Luận án tiến sĩ Y học: Nghiên cứu tần suất, đặc điểm thalassemia và các bệnh hemoglobin trong cộng đồng dân tộc Khmer ở đồng bằng sông Cửu Long

Mục đích nghiên cứu của luận án nhằm xác định tần suất các thể thalassemia và bệnh hemoglobin, tỉ lệ các kiểu đột biến gen globin trong cộng đồng dân tộc Khmer ở đồng bằng sông Cửu Long. Mô tả một số đặc điểm lâm sàng và huyết học các thể thalassemia và bệnh hemoglobin trong cộng đồng dân tộc Khmer ở đồng bằng sông Cửu Long.

BÔ GIAO DUC VA ĐAO TAO ̣ ́ ̣ ̀ ̀ ̣           BÔ Y TẾ ̣ TRƯƠNG ĐAI HOC Y HA NÔI ̀ ̣ ̣ ̀ ̣ LÊ THI HOANG MY ̣ ̀ ̃ Nghiêncứutầnsuất,đặcđiểmthalassemia vàcácbệnhhemoglobintrongcộngđồngdântộc KhmerởđồngbằngsôngCửuLong LUNNTINSYHC HANễIư2018 BễGIAODUCVAAOTAO ̣ ̀ ̀ ̣       BÔ Y TẾ ̣ TRƯƠNG ĐAI HOC Y HA NÔI ̀ ̣ ̣ LấTHIHOANGMY Nghiêncứutầnsuất,đặcđiểmthalassemia vàcácbệnhhemoglobintrongcộngđồngdântộc KhmerởđồngbằngsôngCửuLong Chuyờnnganh ̀ : Huyêt hoc và Truyên mau ́ ̣ ̀ ́ Ma sô ̃ ́ : 62720151 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hương dân khoa hoc: ́ ̃ ̣ GS. TS. Pham Quang Vinh ̣ PGS. TS. Huỳnh Nghĩa HA NÔI ­ 2018 ̀ ̣ LỜI CẢM ƠN Hồn thành luận án, cho phép tơi bày tỏ  lòng biết  ơn và lời cảm  ơn  chân thành nhất tới: ­ Đảng  ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý Đào tạo Sau đại học, Bộ  mơn Huyết học và Truyền máu ­ Trường Đại học Y Hà Nội đã tạo điều   kiện, giúp đỡ tơi hồn thành luận án Tiến sĩ ­ Đảng  ủy, Ban Giám Hiệu Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, Bệnh   viện Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, đã ủng hộ  và tạo mọi điều kiện  tốt nhất cho tơi trong q trình học tập và thực hiện đề tài nghiên cứu Với lòng kính trọng và biết  ơn sâu sắc, tơi xin được bày tỏ  lòng biết   ơn của mình tới: ­ GS.TS. Phạm Quang Vinh  – Chủ  nhiệm Bộ  mơn Huyết học và  Truyền máu, Trường Đại học Y Hà Nội; ­ PGS.TS. Huỳnh Nghĩa – Phó chủ  nhiệm Bộ  mơn Huyết học, Đại  học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh; ­ TS. Dương Bá Trực – Ngun Trưởng khoa Huyết học lâm sàng,  Bệnh viện Nhi Trung Ương;  ­ Prof. Suthat Fucharoen – Trung tâm nghiên cứu Thalassemia, Viện  Nghiên cứu Sinh học phân tử, Đại học Mahidol, Thái Lan; ­ những người   Thầy đã ln dành hết tâm sức hướng dẫn, truyền đạt cho tơi những kiến   thức, phương pháp nghiên cứu khoa học vơ cùng q giá; động viên và tạo   điều kiện tốt nhất cho tơi trong suốt q trình thực hiện luận án.  Xin cho tơi được gửi lời tri ân đến Thầy – Cố PGS.TS. Bùi Văn Viên ,  người Thầy đã ln nhiệt tâm hướng dẫn, động viên tơi trong q trình  thực hiện luận án…, ngay cả khi Thầy nằm trên giường bệnh Tơi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Trung tâm Chẩn đốn Y khoa  Medic, thành phố Hồ Chí Minh; tập thể Trung tâm nghiên cứu Thalassemia,   Viện nghiên cứu Sinh học Phân tử, Đại học Mahidol, Thái Lan; đơn vị dịch   vụ  Thalassemia, Trường Đại học Khon Khaen, Thái Lan; Sở  Khoa học và   cơng nghệ  tỉnh Sóc Trăng, Sở  Y tế, trung tâm Y tế,  các trạm y tế  xã,  phường các tỉnh Sóc Trăng, Trà Vinh, Bạc Liêu, Hậu Giang… đã giúp đỡ và  tạo điều kiện cho tơi trong q trình thu thập số  liệu và thực hiện nghiên  cứu Tơi xin bày tỏ  lòng biết  ơn sâu sắc đến gia đình, anh chị  em đồng   nghiệp tại Trường Đại học Y Dược Cần Thơ, và bạn bè đã ln dành cho  tơi những tình cảm q mến, những lời động viên, chia sẻ, giúp tơi có thêm  động lực để hồn thành luận án này   Hà Nội, ngày     tháng     năm 2018 Lê Thị Hồng Mỹ LỜI CAM ĐOAN Tơi là Lê Thị Hồng Mỹ, nghiên cứu sinh khóa 29 trường Đại học Y  Hà Nội, chun ngành Huyết học và Truyền máu, xin cam đoan: Đây là luận án do bản thân tơi trực tiếp thực hiện dưới sự  hướng   dẫn của GS.TS. Phạm Quang Vinh và PGS.TS. Huỳnh Nghĩa Cơng trình này khơng trùng lặp với bất kỳ  nghiên cứu nào khác đã   được cơng bố tại Việt Nam Các số liệu và thơng tin trong nghiên cứu là hồn tồn chính xác, trung   thực và khách quan, đã được xác nhận và chấp thuận của cơ  sở  nơi   nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật về  những cam kết  Hà Nội, ngày     tháng     năm 2018 Người viết Lê Thị Hồng Mỹ Lê Thị Hồng Mỹ CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN ÁN Viết tắt ­α3.7 ­α4.2 ­­SEA ­­THAI ­­/α   ­ / αCSα  αQSα αTα ααT α+­thal  α0­thal   AEBart’s ARMS ASO β β0 β+ βE β/βE, βE/βE  βthal (δβ)thal CE ĐB ĐBSCL DCIP ddNTP DGGE DHT ĐHT ĐLC DNA dNTP GTLN GTNN Hb HbCS HC Ý nghĩa đột biến xóa đoạn 3,7 kb α+­thalassemia đột biến xóa đoạn 4,2 kb α+­thalassemia đột biến xóa đoạn α0­thalassemia South East Asia  đột biến xóa đoạn α0­thalassemia Thailand α0­thalassemia α+­thalassemia đột biến điểm gen globin α2 tạo Hb Constant Spring đột biến điểm gen globin α2 tạo Hb Quong Sze đột biến điểm gen globin α2 đột biến điểm gen globin α1 α­thal do các đột biến gây mất 1 gen globin­α     α­thal do các đột biến gây mất 2 gen globin­α      Bệnh lý hemoglobin E dị hợp tử kết hợp đột biến gây tổn thương 3 gen  globin α do xóa đoạn hoặc khơng xóa đoạn   amplification refractory mutation system: hệ  thống khuếch đại đột biến   có tính chất trơ Allele specific oligonucleotide, mẫu dò đặc hiệu alen gen globin­β, alen gen globin­β bình thường đột biến gen β0­thalassemia khơng tổng hợp chuỗi globin­β đột biến gen β+­thalassemia giảm tổng hợp chuỗi globin­β đột biến gen globin­β tạo HbE (codon 26 GAG>AAG) Bệnh lý hemoglobin E dị hợp tử, hemoglobin E đồng hợp tử đột biến β­thalassemia giảm hoặc khơng tổng hợp chuỗi globin β, khơng  bao gồm đột biến βE  đột biến mất đoạn DNA chứa gen β và δ Capillary Electrophoresis, điện di mao quản đột biến Đồng bằng sông Cửu Long Dichlorophenolindophenol dioxynucleotide triphosphat Denaturing gradient gel electrophoresis, Điên di gradient biên tinh ̣ ́ ́ Dị hợp tử Đồng hợp tử Độ lệch chuẩn Deoxynucleotide acid Deoxynucleotide triphosphate Giá trị lớn nhất Giá trị nhỏ nhất Hemoglobin: huyết sắc tố Hemoglobin Constant Spring Hồng cầu HCT HGB HPFH HPLC HRM HS IVS KKU MAS­PCR MCH MCHC MCV MLPA NST OF test PCR RDB RDW RE rpm RT­PCR SLHC TB TPTTBMNV WHO γ, ζ, ε δ δβ Hematocrit, thể tích khối hồng cầu Nồng độ hemoglobin Heriditary persistence of fetal hemoglobin, tồn lưu hemoglobin bào thai High Performance Liquid Chromatography, Sắc ký lỏng hiệu năng cao High resolution melting, đường cong nóng chảy có độ phân giải cao Hypersensitive site: vị trí rất nhạy cảm Intervening sequence: trình tự đoạn chèn hay intron Khon Khaen University, Đại học Khon Khaen Thái Lan Multiplex allele specific Polymerase chain reaction Mean Corpuscular Hemoglobin, lượng hemoglobin trung bình trong hồng cầu Mean  Corpuscular   Hemoglobin   Concentration,   nồng   độ   hemoglobin   trung  bình trong hồng cầu Mean Corpuscular Volume, thể tích trung bình hồng cầu multiplex ligation­dependent probe amplification, khuếch đại đa đoạn dò  phụ thuộc phản ứng nối Nhiễm sắc thể osmotic fragility: xét nghiệm sức bền thẩm thấu  polymerase chain reaction: phản ứng chuỗi trùng hợp Reverse dot blot: kỹ thuật lai điểm ngược Red cell distribution width, Độ rộng dải phân bố kích thước hồng cầu Ristriction enzyme, enzyme giới hạn round per minute Realtime – PCR: phản ứng chuỗi trùng hợp ở thời gian thực Red Blood cell count ­ số lượng hồng cầu Giá trị trung bình Tổng phân tích tế bào máu ngoại vi World Health Organisation, Tổ Chức Y Tế Thế giới gen globin gamma, zeta, epsilon gen globin­delta alen gen globin­delta beta bình thường MỤC LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ PHỤ LỤC 2 ­ QUY TRÌNH ĐO NỒNG ĐỘ DNA BẰNG QUANG PHỔ KẾ Nguyên lý hoạt động ­ ­ Sức căng bề mặt được sử dụng để giữ  một cột mẫu ở vị  trí để  ánh sáng   truyền qua thuận tiện cho phép đo. Người sử  dụng chỉ  cần dùng pipette  nhả  trực tiếp một thể tích nhỏ  (0,5 – 2  L) mẫu vào vị trí đo, có một tay  cầm nơi có sợi cáp quang ấn xuống vị trí đặt mẫu, sau đó thả  nhẹ để  tạo  một khoảng cách nhỏ  dưới tác dụng của sức căng bề  mặt, cột chất lỏng   của mẫu được kéo lên. Lúc này có thể  thực hiện phép đo với thời gian <   10 giây. Biểu đồ  quang phổ  và các kết quả  phân tích hiện lên trên màn   hình máy tính đi kèm Dụng cụ, trang thiết bị ­ Micropipette 0,2 – 2  L ­ Nước cất ­ Đầu típ 10  L ­ Giấy lau ­ Máy đo quang phổ  NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Specific ®) và phần  mềm cài đặt trên máy tính Các bước thực hiện (1) Mở phần mềm: nhấp chuột 2 lần vào biểu tượng NanoDrop 2000 trên máy   tính (2) Chọn chương trình đo: chọn thanh Nucleic Acid (3) Xác minh bước sóng thường quy: dùng giấy lau sạch bệ đo (pedestal) bên  dưới và trên cánh tay của NanoDrop, hạ  cánh tay xuống và click OK, máy sẽ  chạy vài giây để kiểm tra.  (4) Blank trước khi sử  dụng: tải 1   L nước cất trực tiếp lên bệ  đo của  NanoDrop, hạ cánh tay máy xuống, nhấp chuột vào nút Blank trên màn hình. Máy  sẽ tiếp tục chạy vài giây để blanking. Sau khi blank xong, nút Measure sẽ hiện rõ  trên màn hình (5) Tiến hành đo mẫu: nhập mã số mẫu vào ơ ID, nâng cánh tay lên, lau sạch   bệ đo bên dưới và trên cánh tay bằng giấy thấm, nhỏ 1  L sản phẩm DNA lên vị  trí đo, hạ  cánh tay máy xuống, nhấp chọn nút Measure. Sau khi chương trình đo  hồn thành, máy sẽ hiển thị 1 cửa sổ cho phép lưu các số liệu vừa đo, có thể tạo   1 folder để lưu kết quả. Kết quả đo được hiển thị lên màn hình, với nồng độ ng/   L. Đối với DNA, cần quan tâm đến tỉ  số  hấp thụ  quang phổ  ở bước sóng 260  nm và 280 nm (A260/A280). Tỉ  số  này nằm trong khoảng từ  1,8 – 2,0 cho biết  sản phẩm DNA tinh sạch, nếu A260/A280