Với mục tiêu tìm kiếm các nguồn nguyên liệu mới từ tự nhiên có tác động trị liệu tốt và ít tác dụng phụ, đồng thời xác định thành phần chính thực sự có tác động dược lý, từ đó hướng tới xác định cấu trúc, cơ chế tác động của thành phần này,đề tài nghiên cứu quá trình sắc ký lọc gel Superdex HR75 nọc rắn cạp nong Bungarus fasciatus và tác động giảm đau ngoại biên và trung ương của nọc thô và của các phân đoạn của nọc rắn trên 02 mô hình: gây đau quặn bằng acid acetic và mô hình nhúng đuôi chuột.
NTTU-NCKH-05 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2015-2016 Tên đề tài: Khảo sát tác động giảm đau nọc thô phân đoạn nọc rắn cạp nong Việt Nam Bungarus fasciatus Số hợp đồng: 2016.01.17 /HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Thùy Trang Đơn vị công tác: Khoa Dược – Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 1/2016 – 1/2017 TPHCM-2017 TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 201 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc - Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN BỘ - GIẢNG VIÊN 2015 - 2016 Tên đề tài: Khảo sát tác động giảm đau nọc thô phân đoạn nọc rắn cạp nong Việt Nam Bungarus fasciatus Số hợp đồng :2016.01.17 /HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Thùy Trang Đơn vị công tác: Khoa Dược – Đại học Nguyễn Tất Thành Thời gian thực hiện: 1/2016 – 1/2017 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nọc rắn 1.1.1 Nguồn gốc, đặc điểm phân loại 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Đặc tính lồi 1.1.4 Nọc rắn 1.1.5 Các ứng dụng y học 1.2 Loài rắn cạp nong 1.2.1 Đặc điểm loài 1.2.2 Nọc rắn cạp nong 1.3 Đại cương đau 1.3.1 Định nghĩa phân loại 1.3.2 Thuốc điều trị đau mặt hạn chế 13 1.3.3 Tác dụng giảm đau nọc rắn 14 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Động vật thử nghiệm 16 2.2 Dụng cụ 16 2.3 Hóa chất 16 2.4 Phương pháp thử nghiệm tác dụng giảm đau 17 2.4.1 Mơ hình giảm đau trung ương phương pháp nhúng chuột 17 2.4.2 Mơ hình giảm đau ngoại biên với phương pháp gây đau quặn acid acetic 18 2.5 Phân tích thống kê kết 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 3.1 Tách phân đoạn nọc rắn phương pháp sắc ký cột Superdex HR75 19 3.1.1 Tác động giảm đau ngoại biên 20 3.1.2 Tác động giảm đau trung ương 22 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 24 4.1 Kết luận 24 4.2 Kiến nghị 24 i DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cách lấy nọc rắn Hình 1.2Rắn cạp nong Bungarus fasciatus Hình 1.3Sắc ký trao đổi ion nọc rắn cạp nong Hình 1.4 Đường dẫn truyền cảm giác đau 13 Hình 3.1Sắc ký nọc rắn cạp nong cột lọc gel Superdex HR75 19 Hình 3.2 Số lần đau quặn lô chuột thời điểm khảo sát 20 Hình 3.3tiềm thời giật chuột lô thời điểm khảo sát 22 ii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số thuốc chữa bệnh chẩn đoán bệnh có nguồn gốc từ nọc rắn iii MỞ ĐẦU Xã hội ngày phát triển, nhu cầu chăm sóc sức khỏe người ngày được ý Các nghiên cứu khoa học, kỹ thuật y dược học phát triển nhằm tìm giải pháp khơng chỉ điều trị an tồn, tác động phụ mà còn đạt hiệu cao Như nói trên, thuốc hóa dược có nhiều tác dụng không mong muốn vấn đề cấp thiết ngành y tế phải tìm dẫn chất phương pháp điều trị để giúp bệnh nhân giảm đau, kháng viêm, cải thiện được triệu chứng bệnh Rắn cạp nong Việt Nam Bungarus fasciatus loài được phân bố rộng rãi nước ta loài chưa được đưa vào nghiên cứu nhiều Rắn cạp nong Bungarus fasciatus loài thuộc họ rắn hổ Elapidae nghiên cứu trước chứng minh được nọc rắn cạp nong có tác dụng giảm đau tốt [2] Vì vậy, với mục tiêu tìm kiếm nguồn nguyên liệu từ tự nhiên có tác động trị liệu tốt tác dụng phụ, đồng thời xác định thành phần thực có tác động dược lý, từ hướng tới xác định cấu trúc, chế tác động thành phần này, tiến hành sắc ký lọc gel Superdex HR75 nọc rắn cạp nong Bungarus fasciatus thu được phân đoạn tiến hành nghiên cứu tác động giảm đau ngoại biên trung ương nọc thô phân đoạn nọc rắn 02 mơ hình :gây đau quặn acid acetic mơ hình nhúng chuột CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nọc rắn 1.1.1 Nguồn gốc, đặc điểm phân loại Lồi rắn được cho tiến hóa từ lồi thằn lằn khoảng thời gian kỉ Phấn Trắng Hóa thạch có niên đại lâu được tìm thấy có nguồn gốc cách 112 triệu năm Đặc điểm chung lồi rắn thân dài, có vảy nhỏ, bụng có vảy lớn, khơng chân, di chuyển cách trườn bụng Miệng có xương hàm trên, xương hàm dưới, xương cánh, xương ngang có khớp đóng dây chằng đàn hồi làm cho rắn há to, dễ dàng nuốt mồi lớn, lưỡi chẻ đôi [28] Phân loại: rắn được chia làm hai loại - có nọc độc khơng có nọc độc Trên giới có 15 họ, 456 chi 2900 lồi rắn được cơng nhận Trong số đó, chỉ có khoảng 300 lồi có nọc độc [20] Ở Việt Nam có khoảng 140 lồi rắn 32 lồi có nọc độc [2] Lồi có nọc độc thường tập trung vào họ như: Colubridae, Elapidae, Hydrophidae, Viperidae Crotalidae [20] 1.1.2 Phân bố Loài rắn sinh sống khắp nơi giới trừ Nam Cực, Ấn Độ Dương, Thái Bình Dương, số đảo lớn Ireland, New Zealand, nhiều đảo nhỏ Đại Tây Dương trung tâm Thái Bình Dương [10] Ở Việt Nam, rắn phân bố khắp nơi từ vùng núi, trung du, đồng Thường gặp rừng thưa, bờ bụi, gò đống hay gần nơi người [2] 1.1.3 Đặc tính lồi Rắn thuộc nhóm bò sát, động vật máu lạnh Chúng thường ẩn hang để ngủ mùa đông Thức ăn rắn thường ếch, nhái, sâu bọ, thằn lằn, chim, trứng chim loại rắn khác Những lồi có nọc độc thường hoạt động vào ban đêm, dùng nọc độc để chế ngự mồi, lồi khơng có nọc độc thường hoạt động vào ban ngày, săn mồi cách xiết chặt mồi chết Sau ăn, chúng trở nên thụ động lười biếng Bộ máy tiêu hóa chúng làm việc hiệu quả, tiêu thụ thứ trừ lơng móng vuốt mồi Rắn thường ghép đôi vào tháng 4, giao phối vào tháng đẻ trứng vào tháng Rắn trưởng thành sau nhiều lần lột xác Việc lột xác giúp chúng loại bỏ kí sinh trùng Trung bình 2-3 tháng rắn lột xác lần [2] 1.1.4 Nọc rắn Nọc rắn hỗn hợp thành phần có hoạt tính sinh học cao với chức tiêu diệt bất động tiêu hóa mồi Nọc rắn bao gồm chất có chất protein chất khơng có chất protein Thành phần chất có chất protein bao gồm enzym, protein khơng có tính enzym, polypeptid Thành phần khơng có chất protein gồm chất hữu chất vô [27] Trong đó, khoảng 95% khối lượng khơ nọc rắn polypeptid như: enzym, toxin, peptid nhỏ Trong nọc rắn, nhà khoa học xác định được 20 enzym 12 số thành phần nọc Trong đó, hyaluronidase thành phần ln có mặt tất nọc, có tác dụng giúp cho thành phần nọc dễ dàng xâm nhập vào mô mồi [20] Sự thay đổi thành phần độc tính nọc rắn khơng chỉ phụ thuộc vào lồi mà bị ảnh hưởng yếu tố khác như: địa lí phân bố, mùa, thói quen, mồi, độ tuổi giới tính Một nghiên cứu cho thấy nọc rắn lấy vào mùa thu độc nọc rắn lấy vào mùa xuân [17] Nọc rắn được lấy cách để rắn cắn vào đĩa petri, dùng tay xoa bóp nhẹ vào hai tuyến nọc sau tai, nọc chảy vào đĩa Khi lấy nọc cần ý bóp mạnh nọc hòa dãi lẫn máu làm giảm chất lượng nọc Nọc chảy có màu vàng nhạt, sánh Sau đó, nọc được đơng khơ làm khơ bình hút ẩm chứa silicagen hay CaCl2 Nọc khơ bảo quản hàng chục năm hoạt tính pha với nước khơng dùng được lâu [3] Hình 1.1 Cách lấy nọc rắn Một số chế gây độc nọc rắn [26] - Enzym trợ đơng máu (procoagulant enzymes): thường gặp họ rắn lục Viperidae, enzym kích thích q trình đơng máu khơng tạo được cục máu đơng Nó thường tạo fibrin máu hầu hết bị phá vỡ nhanh chóng hệ thống ly giải fibrin thể Vì khoảng 30 phút sau bị rắn cắn nồng độ yếu tố gây đơng giảm xuống khơng thể hình thành cục máu - Enzym gây xuất huyết (haemorrhagins): zinc metalloproteinase, enzym làm tổn thương thành mạch máu gây xuất huyết tự nhiên -Toxin gây hoại tử tế bào (cytolitic): enzym tiêu hóa thuộc loại polypeptid hydroxylase (enzym thủy phân protein phospholipase A) yếu tố khác làm gia tăng tính thấm gây nên tượng sưng phù Chúng dẫn đến hủy diệt màng mô tế bào - Phospholipase A2: gây tan máu tiêu Những enzym làm tổn thương màng tế bào, lớp nội mạc, xương, tế bào thần kinh hồng cầu - Độc tố thần kinh (neurotoxin) tiền synap: thường gặp họ rắn hổ Elapidae vài họ rắn lục Viperidae Đây phospholipase A2 làm tổn thương thần kinh tận cùng, ban đầu giải phóng chất dẫn truyền acetylcholin, sau can thiệp vào trình giải phóng acetylcholin kênh cổng proton, kênh cổng điện Na+, thụ thể NMDA chất chủ vận với thụ thể GABA, thụ thể cholinergic thụ thể opioid Dựa chế này, chất độc có nguồn gốc động vật được chứng minh có tác dụng giảm đau thơng qua kênh ion thụ thể Trong đó, nọc rắn điển hình Nhiều báo cáo cho thấy nọc độc họ rắn lục (Viperidae) họ rắn hổ (Elapidae) có tác dụng giảm đau nhờ vào neurotoxin myotoxin cobrotoxin, crotamin, hannalgesin… [27] Rắn cạp nong B.fasciatus có thành phần neurotoxin, bước đầu nghiên cứu cho thấy 16/17 toxin có khối lượng phân tử từ đến KDa tương tác mạnh với thụ thể nicotinic acetylcholin loại có hai toxin tương tác với thụ thề nicotinic acetylcholin loại loại α - [5] Đây sở cho việc tiến hành nghiên cứu tác dụng giảm đau nọc rắn cạp nong B.fasciatus 15 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng đực trưởng thành, chủng Swiss albino, khỏe mạnh, không dị tật Viện vắc xin sinh phẩm y tế Nha Trang cung cấp Chuột mua được ni ổn định hai ngày trước tiến hành thử nghiêm Những chuột có trọng lượng từ 19 đến 26 gam được đưa vào thử nghiệm Khi thử nghiệm độc tính cho chuột nhịn đói 12 cung cấp nước đầy đủ Thử nghiệm giảm đau, chuột được cung cấp thức ăn nước uống đầy đủ Tất thử nghiệm được tiến hành từ đến 17 ngày 2.2 Dụng cụ Cân phân tích AND model HR 2000, Nhật Cân kỹ thuật Sarito model CP4202S, Nhật Bể siêu âm model T840DH, model ELMA, Đức Bếp cách thủy Memmert, model WB14, Đức Micropipet 5- 50 µl,100- 1000 µl Nhiệt kế Đồng hồ bấm giây Bocal thủy tinh, bocal nhựa, kéo mổ, cốc có mỏ, kim tiêm, kim cho uống 2.3 Hóa chất Nọc rắn cạp nong B fasciatus: nọc đơng khơ, có màu vàng ánh, được bảo quản -20 oC, tan tốt nước Nọc rắn được nghiền mịn, cho trương nở hoàn toàn nước muối sinh lý 0,9% khoảng 20 phút Sau lắc để nọc hòa tan hồn tồn Dung dịch được sử dụng cho thử nghiệm độc tính dược lý Chất gây đau quặn acid acetic băng (CH3COOH) (Fuangdong Guanghua Chemical Factory) Acid acetic đạt tiêu chuẩn phân tích acid hữu yếu, có tính ăn mòn, dễ bay Nhiệt độ nóng chảy 17 oC Nhiệt độ sơi 116 – 118 oC Tỷ trọng 1,05 16 Chất đối chứng thử nghiệm giảm đau trung ương morphin chlorhydrat (công ty cổ phần dược phẩm TW2): Morphin thuốc giảm đau gây ngủ mạnh, tác động chủ yếu lên hệ thần kinh trung ương Morphin dễ gây nghiện dễ lệ thuộc thuốc Chất đối chứng thử nghiệm giảm đau ngoại biên Aspirin (Aspegic®, Sanofi Sythelabo): gói chứa 180 mg Acetylsalicylat DL-Lysin tương đương với 100 mg acid acetylsalicylic Thuốc giảm đau hạ sốt nhóm salicylat 2.4 Phương pháp thử nghiệm tác dụng giảm đau 2.4.1 Mơ hình giảm đau trung ương phương pháp nhúng đuôi chuột Chuột đủ tiêu chuẩn thử nghiệm được chia ngẫu nhiên thành nhiều nhóm, nhóm từ - 10 con, cho thuốc với lượng 0,1 ml/ 10 g thể trọng - Lô chứng: tiêm da dung dịch muối sinh lý 0,9% - Lô đối chứng: tiêm da dung dịch morphin chlorhydrat mg/kg - Lô thử nghiệm liều 0,34 mg/kg: tiêm da dung dịch nọc nọc rắn liều 0,34 mg/kg Chuột được cố định vào lồng với được thả tự ngồi Đi chuột được nhúng vào bocal nước nóng trì nhiệt độ 50 ± 0,5 ºC bếp cách thủy Memmert Nhiệt độ nước được kiểm soát nhiệt kế Thời gian phản ứng, tính từ lúc nhúng vào nước đến chuột giật mạnh đuôi khỏi nước, được ghi nhận đồng hồ bấm giây Chuột được chọn làm thử nghiệm chuột có thời gian phản ứng khơng giây Ghi nhận thời gian phản ứng chuột trước cho dùng thuốc vào thời điểm 30, 60, 90, 120 phút sau cho thuốc Tại thời điểm, thời gian phản ứng được đo lần liên tiếp ghi nhận thời gian dài Lau khơ chuột bơng gòn sau lần đo, chuột không phản ứng sau 10 giây nhấc chuột để tránh bỏng chuột So sánh thời gian xuất phản ứng giật mạnh đuôi chuột nhóm, kéo dài thời gian có phản ứng nhóm thử so với nhóm chứng cho thấy tác động giảm đau trung ương chất thử nghiệm 17 2.4.2 Mơ hình giảm đau ngoại biên với phương pháp gây đau quặn acid acetic Chuột được chia ngẫu nhiên thành nhiều nhóm, nhóm từ - 10 con, cho thuốc với lượng 0,1ml/10 g thể trọng - Lô chứng: tiêm da dung dịch muối sinh lý 0,9% - Lô đối chứng: uống dung dịch aspirin liều 50 mg/kg - Lô thử nghiệm liều 0,34 mg/kg: tiêm da dung dịch nọc rắn liều 0,34 mg/kg Sau dùng thuốc 30 phút, tất chuột được tiêm phúc mô dung dịch acid acetic 0,7% Mỗi chuột được đặt vào bocal riêng, ghi nhận số lần đau quặn (chuột hóp bụng đồng thời duỗi chân sau) phút đến phút thứ 40 So sánh số lần đau quặn chuột nhóm thời điểm Sự giảm số lần đau quặn chuột nhóm thử so với nhóm chứng cho thấy tác động giảm đau ngoại biên chất thử nghiệm 2.5 Phân tích thống kê kết Các số liệu tác dụng giảm đau được trình bày dạng số trung bình SEM (standard error of mean – sai số chuẩn số trung bình) Sự khác biệt lơ được phân tích phép kiểm Kruskal – Wallis sau Mann - Whitney với phần mềm Minitab 15.0, P < 0,05 được cho có ý nghĩa thống kê Biểu đồ được vẽ phần mềm SigmaPlot 12.0 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tách phân đoạn nọc rắn phương pháp sắc ký cột Superdex HR75 Nọc rắn toàn phần được phân tách sắc ký lọc gel cột Superdex HR75 Kết cho thấy nọc toàn phần tách làm phân đoạn Các phân đoạn được thu lại, đông khô dùng để khảo sát tác động giảm đau chúng lên chuột Hình 3.1Sắc ký nọc rắn cạp nong cột lọc gel Superdex HR75 19 3.1.1 Tác động giảm đau ngoại biên Hình 3.2 Số lần đau quặn lô chuột thời điểm khảo sát Để biết được tác dụng giảm đau ngoại biên dung dịch thử, so sánh kết số lần đau quặn phân đoạn với số lần đau quặn nhóm chứng nhóm đối chứng So với nhóm chứng: - Nhóm đối chứng Aspirin với liều 50,0 mg/kg có số lần đau quặn có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng thời điểm: 5-10 phút, 20-25 phút, 35-40 phút - Nọc toàn phần, phân đoạn 1, 2, với liều 0,34 mg/kg có số lần đau quặn có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng thời điểm khảo sát 5-10 phút, 20-25 phút 35-40 phút - Phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có số lần đau quặn thời điểm 5-10 phút khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng Tại thời điểm 20-25 phút 35-40 phút phân đoạn có số lần đau quặn khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng So với nhóm đối chứng - Nọc tồn phần với liều 0,34 mg/kg có số lần đau quặn nhiều hơn, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng thời điểm 5-10 phút 20 20-25 phút Tại thời điểm 35-40 phút, nọc tồn phần có số lần đau quặn nhiều có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng - Phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có số lần đau quặn khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng thời điểm 5-10 phút Tại thời điểm 20-25 phút 35-40 phút, số lần đau quặn phân đoạn nhiều hơn, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng - Phân đoạn 2, với liều 0,34 mg/kg có số lần đau quặn nhiều khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng thời điểm khảo sát Phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có số lần đau quặn thời điểm khảo sát khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng Nhận xét: - Nọc toàn phần phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có tác dụng giảm đau ngoại biên tốt so với nhóm chứng Có khác tác dụng giảm đau phân đoạn liều sử dụng - Chúng nhận thấy phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có tác dụng giảm đau ngoại biên tốt nọc rắn toàn phần với liều 0,34 mg/kg thuốc Aspirin với liều 50,0 mg/kg thời điểm khảo sát - Phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có tác dụng giảm đau ngoại biên tốt nọc rắn toàn phần với liều 0,34 mg/kg thuốc Aspirin với liều 50,0 mg/kg khoảng 10 phút đầu thử nghiệm 21 3.1.2 Tác động giảm đau trung ương Hình 3.3tiềm thời giật chuột lô thời điểm khảo sát So với nhóm chứng - Nọc tồn phần phân đoạn 1, 2, với liều 0,34 mg/kg có thời gian phản ứng giật mạnh chuột nhanh so với nhóm chứng thời điểm khảo sát, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê - Nhóm phân đoạn với liều 0,34 mg/kg có thời gian phản ứng giật mạnh chuột chậm khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng thời điểm 90 phút, thời điểm khảo sát 30 phút, 60 phút 120 phút phân đoạn có thời gian phản ứng giật mạnh chuột nhanh nhóm chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê So với nhóm đối chứng Thời gian phản ứng giật mạnh đuôi chuột nhóm nọc tồn phần phân đoạn nọc rắn cạp nong với liều 0,34 mg/kg nhanh so với thời gian phản ứng giật mạnh chuột nhóm đối chứng Nhận xét: 22 Nọc toàn phần phân đoạn nọc rắn cạp nong với liều 0,34 mg/kg khơng có tác dụng giảm đau trung ương, thời gian phản ứng giật mạnh nhóm nhanh so với nhóm chứng nhóm đối chứng Trong nghiên cứu trước đó, người ta thử nọc tồn phần nọc rắn cạp nong B.fasciatus miền Nam (Tiền Giang) với liều 0,34 mg/kg thấy có tác dụng giảm đau trung ương [9] Trong nghiên cứu chúng tôi, nọc toàn phần nọc rắn cạp nong B.fasciatus miền Bắc (Vĩnh Phúc) với liều 0,34 mg/kg khơng thấy tác dụng giảm đau trung ương Như vậy, kết cho thấy loài vùng địa lý khác tính chất hóa học tính chất dược lý nọc rắn khác 23 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua thời gian nghiên cứu, thu được kết luận sau: Nọc rắn cạp nong Bungarus fasciatus được tách làm phân đoạn phương pháp sắc ký cột với Superdex HR 75 Nọc toàn phần phân đoạn có tác dụng giảm đau ngoại biên liều 0,34 mg/kg Trong số đó, phân đoạn (0,34 mg/kg) có tác dụng giảm đau biên tương đương so với aspirin (50 mg/kg) Về tác dụng giảm đau trung ương, liều thử nghiệm nọc toàn phần (0,34 mg/kg) phân đoạn (0,34 mg/kg) chưa thể tác dụng giảm đau trung ương 4.2 Kiến nghị - Vì mơ hình có ưu khuyết điểm riêng nên để khẳng định tác dụng dược lý giảm đau nọc rắn cạp nong B fasciatus, đề nghị tiến hành thử nghiệm giảm đau trung ương ngoại biên mô hình khác, nhiều liều thử nghiệm với dạng bào chế khác cream bơi ngồi da - Một số tác dụng dược lý khác nọc rắn được công bố kháng viêm, trị huyết khối, ung thư… cần được khảo sát để làm phong phú thêm giá trị nọc rắn - Khảo sát độc tính bán mạn tính mạn tính nọc rắn cạp nong Việt Nam B fasciatus Chủ nhiệm đề tài (Ký ghi rõ họ tên) 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Khoa học Công nghệ Việt Nam (2007), Sách đỏ Việt Nam phần I - Động vật, NXB Khoa học Cơng nghệ, Hà Nội, tr 209 Đỗ Huy Bích (2004), Cây thuốc động vật dùng làm thuốc Việt Nam tập II, NXB Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội, tr 1191-1195 Đỗ Tất Lợi (2004), Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, tr 1007 Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, NXB Y Học, Hà Nội Hồng Ngọc Anh, Phạm Ngun Đơng n (2012), “Nghiên cứu thành phần toxin nọc rắn cạp nong Việt Nam”, Tạp chí Khoa học Cơng Nghệ Được chấp thuận đăng Trần Thị Thu Hằng (2010), Dược lực học, NXB Phương Đơng, Hồ Chí Minh, tr 178-193 Viện dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ dược thảo, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 57-64 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG ANH Anthony T Tu, Paul M Tooma, and Somsri Ganthavorna (1967), “Hemorrhagic and proteolytic activities of thailand snake venoms”, Biochem Pharmacol, 16(11), 2125-30 B Eliot Cole (2002), “Clinical review article:pain management: classifying, understanding, and treating pain”, Hospital Physician, 23-30 10 Bauchot and Roland (1994), Snakes: A Natural History, Sterling Publishing Co., New York, pp 220 11 Chinpan Chen, et al (2001), “Solution structure of a Kunitz-type Chymotrypsin inhibitor isolated from the Elapid snake Bungarus fasciatus”, The Journal of Biological Chemistry, 276(48), 45079-45097 12 D.C.I Koh., A Armugam, and K Jaseelan (2006), “Review Snake venom components and their applications in biomedicine”, Celluar and Molecular Life Sciences,63, 3030-3041 13 Daniel le Bars, Manuela Gozariu, and Samuel W Cadden (2001), “Animal models of Nociception”, Pharmacological Reviews, 53(4), 597-952 14 Emanuele Schiavon and Tiziaza Sacco (2006), “Resurgent Current and Voltage Sensor Trapping Enhanced Activaton by a β- scorpion toxin solely in Na+”, J Biol Chem., 289(29), 20326-37 15 Ernest Hodgson (2010), A textbook of modern toxicology 4th , John Wiley & Sons, INC., Canada, pp 287- 298 16 Inn-Ho Tsai, Hsin-Yu Tsai, et al (2006), “Sequences, geographic variations and molecular phylogeny of venom phospholipases and threefinger toxins of Eastern India Bungarus fasciatus and kinetic analyses of its Pro31 phospholipases A2” FEBS Journal, 274(2007), 512-525 17 J.-P Chippaux, Williams, and J White (1991), “Review article snake venom variability: methods of study, 1303 results and interpretation”, Toxicon, 29(2), 1279- 18 Ji-Fu Wei, Hai-Wei Y., Xiao-Long W., Li-Ya Q., Wan-Yu W., Shao-Heng H (2009), “Purification, characterization and biological activities of the L-amino acid oxidase from Bungarus fasciatus snake venom”, Toxicon, 54(2009), 262-271 19 K Ratanabanangkoon and T Buranawuti(1978), “Comparative cardiovascular and respiratory effects of Bungarusfasciatus and Naja naja siamensis venoms in dog” , Comp Biochem Physiol C., 60(1), 61-63 20 L.Karalliedde (1995), “Animal toxins”, British Journal of Anaesthesia,74, 319327 21 Michael D B Swedberg (1994), “The mouse grid-shock analgesia test: Pharmacological characterization of latency to vocalization threshold as an index of antinoception”, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 269(3), 1021-1028 22 M Imad Damej, Edwin M Meyer, Billy R Martin (2000), “The antinociceptive effects of α7 nicotinic agonists in an acute pain model”, Neuropharmacology, 39, 2785 - 2791 23 Sanjoi Kumar Pal, et al (2002), “Review article: Snake venom as therapeutic agents: from toxin to drug development”, Indian Journal of experimental biology, 40, 1353-1358 24 Seiichi Nurimoto and Goro Hayashi (1973), “Narcotic antagonist activity of the 3phenylpiperidines with N-antagonistic substitution”, Japan J Pharmacol, 23, 742-745 25 V K Kapoor (2010), “Review Article: Natural toxins and their therapeutic potential”, Indian Journal of Experimental Biology, 48, 228-237 26 WHO (2005), Guidelines for the clinical management of snake bites it the South – East Asia region, pp 8-9 27 Wudayagiri Rajendra, Arunmozhiarasi Armugam, and Kandiah Jeyaseelan (2004), “Review: Toxins in anti-nociception and anti-inflammation”, Toxicon, 44, 1-17 28 Yipeng Wang, et al (2008), “Snake Cathelicidin from Bungarus fasciatus is a potent Peptide Antibiotics”, PLoS one, 3(9), 1-9 ... đề tài: Khảo sát tác động giảm đau nọc thô phân đoạn nọc rắn cạp nong Việt Nam Bungarus fasciatus Số hợp đồng :2016.01.17 /HĐ-KHCN Chủ nhiệm đề tài: Nguyễn Thị Thùy Trang Đơn vị công tác: Khoa... thấy nọc rắn cạp nong độc nọc rắn hổ mang [18] Độc tố nọc rắn cạp nong neurotoxin, bị rắn cạp nong cắn mồi bị trụy hô hấp dẫn đến tử vong [19] Các nghiên cứu tác dụng dược lý nọc rắn cạp nong: ... phân đoạn Các phân đoạn được thu lại, đông khô dùng để khảo sát tác động giảm đau chúng lên chuột Hình 3.1Sắc ký nọc rắn cạp nong cột lọc gel Superdex HR75 19 3.1.1 Tác động giảm đau ngoại biên