KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG CHỐNG ĐÔNG MÁU CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN NỌC BÒ CẠP Heterometrus laoticus

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYỄN HOÀNG MỸ AN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG CHỐNG ĐƠNG MÁU CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN NỌC BỊ CẠP Heterometrus laoticus KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC TP.HCM – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH TRANG PHỤ BÌA NGUYỄN HỒNG MỸ AN KHẢO SÁT TÁC ĐỘNG CHỐNG ĐÔNG MÁU CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN NỌC BÒ CẠP Heterometrus laoticus Chuyên ngành: Quản lý cung ứng thuốc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Giảng viên hướng dẫn: ThS Hoàng Thị Phương Liên TP.HCM – 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: - Đây đề tài nghiên cứu - Số liệu đề tài xác trung thực - Tơi xin chịu trách nhiệm đề tài nghiên cứu Chữ ký sinh viên Nguyễn Hoàng Mỹ An LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến trường Đại học Nguyễn Tất Thành, khoa Dược môn Dược lý tạo điều kiện tốt để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin cảm ơn TSKH Hồng Ngọc Anh đặt móng cho nghiên cứu lồi Bò cạp đen An Giang (Heterometrus laoticus), để từ em có sở thực đề tài Em xin đặc biệt cảm ơn ThS.DS Hồng Thị Phương Liên - mơn Dược lý truyền đạt kiến thức cần thiết, kinh nghiệm quý báu nghiên cứu khoa học tận tình dìu dắt, hướng dẫn em thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giảng viên môn Dược lý tạo điều kiện thuận lợi nhiệt tình giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Hội đồng phản biện đưa nhận xét góp ý quý giá để báo cáo khóa luận em hồn thiện Cuối cùng, cảm ơn bạn nhóm monitor mơn Dược lý hỗ trợ, giúp đỡ hồn thành khóa luận Sinh viên Nguyễn Hoàng Mỹ An MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ BÒ CẠP 1.1.1 Giới thiệu bò cạp 1.1.2 Độc tính nọc bọ cạp 1.1.3 Tác dụng dược lý nọc bọ cạp 1.1.4 Cơ chế tác động nọc bọ cạp 1.2 TỔNG QUAN VỀ BÒ CẠP ĐEN AN GIANG (Heterometrus laoticus) 10 1.3 TỔNG QUAN VỀ QUÁ TRÌNH CẦM MÁU 12 1.3.1 Tiểu cầu 12 1.3.2 Cầm máu 15 1.3.3 Rối loạn đông máu 19 1.3.4 Những chất chống đông máu 21 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG & PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 NGUYÊN LIỆU 23 2.1.1 Nọc Bò cạp đen An Giang (Heterometrus laoticus) 23 2.1.2 Động vật thử nghiệm 23 2.1.3 Dụng cụ 23 2.1.4 Hóa chất 23 2.2 PHƯƠNG PHÁP 24 2.3 PHÂN TÍCH THỐNG KÊ KẾT QUẢ 24 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ & BÀN LUẬN 25 3.1 KẾT QUẢ 25 i 3.1.1 Tác động chất khảo sát lên q trình đơng máu 25 3.1.2 Tác động chất khảo sát lên trình chảy máu 26 3.2 BÀN LUẬN 28 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ 31 4.1 KẾT LUẬN 31 4.2 ĐỀ NGHỊ 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt ADP Adenosine diphosphate BKCa Big conductance potassium Kênh Kali hoạt hóa Calci channel có độ dẫn lớn BmK Buthus martensi Karsch DIC Disseminated intravascular Hội chứng đông máu rải rác/ lan tỏa coagulation Dược sĩ DS hNav IKCa KCa Human voltage-gated sodium Kênh Natri cảm ứng điện channel người Intermediate conductance Kênh Kali hoạt hóa Calci potassium channel có độ dẫn trung bình Calcium-activated potassium Kênh Kali hoạt hóa Calci channel Toxin tác động lên kênh Kali KTx Kv Kênh Kali cảm ứng điện Voltage-gated potassium channel Nav Voltage-gated sodium channel Kênh Natri cảm ứng điện PAF Platelet activator factor Yếu tố hoạt hóa tiểu cầu PĐ Phân đoạn PĐTC Phân đoạn thứ cấp PPP Huyết tương nghèo tiểu cầu Platelet poor plasma iii PRP Platelet rich plasma Huyết tương giàu tiểu cầu rNav Human voltage-gated sodium Kênh Natri cảm ứng điện channel chuột RyR Ryanodine receptor Thụ thể Ryanodin SKCa Small conductance potassium Kênh Kali hoạt hóa Calci channel có độ dẫn nhỏ Thạc sĩ ThS TSKH./ Tiến sĩ khoa học Doctor of Science D.Sc iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Bọ cạp hóa thạch Hình 1.2 Cấu tạo thể bò cạp Androctonus crassicauda Hình 1.3 Bò cạp đen An Giang (Heterometrus laoticus) 10 Hình 1.4 Phần (metasoma) Heterometrus laoticus 11 Hình 1.5 Các giai đoạn trình sinh tiểu cầu 13 Hình 1.6 Các tế bào máu 13 Hình 1.7 Hình dạng tiểu cầu 13 Hình 1.8 Cấu trúc tiểu cầu 14 Hình 1.9 Q trình đơng máu 17 Hình 1.10 Các giai đoạn q trình đơng máu 17 Hình 1.11 Mạng lưới fibrin giam giữ hồng cầu, tạo cục máu đông 18 Hình 1.12 Quá trình tan cục máu đông 19 Hình 3.1 Thời gian đơng máu tác động PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48mg/kg 25 Hình 3.2 Thời gian chảy máu tác động PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48mg/kg 27 v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các yếu tố đông máu huyết tương 18 Bảng 3.1 Thời gian đông máu tác động chất khảo sát PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48mg/kg so với lô chứng (NaCl 0,9%) 25 Bảng 3.2 Thời gian chảy máu tác động chất khảo sát PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48mg/kg so với lô chứng (NaCl 0,9%) 27 vi Bảng 3.2 Thời gian chảy máu tác động chất khảo sát PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48mg/kg so với lô chứng (NaCl 0,9%) Thời gian chảy máu (giây) Sau 20 phút Sau 30 phút Sau 60 phút Sau 90 phút Sau 120 phút PĐ 386.2±57.3* 187.0±64.6* 86±2.38 119.3±29.2* 183±80.7 5.5.1 248.2±66.7* 314±58.6* 146.7±46.0* 65±14.5 40.2±10.3 5.22.3 233.0±30.6 ** 179.0±41.4* 218.7±78.5** 151.5±57.4 83.8±13.7 5.21.1 314.5±85.2* 84.8±16.7 81.2±15.4 61.8±14.8 68.8±16.4 Chứng 79.5±13.7 43.33±1.94 45.83±3.95 40.67±5.02 49.67±7.85 * p < 0,05 ** p < 0,01 so với chứng Hình 3.2 Thời gian chảy máu tác động PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48mg/kg Nhìn chung, PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1 5.22.3 có tác động kéo dài thời gian chảy máu suốt trình thử nghiệm (thời gian chảy máu xác định thời điểm 20, 30, 60, 90 120 phút sau tiêm tĩnh mạch chuột chất khảo sát) 27 PĐ khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) quan sát thấy thời điểm 20, 30 90 phút sau tiêm Riêng thời điểm 60 120 phút, khác biệt không mang ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Sau 20 phút kể từ tiêm thuốc, PĐTC kéo dài thời gian chảy máu so với nhóm chứng từ 3-5 lần tất khác biệt có ý nghĩa thống kê Sau 30 phút, PĐTC 5.5.1 5.22.3 kéo dài thời gian chảy máu đáng kể so với nhóm chứng khác biệt có ý nghĩa thống kê Đáng ý, PĐTC 5.5.1 có thời gian chảy máu gấp khoảng 7,2 lần so với nhóm chứng chênh lệch cao so với thời điểm khảo sát khác PĐTC PĐTC khác suốt trình thử nghiệm Ở PĐTC 2.21.1, thời gian chảy máu có kéo dài lại khơng có ý nghĩa thống kê Sau 60 phút, PĐTC kéo dài thời gian chảy máu so với nhóm chứng có 5.5.1 5.22.3 có ý nghĩa thống kê, 5.21.1 có khác biệt so với nhóm chứng khơng lớn (1,8 – 1,9 lần, 5.5.1 5.22.3 tương ứng 3,2 4,8 lần) ý nghĩa thống kê Sau 90 phút, PĐTC 5.5.1, 5.22.3 5.21.1 dù có kéo dài thời gian chảy máu so với nhóm chứng khơng mang ý nghĩa thống kê Sau 120 phút, so với nhóm chứng, hầu hết PĐTC kéo dài thời gian chảy máu, có PĐTC 5.5.1 có thời gian chảy máu ngắn Tuy nhiên, PĐTC khảo sát cho thấy khác biệt ý nghĩa thống kê Như vậy, PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 liều 2,48 mg/kg tăng thời gian chảy máu so với lô chứng Trong đó, PĐTC 5.21.1 cho tác động yếu 3.2 BÀN LUẬN Theo nghiên cứu trước đây, nọc thô bò cạp Heterometrus laoticus tách PĐ (cột Saphadex G-50 1,5 x 100cm) Trong đó, PĐ làm tăng thời gian đông máu lên 10 lần so với mẫu đối chứng qua xét nghiệm APTT [2] 28 Trong thử nghiệm in vivo, PĐ thể rõ ảnh hưởng lên thời gian đông – chảy máu thông qua việc kéo dài thời gian đông – chảy máu so với nhóm chứng suốt 120 phút q trình thử nghiệm Cụ thể, PĐ có thời gian đơng máu gấp 1,1 – 1,4 lần nhóm chứng thời gian chảy máu gấp 2,9 – 4,9 lần nhóm chứng Như vậy, kết in vivo góp phần củng cố thêm chứng chứng minh tác dụng chống đông máu PĐ nọc bò cạp Heterometrus laoticus Từ PĐ Heterometrus laoticus, tách 24 PĐTC qua sắc ký pha đảo Trong đó, PĐTC tách 5.5.1, 5.21.1 5.22.3 cho thấy tác động kéo dài thời gian đông – chảy máu suốt trình thử nghiệm  Tác động lên trình đông máu PĐTC Kết khảo sát cho thấy tác động kéo dài thời gian đông máu PĐTC khảo sát không cao, từ 1,3 – 1,8 lần so với nhóm chứng Trong đó, PĐTC 5.21.1 5.22.3 cho tác động nhanh kéo dài Cả PĐTC thể tác động từ phút thứ 20 sau tiêm kéo dài suốt 60 PĐTC 5.5.1 90 phút PĐTC 5.22.3 Đáng ý, thời điểm 20 phút kể từ tiêm thuốc, PĐTC 5.22.3 có thời gian đơng máu kéo dài đến 1,8 lần so với nhóm chứng Ngược lại, PĐTC 5.21.1 lại cho tác động yếu chậm hẳn PĐTC phát huy tác động sau 120 phút kể từ tiêm thuốc cho kèo dài thời gian đơng máu 1,4 lần so với nhóm chứng  Tác động lên trình chảy máu PĐTC Kết khảo sát cho thấy tác động kéo dài thời gian chảy máu PĐTC khảo sát rõ ràng, từ khoảng từ 2,9 đến 7,2 lần so với nhóm chứng Trong PĐTC 5.5.1 5.22.3 thể tác động mạnh PĐTC 5.21.1 yếu Cả PĐTC 5.5.1 5.22.3 thể tác động kéo dài thời gian chảy máu suốt đầu thử nghiệm Đáng ý, thời điểm 30 phút sau tiêm thuốc, PĐTC 5.5.1 có thời gian chảy máu dài gấp 7,2 lần nhóm chứng 29 Ngược lại, PĐTC 5.21.1 thể tác động yếu ngắn số PĐTC khảo sát PĐTC cho tác động 20 phút đầu 30 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN - PĐ 5, PĐTC 5.5.1, 5.21.1 5.22.3 cho thấy tác động kéo dài thời gian đông máu chảy máu - Tác động kéo dài thời gian chảy máu PĐ PĐTC 5.5.1, 5.21.1 5.22.3 rõ đông máu - PĐTC 5.5.1 5.22.3 có tác động kéo dài thời gian đơng – chảy máu mạnh - PĐTC 5.21.1 có tác động kéo dài thời gian đông - chảy máu yếu 4.2 ĐỀ NGHỊ Tiến hành nghiên cứu nhằm xác định đích tác động chế tác động PĐ lên hoạt động chống đông máu Từ triển khai nghiên cứu tối ưu hóa trình chiết tách, tinh chất, nghiên cứu thành phẩm ứng dụng vào điều trị bệnh 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Hoàng Ngọc Anh, Phạm Nguyên Đông Yên, Nguyễn Thị Mai Hương, Trần Thanh Đức, Võ Phùng Nguyên (2010), "Khảo sát thành phần protein nọc bọ cạp Heterometrus laoticus phân bố Tây Ninh so sánh với nọc bọ cạp phân bố An Giang", Tạp chí Hóa học, 48(4B), tr 285-289 Hoàng Ngọc Anh, Võ Đỗ Minh Hoàng, Nikitin Ilya, Utkin Yurin (2011), "Tách bước đầu nghiên cứu toxin ngắn nọc bọ cạp Heterometrus laoticus", Tạp chí Hóa học, 49(1), tr 117-121 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 1, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 10741076 Bộ môn Miễn dịch-Sinh lý bệnh - Trường đại học Y Hà Nội (2012), Sinh lý bệnh học, tái lần thứ 2, NXB Y học, Hà Nội, tr 297-298 Trần Thị Thu Hằng (2018), Dược lực học, tái lần thứ 22, NXB Phương Đơng, Tp Hồ Chí Minh, tr 947-964 Võ Đỗ Minh Hồng, Phạm Ngun Đơng n, Lưu Hoàng Lê Giang, Võ Phùng Nguyên, Hoàng Ngọc Anh (2014), "Khảo sát tính chất hóa học dược tính nọc bọ cạp đen Heterometrus laoticus (An Giang)", Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 52(1C), tr 217-224 Võ Phùng Nguyên, Hoàng Ngọc Anh, Lưu Hoàng Lê Giang (2009), "Độc tính cấp - bán trường diễn tác động giảm đau, kháng viêm nọc bọ cạp đen An Giang (Heterometrus laoticus)", Tạp chí Dược học, 400, tr 13-17 Võ Phùng Nguyên, Hoàng Ngọc Anh, Nguyễn Thị Phương Khuê (2008), "Nghiên cứu độc tính cấp tác dụng giảm đau nọc bò cạp nâu bò cạp đen Việt Nam", Tạp chí Y học Tp Hồ Chí Minh, Tập 12(1), tr 106 Võ Phùng Nguyên, Hoàng Ngọc Anh, Nguyễn Thị Phương Khuê (2008), "Nghiên cứu độc tính cấp, tác dụng giảm đau, kháng viêm nọc bọ cạp đen Tây Ninh", Tạp chí Dược học, 389, tr 31-34 10 Nguyễn Thị Thùy Trang, Trần Hiếu Trung, Nguyễn Hoài Nam, Nguyễn Cửu Khoa, Võ Phùng Nguyên, Yuri Utkin, Hoàng Ngọc Anh (2014), "Khảo sát tác động kháng viêm, giảm đau phân đoạn nọc bọ cạp Heterometrus laoticus", Tạp chí Dược học, 464, tr 41-45 11 Vụ Khoa học Đào tạo - Bộ Y tế (2012), Giải phẩu sinh lý người (Dùng cho đào tạo dược sĩ đại học), NXB Giáo dục Việt Nam, tr 75-85 TIẾNG ANH 12 Andrade E., Villanova F., Borra P., Leite K., Troncone L., Cortez I., Messina L., Paranhos M., Claro J., Srougi M (2008), "Penile erection induced in vivo by a purified toxin from the Brazilian spider Phoneutria nigriventer", BJU Int, 102(7), p 835-837 13 Berger R., Billups K., Brock G., Broderick G A., Dhabuwala C B., Goldstein I., Hakim L S., Hellstrom W., Honig S., Levine L A., Lue T., Munarriz R., Montague D K., Mulcahy J J., Nehra A., Rogers Z R., Rosen R., Seftel A D., Shabsigh R., Steers W (2001), "Report of the American Foundation for Urologic Disease (AFUD) Thought Leader Panel for evaluation and treatment of priapism", Int J Impot Res, 13 Suppl 5, p S39-43 14 Brazón Josmary, Guerrero Belsy, D´Suze Gina, Sevcik Carlos, Arocha-Piñango Carmen L (2013), "Anticoagulant and factor Xa-like activities of Tityus discrepans scorpion venom", Acta Toxicol Argent., 21(1), p 26-32 15 Brunton Laurence L., Chabner Bruce A., Knollmann Bjorn C (2011), Goodman & Gilman's The Pharmacological Basic of Therapeutics, 12th edition, McGraw Hill Medical, New York, p 849 16 Catterall W A., Cestele S., Yarov-Yarovoy V., Yu F H., Konoki K., Scheuer T (2007), "Voltage-gated ion channels and gating modifier toxins", Toxicon, 49(2), p 124-41 17 Chen B., Ji Y (2002), "Antihyperalgesia effect of BmK AS, a scorpion toxin, in rat by intraplantar injection", Brain Res, 952(2), p 322-326 18 Chen J., Feng X H., Shi J., Tan Z Y., Bai Z T., Liu T., Ji Y H (2006), "The anti-nociceptive effect of BmK AS, a scorpion active polypeptide, and the possible mechanism on specifically modulating voltage-gated Na+ currents in primary afferent neurons", Peptides, 27(9), p 2182-2192 19 Chuang R S., Jaffe H., Cribbs L., Perez-Reyes E., Swartz K J (1998), "Inhibition of T-type voltage-gated calcium channels by a new scorpion toxin", Nat Neurosci, 1(8), p 668-674 20 Couraud F., Jover E., Dubois J.M., Rochat H (1982), "Two types of scorpion toxin receptor sites, one related to the activation, the other to the inactivation of the action potential sodium channel", Toxicon, 20(1), p 9-16 21 Couzijn H.W.C (1981), "Revision of the Genus Heterometrus Hemprich & Ehrenberg (Scorpionidae, Arachnidea)", Zoologische Verhandelingen, 184(1), p 1-196 22 DeBin J A., Maggio J E., Strichartz G R (1993), "Purification and characterization of chlorotoxin, a chloride channel ligand from the venom of the scorpion", Am J Physiol, 264(2 Pt 1), p C361-369 23 DeBin J A., Strichartz G R (1991), "Chloride channel inhibition by the venom of the scorpion Leiurus quinquestriatus", Toxicon, 29(11), p 1403-1408 24 Diaz-Garcia A., Morier-Diaz L., Frion-Herrera Y., Rodriguez-Sanchez H., Caballero-Lorenzo Y., Mendoza-Llanes D., Riquenes-Garlobo Y., Fraga-Castro J A (2013), "In vitro anticancer effect of venom from Cuban scorpion Rhopalurus junceus against a panel of human cancer cell lines", J Venom Res, 4, p 5-12 25 Dorce A L C., Martins A D N., Dorce V A C., Nencioni A L A (2017), "Perinatal effects of scorpion venoms: maternal and offspring development", J Venom Anim Toxins Incl Trop Dis, 23(1), p 31 26 Fu Y J., Yin L T., Liang A H., Zhang C F., Wang W., Chai B F., Yang J Y., Fan X J (2007), "Therapeutic potential of chlorotoxin-like neurotoxin from the Chinese scorpion for human gliomas", Neurosci Lett, 412(1), p 62-67 27 Gopalakrishnakone P., Possani Lourival D., Schwartz Elisabeth F., Vega Ricardo C Rodríguez de la (2014), Scorpion venoms, Springer, Dordrecht, p 3-496 28 Gordon D., Karbat I., Ilan N., Cohen L., Kahn R., Gilles N., Dong K., Stuhmer W., Tytgat J., Gurevitz M (2007), "The differential preference of scorpion alpha-toxins for insect or mammalian sodium channels: implications for improved insect control", Toxicon, 49(4), p 452-472 29 Goudet C., Chi C W., Tytgat J (2002), "An overview of toxins and genes from the venom of the Asian scorpion Buthus martensi Karsch", Toxicon, 40(9), p 1239-58 30 Guan R., Wang C G., Wang M., Wang D C (2001), "A depressant insect toxin with a novel analgesic effect from scorpion Buthus martensii Karsch", Biochim Biophys Acta, 1549(1), p 9-18 31 Hamilton P J., Ogston D., Douglas A S (1974), "Coagulant activity of the scorpion venoms Palamneus gravimanus and Leiurus quinquestriatus", Toxicon, 12(3), p 291-296 32 Hoang Anh N , Vo Hoang D.M , Kudryashova K S., Nekrasova O V., Feofanov A V., Andreeva T V., Tsetlin V I., Utkin Y N (2013), "Hetlaxin, a new toxin from the Heterometrus laoticus scorpion venom, interacts with voltage-gated potassium channel Kv1.3", Dokl Biochem Biophys, 449, p 109-111 33 Hoang Anh N , Vo Hoang D.M , Vo Nguyen P., Kudryashova K S., Nekrasova O V., Feofanov A V., Kirpichnikov M P., Andreeva T V., Serebryakova M V., Tsetlin V I., Utkin Y N (2014), "Vietnamese Heterometrus laoticus scorpion venom: evidence for analgesic and anti-inflammatory activity and isolation of new polypeptide toxin acting on Kv1.3 potassium channel", Toxicon, 77, p 40-48 34 Housley D M., Housley G D., Liddell M J., Jennings E A (2017), "Scorpion toxin peptide action at the ion channel subunit level", Neuropharmacology, 127, p 46-78 35 Incamnoi P., Patramanon R., Thammasirirak S., Chaveerach A., Uawonggul N., Sukprasert S., Rungsa P., Daduang J., Daduang S (2013), "Heteromtoxin (HmTx), a novel heterodimeric phospholipase A(2) from Heterometrus laoticus scorpion venom", Toxicon, 61, p 62-71 36 Isbister G K., Bawaskar H S (2014), "Scorpion envenomation", N Engl J Med, 371(5), p 457-463 37 Kovařík František (2004), "A review of the genus Heterometrus Ehrenberg, 1828, with descriptions of seven new species (Scorpiones, Scorpionidae)", Euscorpius, 2004(15), p 1-60 38 Liu T., Pang X Y., Jiang F., Bai Z T., Ji Y H (2008), "Anti-nociceptive effects induced by intrathecal injection of BmK AS, a polypeptide from the venom of Chinese-scorpion Buthus martensi Karsch, in rat formalin test", J Ethnopharmacol, 117(2), p 332-338 39 Liu Y., Jennings N L., Dart A M., Du X J (2012), "Standardizing a simpler, more sensitive and accurate tail bleeding assay in mice", World J Exp Med, 2(2), p 30-36 40 Mamelak A N., Jacoby D B (2007), "Targeted delivery of antitumoral therapy to glioma and other malignancies with synthetic chlorotoxin (TM-601)", Expert Opin Drug Deliv, 4(2), p 175-186 41 Manjunatha Kini R., Clemetson Kenneth J, Markland Francis S., McLane Mary Ann, Morita Takashi (2011), Toxins and Hemostasis: From Bench to Bedside, Springer, New York 42 Nunes K P., Costa-Goncalves A., Lanza L F., Cortes S F., Cordeiro M N., Richardson M., Pimenta A M., Webb R C., Leite R., De Lima M E (2008), "Tx2-6 toxin of the Phoneutria nigriventer spider potentiates rat erectile function", Toxicon, 51(7), p 1197-1206 43 Pennington M W., Czerwinski A., Norton R S (2018), "Peptide therapeutics from venom: Current status and potential", Bioorg Med Chem, 26(10), p 27382758 44 Possani Lourival D., Becerril Baltazar, Delepierre Muriel, Tytgat Jan (1999), "Scorpion toxins specific for Na+-channels", FEBS Journal, 264(2), p 287-300 45 Quintero-Hernandez V., Jimenez-Vargas J M., Gurrola G B., Valdivia H H., Possani L D (2013), "Scorpion venom components that affect ion-channels function", Toxicon, 76, p 328-342 46 Saidani C., Hammoudi-Triki D., Laraba-Djebari F., Taub M (2016), "In vitro studies with renal proximal tubule cells show direct cytotoxicity of Androctonus australis hector scorpion venom triggered by oxidative stress, caspase activation and apoptosis", Toxicon, 120, p 29-37 47 Soroceanu L., Gillespie Y., Khazaeli M B., Sontheimer H (1998), "Use of chlorotoxin for targeting of primary brain tumors", Cancer Res, 58(21), p 48714879 48 Teixeira C E., de Oliveira J F., Baracat J S., Priviero F B., Okuyama C E., Rodrigues Netto N., Jr., Fregonesi A., Antunes E., De Nucci G (2004), "Nitric oxide release from human corpus cavernosum induced by a purified scorpion toxin", Urology, 63(1), p 184-189 49 Teixeira C E., Faro R., Moreno R A., Rodrigues Netto N., Jr., Fregonesi A., Antunes E., De Nucci G (2001), "Nonadrenergic, noncholinergic relaxation of human isolated corpus cavernosum induced by scorpion venom", Urology, 57(4), p 816-820 50 Teixeira C E., Teixeira S A., Antunes E., De Nucci G (2001), "The role of nitric oxide on the relaxations of rabbit corpus cavernosum induced by Androctonus australis and Buthotus judaicus scorpion venoms", Toxicon, 39(5), p 633-639 51 Uawonggul N., Thammasirirak S., Chaveerach A., Arkaravichien T., Bunyatratchata W., Ruangjirachuporn W., Jearranaiprepame P., Nakamura T., Matsuda M., Kobayashi M., Hattori S., Daduang S (2007), "Purification and characterization of Heteroscorpine-1 (HS-1) toxin from Heterometrus laoticus scorpion venom", Toxicon, 49(1), p 19-29 52 Vandendriessche T., Kopljar I., Jenkins D P., Diego-Garcia E., Abdel-Mottaleb Y., Vermassen E., Clynen E., Schoofs L., Wulff H., Snyders D., Tytgat J (2012), "Purification, molecular cloning and functional characterization of HelaTx1 (Heterometrus laoticus): the first member of a new kappa-KTX subfamily", Biochem Pharmacol, 83(9), p 1307-1317 53 Wang X., Wang G (2016), "Insights into Antimicrobial Peptides from Spiders and Scorpions", Protein Pept Lett, 23(8), p 707-721 54 Xiong Y M., Lan Z D., Wang M., Liu B., Liu X Q., Fei H., Xu L G., Xia Q C., Wang C G., Wang D C., Chi C W (1999), "Molecular characterization of a new excitatory insect neurotoxin with an analgesic effect on mice from the scorpion Buthus martensi Karsch", Toxicon, 37(8), p 1165-1180 55 Zhao R., Weng C C., Feng Q., Chen L., Zhang X Y., Zhu H Y., Wang Y., Ji Y H (2011), "Anticonvulsant activity of BmK AS, a sodium channel site 4specific modulator", Epilepsy Behav, 20(2), p 267-276 56 Zhao R., Zhang X Y., Yang J., Weng C C., Jiang L L., Zhang J W., Shu X Q., Ji Y H (2008), "Anticonvulsant effect of BmK IT2, a sodium channel-specific neurotoxin, in rat models of epilepsy", Br J Pharmacol, 154(5), p 1116-1124 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM KHẢO SÁT TÁC DỤNG LÊN THỜI GIAN ĐÔNG MÁU CỦA PĐ5 VÀ CÁC PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 Ở LIỀU 2,48mg/kg Nhóm thử nghiệm PĐ5 PĐTC 5.5.1 PĐTC 5.21.1 PĐTC 5.22.3 CHỨNG Chuột 6 6 Sau 20 phút 643 337 341 298 350 465 374 450 522 410 366 433 488 424 330 365 387 315 389 495 407 712 918 418 558 654 401 172 174 235 Thời gian đông máu (giây) Sau 30 Sau 60 Sau 90 phút phút phút 437 482 391 222 295 447 282 496 532 212 386 123 430 206 329 567 360 339 397 359 550 404 340 307 336 312 316 492 341 610 503 486 413 425 359 374 406 363 414 409 307 409 304 270 401 353 414 479 219 198 400 354 250 660 291 295 267 357 450 289 305 184 134 524 580 445 648 224 365 262 295 382 381 684 640 505 594 604 313 344 391 288 279 213 116 271 303 203 208 269 PL1 Sau 120 phút 355 447 378 299 304 340 376 288 223 435 257 199 372 314 272 394 359 296 177 274 158 327 213 272 712 457 218 285 242 325 PHỤ LỤC 2: SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM KHẢO SÁT TÁC DỤNG LÊN THỜI GIAN CHẢY MÁU CỦA PĐ5 VÀ CÁC PĐTC 5.5.1, 5.21.1, 5.22.3 Ở LIỀU 2,48mg/kg Nhóm thử nghiệm PĐ5 PĐTC 5.5.1 PĐTC 5.21.1 PĐTC 5.22.3 CHỨNG Chuột 6 6 Sau 20 phút 558 121 600 600 530 122 419 135 76 600 147 122 302 511 58 141 275 600 322 125 292 184 273 202 181 600 600 68 411 89 Thời gian đông máu (giây) Sau 30 Sau 60 Sau 90 phút phút phút 115 197 74 68 74 253 40 53 47 600 20 99 600 1800 1800 112 86 124 215 465 72 296 77 26 26 48 21 1217 90 71 125 113 87 88 94 113 62 91 74 119 122 118 66 80 44 54 44 30 56 119 82 152 31 23 36 194 48 317 88 147 102 114 99 164 1800 420 250 199 159 205 117 36 52 191 65 138 209 100 76 61 33 106 1800 184 511 465 175 64 233 41 PL2 Sau 120 phút 55 204 1530 39 1017 97 44 18 18 54 25 82 17 53 39 92 128 84 115 122 87 51 90 38 50 71 28 69 110 17 PHIẾU XÁC NHẬN SỬA CHỮA Nội dung khóa luận chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng GVHD (ký ghi rõ họ tên) Sinh viên (ký ghi rõ họ tên) Chủ tịch Hội đồng (ký ghi rõ họ tên) GV phản biện (ký ghi rõ họ tên)