Bài báo này cung cấp cho các độc giả kết quả điều tra, giám định tên khoa học của các loài rệp sáp hại trên cây vú sữa ở Việt Nam do Viện Bảo vệ thực hiện trong các năm 2015–2017.
Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 11 Viện Bảo vệ thực vật, 1976 Kết điều tra côn trùng 1967-1968 Nxb Nông thôn, Hà Nội 12 Viện Bảo vệ thực vật, 1997 Phương pháp nghiên cứu bảo vệ thực vật, tập Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, 3-14 13 Viện Bảo vệ thực vật, 1999a Kết điều tra côn trùng bệnh tỉnh miền Nam 19771979 Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, 7-207 14 Viện Bảo vệ thực vật, 1999b Kết điều tra côn trùng bệnh hại ăn Việt Nam 19971998 Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, 5-81 15 Waston G.W and Chandler L.R, 1999 Identification of mealybugs important in Caribean Region Egham, UK: CAB International, 40pp 16 Williams D J., 2004 Mealybug of southern Asia United Selangor Press Sdn.Bhd, 896p Phạm văn Lầm, 1994 Thành phần rệp sáp hại ăn có múi phát Việt Nam Tạp chí Bảo vệ thực vật, số Phạm Văn Lầm, 2013 Các lồi trùng nhện nhỏ gây hại trồng phát Việt Nam Quyển Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Thị Nga, Nguy n Thị Chắt, Phạm Văn Lầm, 2005 Thành phần sâu hại mãng cầu xiêm (Annona muricata L.) Bình Chánh (tp Hồ Chí Minh) Báo cáo khoa học Hội nghị Cơn trùng học tồn quốc lần thứ 5, Hà Nội, ngày 11-14 tháng năm 2005 Nxb Nông nghiệp: 441-445 10 Nguyen Thi Thuy, Pham Thi Vuong, Ha Quang Hung, 2011 Composition of scale insects on coffee in Daklak, Vietnam and reproductive biology of japanese mealybug, Planococcus kraunhiae Kuwana (Hemiptera: Pseudococcidae) J ISSAAS, Vol 17(2): 29-37 Phản biện: TS Đào Thị Hằng THÀNH PHẦN LỒI RỆP SÁP VẢY (Hemiptera: Coccomorpha: Diaspididae) TRÊN CÂY VƯ SỮA Ở VIỆT NAM Checklist of Armoured Scale Insects (Hemiptera: Coccomorpha: Diaspididae) on Star Apple Fruit Tree in Viet Nam 1 1 Đào Thị Hằng , Nguyễn Văn Liêm , Lê Đức Khánh , Nguyễn Thị Hoa , Nguyễn Đức Việt G Andrew C Beattie Ngày nhận bài: 06.09.2018 Ngày chấp nhận: 27.09.2018 Abstract Armoured scales, [Hemiptera: Coccomorpha: Diaspididae], are important pests on numerous fruit trees including star apple fruit tree, one of the key fruit trees in Mekong rive delta This paper aims to provide the identification of the armoured scale insect species on star apple fruit tree based on the morphological and molecular characters Eleven species of armoured scale were recorded on star apple fruit tree in Viet Nam during 2015–2017 Some major morphological characters of adult female of these species were give are included to provide the clues for distinghuising the scales in the field The molecular results indicated that the DNA sequences of armoured scale species collected on star apple fruit tree in Viet Nam match with those available in GenBank data The checklist of armoured scales on star apple fruit tree in Viet Nam is also provided and discussed Keywords: armoured scale insect, identification, morphology, molecular * ĐẶT VẤN ĐỀ Cây vú sữa (Chrysophyllum cainito L.) ăn chủ lực khu vực Viện Bảo vệ thực vật, Phường Đức Thắng Bắc Từ Liêm, Hà Nội, Việt Nam Western Sydney University, Locked Bag 1797, Penrith, NSW 2751, Australia đồng sông Cửu Long Cây vú sữa trồng phổ biến tỉnh đồng sông Cửu Long nước ta từ hàng trăm năm trước Gần vú sữa trồng tỉnh phía Bắc Việt Nam Quả vú sữa loại trái bổ dưỡng, có giá trị dinh dưỡng cao, người tiêu dùng ưa thích Ngồi phục vụ nhu cầu tiêu dùng nội địa, vú sữa có triển vọng 39 BVTV - Sè 5/2018 Kết nghiên cứu khoa học mặt hàng trái xuất lớn Việt Nam Hiện nay, Việt Nam quốc gia giới xuất vú sữa sang thị trường Mỹ Rệp sáp vảy [Hemiptera: Coccomorpha: Diaspididae] họ lớn tổng họ Coccoidae Họ rệp sáp vảy bao gồm loài sâu hại quan trọng trồng nơng nghiệp, rừng đối tượng khó phân loại (Watson, 2002) Rệp sáp vảy gây thiệt hại nghiêm trọng cho sản xuất khơng phòng trừ hợp lý nhóm trùng tiết độc tố truyền trực tiếp vào mô bào ký chủ gây chết cành, (Watson 2002) Sự tồn rệp sáp vảy sản phẩm nơng nghiệp ảnh hưởng tới xuất chúng thuộc đối tượng kiểm dịch nước nhập Hầu hết giai đoạn trình phát triển rệp sáp vảy, trừ giai đoạn thời gian tuổi trước hình thành lớp sáp trưởng thành đực có cánh, bảo vệ lớp vảy tạo lên từ protein sợi tơ kết hợp với sáp Chính bảo vệ lớp vảy vây nên rệp sáp vảy nhóm đối tượng sâu hại khó phòng trừ biện pháp hóa học khơng vú sữa mà nhiều loại trồng khác Việc xác định xác lồi rệp sáp gây hại vú sữa Việt Nam tiền đề để xây dựng biện pháp phòng chống chúng cách có hiệu Ở Việt Nam, nghiên cứu đợt điều tra Viện Bảo vệ thực vật (được thực vào năm 1967-1968, 1977-1978 1997-1998) chưa có điều tra thành phần sâu hại vú sữa Các nghiên cứu sâu hại vú sữa nước ta hạn chế Qua trình khảo sát, bước đầu ghi nhận có diện lồi rệp sáp vảy vú sứa Vì vậy, thực nghiên cứu nhằm xác định thành phần loài rệp sáp vảy hại vú sữa Việt Nam Các kết nghiên cứu sử dụng quản lý sinh vật hại vú sữa, điều kiện mở rộng diện tích thâm canh vú sữa để đáp ứng nhu cầu ngày tăng tiêu dùng nước phục vụ xuất Kết thành phần loài góp phần bổ sung vào khu hệ rệp sáp vảy Việt Nam Bài báo cung cấp cho độc giả kết điều tra, giám định tên khoa học loài rệp sáp hại vú sữa Việt Nam Viện Bảo vệ thực năm 2015–2017 40 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Địa điểm thu thập mẫu Thu thập mẫu rệp sáp vảy hại vú sữa tiến hành tỉnh đồng Sông Cửu Long (Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, Vĩnh Long) thu thập bổ sung số tỉnh miền Bắc (Hà Nội, Hưng Yên, Hải Phòng, Ninh Bình), thu mẫu tiến hành 3–4 lần/năm từ 2015–2017 2.2 Phƣơng pháp thu thập bảo quản mẫu Thu ngắt phận bị hại (quả, thân/cành) có ghi nhận diện rệp sáp vảy qua quan sát mắt thường Khi thu mẫu cần quan sát hai mặt toàn diện tích bề mặt cành điều tra Mẫu thu thập giữ túi nilon có gắn nắp, ghi thông tin mẫu (địa điểm, thời gian), hộp mát có hệ thống thơng thống chuyển phòng thí nghiệm để phân tích Mẫu lưu giữ phòng mát ngăn mát tủ lanh khoảng 9-10ºC, làm mẫu vòng 10 ngày kể từ lấy mẫu Mẫu thu được phân loại sơ kính lúp soi nổi, chụp ảnh bảo quản cồn 70% nhiệt độ phòng để làm mẫu tiêu bảo quản mẫu dung dịch cồn tuyệt đối điều kiện -20 C để làm tách chiết DNA 2.3 Làm mẫu tiêu giám định mẫu Mẫu tiêu rệp trưởng thành loài rệp thực theo phương pháp Sirisena et al 2014) Phương pháp làm mẫu tóm tắt gồm bước sau: làm mẫu dung dịch KOH 10% (có thể đun nhiệt độ 50 C), sau rửa mẫu nước cất để loại bỏ KOH Chuyển mẫu sang dung dịch acid cồn (tỷ lệ Glacial Acetic: cồn 50% 20:80) để loại bỏ KOH lại mẫu Sau mẫu nhuộm màu acid Fuchsin, chuyển qua dung dịch cồn đề loại bỏ nước trước cho vào dầu đinh hương Mẫu sau gắn cố định lam sử dụng keo đào (Canada balsam) Giám định mẫu thực sở đặc điểm hình thái rệp trưởng thành, dựa theo khóa phân loại rệp sáp vảy Williams and Watson (1988) 2.4 Tách chiết DNA, nhân gen, phân tích trình tự gen Tách chiết DNA: DNA rệp sáp vảy tách chiết từ cá thể trưởng thành sử Kết nghiên cứu khoa học BVTV - Sè 5/2018 dụng kít tách chiết DNA QIAamp DNA Micro Kit (QIAGEN Pty Ltd, Australia, Doncaster, VIC) theo hướng dẫn hãng sản xuất Khuyếch đại DNA Đoạn gen 28S ribosomal RNA (28S rDNA) rệp khuếch đại sử dụng cặp mồi: 28S D-2F (CGTGTTGCTTGATAGTGCAGC) 28S D-2R (TTGGTCCGTGTTTCAAGACGG) (Campbell et al 1993).Thành phần hỗn hợp PCR Mỗi phản ứng PCR có dung tích 25 µL, gồm có thành phần sau: 0.05 U/mL Taq polymerase ® (GoTaq Flexi DNA Polymerase, Promega Corporation); × manufacturer’s buffer; mM MgCl2, 0.2 mM dNTPs; and 0.4-0.8 mM each primer Chu trình nhiệt cho phản ứng PCR sử dụng chu trình nhiệt giảm dần theo tác giả Morse & Normark (2006) Phản ứng PCR thực sử dụng máy nhân gen an Eppendorf Master EP thermal cycler (Eppendorf, Hamburg, Germany) Tinh sản phẩm PCR Sản phẩm PCR sau chạy điện di, tinh sử dụng ® EXoSAP (Exonuclease I (New England Biolabs Inc., Ipswich, Massachusetts, USA) shrimp alkaline phosphatase (Promega)), theo quy trình hãng sản xuất Giả trình tự DNA Sản phẩm PCR tinh đọc trình tự AITbiotech Pte Ltd, the Rutherford Science Park 1, 89 Science Park Drive, #01-08, Singapore Trình tự gen thu được phân tích thiết lập phả hệ sử dụng phần mềm MEGA (Tamura nnk 2013) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thành phần rệp sáp vảy hại vú sữa Kết điều tra từ 2015–2017 ghi nhận 11 loài rệp sáp vảy vú sữa tỉnh Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, Vĩnh Long điều tra bổ sung tỉnh phía Bắc (Bảng 1) Các loài rệp sáp vảy ghi nhận vú sữa thuộc tộc Aspidiotini, Parlatorini Diaspidini Các loài xuất với tần suất bắt gặp cao gồm có C bifasciculatus, H lataniae, H palmae Các lồi lại có tần suất bắt gặp trung bình thấp So sánh với khu hệ rệp sáp vảy trồng Việt Nam, có lồi tổng số 11 loài ghi nhận Việt Nam (Morales 2016, cập nhật 20 tháng năm 2018) Bên cạnh đó, Lepidosaphes sp có nhiều đặc điểm khác biệt với loài thuộc chi Lepidosaphes ghi nhận Việt Nam Chưa có lồi thuộc chi Lindingaspis trước chưa ghi nhận Việt Nam Việc ghi nhận 11 loài rệp sáp vảy vú sữa vùng điều tra nghiên có ý nghĩa trước chưa có ghi nhận công bố thành phần rệp sáp vảy hại vú sữa Việt Nam công bố Trên giới, ScaleNet liệt kê 10 loài rệp sáp vảy hại trồng thuộc chi Chrysophyllum (Morales 2016) So sánh với thành phần loài rệp sáp vảy vú sữa giới, nhận thấy có lồi trùng với thành phần ghi nhận nghiên cứu (A aurantii, H lataniae, H palmae O stauntoniae) (Morales 2016) Tám lồi rệp sáp lại thành phần loài ghi nhận nghiên cứu chưa ghi nhận trồng thuộc chi Chrysophyllum tài liệu cơng bố trước Bảng Thành phần rệp sáp vảy vú sữa từ 2015-2017 tỉnh đồng sông Cửu Long Tên loài Địa điểm thu thập Bộ phận bị hại Mức độ phổ biến Aonidiella aurantii (Maskell) Bến Tre Cần Thơ, Tiền Giang, + Aonidiella citrina (Coquillett) Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, ++ Aspidiotus destructor (Signoret) Bến Tre,Cần Thơ, Hà Nội, Hải Phòng ++ Chrysomphalus bifasciculatus (Linnaeus) Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, +++ Hemiberlesia lataniae (Signoret) Cần Thơ, Hải Phòng, Hưng n, Ninh Bình +++ Hemiberlesia palmae (Cokerrell) Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang +++ STT 41 BVTV - Sè 5/2018 Kết nghiên cứu khoa học Tên loài Địa điểm thu thập Bộ phận bị hại Mức độ phổ biến Lepidosaphes sp Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang lá, cành ++ Lindingaspis sp Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang ++ Parlatoria proteus Signoret Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, Lá, cành + 10 Pseudaulacaspis cockerelli (Cooley) Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, ++ 11 Octaspidiotus stauntoniae (Takahashi) Bến Tre, Cần Thơ, Tiền Giang, ++ STT * Tần suất bắt gặp: +++ (>50% số lần điều tra bắt gặp); ++ (25-50% số lần điều tra bắt gặp); + (