TRẦN TRỌNG BIÊN NGHIÊN cứu PHƯƠNG PHÁP LOẠI CAFEIN và làm GIÀU CATECHIN từ CAO lá CHÈ XANH LUẬN văn THẠC sỹ dược học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN TRỌNG BIÊN NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP LOẠI CAFEIN VÀ LÀM GIÀU CATECHIN TỪ CAO LÁ CHÈ XANH LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN TRỌNG BIÊN NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP LOẠI CAFEIN VÀ LÀM GIÀU CATECHIN TỪ CAO LÁ CHÈ XANH LUẬN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: Công nghệ dược phẩm & bào chế thuốc MÃ SỐ: 8720202 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Văn Hân HÀ NỘI 2019 Lời cảm ơn Để hồn thành luận văn này, người tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn thầy tơi, PGS.TS Nguyễn Văn Hân, người tơi ln kính trọng biết ơn dìu dắt tơi ngày đầu môn hỗ trợ nhiều công việc nghiên cứu sống Tiếp theo xin cảm ơn TS Bùi Thị Thúy Luyện thầy cô giảng viên, kỹ thuật viên Bộ môn Công nghiệp Dược hỗ trợ công việc chung để tơi có thời gian dành cho nghiên cứu Tơi xin cảm ơn chị Nguyễn Thị Phương Thảo (công ty cổ phẩn Anvy) hỗ trợ chất chuẩn, TS Hồng Văn Hoan (Viện Hóa học cơng nghiệp) hỗ trợ nguyên liệu EGCG, chị Đào Minh (Công ty Clariant Việt Nam) hỗ trợ mẫu MMT, TS Takashi Shiono (Công ty Kirin, Nhật Bản) tư vấn chuyên mơn tận tình, Ths Đào Anh Hồng (Viện Dược liệu) hỗ trợ phun sấy sản phẩm, DS Lê Thị Hà (Công ty BBraun) hỗ trợ sắc ký HPLC, Ths Vũ Văn Tuấn (ĐH Đại Nam) hỗ trợ ngun liệu cafein Nếu khơng có hỗ trợ vơ tư này, chắn tơi khó hồn thành công việc nghiên cứu Tôi xin cảm ơn DS Lê Thị Bảo Ngọc, sinh viên Nguyễn Thu Hà (K69) hỗ trợ công việc phần thực nghiệm Nhân đây, xin cảm ơn Ban giám hiệu trường ĐH Dược Hà Nội tạo điều kiện, hỗ trợ kinh phí cho khóa học Cuối tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè tơi đồng hành suốt chặng đường qua Hà Nội, tháng 4/2019 Học viên Trần Trọng Biên MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Chương TỔNG QUAN 1.1 Cây Chè 1.1.1 Các thành phần quan trọng Chè .2 1.1.2 Các phương pháp loại cafein Chè xanh 1.1.3 Các phương pháp chiết xuất làm giàu catechin Chè xanh .8 1.1.4 Một số sản phẩm chiết xuất từ Chè .10 1.1.5 Một số phương pháp định lượng cafein catechin Chè 11 1.2 Thông tin số chất hấp phụ sử dụng nghiên cứu .14 1.2.1 Nhựa macroporous 14 1.2.2 Montmorillonit 16 Chương NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên vật liệu 19 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 19 2.1.2 Chất chuẩn hóa chất 19 2.1.3 Thiết bị thí nghiệm 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Chiết xuất điều chế cao thô 21 2.3.2 Cơ chế trình chiết xuất .21 2.3.3 Quá trình hấp phụ, giải hấp phụ điều kiện tĩnh 22 2.3.4 Quá trình hấp phụ, giải hấp phụ điều kiện động 23 2.3.5 Phương pháp định lượng cafein EGCG .25 2.3.6 Xử lý thống kê 26 Chương THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 27 3.1 Thẩm định phương pháp định lượng cafein EGCG HPLC 27 3.1.2 Độ đặc hiệu 27 3.1.3 Độ thích hợp hệ thống .28 3.1.4 Khoảng tuyến tính 28 3.1.5 Độ lặp lại 29 3.1.6 Độ .30 3.1.7 Giới hạn phát giới hạn định lượng 31 3.2 Nghiên cứu điều chế dịch chiết chế trình chiết xuất 31 3.2.1 Khảo sát điều kiện chiết xuất catechin 31 3.2.2 Cơ chế trình chiết xuất 33 3.3 Nghiên cứu sàng lọc chất hấp phụ 34 3.3.1 Tính chọn lọc chất hấp phụ 34 3.3.2 So sánh chất hấp phụ 35 3.4 Nghiên cứu loại cafein MMT .36 3.4.1 Động học hấp phụ cafein MMT 36 3.4.2 Đường hấp phụ đẳng nhiệt .37 3.4.3 Ảnh hưởng pH dịch chiết 38 3.4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ 39 3.4.5 Ảnh hưởng nồng độ ethanol 39 3.5 Nghiên cứu làm giàu catechin nhựa macroporous .40 3.5.1 Sàng lọc nhựa macroporous .40 3.5.2 Quá trình hấp phụ, giải hấp phụ điều kiện tĩnh 41 3.5.3 Quá trình hấp phụ, giải hấp phụ điều kiện động 45 3.5.4 Nghiên cứu tái sử dụng nhựa macroporous .48 3.6 Quy trình chiết xuất, loại cafein làm giàu catechin từ Chè xanh .48 Chương BÀN LUẬN .53 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril AOAC Hiệp hội nhà hóa phân tích thức (Association of Official Analytical Chemists) BV Thể tích khối hạt (bed volume) DĐVN Dược điển Việt Nam EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid EGCG Epigallocatechin gallat FDA Cơ quan quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (Food and Drug Administration) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) id Đường kính (internal diameter) kl/tt khối lượng/thể tích LOD Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Litmit of Quantifitation) MMT Montmorillonit PE Polyethylen RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SDVB Styrendivinylbenzen STT Số thứ tự tt/tt thể tích/thể tích USP Dược điển Mỹ (United State Pharmacopoeia) UV Tử ngoại (Ultraviolet) VIS Khả kiến (Visible) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số chương trình HPLC định lượng cafein catechin Chè xanh 12 Bảng 1.2 Phân loại nhựa macroporous 15 Bảng 2.1 Các đặc tính lý hóa nhựa macroporous 19 Bảng 2.2 Các đặc tính lý hóa khoáng sét tự nhiên 20 Bảng 2.3 Danh mục hóa chất sử dụng 20 Bảng 3.1 Kết thời gian lưu diện tích píc dung dịch chuẩn hỗn hợp 28 Bảng 3.2 Mối tương quan diện tích píc nồng độ cafein EGCG 28 Bảng 3.3 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp định lượng 29 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ cafein 30 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ EGCG 30 Bảng 3.6 Độ tan (mg/g) EGCG cafein loại dung môi 25°C 34 Bảng 3.7 Phương trình động học hấp phụ cafein MMT 25°C .36 Bảng 3.8 Các thông số mô hình hấp phụ cafein MMT 25°C 38 Bảng 3.9 Ảnh hưởng pH dịch chiết đến trình loại cafein .39 Bảng 3.10 Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình loại cafein .39 Bảng 3.11 Ảnh hưởng nồng độ ethanol đến trình loại cafein 40 Bảng 3.12 Phương trình động học hấp phụ EGCG nhựa HPD826 25°C 42 Bảng 3.13 Các thơng số mơ hình hấp phụ EGCG nhựa HPD826 25°C 43 Bảng 3.14 Ảnh hưởng tốc độ nạp dịch chiết đến trình hấp phụ .45 Bảng 3.15 Ảnh hưởng tốc độ dòng đến hiệu suất giải hấp phụ EGGC cột HPD826 46 Bảng 3.16 Kết khảo sát thể tích dung mơi ethanol 30% giải hấp phụ EGCG cột HPD826 47 Bảng 3.17 Kết khảo sát độ lặp lại quy trình chiết xuất tinh chế 51 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Cấu trúc số catechin Chè Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo cafein Hình 1.3 Một phần mạng lưới polyme polystyren liên kết chéo 14 Hình 1.4 Cấu trúc phân tử montmorillonit [59] 16 Hình 1.5 Các vị trí tương tác montmorillonit [37] 17 Hình 3.1 Sắc ký đồ HPLC thẩm định độ đặc hiệu .27 Hình 3.2 Đường chuẩn mối tương quan diện tích píc nồng độ .29 Hình 3.3 Ảnh hưởng kích thước nguyên liệu đến hiệu suất chiết EGCG .32 Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ ethanol đến hiệu suất chiết EGCG 32 Hình 3.5 Ảnh hưởng số lần chiết đến hiệu suất chiết EGCG 33 Hình 3.6 Tỷ lệ trương nở nguyên liệu dung môi khác 33 Hình 3.7 Ảnh hưởng loại chất hấp phụ đến dung lượng hấp phụ cafein, EGCG hệ số chọn lọc 35 Hình 3.8 Ảnh hưởng loại chất hấp phụ đến tỷ lệ cafein loại tỷ lệ EGCG lại dịch chiết 35 Hình 3.9 Động học hấp phụ cafein MMT điều kiện tĩnh .36 Hình 3.10 Đường đẳng nhiệt hấp phụ cafein MMT 25°C .37 Hình 3.11 Dung lượng hấp phụ, dung lượng giải hấp phụ tỷ lệ giải hấp phụ EGCG nhựa macroporous 41 Hình 3.12 Động học hấp phụ EGCG nhựa HPD826 điều kiện tĩnh (25°C) 41 Hình 3.13 Đường đẳng nhiệt hấp phụ EGCG từ dịch chiết nhựa HPD826 25°C .42 Hình 3.14 Ảnh hưởng pH dịch chiết đến dung lượng hấp phụ EGCG nhựa HPD826 điều kiện tĩnh .44 Hình 3.15 Ảnh hưởng nồng độ ethanol đến tỷ lệ giải hấp phụ EGCG điều kiện tĩnh, 25°C .44 Hình 3.16 Đường hấp phụ EGCG cột HPD826 (Co: 0,5 mg/mL, 25°C, tốc độ: BV/giờ) 46 Hình 3.17 Đường biểu diễn trình giải hấp phụ EGCG cột HPD826 .47 Hình 3.18 Dung lượng hấp phụ EGCG nhựa HPD826 48 Hình 3.19 Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất, loại cafein làm giàu catechin từ Chè xanh quy mơ phòng thí nghiệm (100 g/mẻ) 49 Hình 3.20 Sắc ký đồ số mẫu cao Chè 52 Hình 3.21 Hình ảnh cao thơ (A), cao sau loại cafein (B) cao sau làm giàu catechin (C) 52 Hình 4.1 Minh họa chế hấp phụ cafein MMT 56 ĐẶT VẤN ĐỀ Chè (Trà, Camellia sinensis L.) đồ uống phổ biến Việt Nam giới hương vị đặc trưng tác dụng sinh học quan trọng hợp chất polyphenol (chủ yếu catechin) chống oxy hóa [43], chống dị ứng, chống viêm, kháng khuẩn [84], chống ung thư [55] Trong catechin Chè xanh, epigallocatechin gallat (EGCG) thành phần có hàm lượng lớn có tác dụng chống oxy hóa mạnh Trong cơng nghiệp dược phẩm, cao chiết Chè xanh chuẩn hóa (Polyphenon® E, Theaphenon® E) sản xuất trải qua nhiều thử nghiệm lâm sàng quan trọng [25] Một thuốc FDA chấp nhận điều trị mụn cóc sinh dục (Condyloma acuminata) từ năm 2006 tên thương mại Veregen® (hoạt chất Sinecatechins) [51] Ngoài Chè chứa 2-5% cafein - alcaloid có tác dụng kích thích thần kinh mà sử dụng thường xuyên mức gây nhiều tác dụng bất lợi kích ứng đường tiêu hóa; hồi hộp, ngủ [4]; nhịp tim nhanh, tăng huyết áp [34]; nguy dị tật thai nhi, sẩy thai thai chết lưu [50] Do đó, nhu cầu sản phẩm chứa hàm lượng cafein thấp từ Chè nói riêng loại đồ uống nói chung ngày tăng Lá Chè loại cafein polyphenol Chè xanh loại cafein sản phẩm bật xu hướng [11, 80] Trên giới, nhiều công ty sản xuất sản phẩm loại cafein từ Chè nhiều công nghệ khác chiết dung môi siêu tới hạn, công nghệ màng lọc kỹ thuật hấp phụ Đây chủ đề nghiên cứu thu hút quan tâm lớn nhà khoa học Tuy nhiên Việt Nam chưa có nghiên cứu đề cập đến việc loại cafein đồng thời làm giàu catechin điều chế cao Chè xanh ứng dụng dược phẩm Việt Nam quốc gia sản xuất tiêu thụ Chè lớn giới Chè Việt Nam đánh giá có chất lượng ngang với Chè Trung Quốc, Nhật Bản hay Australia [72] Do đề tài “Nghiên cứu phương pháp loại cafein làm giàu catechin từ Chè xanh” thực với mục tiêu: Xây dựng quy trình chiết xuất, loại cafein làm giàu catechin từ Chè xanh quy mơ phòng thí nghiệm Điều chế 20 g cao khô Chè xanh có hàm lượng EGCG giới hạn cafein đạt tiêu chuẩn USP 41 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 Mohanpuria P., et al (2011), "Producing low-caffeine tea through posttranscriptional silencing of caffeine synthase mRNA", Plant Molecular Biology, 76(6), pp 523-534 Monsanto Miguel, et al (2014), "Modeling and optimization of green tea precipitation for the recovery of catechins", Separation and Purification Technology, 129, pp 129-136 Moyers Susan B., Kumar Nagi B (2004), "Green Tea Polyphenols and Cancer Chemoprevention: Multiple Mechanisms and Endpoints for Phase II Trials", Nutrition Reviews, 62(5), pp 204-211 Ninomiya M., et al (1997), Chemistry and Applications of Green Tea, CRC Press, Boca Raton, pp 23-36 Nkhili E., et al (2009), "Microwave-assisted water extraction of green tea polyphenols", Phytochemical Analysis, 20(5), pp 408-415 Nwuha V (2000), "Novel studies on membrane extraction of bioactive components of green tea in organic solvents: part I", Journal of Food Engineering, 44(4), pp 233-238 Park J H., et al (2016), "Application of montmorillonite in bentonite as a pharmaceutical excipient in drug delivery systems", Journal of Pharmaceutical Investigation, 46(4), pp 363-375 Rafaela Macedo Mendes De Oliveira (2012), "Quantification of catechins and caffeine from green tea (Camellia sinensis) infusions, extract, and ready-to-drink beverages", Food Science and Technology, 32(1), pp 163-166 Ramarethinam S., et al (2002), "Standardization of conditions for effective clarification and concentration of green tea extract by membrane filtration", Journal of Scientific & Industrial Research, 65(10), pp 821-825 Raymond Cooper, et al (2005), "Medicinal Benefits of Green Tea: Part I Review of Noncancer Health Benefits", The Journal of Alternative and Complementary Medicine, 11(3), pp 521-528 Sakanaka Senji (2003), "A Novel Convenient Process To Obtain a Raw Decaffeinated Tea Polyphenol Fraction Using a Lignocellulose Column", Journal of agricultural and food chemistry, 51(10), pp 3140-3143 Schoonheydt R A., Johnston C T (2006), Developments in Clay Science, Chapter 3: Surface and Interface Chemistry of Clay Minerals, Elsevier Ltd., 1, pp 87-113 Shiono Takashi, et al (2017), "Selective decaffeination of tea extracts by montmorillonite", Journal of Food Engineering, 200, pp 13-21 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 Sosa M V., et al (2011), "Green tea encapsulation by means of high pressure antisolvent coprecipitation", The Journal of Supercritical Fluids, 56(3), pp 304311 Stapleton P D., et al (2004), "Modulation of beta-lactam resistance in Staphylococcus aureus by catechins and gallates", International Journal of Antimicrobial Agents, 23(5), pp 462-467 Sun Q L., et al (2010), "Decaffeination of green tea by supercritical carbon dioxide", Journal of Medicinal Plants Research, 4(12), pp 1161-1168 Tao X., et al (2006), "Impact of ultrasonic-assisted extraction on the chemical and sensory quality of tea infusion", Journal of Food Engineering, 74(4), pp 557-560 Tedeschi E., et al (2002), "Antiinflammatory action of EGCG, the main component of green tea, through STAT‐1 inhibition", Annals of the New York Academy of Sciences, 973(1), pp 435-437 USP 41 (2019), Dietary Supplements: Powdered Decaffeinated Green Tea Extract Vuong Q V., et al (2011), "The content of bioactive constituents as a quality index for Vietnamese teas", International Food Research Journal, 18(1), pp 329336 Vuong Q V., et al (2011), "Optimizing conditions for the extraction of catechins from green tea using hot water", Journal of Separation Science, 34(21), pp 30993106 Vuong Q V., et al (2010), "Extraction and isolation of catechins from tea", Journal of Separation Science, 33(21), pp 3415-3428 Wang H., et al (2000), "Isocratic elution system for the determination of catechins, caffeine and gallic acid in green tea using HPLC", Food Chemistry, 68(1), pp 115-121 Wang L., et al (2012), "Column-chromatographic extraction and separation of polyphenols, caffeine and theanine from green tea", Food Chemistry, 131(4), pp 1539-1545 Wang R F., et al (2009), "Removal of Caffeine from Green Tea Extract by Macroporous Resin Adsorption", Food Science, 30(20), pp 122-125 Xu Y., et al (2009), "Preparative Separation of Glabridin from Glycyrrhiza glabra L Extracts with Macroporous Resins", Separation Science and Technology, 44(15), pp 3717-3734 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 Yamamoto Yoshimasa, et al (2003), "A Combination Effect of Epigallocatechin Gallate, a Major Compound of Green Tea Catechins, with Antibiotics on Helicobacter pylori Growth In Vitro", Current Microbiology, 47(3), pp 244-249 Ye J H., et al (2007), "Preparation of Partially Decaffeinated Instant Green Tea", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 55(9), pp 3498–3502 Ye J H., et al (2011), "Preparation of tea catechins using polyamide", Journal of Bioscience and Bioengineering, 111(2), pp 232-236 Ye J H., et al (2009), "Using tea stalk lignocellulose as an adsorbent for separating decaffeinated tea catechins", Bioresource Technology, 100(2), pp 622628 Yoko Matsui, et al (2006), "Antihypercholesterolemic Activity of Catechin-free Saponin-rich Extract from Green Tea Leaves", Food Science and Technology Research, 12(1), pp 50-54 Yoshimasa Yamamoto, et al (2004), "Protective effects of green tea catechins on alveolar macrophages against bacterial infections", BioFactors, 21, pp 119-121 Yu Ernest K C (1998), "Novel decaffeination process using cyclodextrins", Applied Microbiology and Biotechnology, 28(6), pp 546-552 Zhang H., et al (2014), "Extraction of catechin compounds from green tea with a new green solvent", Chemical Research in Chinese Universities, 30(1), pp 37-41 Zhang X., et al (2013), "Simultaneous separation and purification of tea bioactives from summer green tea by column chromatography", Journal of the Chemical Society of Pakistan, 35(5), pp 1258-1267 Zhao R., et al (2008), "Selective adsorption of tea polyphenols from aqueous solution of the mixture with caffeine on macroporous crosslinked poly(N-vinyl-2pyrrolidinone)", Reactive and Functional Polymers, 68(3), pp 768-774 Zhu Q Y., et al (1997), "Stability of Green Tea Catechins", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 45(12), pp 4624–4628 PHỤ LỤC Phụ lục Dữ liệu động học hấp phụ cafein MMT Phụ lục Dữ liệu động học hấp phụ EGCG nhựa HPD826 Phụ lục Dữ liệu hấp phụ đẳng nhiệt Phụ lục Hình ảnh nguyên liệu số chất hấp phụ dùng nghiên cứu Phụ lục Động học hấp phụ Phụ lục Đường hấp phụ đẳng nhiệt Phụ lục Minh họa chế làm tăng hiệu suất chiết dung môi ethanol 50% Phụ lục Một số mẫu dịch chiết trình loại cafein MMT Phụ lục Một số hình ảnh sắc đồ HPLC Phụ lục 10 Phiếu giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu Phụ lục Dữ liệu động học hấp phụ cafein MMT Phụ lục 1.1 Ảnh hưởng thời gian đến dung lượng hấp phụ cafein MMT (25°C, nồng độ cafein 0,5 mg/mL) Qt (mg/g) Thời gian (phút) 10 15 30 45 60 90 120 Dung dịch cafein 0,00 11,43 14,14 14,16 14,17 14,19 14,20 14,20 Dịch chiết 0,00 11,00 13,37 13,68 13,71 13,93 14,04 14,11 Phụ lục 1.2 Dữ liệu thực nghiệm động học hấp phụ cafein MMT theo mơ hình giả bậc ln(Qe-Qt) Thời gian (phút) 10 15 30 45 60 90 120 Dung dịch cafein 2,66 1,04 -2,23 -2,41 -2,54 -2,74 -3,00 -3,00 Dịch chiết 2,65 1,16 -0,18 -0,66 -0,72 -1,30 -1,81 -2,39 Phụ lục 1.3 Dữ liệu thực nghiệm động học hấp phụ cafein MMT theo mơ hình giả bậc t/Qt (phút.g.mg-1) Thời gian (phút) 10 15 30 45 60 90 120 Dung dịch cafein 0,00 0,88 1,06 2,12 3,18 4,23 6,34 8,45 Dịch chiết 0,00 0,91 1,12 2,19 3,28 4,31 6,41 8,51 Phụ lục Dữ liệu động học hấp phụ EGCG nhựa HPD826 Phụ lục 2.1 Ảnh hưởng thời gian đến dung lượng hấp phụ EGCG nhựa HPD826 (25°C, nồng độ EGCG 0,5 mg/mL) Thời gian 0,5 1,5 2,5 3,5 (giờ) Qt (mg/g) 0,00 38,23 53,11 65,00 70,00 75,00 76,48 77,22 77,78 78,12 78,23 Phụ lục 2.2 Dữ liệu thực nghiệm động học hấp phụ EGCG nhựa HPD826 theo mô hình giả bậc Thời gian (giờ) ln(Qe-Qt) 0,5 1,5 2,5 3,5 4,36 3,70 3,24 2,61 2,15 1,27 0,73 0,29 -0,25 -0,82 -1,11 Phụ lục 2.3 Dữ liệu thực nghiệm động học hấp phụ EGCG nhựa HPD826 theo mơ hình giả bậc Thời gian (giờ) t/Qt (giờ.g.mg-1) 0,5 1,5 2,5 3,5 0,000 0,013 0,019 0,023 0,029 0,033 0,039 0,045 0,051 0,064 0,077 Phụ lục Dữ liệu hấp phụ đẳng nhiệt Phụ lục 3.1 Dữ liệu thực nghiệm hấp phụ đẳng nhiệt cafein MMT 25°C Dung dịch cafein Dịch chiết Co (µg/mL) 140 300 500 600 700 Ce (µg/mL) 0,162 0,82 4,88 8,02 Qe (mg/g) 4,00 8,55 14,23 17,00 19,77 Ce (µg/mL) 0,5 1,5 15 Qe (mg/g) 3,99 8,53 14,14 16,91 19,57 Phụ lục 3.2 Dữ liệu thực nghiệm hấp phụ đẳng nhiệt EGCG nhựa HPD826 25°C Dịch chiết Co (µg/mL) 140 300 500 600 700 Ce (µg/mL) 10,05 28,64 104,32 180,82 260,14 Qe (mg/g) 25,99 54,27 79,14 83,84 87,97 Phụ lục Hình ảnh nguyên liệu số chất hấp phụ dùng nghiên cứu Phụ lục 4.1 Mẫu Chè nguyên liệu Phụ lục 4.2 Hình ảnh mẫu MMT Phụ lục 4.3 Hình ảnh nhựa macroporous 3.00 2.00 1.00 0.00 -1.00 -2.00 -3.00 -4.00 -5.00 10.00 (a) y = -0.0358x + 0.1273 R² = 0.4873 50 100 150 (b) 8.00 6.00 t/Qt ln (Qe-Qt) Phụ lục Động học hấp phụ 4.00 y = 0.0696x + 0.0686 R² = 0.9996 2.00 0.00 t (phút) 50 100 150 t (phút) ln (Qe-Qt) 10.00 (c) 2.00 y = -0.0344x + 1.1862 R² = 0.7732 1.00 0.00 -1.00 50 100 150 (d) 8.00 t/Qt 3.00 -2.00 6.00 4.00 y = 0.0697x + 0.134 R² = 0.9998 2.00 -3.00 0.00 -4.00 t (phút) 50 100 150 t (phút) Phụ lục 5.1 Động học hấp phụ cafein từ dung dịch cafein (a b) dịch chiết -1 -2 -3 0.1 (a) y = -0.976x + 4.0429 R² = 0.9666 (b) 0.08 t/Qt ln (Qe-Qt) (c d) MMT theo mô hình giả bậc (a c) giả bậc (b d) 0.06 0.04 y = 0.0115x + 0.006 R² = 0.9969 0.02 t (giờ) t (giờ) Phụ lục 5.2 Động học hấp phụ EGCG từ dịch chiết nhựa HPD826 theo mơ hình giả bậc (a) giả bậc (b) Phụ lục Đường hấp phụ đẳng nhiệt 3.5 (b) (a) 0.0004 y = 0.4149x + 5.0725 R² = 0.9768 0.0003 0.0002 2.5 y = 0.0458x + 5E-05 R² = 0.9926 1.5 0.0001 0 0.002 0.0008 0.004 0.006 Ce (mg/mL) 0.008 -10 0.01 -9 -8 -7 lnCe -6 -5 3.5 (d) (c) 0.0006 y = 0.4677x + 5.0551 R² = 0.9699 0.0004 -4 2.5 y = 0.044x + 0.0001 R² = 0.9977 lnQe Ce /Qe (g/mL) lnQe Ce /Qe (g/mL) 0.0005 0.0002 1.5 0.003 0.006 0.009 Ce (mg/mL) 0.012 0.015 -8 -7 -6 -5 lnCe -4 Phụ lục 6.1 Đường hấp phụ đẳng nhiệt cafein MMT từ dung dịch cafein (a b) dịch chiết (c d) theo mơ hình Langmuir (a c) Freundlich (b d) 0.003 (a) y = 0.0104x + 0.0003 R² = 0.9995 0.002 4.5 y = 0.3603x + 5.0765 R² = 0.9128 0.0015 lnQe Ce /Qe (g/mL) 0.0025 (b) 0.001 3.5 0.0005 0.05 0.1 0.15 0.2 Ce (mg/mL) 0.25 0.3 -5 -4 -3 lnCe -2 -1 Phụ lục 6.2 Đường hấp phụ đẳng nhiệt EGCG nhựa HPD826 từ dịch chiết theo mô hình Langmuir (a) Freundlich (b) Phụ lục Minh họa chế làm tăng hiệu suất chiết dung môi ethanol 50% Phụ lục 7.1 Minh họa chế tăng hiệu suất chiết dung môi ethanol 50% Phụ lục Một số mẫu dịch chiết trình loại cafein MMT Phụ lục 8.1 Hình ảnh dịch chiết Chè tự nhiên (1), dịch chiết có MMT acid citric (2) dịch chiết có MMT, khơng có acid citric (3) sau lắc Phụ lục Một số hình ảnh sắc đồ HPLC Cao sau loại cafein mẻ Cao sau loại cafein mẻ Cao sau loại cafein làm giàu catechin mẻ Cao sau loại cafein làm giàu catechin mẻ Phụ lục 9.1 Sắc ký đồ HPLC số mẫu cao Chè )olSueg'sser4lcrsy eql'({-y Dnuag) aoacnrq.toqdng 'f I uDd 'otrJ arunpl'pun1pt11{o n.to1g'spe 'ues;e1re;E'puuurlrurs ural :ur'eeaceerll (OfOt) 3ue;1 11 y srno.I']S 'sser4 uep;eg lecru€1og rJnossrlAJ pue 'Surheg 'lor1 'ou1q3 Dnll ,spe ,3uo11 'sse;4 ecuerc g '(aoacoaql q8no.nll aDa)DuDtsD)oddt11) '1 'q 'ueneu 'H 'd r 'L'Z t dgr lgnqt d) - coq Z 'nh\'.ur 'aoacnaql '(tooz) I cnql Sugqr 19n {o ^\oluolor]uEg ug,tn|'?rJ BXNI'tuDil t?!l ?c,@) uoq) BxN'8unp esnrg '(OOOt) uglp gg 'Ur141 3upo11 n1uer1 uuq4 [J '(Eooz) Iqc uq^ 't Z 9A 'l ogrpl tueqt nfU Sudr; c4g urglq8N'SqI tft uvrl'sI'scd u.o UPA *fu \t - _: _ s- l -\ ,