Luận án tiến sĩ y học: Nghiên cứu tần suất, đặc điểm thalassemia và các bệnh hemoglobin trong cộng đồng dân tộc Khmer ở đồng bằng sông Cửu Long

Tần suất mang gen thalassemia (thal) và các bệnh hemoglobin (Hb) trong cộng đồng dân tộc Khmer là 39,4%. Cụ thể: đột biến HbE có tỉ lệ mang gen cao nhất chiếm 28,9%, α thal 15,7%, và β thal 1,4%. Phát hiện 05 thể bệnh lưu hành là HbE 22,4%; α thal 9,1%; β thal 1,3%; HbE trên α thal 6,5%; và β thal trên α thal 0,1%.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỢI LÊ THỊ HOÀNG MY Nghiªn cứu tần suất, đặc điểm thalassemia bệnh hemoglobin cộng đồng dân tộc Khmer đồng sông Cưu Long LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỢI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LÊ THỊ HOÀNG MY Nghiên cứu tần suất, đặc điểm thalassemia bệnh hemoglobin cộng đồng dân tộc Khmer đồng b»ng s«ng Cưu Long Chun ngành : Hút học và Truyền máu Mã sô : 62720151 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS TS Phạm Quang Vinh PGS TS Huỳnh Nghĩa HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận án, cho phép bày tỏ lòng biết ơn và lời cảm ơn chân thành tới: - Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học, Bộ môn Huyết học và Truyền máu - Trường Đại học Y Hà Nội đã tạo điều kiện, giúp đỡ hoàn thành luận án Tiến sĩ - Đảng ủy, Ban Giám Hiệu Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, Bệnh viện Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, đã ủng hộ và tạo mọi điều kiện tôt cho quá trình học tập và thực đề tài nghiên cứu Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới: - GS.TS Phạm Quang Vinh – Chủ nhiệm Bộ môn Huyết học và Truyền máu, Trường Đại học Y Hà Nội; - PGS.TS Huỳnh Nghĩa – Phó chủ nhiệm Bộ môn Huyết học, Đại học Y Dược Thành phô Hồ Chí Minh; - TS Dương Bá Trực – Nguyên Trưởng khoa Huyết học lâm sàng, Bệnh viện Nhi Trung Ương; - Prof Suthat Fucharoen – Trung tâm nghiên cứu Thalassemia, Viện Nghiên cứu Sinh học phân tử, Đại học Mahidol, Thái Lan; - người Thầy đã dành hết tâm sức hướng dẫn, truyền đạt cho kiến thức, phương pháp nghiên cứu khoa học vô quý giá; động viên và tạo điều kiện tôt cho tơi st quá trình thực luận án Xin cho gửi lời tri ân đến Thầy – Cố PGS.TS Bùi Văn Viên, người Thầy đã nhiệt tâm hướng dẫn, động viên tơi quá trình thực luận án…, Thầy nằm giường bệnh Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Trung tâm Chẩn đoán Y khoa Medic, thành phô Hồ Chí Minh; tập thể Trung tâm nghiên cứu Thalassemia, Viện nghiên cứu Sinh học Phân tử, Đại học Mahidol, Thái Lan; đơn vị dịch vụ Thalassemia, Trường Đại học Khon Khaen, Thái Lan; Sở Khoa học và công nghệ tỉnh Sóc Trăng, Sở Y tế, trung tâm Y tế, các trạm y tế xã, phường các tỉnh Sóc Trăng, Trà Vinh, Bạc Liêu, Hậu Giang… đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tơi quá trình thu thập sô liệu và thực nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, anh chị em đồng nghiệp tại Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, và bạn bè đã dành cho tình cảm quý mến, lời động viên, chia sẻ, giúp tơi có thêm động lực để hoàn thành luận án này Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Lê Thị Hồng Mỹ LỜI CAM ĐOAN Tơi là Lê Thị Hoàng Mỹ, nghiên cứu sinh khóa 29 trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Huyết học và Truyền máu, xin cam đoan: Đây là luận án thân trực tiếp thực dưới hướng dẫn GS.TS Phạm Quang Vinh và PGS.TS Huỳnh Nghĩa Cơng trình này khơng trùng lặp với nghiên cứu nào khác đã công bô tại Việt Nam Các sô liệu và thông tin nghiên cứu là hoàn toàn xác, trung thực và khách quan, đã xác nhận và chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật về cam kết này Hà Nội, ngày tháng năm 2018 Người viết Lê Thị Hoàng Mỹ Lê Thị Hoàng Mỹ CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN Viết tắt -α3.7 -α4.2 SEA THAI /αα -α/αα αCSα αQSα αT α ααT α+-thal α0-thal AEBart’s ARMS ASO β β0 β+ βE β/βE, βE/βE βthal (δβ)thal CE ĐB ĐBSCL DCIP ddNTP DGGE DHT ĐHT ĐLC DNA dNTP GTLN GTNN Ý nghĩa đột biến xóa đoạn 3,7 kb α+-thalassemia đột biến xóa đoạn 4,2 kb α+-thalassemia đột biến xóa đoạn α0-thalassemia South East Asia đột biến xóa đoạn α0-thalassemia Thailand α0-thalassemia α+-thalassemia đột biến điểm gen globin α2 tạo Hb Constant Spring đột biến điểm gen globin α2 tạo Hb Quong Sze đột biến điểm gen globin α2 đột biến điểm gen globin α1 α-thal các đột biến gây gen globin-α α-thal các đột biến gây gen globin-α Bệnh lý hemoglobin E dị hợp tử kết hợp đột biến gây tổn thương gen globin α xóa đoạn khơng xóa đoạn amplification refractory mutation system: hệ thơng kh́ch đại đột biến có tính chất trơ Allele specific oligonucleotide, mẫu dò đặc hiệu alen gen globin-β, alen gen globin-β bình thường đột biến gen β0-thalassemia không tổng hợp chuỗi globin-β đột biến gen β+-thalassemia giảm tổng hợp chuỗi globin-β đột biến gen globin-β tạo HbE (codon 26 GAG>AAG) Bệnh lý hemoglobin E dị hợp tử, hemoglobin E đồng hợp tử đột biến β-thalassemia giảm không tổng hợp chuỗi globin β, không bao gồm đột biến βE đột biến đoạn DNA chứa gen β và δ Capillary Electrophoresis, điện di mao quản đột biến Đồng sông Cửu Long Dichlorophenolindophenol dioxynucleotide triphosphat Denaturing gradient gel electrophoresis, Điện di gradient biến tính Dị hợp tử Đồng hợp tử Độ lệch chuẩn Deoxynucleotide acid Deoxynucleotide triphosphate Giá trị lớn Giá trị nhỏ Hb HbCS HC HCT HGB HPFH HPLC HRM HS IVS KKU MAS-PCR MCH Hemoglobin: huyết sắc tô Hemoglobin Constant Spring Hồng cầu Hematocrit, thể tích khơi hồng cầu Nồng độ hemoglobin Heriditary persistence of fetal hemoglobin, tồn lưu hemoglobin bào thai High Performance Liquid Chromatography, Sắc ký lỏng hiệu cao High resolution melting, đường cong nóng chảy có độ phân giải cao Hypersensitive site: vị trí nhạy cảm Intervening sequence: trình tự đoạn chèn hay intron Khon Khaen University, Đại học Khon Khaen Thái Lan Multiplex allele specific Polymerase chain reaction Mean Corpuscular Hemoglobin, lượng hemoglobin trung bình hồng cầu MCHC Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration, nồng độ hemoglobin trung bình hồng cầu MCV Mean Corpuscular Volume, thể tích trung bình hồng cầu MLPA multiplex ligation-dependent probe amplification, khuếch đại đa đoạn dò phụ thuộc phản ứng nôi NST Nhiễm sắc thể OF test osmotic fragility: xét nghiệm sức bền thẩm thấu PCR polymerase chain reaction: phản ứng chuỗi trùng hợp RDB Reverse dot blot: kỹ thuật lai điểm ngược RDW Red cell distribution width, Độ rộng dải phân bơ kích thước hồng cầu RE Ristriction enzyme, enzyme giới hạn rpm round per minute RT-PCR Realtime – PCR: phản ứng chuỗi trùng hợp thời gian thực SLHC Red Blood cell count - sô lượng hồng cầu TB Giá trị trung bình TPTTBMNV Tổng phân tích tế bào máu ngoại vi WHO World Health Organisation, Tổ Chức Y Tế Thế giới γ, ζ, ε gen globin gamma, zeta, epsilon δ gen globin-delta δβ alen gen globin-delta beta bình thường MỤC LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 76 - Các nghiên cứu viên tham gia thu thập sô liệu tập huấn thông và có làm thử rút kinh nghiệm - Mỗi thơng sô nghiên cứu thu thập - người chuyên nghiệp đã tập huấn thông st quá trình nghiên cứu - Các dụng cụ thu thập sô liệu sử dụng theo loại thông và đều chuẩn định trước lần nghiên cứu - Cách thức bảo quản và vận chuyển mẫu nghiệm đảm bảo điều kiện Mẫu máu vận chuyển Thái Lan tiến hành chuẩn bị công ty Cổ phần công nghệ Việt Á và vận chuyển công ty FedEx, với thời gian vận chuyển mẫu từ thành phơ Hồ Chí Minh sang Thái Lan vòng 48 giờ 2.2.7 Phương pháp xử lý số liệu Sô liệu xử lý máy vi tính nhờ phần mềm thơng kê SPSS 22.0 để tính các giá trị thơng kê như: trung X bình ( ), độ lệch chuẩn (SD), giá trị nhỏ nhất, giá trị lớn nhất, tỷ lệ % So sánh hai sơ trung bình t-test So sánh hai tỷ lệ test χ2 Trình bày thơng kê với khoảng tin cậy 95%, kiểm định giá trị pA) 3.7 -α /αα αCSα/αα Tổng Tổng cộng 263 45 8 338 23 30 368 71,4 12,2 0,3 1,9 2,2 2,2 0,5 0,3 0,8 91,8 6,3 1,6 0,3 8,2 100 20,6 3,5 0,1 0,5 0,6 0,6 0,2 0,1 0,2 26,5 1,8 0,5 0,1 2,4 28,9 Nhận xét: - Kiểu gen βE/β (HbE DHT) có tỉ lệ 26,5% cộng đồng, kiểu gen βE/βE (HbE ĐHT) chiếm 2,4% - Đột biến HbE kết hợp với kiểu đột biến gen globin-α tạo 10 kiểu gen dị hợp tử kép khác Kiểu kết hợp phổ biến là βE/β DHT HbE kết hợp với DHT -α3.7/αα; kế đến là DHT HbE kết hợp αCSα/αα và SEA/αα 3.3 Đặc điểm lâm sàng huyết học thể thalassemia bệnh Hb cộng đồng dân tộc Khmer ĐBSCL 3.3.1 Đặc điểm lâm sàng thể thalassemia bệnh Hb Bảng 3.8 Đặc điểm lâm sàng Đặc điểm Nhóm có ĐB Tần số Tỉ lệ Nhóm khơng ĐB Tần số Tỉ lệ p 89 (n=501) (%) (n=772) (%) Có 162 32,2 115 14,9 Khơng Niêm nhợt 339 67,7 657 85,1 Có 224 44,7 177 22,9 Không Vàng da 277 55,3 595 77,1 0 0 501 100 100 100 0 0 501 100 100 100 0 0 501 100 100 100 Da xanh Có Khơng Vàng mắt Có Khơng Biến dạng xương mặt Có Khơng 0,000 0,000 - - - Nhận xét: - Nghiên cứu ghi nhận hai biểu da xanh và niêm mạc nhợt Các biểu vàng da, vàng mắt và biến dạng xương mặt không ghi nhận trường hợp nào - Biểu da xanh chiếm 32,2% và niêm mạc nhợt chiếm 44,7% nhóm có mang đột biến nhiều nhóm khơng mang đột biến với p