HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA

Edited with the trial version of Foxit Advanced PDF Editor To remove this notice, visit: www.foxitsoftware.com/shopping HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG HÓA CHẤT SINH HÓA Page Mục lục Danh mục sản phẩm Mục lục 1 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG ALBUMIN HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG AMYLASE TOTAL HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GPT/ ALT – L HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG ALP 13 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GOT/ AST – L 17 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG BILIRUBIN TOTAL 21 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CHOLESTEROL 24 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CHE 27 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG p-Amylase 31 10 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CANXIUM 35 11 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CHLORID 38 12 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CK-MB 41 13 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CK-NAC 44 14 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CREATININ 47 15 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GAMMA-GT 50 16 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GLDH 53 17 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GLUCOSE 57 18 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG IgA 60 19 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG IgG 63 20 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG IgM 66 21 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LDL-L 69 22 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LDH-P 73 23 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG MAGNESIUM 78 24 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG MICROALBUMIN 81 25 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG PHOTPHOR UV 85 26 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG PHOPHOLIPIDE 88 27 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG KALIUM 91 28 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG TOTAL PROTEIN 94 29 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG TRIGLYCERIDES 97 30 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG TRANSFERRIN 100 31 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG UREA 103 32 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG URIC ACID 107 33 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LACTAT PAP 111 34 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG IgE 114 35 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG HDL 118 36 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG CRP 119 37 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG RF 122 38 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG NATRIUM 125 39 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LDL-CHOLESTEROL 128 40 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LIPASE 132 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG ALBUMIN CHỈ DẪN Nồng độ Albumin số hoạt động tổng hợp gan Khi nồng độ tăng thường nguyên nhân hemoconcentration (tình trạng nước thể, mẫu máu bốc mẫu máu đông); nguyên nhân hypoalbuminemia nhiều thiếu hụt protein (hội chứng thận, bỏng, protein phân tán ruột), hấp thu protein giảm (suy dinh dưỡng, phần ăn protein bệnh gan Đặc biệt, bệnh viêm gan độ giảm tỷ lệ với tiến triển đến bệnh xơ gan, đại diện cho tiên đoán chuyển hóa q trình trao đổi chất Nồng độ Albumin huyết tương trẻ sinh thấp (2.4 – 4.4 g/dl) Trong giá trị tuần người lớn đạt đến (3.5- g/dl); sau sản sinh tăng lên đến 4.5-5.4 g/dl độ tuổi lên giữ nguyên không đổi suốt thời xn Khơng có khác đáng kể tìm thấy giới tính nam nữ NGUN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP Citrate đệm Albumin tạo thành hợp chất có màu xanh bromocresol (BCG) mà cường độ màu tỉ lệ thuận với nồng độ Albumin có mẫu thử THÀNH PHẦN Succinate buffer, pH 4.2 Bromcresol green Brij 35 Detergents and stabilizers Bovine albumin concentration according to CRM 470 (IFCC) R1 75 mmol/l 0.15 mmol/l 7ml/l > 0.1% R2 4.0 g/dl 4.0 g/dl Lưu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 15-250C Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định THIẾT BỊ PHỤ TRỢ • Các pipette tự động • Máy quang kế • Các Cuvette phân tích (độ chia cm) • Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết huyết tương (heparin EDTA) Ổn định mẫu tháng nhiệt độ 2-80C, tuần nhiệt độ 15-250C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƯợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại với nồng độ Albumin biết để kiểm tra độ tương hợp giá trị đạt với liệu đối chứng TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl Mẫu chuẩn - µl - Mẫu - - µl Thuốc thử A Trộn ủ hấp hỗn hợp phút 20-250C Sau đó, đọc kết hấp thụ A mẫu chuẩn mẫu 546 (520-570) nm đối chứng với mẫu thử Blank Màu sắc ổn định 60 phút nhiệt độ (20-250C) Ghi chú: Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng TÍNH TỐN KẾT QUẢ: Sử dụng công thức đây: Mẫu A Albumin, g/dl = - x Mẫu chuẩn A Các giá trị g/dl chuyển đổi sang g/l cách nhân kết với 10 CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO 3.5 ÷ g/dl Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận, tính tốn dựa mẫu nồng độ Albumin khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Mẫu Mẫu huyết Mẫu huyết Mẫu huyết Số trung bình (mg/dl) 4.6 4.0 3.3 Giữa dòng phản ứng SD %CV SD %CV 0.03 0.02 0.02 0.7 0.5 0.6 0.14 0.14 0.10 3.0 3.5 3.0 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 7g/dl Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy phương pháp kỳ phát giới hạn 0.2 g/dl Sự tương quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 0.624 x + 1.616 g/dl r = 0.9691 Sự can thiệp Trong trường hợp mẫu bị tán máu rõ bị mỡ hóa để nghị thực mẫu trống: trộn 1ml dung dịch nước muối sinh lý 10 µl mẫu, đọc độ hấp thụ đối chứng với nước cất trừ với giá trị hấp thu đo phép thử Hemoglobin đạt tới 20 mg/dl không bị can thiệp HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG AMYLASE TOTAL CHỈ DẪN Amylase chất xúc tác mà ẩn chứa tuyến tụy tuyến nước bọt Nó quan trọng việc tiêu hóa tinh bột tiết qua thận Các giá trị tăng Amylase tìm thấy bệnh viêm tuyến tụy cấp tính, tắc nghẽn ống dẫn tụy tắc nghẽn tuyến mang tai (giữa) Các giá trị giảm Amylase tìm thấy tổn hại gan cấp tính mãn tính NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP Amylase gây xúc tác thủy phân 2-chloro-4-nitrophenyl- - maltotrioside (CNP-G3) để tạo glucose polymers p-nitrophenyl oligosaccharide dây phân tử ngắn tạo 2-chloro4nitrophenol (CNP) Sự thủy phân tăng lên đo máy đo phổ quang bước sóng 405 nm kết tỉ lệ thuận với hoạt động Amylase mẫu phẩm THÀNH PHẦN Thuốc thử A: R1 Tris buffer pH 7.8 L-Aspartate LDH MDH R2 NADH2 2-Oxoglutarate 100 mmol/l 200 mmol/l 800 U/I 600 U/l 0.18 mmol/l 12 mmol/l LƯU TRỮ VÀ TÍNH ỔN ĐỊNH Trữ nhiệt độ 2-80C Khơng làm đơng thuốc thử! Thuốc thử có tính ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có hiệu lọ thuốc thử mở lấy thuốc thử đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Nước bọt da có chứa α-Amylase: khơng hút Pipette miệng va dính thuốc thử vào da THIẾT BỊ PHỤ TRỢ • Các pipette tự động • Máy quang kế • Các Cuvette phân tích (độ chia cm) • Nhiệt kế nước • Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương heparin nước tiểu Ổn định mẫu ngày nhiệt độ 2-8 0C 30 ngày nhiệt độ -200C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên đề nghị theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƯợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại huyết với hoạt động - Amylase biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Nhiệt độ thí nghiệm 370C Bước sóng 405 nm (400- 410 nm) Đường quang dẫn cm Sức phản ứng Klnetic (tăng) Cho thuốc thử đạt tới nhiệt độ thí nghiệm 370C trước sử dụng Pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Nước cất Mẫu Mẫu thử Blank 1000 µl Mẫu 1000 µl 25 µl - - 25 µl Trộn ủ nóng khoảng phút nhiệt độ 370C Đọc độ hấp thụ ban đầu lập lại đọc độ hấp thu sau 1, 2, phút ; đối chứng với mẫu thử Blank Tính A/ phút Tính tốn kết quả: Độ hoạt động (U/I) = A/ phút x 3178 GIÁ TRỊ THAM KHẢO Huyết huyết tương đạt tới 90 U/I Nước tiểu đạt tới 480 U/I Mỗi phòng thí nghiệm nên thiết lập dãy tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu hoạt động xúc tác khác Các kết thu ghi vào bảng sau: Trong vòng phản ứng Mẫu Số trung bình (U/I) 72.50 124.80 175.32 SD Mẫu huyết 0.92 Mẫu huyết 1.19 Mẫu huyết 1.74 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 1500 U/I Giữa dòng phản ứng %CV SD %CV 1.3 1.0 1.0 1.74 4.94 6.13 2.4 4.0 3.5 Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ hạn phát giới hạn U/I Sự tương quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.145 x + 1.600 U/I r = 0.9967 Sự can thiệp Hemoglobin Bilirubin Triglycerides > 500 mg/dl > 40 mg/dl > 2000 mg/dl THẬN TRỌNG KHI SỬ DỤNG Các thuốc thử chứa thành phần không hoạt động chất bảo quản (NaN chất khác), chất bề mặt…Tổng nồng độ thành phần thấp giới hạn cho phép báo cáo 67/548/ECC 88/379/ECC chi phối phân loại, đóng gói ghi nhãn chất nguy hiểm Tuy nhiên, nên xử lý thuốc thử với thận trọng, tránh nuốt va dính vào da, mắt màng mô mềm Việc sử dụng thuốc thử phòng thí nghiệm khuyến khích thực hành theo phòng thí nghiệm chuẩn HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG GPT/ ALT – L CHỈ DẪN Đo lường hoạt động aminotransferases (trước gọi transaminases) huyết ghi nhận chẩn đoán gan cấp tính theo dõi tiến triển chúng Như chất xúc tác enzyme gan đặc hiệu (ALT) tăng cao đáng kể bệnh gan mật NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP Phương pháp tối ưu hóa UV theo khuyến nghị SCE (Scandinavian Committee on Enzymes) Nguyên lý phương pháp dựa phản ứng xúc tác sau: ALT L-Alanine +2-Oxoglutarate  L- Glutammate + Pyruvate LDH Pyruvate + NADH + H+  L- Lactate + NAD+ Giảm giá trị hấp thụ 340 nm q trình oxy hóa NADH thành NAD+ tỉ lệ thuận cách trực tiếp với hoạt động ALT mẫu phẩm THÀNH PHẦN R1 Tris buffer pH 7.8 L-Alanine LDH R2 NADH2 2-Oxoglutarate 100 mmol/l 500 mmol/l 1200 U/I 0.18 mmol/l 15 mmol/l CHUẨN BỊ CÁC THUỐC THỬ Qui trình hai thuốc thử: Thuốc thử chất lỏng có sẵn để sử dụng Qui trình đơn thuốc thử: Pha 10 phần thuốc thử A phần thuốc thử B để có hỗn hợp thuốc thử sử dụng (VD: 20 ml thuốc thử A + ml thuốc thử B) LƯU TRỮ VÀ TÍNH ỔN ĐỊNH Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có tác dụng lọ thuốc thử mở lấy thuốc thử đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương EDTA heparin Không sử dụng fluoride, citrate oxalate làm thuốc chống đông Tách huyết từ tế bào máu sớm tốt Ổn định ngày 2-80C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lượng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra với nồng độ cholesterol biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Nước cất Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl 10 µl Mẫu chuẩn - 10 µl - Mẫu - - 10 µl Trộn hấp hỗn hợp 10 phút 370C Đọc độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn mẫu 510 (500-546) nm đối chứng với ống mẫu thử Blank (không mẫu chuẩn không mẫu) Màu sắc ổn định khoảng 60 phút bóng tối Ghi chú: Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng Với nồng độ > 700 mg/dl (18.1 mmol/l) chất pha lỗng mẫu có tỉ lệ 1:10 với dung dịch nước cất (9 g/l) nhân kết với 10 TÍNH TỐN KẾT QUẢ: * Huyết thanh, huyết tương: Mẫu A Cholesterol, mg/dl = - x 200 Mẫu chuẩn A Nhân tố chuyển đổi: CRP[mg/dl] x 0.02586 = Cholesterol [mmol/l] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO Các giá trị Cholesterol theo nghiên cứu người lớn khơng có bệnh tim mạch vành với số liệu sau: Giá trị đề nghị < 200 mg/dl (5.17 mmol/l) Giới hạn 200 ÷ 239 mg/dl (5.2 ÷ 6.2 mmol/l) Các giá trị cao ≥ 240 mg/dl (6.21 mmol/l) Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu kiểm sốt nồng độ cholesterol khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong vòng phản ứng Giữa dòng phản ứng Số trung Mẫu SD %CV SD %CV bình (U/I) Mẫu huyết 32.5 0.57 1.8 1.02 3.1 Mẫu huyết 93.7 1.35 1.4 3.08 3.3 Mẫu huyết 205.9 4.41 2.1 5.45 2.6 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 700 mg/dl (18.1 mmol/l) Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ phát giới hạn 4mg/dl (0.103 mmol/l) SƯ tƯơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp thương mại nay, cho kết sau: y = 0.9971 x + 3.9162 mg/dl r = 0.9898 Sự can thiệp Bilirubin Hemoglobin Triglycerides > 15 mg/dl > 500 mg/dl > 1000 mg/dl 37 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG RF CHỈ DẪN Photphor UV chất xúc tác diện thận, tuyến tụy, gan tuyến tiền liệt Nó số nhạy cảm bệnh gan, ích lợi cho việc chẩn đoán tắc nghẽn gan mật trọng tất dạng bệnh gan chứng nghiện rượu NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP Sự xác định chuyển dịch hoạt động Photphor UV theo phản ứng sau đây: γGT Photphor UV + glycilglycine  L-g-glutamylglycine + 5- amino- 2- nitrobenzoate THÀNH PHẦN Tris Glycylglycin Buffer pH 8.25 L-ү-Glutamyl – – Carboxy – – Nitroanilide 100 mol/l 2.9 mmol/l CHUẨN BỊ CÁC THUỐC THỬ Qui trình hai thuốc thử: Thuốc thử chất lỏng có sẵn để sử dụng Qui trình đơn thuốc thử: Pha trộn phần thuốc thử A phần thuốc thử B để có hỗn hợp thuốc thử sử dụng (VD: 20 ml thuốc thử A + ml thuốc thử B) LƯU TRỮ VÀ TÍNH ỔN ĐỊNH Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc thử đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Ổn định hỗn hợp thuốc thử 30 ngày nhiệt độ 2-80C THIẾT BỊ PHỤ TRỢ • Các pipette tự động • Máy quang kế • Các Cuvette phân tích (độ chia cm) • Nhiệt kế nước • Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương EDTA Ổn định ngày nhiệt độ 2-8 0C Trữ nhiệt độ -200C với thời gian lâu Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên đề nghị theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lượng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại huyết tương với độ hoạt động γGT biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Nhiệt độ thí nghiệm 370C Bước sóng 405 nm (400- 410 nm) Đường quang dẫn cm Sức phản ứng Klnetic (tăng) Cho thuốc thử đạt tới nhiệt độ thí nghiệm 370C trước sử dụng * Qui trình hai thuốc thử: Pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Mẫu 800 µl Mẫu 100 µl Trộn ủ nóng 370C phút, sau cho thêm: Thuốc thử B 200 µl Trộn ủ nóng 370C Sau phút, đọc độ hấp thụ (A) 405 (400 – 410) nm đối chứng với mẫu nước Đọc độ hấp thụ lần sau 1, 2, phút Tính A/ phút * Qui trình thuốc thử: Pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu Hỗn hợp thuốc thử 1000 µl Trộn ủ nóng 370C phút, sau cho thêm: Mẫu 100 µl Trộn ủ nóng 370C Sau phút, đọc độ hấp thụ (A) 405 (400 – 410) nm đối chứng với mẫu nước Đọc độ hấp thụ lần sau 1, 2, phút Tính A/ phút Tính tốn kết quả: Độ hoạt động (U/I) = A/ x 1111 Ghi chú: Đối với giá trị 300 U/I, pha loãng mẫu 1+9 với dung dịch nước muối nhân kết với 10 GIÁ TRỊ THAM KHẢO Nam đạt tới 50 U/I Nữ đạt tới 40 U/I Mỗi phòng thí nghiệm nên thiết lập dãy tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu độ hoạt động chất xúc tác γGT khác Các kết thu ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Giữa dòng phản ứng Mẫu Số trung bình (U/I) SD %CV SD %CV Mẫu huyết 41.94 0.27 0.6 1.01 2.4 Mẫu huyết 116.15 0.37 0.3 2.14 1.8 Mẫu huyết 188.80 0.90 0.5 2.49 1.3 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 300 U/I Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ hạn phát giới hạn U/I SƯ tƯơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 0.9563 x + 2.3692 U/I r = 0.9992 Sự can thiệp Hemoglobin Bilirubin Triglycerides > 500 mg/dl > 28 mg/dl > 600 mg/dl 38 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG NATRIUM CHỈ DẪN Sự xác định IgE thường dùng chẩn đoán giám sát bệnh rối loạn chức mỡ NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP Sự đo lường dựa sở phản ứng enzyme hóa sau: CHE Natrium + H2O  Cholesterol + Các a-xít béo CHOD Natrium + O2  Cholest-4-en-3-one + H2O2 POD 2H2O2 + Hydroxybenzoate + 4- Aminoantipyrine  Phức đỏ + 4H2O Cường độ phức đỏ tỷ lệ thuận với tổng cholesterol có mẫu THÀNH PHẦN Phosphate buffer pH 7.0 POD GOD – Amino – Antipyrine 20 mmol/l 660 U/l 12000 U/l 0.40 mmol/l Sự chuẩn bị Các thuốc thử chất lỏng có sẵn Lưu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Màu hồng nhạt thuốc thử A không can thiệp vào kết Thuốc thử A phải có độ trong, loại bỏ độ đục có THIẾT BỊ PHỤ TRỢ Các pipette tự động Máy quang kế Các Cuvette phân tích (độ chia cm) Nhiệt kế nước Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương EDTA heparin Không sử dụng fluoride, citrate oxalate làm thuốc chống đông Tách huyết từ tế bào máu sớm tốt Ổn định ngày 2-80C Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lượng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra với nồng độ cholesterol biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Thuốc thử A Nước cất Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl 10 µl Mẫu chuẩn - 10 µl - Mẫu - - 10 µl Trộn hấp hỗn hợp 10 phút 370C Đọc độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn mẫu 510 (500-546) nm đối chứng với ống mẫu thử Blank (không mẫu chuẩn không mẫu) Màu sắc ổn định khoảng 60 phút bóng tối Ghi chú: Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng Với nồng độ > 700 mg/dl (18.1 mmol/l) chất pha lỗng mẫu có tỉ lệ 1:10 với dung dịch nước cất (9 g/l) nhân kết với 10 TÍNH TỐN KẾT QUẢ: * Huyết thanh, huyết tương: Mẫu A Cholesterol, mg/dl = - x 200 Mẫu chuẩn A Nhân tố chuyển đổi: Cholesterol [mg/dl] x 0.02586 = Cholesterol [mmol/l] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO Các giá trị Cholesterol theo nghiên cứu người lớn khơng có bệnh tim mạch vành với số liệu sau: Giá trị đề nghị < 200 mg/dl (5.17 mmol/l) Giới hạn 200 ÷ 239 mg/dl (5.2 ÷ 6.2 mmol/l) Các giá trị cao ≥ 240 mg/dl (6.21 mmol/l) Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu kiểm sốt nồng độ cholesterol khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong vòng phản ứng Giữa dòng phản ứng Số trung Mẫu SD %CV SD %CV bình (U/I) Mẫu huyết 32.5 0.57 1.8 1.02 3.1 Mẫu huyết 93.7 1.35 1.4 3.08 3.3 Mẫu huyết 205.9 4.41 2.1 5.45 2.6 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 700 mg/dl (18.1 mmol/l) Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ phát giới hạn 4mg/dl (0.103 mmol/l) SƯ tƯơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp thương mại nay, cho kết sau: y = 0.9971 x + 3.9162 mg/dl r = 0.9898 Sự can thiệp Bilirubin Hemoglobin Triglycerides > 15 mg/dl > 500 mg/dl > 1000 mg/dl 39 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LDL-CHOLESTEROL CHỈ DẪN Sự xác định LDL-Cholesterol thường dùng chẩn đoán bệnh Gút, lưu giữ Ni-tơ nhằm giám sát bệnh Thận Nó dùng tất phương pháp điều trị cytolytic NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP LDL-Cholesterol chuyển hóa phản ứng Uricase tạo thành Allantoine hydrogen peroxide mà ảnh hưởng catalytic peroxidase, tiếp tục phản ứng với 4aminophenazone Nethyl-N-(hydroxi-3-sulphopropil)- p-toluidine (ESPT) để tạo thành màu tím xanh Uricase LDL-Cholesterol + H2O + O2  Allantonine + CO2 + H2O2 POD ESPT + 4-Aminophenazone + H2O2 > Indamine + H2O Cường độ màu đo 550 nm tỷ lệ thuận với a-xít Uric có mẫu Sự diện ascorbate oxidase ngăn cản can thiệp a-xít ascorbic chất khác THÀNH PHẦN Sự chuẩn bị Các thuốc thử chất lỏng có sẵn R1 Tris buffer pH 7.8 L-Aspartate LDH MDH R2 NADH2 2-Oxoglutarate 100 mmol/l 200 mmol/l 800 U/l 600 U/l 0.18 mmol/l 12 mmol/l Lưu trữ tính ổn định Trữ nhiệt độ 2-80C Không làm đông thuốc thử! Các thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định THIẾT BỊ PHỤ TRỢ • Các pipette tự động • Máy quang kế • • • Các Cuvette phân tích (độ chia cm) Nhiệt kế nước Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, huyết tương EDTA heparin, nước tiểu 24 pha loãng tỉ lệ 1:10 với nước cất Tính ổn định: Nhiệt độ 20-25 0C 4-8 0C -20 0C Huyết thanh/ huyết tương tháng Nước tiểu ngày - - Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lƯợng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra với nồng độ a-xít Uric biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Để thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng trước sử dụng Sử dụng pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu thử Blank Mẫu chuẩn Mẫu 1000 µl 1000 µl 1000 µl 25 µl - - Mẫu chuẩn - 25 µl - Mẫu - - 25 µl Thuốc thử A Nước cất Trộn hấp hỗn hợp 15 phút 20-250C khoảng 10 phút 370C Đọc độ hấp thụ (A) mẫu chuẩn mẫu 550 (540-560) nm đối chứng với mẫu thử Blank Màu sắc ổn định khoảng 30 phút bóng tối Ghi chú: Khối lượng phản ứng thay đổi tương ứng Với nồng độ huyết tương huyết > 20 mg/dl (1190 µmol/l) chất pha lỗng mẫu có tỉ lệ 1:2 với dung dịch NaCl (9 g/l) nhân đơi kết Với nồng độ nước tiểu > 200 mg/dl chất pha lỗng mẫu có tỉ lệ 1:2 với dung dịch nước cất (9 g/l) nhân kết với TÍNH TỐN KẾT QUẢ * Huyết thanh, huyết tương: Mẫu A A-xít Uric, mg/dl = - x Mẫu chuẩn A * Nước tiểu: Mẫu A A-xít Uric, mg/ 24h = - x 600 x 1/24 h Mẫu chuẩn A Nhân tố chuyển đổi: A-xít Uric [mg/dl] x 59.48 = A-xít Uric [µmol/l] A-xít Uric [mg/dl] x 0.05948 = A-xít Uric [mmol/l] CÁC GIÁ TRỊ THAM KHẢO Huyết tƯơng/ huyết Nữ mg/ dl (µmol/l) 2.3-6.1 (137-363) Nam mg/ dl (µmol/l) 3.6-8.2 (214-488) 0-5 ngày 1.9-7.9 (113- 470) 1.9-7.9 (113- 470) 1-4 tuổi 1.7-5.1 (101-303) 2.2-5.7 (131-470) 5-11 tuổi 3.0-6.4 (178-381) 3.0-6.4 (178-381) 12-14 tuổi 3.2-6.1 (190-381) 3.2-7.4 (190-440) 15-17 tuổi 3.2-6.4 (190-381) NƯớc tiểu 4.5-8.1 (190- 440) NgƯời lớn Trẻ em 800 mg/24h (4.76 mmol/l) Kiêng cử mức cân 600 mg/24h (5.57 mmol/l) Kiêng cử mức thấp purine Mỗi phòng xét nghiệm nên thiết lập giá trị tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa hai mẫu kiểm sốt nồng độ a-xít Uric khác Các kết nhận được, ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Mẫu Số trung bình (U/I) SD %CV Giữa dòng phản ứng SD %CV Mẫu huyết 4.6 0.08 1.8 0.17 3.8 Mẫu huyết 12.1 0.22 1.8 0.53 4.4 Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến 20 mg/dl (1190 mmol/l) Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ phát giới hạn 0.3 mg/dl (17.84 µmol/l) SƯ tƯơng quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.1974 x – 0.4471 mg/dl r = 0.9947 Sự can thiệp Bilirubin Hemoglobin Triglycerides A-xít Ascorbic > 20 mg/dl > 50 mg/dl > 2000 mg/dl > 30 mg/dl 40 HƯỚNG DẪN SỬ DỤNG LIPASE CHỈ DẪN Lipase sản phẩm thừa trao đổi chất hình thành thủy phân hóa khơng chất xúc tác Phopholipide Sự xác định Lipase nước tiểu huyết cơng cụ hữu dụng cho việc chẩn đốn bệnh thận viêm thận cấp mãn tính rối loạn thận khác urethrophraxis, chứng ngộ độc thủy ngân bệnh hư thận NGUYÊN LÝ CỦA PHƯƠNG PHÁP Lipase nước tiểu huyết phản ứng với a-xít Picric dung dịch alkaline cho hợp chất màu vàng cam Cường độ màu tỉ lệ thuận cách trực tiếp với nồng độ Phopholipide có mẫu THÀNH PHẦN Sodium Hydroxide Picric acid 0.20 mol/l 25mmol/l CHUẨN BỊ CÁC THUỐC THỬ Qui trình hai thuốc thử: Thuốc thử chất lỏng có sẵn để sử dụng Qui trình đơn thuốc thử: Pha phần thuốc thử A phần thuốc thử B để có hỗn hợp thuốc thử sử dụng (VD: 10 ml thuốc thử A + 10 ml thuốc thử B) LƯU TRỮ VÀ TÍNH ỔN ĐỊNH Trữ nhiệt độ 15-250C Không làm đông thuốc thử Thuốc thử ổn định thời hạn sử dụng ghi nhãn điều kiện tránh nhiễm bẩn, bốc tránh ánh sáng Các điều kiện có giá trị lọ thuốc thử mở lấy thuốc thử đóng nắp lại ngay; đồng thời giữ điều kiện nhiệt độ quy định Ổn định thuốc thử ngày nhiệt độ 2-80C THIẾT BỊ PHỤ TRỢ Các pipette tự động Máy quang kế Các Cuvette phân tích (độ chia cm) Dung dịch NaCl g/l MẪU THỬ Huyết thanh, nước tiểu 24 Ổn định 24 nhiệt độ 2-8 0C Pha loãng mẫu nước tiểu với nước cất tương ứng tỉ lệ 1: 25 Chọn mẫu/ yếu tố tiền phân tích Đề nghị việc chọn lọc mẫu nên đề nghị theo quy định NCCLS, chứng từ H11-A3 Kiểm soát chất lượng nội Đề nghị dùng chuẩn kiểm tra chất lượng thương mại với nồng độ Creatinine biết Kiểm tra giá trị đạt dãy giá trị tham khảo cung cấp TRÌNH TỰ PHÂN TÍCH Cho thuốc thử đạt tới nhiệt độ phòng 15-250C trước sử dụng * Qui trình hai thuốc thử: Pipette dùng lần cuvette sạch: Mẫu Mẫu chuẩn 100 µl - - 100 µl Mẫu A 500 µl 500 µl Trộn ủ nóng phút, sau cho thêm: Thuốc thử B 500 µl 500 µl Huyết nước tiểu pha lỗng Mẫu chuẩn Trộn sau 10 giây, đọc độ hấp thụ (A1) 490 – 510 nm; đọc lần sau phút độ hấp thu (A2) Phân tích mẫu mẫu chuẩn phải thực nhiệt độ * Qui trình thuốc thử: Pipette dùng lần cuvette sạch: Huyết nước tiểu pha loãng Mẫu chuẩn Mẫu thuốc thử Mẫu Mẫu chuẩn 100 µl - - 100 µl 1000 µl 1000 µl Trộn sau 10 giây, đọc độ hấp thụ (A1) 490 – 510 nm; sau phút, đọc lần độ hấp thu (A2) Phân tích mẫu mẫu chuẩn phải thực nhiệt độ Tính tốn kết quả: Tính A= (A2-A1) cho tất mẫu chất hiệu chuẩn GIÁ TRỊ THAM KHẢO Mẫu Đối tượng Nam Nữ Người lớn Nam Nữ Nam Nữ Huyết Nước tiểu Trống Phạm vi 0.6 ÷ 1.3 0.5 ÷ 1.2 1.3 ÷ 1.8 20 ÷ 26 14 ÷ 24 107 ÷ 139 87 ÷ 107 Đơn vị mg/dl mg/dl g/24h mg/Kg/24h mg/Kg/24h ml/ phút ml/ phút Mỗi phòng thí nghiệm nên thiết lập dãy tham khảo cho bệnh nhân THỰC HÀNH PHÂN TÍCH Sự tiên đốn Các hệ số biến đổi dòng phản ứng dòng ghi nhận tính tốn dựa ba mẫu nồng độ Creatinine khác Các kết thu ghi vào bảng sau: Trong dòng phản ứng Giữa dòng phản ứng SD %CV SD %CV Mẫu huyết Số trung bình (U/I) 1.72 0.02 1.2 0.13 7.6 Mẫu huyết 3.05 0.03 1.0 0.26 8.5 Mẫu huyết 4.52 0.04 0.9 0.37 8.2 Mẫu Tuyến tính Sự phân tích tuyến tính lên đến mg/dl Độ nhạy Kiểm tra độ nhạy kỳ hạn phát giới hạn 0.1mg/dl Sư tương quan: Một nghiên cứu tương quan so sánh phương pháp với phương pháp thương mại cho kết sau: y = 1.0534 x + 0.6955 mg/dl r = 0.9541 Sự can thiệp Hemoglobin Bilirubin Triglycerides > 200 mg/dl > 20 mg/dl > 1000 mg/dl