Ứng dụng kỹ thuật phân tích bạch cầu trong tinh dịch và mối liên quan giữa bạch cầu với một số chỉ số tinh dịch đồ ở nam giới vô sinh

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN VĂN HƯỞNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH BẠCH CẦU TRONG TINH DỊCH VÀ MỐI LIÊN QUAN GIỮA BẠCH CẦU VỚI MỘT SỐ CHỈ SỐ TINH DỊCH ĐỒ Ở NAM GIỚI VÔ SINH LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN VĂN HƯỞNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH BẠCH CẦU TRONG TINH DỊCH VÀ MỐI LIÊN QUAN GIỮA BẠCH CẦU VỚI MỘT SỐ CHỈ SỐ TINH DỊCH ĐỒ Ở NAM GIỚI VÔ SINH Chuyên ngành : Y sinh học Di truyền Mã số : 60720102 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS.BS Đoàn Thị Kim Phượng HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn tới TS BS Đồn Thị Kim Phượng, phó trưởng Bộ mơn Y Sinh học - Di truyền, Trường Đại học Y Hà Nội đồng thời phó giám đốc Trung tâm Tư vấn Di truyền, bệnh viện Đại học Y Hà Nội, người dành cho quan tâm, trực tiếp bảo tận tình từ bước đầu trình nghiên cứu đến hồn thiện khóa luận, đặt viên gạch làm móng cho đường nghiên cứu khoa học Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS BS Lương Thị Lan Anh, phụ trách Bộ môn Y Sinh học - Di truyền, PGS BS Trần Đức Phấn, TS Nguyễn Thị Trang, TS Vũ Thị Huyền, PGS.TS Hoàng Thị Ngọc Lan Bộ môn Y Sinh học - Di truyền, trường Đại học Y Hà Nội, TS Nguyễn Hồi Bắc Bộ mơn Ngoại trường Đại học Y Hà Nội nhiệt tình hướng dẫn giúp đỡ hết lòng q trình học tập thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn: Tồn thể Thầy Cơ, anh chị kỹ thuật viên, anh chị Bác sĩ nội trú Bộ môn Y sinh học - Di truyền Trường Đại học Y Hà Nội gần gũi, động viên, giúp đỡ cho lời khuyên quý báu Tôi xin cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Phòng đào tạo sau đại học Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình học tập, hồn thành luận văn Xin bày tỏ lòng kính u sâu sắc đến bố mẹ người thân gia đình, bạn bè, bên hỗ trợ, cổ vũ động viên tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày 20 tháng 08 năm 2019 Bác sỹ nội trú Phan Văn Hưởng LỜI CAM ĐOAN Tôi Phan Văn Hưởng, học viên bác sĩ nội trú khóa 42, chuyên ngành Y Sinh học - Di truyền, Trường Đại học Y Hà Nội xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS Đoàn Thị Kim Phượng Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 20 tháng 08 năm 2019 Tác giả Phan Văn Hưởng MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BC CASA DFI ELISA ITT KCTT Bạch cầu Computer – Aided Semen Analysis DNA Fragmentation Index Enzyme-linked immunosorbent assay Ít tinh trùng (Oligospermia) Khơng có tinh trùng (Azospermia) KHV Kính hiển vi NST Nhiễm sắc thể PMN RIA Polymorphonuclear leukocytes Radioimmunoassay VCL Curvilinear velocity VSL Straight-line velocity TDĐ Tinh dịch đồ WHO World Health Organization DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH 10 ĐẶT VẤN ĐỀ Ở nước ta, tỷ lệ vô sinh nói chung tỷ lệ nam giới vơ sinh nói riêng ngày gia tăng Đặc biệt, vô sinh nam giới nhận quan tâm nhiều năm gần Để chẩn đoán nguyên nhân vơ sinh nam giới, tinh dịch đồ xét nghiệm đánh giá chức sinh sản nam giới độ tuổi sinh sản, xét nghiệm đầu tay chứa đựng nhiều số quan trọng trước người bác sĩ đưa định trường hợp có bất thường kết tinh dịch đồ [1], [2] Trong tinh dịch người, tinh trùng trưởng thành có loại tế bào tế bào bong, tinh trùng non, bạch cầu Các tế bào gọi chung “tế bào khác”, hay “tế bào tròn” để phân biệt với tinh trùng trưởng thành Số lượng tế bào khác tinh dịch bình thường cho phép triệu/mL [3] Khi tế bào tăng mức cho phép, dù bạch cầu hay tinh trùng non nguyên nhân gây vô sinh nam giới Một số nghiên cứu bạch cầu triệu/mL liên quan tới bệnh đường sinh dục như: nhiễm trùng đường sinh dục tiết niệu, tắc ống dẫn tinh, giãn tĩnh mạch thừng tinh, giảm chức tuyến sinh dục phụ Bạch cầu tăng cao liên quan đến giảm số lượng chất lượng tinh trùng bạch cầu sản xuất sản phẩm chuyển hóa ROS (reactive oxygen species) [4], số lượng bạch cầu triệu/mL làm tăng nồng độ ROS lên đáng kể Các sản phẩm làm tăng stress oxy hóa gây tổn thương tế bào tinh trùng, đặc biệt DNA màng tế bào [5], [6], [7], [8]; tăng nguy vô sinh, sảy thai, đẻ non bệnh lý di truyền [9], [10] Việc phân biệt tế bào khác nhiều mức tinh dịch tế bào sinh tinh non hay bạch cầu có vai trò quan trọng chẩn đốn định điều trị [11], [12] Hơn nữa, Việt Nam nước nhiệt đới, tỷ lệ viêm nhiễm nói chung viêm nhiễm MỘT SỐ HÌNH ẢNH NHUỘM BẠCH CẦU TRONG TINH DỊCH BẰNG PHƯƠNG PHÁP PEROXIDASE Hình ảnh bạch cầu sau nhuộm vật kính 10 (khó phân biệt rõ tế bào bắt màu nâu với tế bào khơng bắt màu) Hình ảnh bạch cầu sau nhuộm vật kính 40 (bạch cầu bắt màu nâu rõ, bờ tròn đều) Hình ảnh bạch cầu (bắt màu nâu) “tế bào tròn” khác khơng phải bạch cầu (không bắt màu) DANH SÁCH ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 Họ tên Nguyễn Văn T Trần Văn Tr Đặng Nhân H Nguyễn Văn Gi Lê Kim C Nguyễn Mạnh C Trương Minh T Trương Viết H Đỗ Văn Tr Trương Minh T Nguyễn Văn G Trương Minh T Lương Đức T Trần Hồng Ph Vũ Thế Ph Phan Văn Th Hoàng Văn H Phan Huy Th Nguyễn Mạnh Ng Đỗ Đình Q Lê Xuân H Nguyễn T Trần Bá Ph Hoàng Ngọc B Hoàng Hữu T Nguyễn Văn Q Nguyễn Mậu L Nguyễn Việt D Lê Xuân T Nguyễn Quyết Th Nguyễn Văn Kh Thái Văn H Lê Quang T Dương Văn L Tuổi 21 23 29 29 36 35 36 32 39 36 30 36 32 30 31 34 26 28 31 29 33 38 32 27 37 29 26 31 34 35 34 46 33 36 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 Bùi Văn Ph Trần Quang H Phùng Văn T Long Văn Ph Giang Quốc L Đinh Văn T Nguyễn Văn Th Phạm Tiến H Nguyễn Quang Th Nguyễn Đức Th Nguyễn Ngọc Q Vũ Ngọc B Nguyễn Đức N Nguyễn Ngọc K Hòa Thế Q Trần S Đỗ Huy M Nguyễn Tiến Đ Quách Công T Nguyễn Văn Ch Nguyễn Bá Đ Nguyễn Hoàng M Vũ Xuân Th Trần Thanh H Bùi Văn T Đào Văn G Phạm Đức A Triệu Văn T Lê Phú T Vũ Hoàng T Đỗ Thế D Trần Văn H Nguyễn Công Đ Bùi Ngọc D Lê Xuân D Lê Thành L Phạm Thành D 27 29 23 31 29 35 34 41 25 40 35 37 40 39 32 37 32 38 30 32 38 46 46 37 36 35 30 37 38 37 34 37 32 40 36 30 29 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 Trần Trung Đ Mai Hoàng N Bùi Cơng M Nguyễn Mạnh H Hồng Thái Đ Nguyễn Văn N Nguyễn Mạnh D Nguyễn Đức T Hoàng Thanh T Trần Đình Minh T Đặng Sỹ Đ Đinh Thanh D Đào Đức H Nguyễn Trung H Nguyễn Văn T Nguyễn Duy Tr Quyền Đức N Đới Sỹ H Ngô Công Q Trần Anh Đ Hồ Diên Th Đặng Văn L Lê Văn Th Vương Đình B Đỗ Văn N Trần Đức M Ngơ Văn H Hồng Tự Quốc H Phạm Việt D Trần Đình X Đặng Quang D Nguyễn Viết H Nguyễn Thanh S Nguyễn Văn Th Lê ĐÌnh Q Nguyễn Trọng H Nguyễn Đức Th 23 27 28 34 28 34 29 26 32 32 28 36 32 36 33 25 31 26 28 34 37 30 35 27 28 39 30 32 37 36 31 46 48 34 31 45 37 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 Đỗ Đình Đ Vũ Anh Đ Hồng Văn Tr Phan Văn Th Vũ Đắc Ch Lương Văn T Đặng Đình S Nguyễn Văn D Đào Tuấn M Trần Văn T Trần Hữu H Nguyễn Thanh Ph Nguyễn Huy C Lương Đức Th Nguyễn Thành A Vũ Trọng Q Vũ Tiến Th Nguyễn Văn Th Đặng Văn X Nguyễn Anh T Đỗ Văn Tr Nguyễn Phạm Khánh H Chu Đình H Lê Văn V Hà Văn B Trần Đức Th Vũ Bá L Lê Đức M Đặng Văn Đ Hoàng Văn K Nguyễn Đức Th Đỗ Huy M Vũ Kiếm V Nguyễn Đức Ph Phạm Ngọc T Nguyễn Đức Ng Hà Văn Th 37 40 25 34 40 27 27 36 31 34 27 29 30 28 28 32 31 36 25 34 39 34 36 35 28 32 29 30 51 29 29 32 42 31 29 36 30 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 Trần Thanh L Nguyễn Ngọc T Nguyễn Xuân L Phạm Ngô T Đỗ Minh T Trần Vĩnh Tr Đỗ Thế D Lê Quang Th Lê Văn Th Nguyễn Nam Q Nguyễn Đức Th Nguyễn Văn N Lê Xuân D Vũ Trọng C Đào Văn Q Phùng Đức B Trần Đức H Nguyễn Quang Ch Nguyễn Văn Kh Trần Cao S Nguyễn Quốc H Trần Quốc V Nguyễn Văn S Hoàng Văn Ng Nguyễn Văn Th Lại Đức H Nguyễn Văn L Đỗ Công Ph Long Văn Ph Nguyễn Văn H Lôi Quốc B Hoàng Văn Th Trần Quang H Trần Văn Th Lò Văn Ng Nguyễn Trọng V Nguyễn Văn C 28 38 28 43 39 30 34 29 36 38 40 28 36 29 35 37 31 29 30 31 30 29 33 29 30 38 33 27 30 30 47 29 29 24 42 27 31 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 Lương Văn L Đồng Đức H Lê Văn C Nguyễn Hoàng A Nguyễn Hoàng Đ Phạm Tuấn C Phan Anh T Phan Văn L Trương Văn Q Phạm Văn Q Hoàng Bùi C Lê Văn T Nguyễn Thế C Trần Xuân N Hoàng Thanh H Đinh Việt H Nguyễn Trung C Hoàng Văn T Đỗ Thùy T Dương Văn T Nguyễn Văn H Nguyễn Thành Đ Phùng Văn T Đoàn Vũ Trọng A Vũ Văn T Lê Mạnh T Trần Văn M Đồng Văn B Nguyễn Thành Đ Quàng Văn T Doãn Văn H Nguyễn Ngọc L Nguyễn Khánh T Nguyễn Hữu T Nguyễn Trung T Bùi Văn Đ Nguyễn Đức T 24 39 28 29 37 31 37 32 30 41 34 27 48 41 32 36 31 30 25 41 36 29 29 44 29 28 30 28 27 27 28 28 35 25 27 30 30 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 Nguyễn Văn Đ Nguyễn Đức T Nguyễn Hải V Hoàng Văn V Nguyễn Minh H Nguyễn Văn B Nguyễn Văn B Trần Văn K Lê Trung T Hà Duy T Nguyễn Chí T Trần Văn C Hồng Văn H Đặng Thái P Đào Huy H Bùi Thanh T Nguyễn Công S Phạm Thế T Nguyễn Quý V Nguyễn Thanh T Ngô Văn T Dương Khắc G Vũ Văn V Hồng Đình H Hoàng Văn C Đào Hữu L Đặng Xuân B Dương Văn V Phạm Tuấn M Đoàn Văn N Nguyễn Văn L Võ Thành Đ Nguyễn Đức A Nguyễn Hoàng L Nguyễn Đình T Nguyễn Văn T Nguyễn Văn M 24 28 30 25 35 31 24 41 38 21 35 34 27 28 33 28 37 32 30 31 29 29 27 37 35 27 42 34 34 25 27 28 26 32 25 38 27 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 Dương A Mai Văn M Nguyễn Văn T Trần Văn A Hồ Bá C Phạm Văn Q Bùi Dũng Q Thân Đức V Nguyễn Anh D Nguyễn Văn S Phạm Ngọc T Nguyễn Xuân T Phạm Minh H Lê Văn T Đào Văn G Hồ Sỹ K Phạm Văn M Nguyễn Văn T Đỗ Văn L Nguyễn Đức C Nguyễn Hiếu T Mai Văn T Phạm Hữu Q Phạm Văn L Phùng Quốc P Lê Văn T Nguyễn Văn K Nguyễn Tiến K Tạ Văn Đ Nguyễn Đình Q Lê Anh D Đinh Văn T Bùi Văn H Nguyễn Hoài V Nguyễn Hồng T Võ Văn S Phạm Quang L 22 28 32 29 38 35 25 28 41 36 33 32 37 35 26 28 35 24 34 35 40 29 27 24 24 23 32 35 40 26 26 39 26 35 30 27 30 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 321 322 323 324 325 326 327 328 329 330 Nguyễn Văn K Phùng Văn D Nguyễn Văn T Nguyễn Văn T Đậu Hoàng S Lê Văn P Lê Xuân S Hoàng Thanh T Hoàng Huy T Mai Khắc H Quan Văn Q Nguyễn Văn T Cao Văn V Nguyễn Hồng S Đào Hồng N Nguyễn Văn T Phan Văn S Nguyễn Minh H Nguyễn Thế H Phùng Viết T Nguyễn Hải H Tạ Văn N Đặng Đức T Nguyễn Văn X Lê Văn C Lộc Khương D Lã Minh H Vũ Anh Ch Nguyễn Quang H Ngô Xuân D Nguyễn Văn H Trần Văn T Nguyễn Văn M Vũ Văn T Phạm Đức T Nguyễn Văn H Nguyễn Quang T 25 28 29 34 34 38 47 27 25 26 26 33 29 33 38 37 31 36 43 33 35 37 30 36 33 29 38 37 27 33 34 29 35 22 29 33 30 331 332 333 334 335 336 337 338 339 340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 Lê Văn Q Đỗ Tiến T Nguyễn Minh K Bram W B Nguyễn Mạnh T Lê Duy H Vũ Hoàng T Phạm Hữu Đ Trần Thanh H Nguyễn Văn D Nguyễn Doãn B Nguyễn Văn M Bùi Văn T Nguyễn Hữu T Trần Văn T Phạm Quốc C Đinh Tiến Đ Lê Anh X Nguyễn Trọng D Phan Hồng L Nguyễn Lương Th Hà Tuấn A Lê Minh T Nguyễn Hoàng A Lương Văn T Nguyễn Thành C Thân Hồng T Vũ Văn A Phạm Văn D Nguyễn Văn T Nguyễn Văn H Nguyễn Việt H Hán Duy T Hoàng Văn T Đoàn Nguyên V Bạch Văn H 36 38 36 37 39 29 30 36 35 37 32 28 29 29 25 37 39 24 30 38 26 50 29 33 33 28 33 36 28 34 27 37 37 28 28 31 33 368 369 370 371 372 373 374 375 376 377 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 392 393 394 395 396 397 398 399 400 Nguyễn Việt D Trần Đức M Trần Văn T Phạm Trung T Đinh Văn Q Nguyễn Đình T Nguyễn Văn T Nguyễn Văn T Nguyễn Duy L Nguyễn Quang Kh Hồng Cơng H Phạm Đình B Nguyễn Đạt T Mã Đình Q Nguyễn Tuấn A Lê Hải Ph Nguyễn Phùng C Nguyễn Quang H Nguyễn Ngọc T Nguyễn Tiến L Ngô Tuấn V Nguyễn Văn T Phạm Đức G Phạm Tiến L Đỗ Văn T Hoàng Hải V Thái Văn T Phạm Hữu T Quyền Hồng T Trần Văn T Nguyễn Đình S Nơng Xn T ng Ngọc L Lãnh đạo Trung tâm 31 39 30 39 29 36 31 36 31 36 26 30 41 29 28 28 25 31 31 36 30 32 30 28 24 37 30 32 32 31 34 31 25 Giáo viên hướng dẫn ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN VĂN HƯỞNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PHÂN TÍCH BẠCH CẦU TRONG TINH DỊCH VÀ MỐI LIÊN QUAN GIỮA BẠCH CẦU VỚI MỘT SỐ CHỈ SỐ TINH DỊCH ĐỒ Ở NAM GIỚI VÔ SINH. .. xác số tình trạng viêm nhiễm đường sinh dục nam, hỗ trợ chức sinh sản nam giới, tiến hành nghiên cứu đề tài: Ứng dụng kỹ thuật phân tích bạch cầu tinh dịch mối liên quan bạch cầu với số số tinh. .. tinh dịch đồ nam giới vô sinh Đề tài có mục tiêu sau: Phát bạch cầu tinh dịch phương pháp nhuộm peroxidase Nhận xét mối liên quan số lượng bạch cầu với độ pH, số lượng, độ di động hình thái tinh