Nghiên cứu phân lập thành phần Flavonoit từ lá cây Me rừng (phyllanthus Emblica)

Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p M U Cùng v i s phát tri n c a khoa h c công ngh ô nhi m môi tr ng n y sinh nh ng v n đ khác, ví d nh c n b nh nguy hi m (ung th , kháng sinh, cúm H1N1, H7N9,…) Nguyên nhân c a c n b nh đ n t nhi u ngu n khác nhau, có th nhi m mơi tr Tr ng, kháng sinh c tình tr ng đó, nhi u qu c gia th gi i ti n hành ch ng trình nghiên c u tìm ki m ho t ch t t thiên nhiên, v i hy v ng d c ph m m i có ngu n g c th c - đ ng v t s giúp gi m thi u c n b nh nguy hi m nêu trên, t ng c ng ng cơng tác ch m sóc s c kh e kéo dài tu i th i Nh ng nghiên c u tìm ki m h p ch t có ho t tính sinh h c cao đ ng d ng y h c, nơng nghi p m c đích khác đ i s ng ng i tr thành nh ng nhi m v quan tr ng c a qu c gia th gi i Là qu c gia n m khu v c nhi t đ i gió mùa, l đ i l n, đ ng m a t ng m cao (kho ng 80%), nhi t đ trung bình kho ng t 15 - 270C, Vi t Nam có u ki n thu n l i cho sinh v t phát tri n t o s phong phú c a nhi u loài đ ng th c v t nhi u h sinh thái khác i u có ý ngh a r t quan tr ng t i s phát tri n c a n n y h c c truy n c a Vi t Nam Trong s loài th c v t c a Vi t Nam, loài th c v t thu c h Th u d u hi n thu hút s quan tâm c a nhi u nhà khoa h c Ví d nh : Me r ng (Phyllanthus emblica), thu c h Th u d u, m t loài đ c s d ng làm thu c ch a b nh t lâu y h c dân gian nh ch a huy t áp cao, viêm ru t, viêm da, đau h ng, đau r ng, r n c n, Tuy nhiên, đ có đ c c s khoa h c nh m phát tri n ng d ng c th lồi này, c n có nh ng nghiên c u c th v hóa h c, ho t tính sinh h c nh ng Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i nghiên c u sâu h n v d Khóa lu n t t nghi p c lý đ gi i thích tác d ng y h c c truy n c a lồi này, qua t o c s đ tìm ki m ph ng thu c u tr b nh Xu t phát t ý ngh a th c ti n ch n đ tài cho khoá lu n t t nghi p là: “Nghiên c u phơn l p thƠnh ph n flavonoit t Me r ng” Khóa lu n t p trung nghiên c u thành ph n flavonoit t Me r ng bao g m nh ng n i dung là: Thu m u Me r ng (Phyllanthus emblica), x lý m u t o d ch chi t Phân l p h p ch t flavonoit Xác đ nh c u trúc hóa h c c a h p ch t phân l p đ Chu Kim Ngân c K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i CH Khóa lu n t t nghi p NG 1: T NG QUAN 1.1 Gi i thi u chung v cơy Me r ng 1.1.1 Th c v t h c me r ng Cây Me r ng (Hình 1.1) hay đ c g i chùm ru t núi, chùm ru t r ng, bơng ngót, cam tú, ng u cam tú, du cam tú, m c kham Cây có tên khoa h c Phyllanthus emblica ây g nh ho c b i, cao 3-8(-10) m, v m ng, màu nâu nh t, nâu ho c màu xám, nh n Thân th ng cong queo, phân cành nhi u, cành nh m m, cành già màu xám nh t, mang nhánh nh , có lơng Cành mang m nh, màu xanh nh t Cành mang s p x p g n nh m t m t ph ng Phi n hình b u d c khn, hai đ u tù, kích th c (3-)12-20 x (1-)3,5 - mm, nh n; g n nh không cu ng ho c r t ng n Lá kèm r t nh , hình tam giác, màu đ nâu Hoa đ n tính g c Hình 1.1 M u lá, qu vƠ tiêu b n cơy me r ng Hoa nh m c thành xim co nách phía d i cành, g m nhi u hoa đ c 1-2 hoa Hoa đ c có cu ng ng n; đài g m m nh màu h ng ho c xanh nh t, hình b u d c Hoa g n nh khơng cu ng; đài có thu t t hoa đ c Qu hình c u, kích th c 13-25 x 20-30 mm, m ng n ng c, màu vàng xanh; khô thành qu nang, t m H t d ng c nh, màu h ng nh t hay nâu nh t [1, 2, 4, 5] Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 1.1.2 Phân b sinh thái Cây m c ph bi n kh p n i Vi t Nam, nh t t nh mi n núi trung du phía b c [1, 2, 4, 5] Me r ng loài có vùng phân b r ng nhi u n c châu Á, t n đ n Myanmar, Nepal, Thái Lan, Malaysia, Lào, Campuchia, mi n nam Trung Qu c Hi n me r ng đ c đ a vào tr ng t i Nh t B n, Hoa K Australia 1.1.3 Công d ng Nhi u b ph n c a loài Me r ng (P emblica L.) có ho t tính kháng khu n, kháng oxy hóa, ch ng suy gi m mi n d ch, kháng đ c b o v t bào gan kim lo i màu gây [1, 2, 4, 5],… Trong y h c dân gian, đ c dùng ch a phù th ng, viêm da, m n ng a H t dùng ch a hen, viêm cu ng ph i thi u n ng m t R dùng đ ch a huy t áp cao, đau th Qu th ng v , viêm ru t lao h ch b ch huy t [5], ng dùng n t làm thu c nhu m r ng, n i, làm ô mai, n c hoa qu , gi i khát, h m th t, c g i đ u đ kích thích m c tóc Qu c ng đ c dùng làm thu c ch a b nh thi u vitaminC (b nh Scorbut), viêm đau gan, vàng da, r i lo n ti t m t, viêm đau d dày, ki t l , tiêu ch y, nhu n tràng, kích thích tiêu hóa, l i ti u, đái đ ng, gi i nhi t, xu t huy t, c m máu, thi u máu, gi m huy t áp, đau nh c đ u, đau nh c m t, gi m s t, choáng váng, ho, viêm ph qu n, viêm s ng ph i,… H t dùng ch a hen suy n, viêm ph qu n, thi u n ng m t,… Hoa đ c dùng làm thu c nhu n tràng, gi i nhi t làm thu c x Lá me dùng làm thu c gi i nhi t, ch a phù th ng m t s b nh da V thân dùng làm thu c ch a tiêu ch y, l amip, c m máu R đ dùng đ ch a tr b nh cao huy t áp, đau th ng v , viêm ru t, lao h ch b ch huy t,… C ng đ ng dân t c t i mi n núi Chu Kim Ngân c Vi t Nam n c K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Trung Qu c, Thái Lan, Malaysia, Me, đ c bi t qu đ Khóa lu n t t nghi p n ,… th ng s d ng b ph n c a n c ng nh làm thu c r ng rãi [1, 2, 4, 5] 1.1.4 Thành ph n hóa h c Qu me r ng có v chua, ngu n nguyên li u r t giàu vitamin C Trong qu ch a trigalloyglucose, ellagic acid, corilagin, terchebin, phylleblin, phyllemblic acid emblicol Các nghiên c u g n cho bi t c vitamin C acid gallic có đ c tính kháng oxy hóa, kháng n m, kháng khu n Ho t tính c ch q trình oxy hóa có th tác d ng c a tannin, emblicanin A, emblicanin B, punigluconin pedunculagin qu me r ng [5] Phyllemblin đ c coi ho t ch t có tác d ng t gây gi m đau, an th n, đ c bi t v i h th n kinh trung Nh ng acid h u c ng t nh adrenalin, ng [5],… qu me r ng nh : acid aspartic, ellagic, gallic, myristic, ascorbic, alanine, glycine, histidine, methionine, niacin, tyrosine v i m t s h p ch t tannin đ c coi có tác d ng phòng ch ng m t s d ng ung th kìm hãm s phát tri n c a virut HIV [5],… Lá ngu n nguyên li u giàu flavonoid, tannin sterol T có th tách chi t đ c ho t ch t ellagic acid, amlaic acid, kaempferol-3- glucoside, kaempferol, lupeol, -amyrin acetat, phytosterol C29 nh - sitosterol, poriferasterol, -sitosterol-3-O-D-glucopyranosid [5], V ch a -sitoserol,(+)-leucodelphinidin (3,75%), lupeol (2,25%) tannin Thành ph n ch y u tannin g m phyllembin, gallotannin nh 1,2,3-trigalloyglucose, ellagitannin terchebin, corilagin, chebulagic acid, chebulinic acid H t ch a kho ng 16% d u béo, ch y u linoleic acid (44%), oleic acid (28,4%), linolenic acid, stearic acid, palmatic myristic acid [5] Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i D Khóa lu n t t nghi p i ví d v c u trúc m t s h p ch t t me r ng: OH O OH OH O OH OH Keamferol Quercetin OH OH OH OH O OH O OH O O OH O OH OH OH O O O O O OH OH O O OH OH O O OH OH Astragalin OH Emblicanin A OH OH OH OH OH OH O OH O O OH O O O OH O O OH OH O OH O O O O OH O O O O OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Emblicanin B OH Corilagin Hình 1.2 C u trúc m t s h p ch t t cơy me r ng Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 1.2 Gi i thi u v l p ch t flavonoit [10-14] Flavonoit m t nh ng nhóm h p ch t phân b r ng rãi nh t t nhiên Cho đ n có h n 4000 Flavonoit đ Ban đ u chúng đ c tìm th y t th c v t c phát hi n v i vai trò s c t c a th c v t vào mùa thu loài hoa, d n chuy n sang màu vàng, da cam, đ Các Flavonoit c ng đ c tìm th y rau, qu , qu h ch, h t, c , gia v , thân cây, lo i hoa c ng nh chè r u vang đ Flavonoit có m t h u h t b ph n c a nh lá, hoa, qu , ph n, r ,… c trú thành t bào Nó tham gia vào s t o thành màu s c c a đ c bi t hoa (t o cho hoa nh ng màu s c r c r đ quy n r lo i côn trùng giúp cho s th ph n c a cây) Các flavonoit l p ch t ph bi n có th c v t Chúng h p ch t có c u t o g m vòng benzen A, B đ c n i v i b i m t d vòng C v i b khung cacbon C6-C3-C6 Vi c phân lo i flavonoit d a s khác c a nhóm C3 (các glicosit c a có màu vàng nh t màu ngà; antoxianin antoxianiđrin màu đ , xanh, tía d ng khơng màu; isoflavon, catecin leucoantoxianiđrin ch t tan n c th ng n m không bào) 2' A B 3' O 1' O 4' OH RO 5' 10 6' C O Hình 1.3 Khung c b n c a Hình 1.4 Khung c b n c a flavan flavon Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p OR O O OH RO RO OH OH O O Hình 1.5 Khung c b n c a Hình 1.6 Khung c b n c a flavonol Flavanonol-3 Flavon (Hình 1.4) flavonol (Hình 1.5) r t ph bi n t nhiên Công th c c u t o c a chúng ch khác v trí cacbon s Trong th c v t, flavon flavonol th t mà th ng d ng không t n t i d i d ng i d ng glycozit Bên c nh h p ch t có d ng khung flavan, flavon, flavonol có h p ch t thu c d ng Flavanonol-3 (Hình 1.6) m t s h p ch t thu c khung Chalcon (Hình 1.7), khung auron (Hình 1.8) OR OH O RO A RO O OR C CH B O Hình 1.7 Khung c b n c a Hình 1.8 Khung c b n c a h p h p ch t chalcon ch t Auron 1.3 Các ph ng pháp chi t m u th c v t Sau ti n hành thu hái làm khô m u, tu thu c vào đ i t ng ch t có m u khác (ch t phân c c, ch t không phân c c, ch t có đ phân c c trung bình, ) mà ta ch n dung môi h dung môi khác 1.3.1 Ch n dung môi chi t Th ng ch t chuy n hố th c p có đ phân c c khác Tuy nhiên nh ng thành ph n tan n mơi dùng q trình chi t c n ph i đ Chu Kim Ngân c đ c quan tâm Dung c l a ch n r t c n th n K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p i u ki n c a dung môi ph i hoà tan đ th c p nghiên c u, d dàng đ c nh ng ch t chuy n hố c lo i b , có tính tr (không ph n ng v i ch t nghiên c u), không đ c, không d b c cháy Dung mơi l n t p ch t nh h trình chi t v y c n ph i đ s d ng Th ng đ n hi u qu ch t l c ch ng c t đ thu đ ng c a c d ng s ch tr c ng có m t s ch t d o l n dung môi nh diankyl phtalat, tri-n-butyl-axetylcitrar tributylphosphat Nh ng ch t có th l n v i dung mơi trình s n xu t ho c khâu b o qu n nh thùng ch a ho c nút đ y b ng nh a Methanol chloroform th ng ch a dioctylphtalat [di-(2- etylhexyl)phtalat ho c bis-2-etylhexyl-phtalat] Ch t s làm sai l ch k t qu phân l p q trình nghiên c u hố th c v t, th hi n ho t tính th nghi m sinh h c có th làm b n d ch chi t c a Chloroform, metylen clorit methanol nh ng dung môi th ng đ c l a ch n trình chi t s b m t ph n c a nh : lá, thân, r , c , qu , hoa, Nh ng t p ch t c a chloroform nh CH2Cl2, CH2ClBr có th ph n ng v i m t vài h p ch t nh ancaloit t o mu i b c nh ng s n ph m khác T ng t nh v y, s có m t c a l có th gây s phân hu , s kh n c hay s đ ng phân hoá v i h p ch t khác Chloroform có th gây t n th vi c v i ch t c n đ đeo m t n ng nh axit clohiđric (HCl) c ng ng cho gan th n nên làm c thao tác khéo léo, c n th n n i thống ph i phòng đ c Metylen clorit đ c h n d bay h i h n chloroform Methanol etanol 80% nh ng dung môi phân c c h n hiđrocacbon th clo Ng i ta cho r ng dung môi thu c nhóm r u s th m t t h n lên màng t bào nên trình chi t v i dung môi s thu đ cl ng l n thành ph n t bào Trái l i, kh n ng phân c c c a Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p chloroform th p h n, có th r a gi i ch t n m t bào Các ancol hoà tan ph n l n ch t chuy n hoá phân c c v i h p ch t phân c c trung bình th p Vì v y chi t b ng ancol ch t c ng b hồ tan đ ng th i Thơng th ng dung mơi c n n c có nh ng đ c tính t t nh t cho q trình chi t s b Tuy nhiên c ng có m t vài s n ph m m i đ c t o thành dùng methanol su t q trình chi t Thí d trechlonolide A thu đ Trechonaetes aciniata đ hu đ c t c chuy n thành trechonolide B b ng trình phân 1-hydroxytropacocain c ng x y erythroxylum novogranatense c chi t methanol nóng Ng i ta th ng s d ng n thay vào dùng dung d ch n ietyl ete hi m đ c đ thu đ c d ch chi t thô t mà c c a methanol c dùng cho trình chi t th c v t r t d bay h i, b c cháy r t đ c, đ ng th i có xu h ng t o thành peroxit d n , peroxit c a dietyl ete d gây ph n ng oxi hố v i nh ng h p ch t khơng có kh n ng t o cholesterol nh carotenoit Ti p đ n axeton c ng có th t o thành axetonit n u 1,2-cis-diol có m t mơi tr Q trình chi t d i u ki n axit ho c baz th ng đ ng axit c dùng v i trình phân tách đ c tr ng, c ng có x lý d ch chi t b ng axit - baz có th t o thành nh ng s n ph m mong mu n S hi u bi t v nh ng đ c tính c a nh ng ch t chuy n hoá th c p đ c chi t s r t quan tr ng đ t l a ch n dung mơi thích h p cho trình chi t tránh đ c s phân hu ch t b i dung môi trình t o thành ch t mong mu n Sau chi t dung môi đ c c t b ng máy c t quay nhi t đ không 30 - 400C, v i m t vài hoá ch t ch u nhi t có th th c hi n nhi t đ cao h n Chu Kim Ngân 10 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p 3.2 H ng s v t lý vƠ d ki n ph c a h p ch t 3.2.1 H p ch t (PU1) Các thông s v t lý c a h p ch t PU1, s li u nh sau: Tinh th màu vàng Ph ESI-MS m/z: 303,1 [M+H]+, 325,0 [M+Na]+ 300,9 [M-H]Công th c phân t C15H10O7 (M = 302) H-NMR (600 MHz, CD3OD)  (ppm): 6,26 (d, J = 2,0 Hz, H-6); 6,52 (d, J = 2,0 Hz, H-8); 7,83 (d, J = 2,0 Hz, H-2’); 6,99 (d, J = 8,5 Hz, H-5’); 7,70 (dd, J = 2,0, 8,5 Hz, H-6’) 3.2.2 H p ch t (PUW1) Các thông s v t lý c a h p ch t PUW1 nh sau: ch t r n màu vàng Ph ESI-MS m/z: 291 [M+H]+, 289 [M-H]- Công th c phân t C15H14O6, M = 290 Các s li u ph c ng h HSQC, HMBC đ Chu Kim Ngân ng t h t nhân 1H-NMR, 13 C-NMR c trình bày b ng 26 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i CH Khóa lu n t t nghi p NG TH O LU N K T QU 4.1 Xác đ nh c u trúc hóa h c c a h p ch t (PU1) H p ch t PU1 thu đ c d i d ng tinh th màu vàng c a h p ch t flavonoit Trên ph 1H-NMR (Hình 4.1) xu t hi n hai tín hi u doublet đ c tr ng cho hai proton c a vòng A t i  6,26 (d, J = 2,0 Hz, H-6) 6,52 (d, J = 2,0 Hz, H-8), ba tín hi u n hình cho vòng B th 1,3,4 v i t ng tác spin h ABX t i  7,83 (d, J = 2,0 Hz, H-2’); 6,99 (d, J = 8,5 Hz, H-5’); 7,70 (dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6’) Nh ng d ki n cho th y quercetin v i công th c phân t C15H10O7 K t qu ph kh i l ng ESI-MS c ng xu t hi n pic ion t i m/z 303,1 [M+H]+, 325,0 [M+Na]+ 300,9 [M-H]- hoàn toàn t ng ng phù h p v i công th c phân t C15H10O7 (M = 302) K t qu so sánh d ki n ph c a PU1 v i quercetin tài li u [8] hoàn toàn phù h p cho th y h p ch t quercetin Hình 4.1a Ph Chu Kim Ngân 27 H-NMR c a PU1 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p Hình 4.1b Ph Hình 4.2 Ph kh i l Chu Kim Ngân 28 H-NMR c a PU1 ng ESI-MS c a PU1 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p B ng 4.1 K t qu ph NMR c a h p ch t PU1 Ha, b , J (Hz) Hc* , J (Hz) [8] 6,26 d (2,0) 6,18 d (2,0) 6,52 d (2,0) 6,40 d (2,0) 2’ 7,83 d (2,0) 7,67 d (2,2) 5’ 6,99 d (8,5) 6,89 d (8,3) 6’ 7,70 dd (2,0; 8,5) 7,53 dd (2,2; 8,6) C a đo Acetone, b500 MHz, c đo DMSO, *S li u ph c a quercetin [8] OH HO 6' 4' 1' 3' O OH 10 OH OH O Hình 4.3 C u trúc hóa h c c a PU1 4.2 Xác đ nh c u trúc hóa h c c a h p ch t (PUW1) Ph H-NMR (Hình 4.4) c a PUW1 xu t hi n proton H 7,65 (1H, dd, 8,0; 2,0); 6,89 (1H,d, 8,0) 7,69 (1H, d, 2,0) v i h ng s t ng tác J = 8,0 Hz 2,0 Hz d đốn s có m t c a m t vòng th m v i nhóm th g n vào v trí octo, para Các v trí l i proton t i v trí meta, para D ki n vòng th m có d ng nh sau: X X Chu Kim Ngân X 29 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i T s li u ph Khóa lu n t t nghi p H-NMR c a PUW1 quan sát th y hai tín hi u doulet t i H 6,23 6,42 ppm v i h ng s t ng tác nh (J = 2,0 Hz) ch ng t hai proton có m t vòng th m v trí meta X X X X Ngoài ra, ph phân t đ H-NMR c a PUW1 quan sát đ ng v i giá tr H kho ng t 3,29 đ n 5,13 ppm, m d nh n d ng proton anome c a phân t đ J = 7,5 Hz) phân t đ c tín hi u c a H-NMR quan sát đ ng th nh t t i H 5,13 (1H, d, ng th proton H 4,54 (1H, d, J = Hz) Trên ph c tín hi u c a nhóm metyl H 1,14 (3H, d, J = 6,5 Hz) Chu Kim Ngân 30 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Hình 4.4 Ph Ph 13 Khóa lu n t t nghi p H-NMR c a h p ch t PUW1 C-NMR (Hình 4.5) c a h p ch t PUW1 quan sát đ c 27 tín hi u cacbon, có tín hi u đ c tr ng c a cacbon anome phân t đ ng v i C 104,72 102,42 ppm, cacbon khác c a phân t đ l t C 75,73; 78,21; 71,42 ; 77,24 68,57 ppm; phân t đ ng l n ng th hai C 72,11; 72,26; 73,95 69,71 ppm Các tín hi u khác cho th y s t n t i c a m t vòng th m có th v trí octo, v trí para m t vòng th m có th v trí octo, v trí para Chu Kim Ngân 31 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Hình 4.5 Ph Các tín hi u l n l 13 Khóa lu n t t nghi p C-NMR c a h p ch t PUW1 t hai tín hi u cacbon có tín hi u cao th hi n s đ i x ng C 130,87 115,09 ppm Tín hi u cacbon t i C 179,43 ppm cho th y m t nhóm cacbonyl C=O, tín hi u C 158,54; 135,63; 159,35; 166,10; 135,63 ppm, cho phép d đốn cacbon có g n ho c n m c nh nhóm th có ch a oxy K t h p s li u v ph 13 C-NMR có th d đốn phân m nh c a h p ch t PUW1 nh sau: X X X X X X X Chu Kim Ngân 32 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p X O X X X O Trên ph HSQC (Hình 4.6) cho th y s t ng tác tr c ti p gi a proton cacbon Quan sát ph HSQC cho th y s t proton cacbon t ng tác gi a c p ng ng nh sau: C 104,72 H 5,13 (1H, d, J = 7,5 Hz); 102,42 H 4,54 (1H, d, J = 1,0 Hz); C 99,98 H 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz); C 94,89 H 6,43 (1H, d, J = 2,0 Hz); C 130,87 H 8,04 (2H, d, J = 9,0 Hz); C 115,09 H 6,88 (2H, d, J = 9,0 Hz); c p t t đ ng tác phân ng C 74,20 H 3,17*; 77,48 3,08* ho c 69,88 3,08* ; 76,40 3,20*; 60,83 H 3,32*; 3,56 dd (5,0; 12,0) Hình 4.6 Ph HSQC c a h p ch t PUW1 Chu Kim Ngân 33 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng S CDCl3) đ i H c S Ph m Hà N i li u ph Khóa lu n t t nghi p H-NMR (500 MHz, CDCl3) 13 C-NMR (125MHz, c trình bày B ng 4.2 B ng 4.2 S li u ph c ng h a C C ng t nhơn c a h p ch t PUW1 b, d H mult (J = Hz) b, c C 158.52 158.54 - 135.62 135.63 - 179.44 179.43 - 162.98 162.99 - 99.95 99.98 6.23 d (2.0) 166.01 166.10 - 94.87 94.89 6.42 d (2.0) 159.35 159.35 - 10 105.66 105.64 - 1' 123.15 123.15 - 2' 117.69 117.70 7.69 d (2.0) 3' 145.84 145.85 - 4' 149.81 149.81 - 5' 116.06 116.07 6.89 d (8.0) 6' 123.55 123.56 7.65 dd (8.0, 2.0) 1'' 104.69 104.72 5.13 (d, 7.5) 2'' 75.74 75.73 3.50e 3'' 78.20 78.21 3.45e 4'' 71.42 71.42 3.29e 5'' 77.25 77.24 3.35e HMBC (H  C) 5, 7, 8, 10 6, 7, 9, 10 2, 3', 4', 6' 1', 3', 4' 6' 2, 2', 4' 3-Glc Chu Kim Ngân 34 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i 6'' 68.56 68.57 Khóa lu n t t nghi p 3.42e 3.82 dd (11.0, 1.0) 1''' 6'' 6-Rha 1''' 102.42 102.42 4.54 d (1.0) 2''' 72.12 72.11 3.65 dd (1.0, 3.5) 3''' 72.26 72.26 3.55 dd (3.5, 9.5) 4''' 73.94 73.95 3.31e 5''' 69.71 69.71 3.47e 6''' 17.87 17.87 1.14 (d, 6.5) a C 4''', 5''' c a rutin [9], b o CD3OD, c125 MHz, d500 MHz, etín hi u b che l p Trên ph ESI-MS c a h p ch t PUW1 xu t hi n pic ion gi phân t m/z 611 [M+H]+, k t h p v i s li u NMR cho th y h p ch t PUW1 có cơng th c phân t C27H30O16, M = 610 S d ng s li u ph HMBC đ liên k t đ n v c u trúc d ki n b ng ph NMR ESI-MS, k t qu ch b ng 4.2 hình 4.7 Hình 4.7 Ph HMBC c a PUW1 Chu Kim Ngân 35 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p K t h p v i tài li u công b [9], h p ch t PUW1 đ c xác đ nh Quercetin 3-rutinoside g i Rutin, c u trúc nh sau: OH 3' OH 2' 4' HO O 5' 1' 6' 10 OH OH O HO OH O O O O Me HO HO OH Hình 4.8 C u trúc vƠ m t s t Chu Kim Ngân 36 ng tác HMBC c a PUW1 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p K T LU N B ng ph ng pháp s c ký k t h p, h p ch t flavonoit đ c phân l p t d ch chi t Etylaxetate c a Phyllanthus emblica Các h p ch t là: Quercetin (PU1) Quercetin 3-rutinoside (PUW1) OH HO 6' 4' 1' 3' O OH 10 OH OH O Quercetin (PU1) OH 3' OH 2' 4' HO O 5' 1' 6' 10 OH OH O HO OH O O O O Me HO HO OH Quercetin 3-rutinoside (PUW1) Chu Kim Ngân 37 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p C u trúc c a h p ch t đ pháp ph hi n đ i nh ph c ng h HSQC HMBC) ph kh i l Chu Kim Ngân c xác đ nh nh vào ph ng t h t nhân (1H-NMR, 13 ng C-NMR, ng phun mù n t (ESI) 38 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p TÀI LI U THAM KH O TƠi li u Ti ng Vi t [1] Huy Bích c ng s (2004), Cây thu c đ ng v t làm thu c Vi t Nam, trang 260-261, Nhà xu t b n Khoa h c K thu t [2] Võ V n Chi (1997), T n thu c Vi t nam, Nhà xu t b n Y h c [3] Nguy n H u nh, Tr n Th (1999), ng d ng m t s ph ng pháp ph nghiên c u c u trúc phân t , Nxb Giáo d c, Hà N i [4] Ph m Hoàng H (1999), Cây c Vi t nam, Nhà xu t b n tr [5] GS TS Lã TS.D ng ình M i (ch biên)(2009), TS.Tr n Minh H i, c Huy n, TS.Tr n Huy Thái, TS.Ninh Kh c B n, Tài nguyên th c v t Vi t Nam Nh ng ch a h p ch t có ho t tính sinh h c, t p II, trang 232-236, Nhà xu t b n Khoa h c t nhiên công ngh [6] Tr n ình S n, V Th Kim Ng c, Nguy n Th H ng Thanh H i (2008), Ph c ng h i p, Phan ng t h t nhân, Quy n I, Nxb Y h c Hà N i [7] Tr n ình S n, V Th Kim Ng c, Nguy n Th H ng Thanh H i (2008), Ph c ng h i p, Phan ng t h t nhân, Quy n II, Nxb Y h c Hà N i TƠi li u Ti ng Anh [8] Chen Chang Shen, Yuan Shiun Chang, Li Kang Ho, 1993, Nuclear magnetic resonance studies of 5,7-dihydroxyflavonoids, Phytochemistry, 34(3), 843-845 [9] Tong S, Yan J, Chen G, Lou J., 2009 May-Jun, Purification of rutin and nicotiflorin from the flowers of Edgeworthia chrysantha Lindl, by high-speed counter-current chromatography J Chromatogr Sci.47(5), 341-4 Chu Kim Ngân 39 K35C – Khoa Hóa H c Tr ng i H c S Ph m Hà N i Khóa lu n t t nghi p [10] Hayerman A.E., Butler I.G., 1994, Assay of condensed tanin or flavonoid oligomers and related flavonoid in plant, Meth, Enz, 234, pp 249 [11] Ternai B., Markham K.R., 1976, C13-NMR of flavonoids-1-Flavones and flavonols, Tetrehedron 32, pp 565 [12] Mabry F.J., Markman R.B., Thomas M.B., 1976, The syrematic indentification of flavonoids, springer Verlag-Berlin-Heidelberg-New york [13] Harborn J.B., 1994, The flavonoids advance in research since 1986, Chaprman & Hall [14] Agrawal P.K., 1989, Carbon-13 NMR of flavonoids, Elsevier Science Pub B.V Chu Kim Ngân 40 K35C – Khoa Hóa H c ... nghi p là: Nghiên c u phơn l p thƠnh ph n flavonoit t Me r ng” Khóa lu n t p trung nghiên c u thành ph n flavonoit t Me r ng bao g m nh ng n i dung là: Thu m u Me r ng (Phyllanthus emblica), x... i thi u chung v cơy Me r ng 1.1.1 Th c v t h c me r ng Cây Me r ng (Hình 1.1) hay đ c g i chùm ru t núi, chùm ru t r ng, bơng ngót, cam tú, ng u cam tú, du cam tú, m c kham Cây có tên khoa h c... ch, h t, c , gia v , thân cây, lo i hoa c ng nh chè r u vang đ Flavonoit có m t h u h t b ph n c a nh lá, hoa, qu , ph n, r ,… c trú thành t bào Nó tham gia vào s t o thành màu s c c a đ c bi