Nghiên cứu đặc điểm kháng khuẩn của vi khuẩn lactic phân lập từ một số thực vật ở việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Mỹ Lệ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN LACTIC PHÂN LẬP TỪ MỘT SỐ THỰC VẬT Ở VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Mỹ Lệ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN LACTIC PHÂN LẬP TỪ MỘT SỐ THỰC VẬT Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC CÁN BỘ HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Nguyễn Quỳnh Uyển TS Lê Hồng Điệp Hà Nội - 2019 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Quỳnh Uyển, cán Viện Vi sinh học Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc gia Hà Nội tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt nhiều kiến thức, kinh nghiệm, giúp tơi hồn thành luận văn theo định hƣớng ban đầu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS Lê Hồng Điệp, cán Bộ mơn Hóa sinh Sinh học phân tử, Khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn CN Hồng Thu Hà, CN Lê Hồng Anh toàn thể cán bộ, sinh viên Viện Vi sinh vật Công nghệ Sinh học - Đại học Quốc gia Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ động viên tơi q trình làm thực nghiệm Đề tài “Đánh giá nguồn gen vi khuẩn lactic địa định hƣớng ứng dụng thực phẩm, dƣợc phẩm thức ăn chăn nuôi” - Bộ khoa học Cơng nghệ hỗ trợ hóa chất, dụng cụ thí nghiệm suốt q trình thực luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, ngƣời thân, bạn bè anh chị đồng học bên giúp đỡ, động viên, khích lệ tơi vƣợt qua khó khăn thời gian học tập suốt năm vừa qua Hà Nội, ngày tháng Học viên Nguyễn Thị Mỹ Lệ i năm 2019 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH ẢNH vi MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Sơ lƣợc loài thực vật dùng nghiên cứu 1.2 Vi khuẩn lactic (Acid lactic Bacteria - LAB) .4 1.2.1 Đặc điểm chung vi khuẩn lactic 1.2.2 Trao đổi chất vi khuẩn lactic 1.2.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng, phát triển vi khuẩn lactic 1.2.4 Ứng dụng vi khuẩn lactic 1.3 Bacteriocin 10 1.3.1 Định nghĩa 11 1.3.2 Phân loại 11 1.3.3 Cơ chế hoạt động bacteriocin 13 1.3.4 Phƣơng pháp tinh bacteriocin 14 1.3.5 Lợi ích hạn chế bacteriocin 16 1.3.6 Ứng dụng bacteriocin 17 1.3.7 Tình hình nghiên cứu bacteriocin từ LAB 19 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nguyên liệu 23 2.1.1 Nguồn phân lập 23 2.1.2 Nguồn vi sinh vật 23 2.1.3 Mơi trƣờng, hóa chất thiết bị 24 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 26 ii 2.2.2 Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn lactic 27 2.2.3 Xác định hoạt tính hoạt độ bacteriocin 27 2.2.4 Phƣơng pháp định danh vi sinh vật sinh học phân tử 28 2.2.5 Nghiên cứu điều kiện phù hợp cho khả sinh tổng hợp bacteriocin 30 2.2.6 Một số tính chất bacteriocin 30 2.2.7 Tinh bacteriocin 31 2.2.8 Phƣơng pháp thống kê sinh học 33 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn lactic sinh bacteriocin định danh 34 3.1.1 Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic sinh bacteriocin 34 3.1.2 Hoạt độ bacteriocin chủng UL830 36 3.1.3 Định danh chủng UL830 37 3.2 Nghiên cứu điều kiện phù hợp cho khả sinh tổng hợp bacteriocin chủng vi khuẩn L plantarum UL830 37 3.2.1 Thời gian nuôi cấy 37 3.2.2 Nhiệt độ nuôi cấy 38 3.3 Một số tính chất bacteriocin từ chủng vi khuẩn L plantarum UL830 39 3.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn 39 3.3.2 Ảnh hƣởng pH đến hoạt tính bacteriocin từ chủng UL830 42 3.3.3 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hoạt tính bacteriocin từ chủng UL830 43 3.3.4 Ảnh hƣởng enzyme tiêu hóa đến hoạt tính bacteriocin từ chủng UL830 44 3.4 Tinh bacteriocin 45 3.4.1 Kết tinh bacteriocin sắc ký trao đổi cation 45 3.4.2 Kết tinh bacteriocin sắc ký lỏng hiệu cao HPLC 47 KẾT LUẬN 49 KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AU HPLC Activity Unit Sắc ký lỏng hiệu cao (High-Performance Liquid Chromatography) kDa Kilo Dalton LAB Vi khuẩn lactic (Acid lactic Bacteria) LB Luria Bertani MRS Man, Rogosa, Sharpe PCR Polymerase chain reaction TSBYE Tryptic Soy Broth Yeast Extract iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Tác dụng y học 10 loài thực vật Bảng 1.2 Một số bacteriocin quan trọng sinh tổng hợp Lactobacilli [83] 12 Bảng 1.3 Tinh số bacteriocin đƣợc sinh tổng hợp LAB [60] .15 Bảng 2.1 Các chủng vi khuẩn kiểm định 23 Bảng 2.2 Các chủng vi sinh vật gây bệnh 24 Bảng 3.1 Các chủng vi khuẩn lactic đƣợc phân lập 34 Bảng 3.2 Khả kháng vi khuẩn kiểm định chủng lựa chọn 35 Bảng 3.3 Hoạt độ bacteriocin sinh tổng hợp chủng UL830 36 Bảng 3.4 Kết đƣờng kính vòng kháng khuẩn 41 Bảng 3.5 Tinh bacteriocin chủng L plantarum UL830 sắc ký trao đổi cation 46 v DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cơ chế hoạt động bacteriocin [82] .14 Hình 2.1 Sơ đồ thí nghiệm .26 Hình 2.2 Cách pha loãng mẫu theo hệ số 27 Hình 3.1 Kết điện di DNA genome chủng UL830 (A) điện di sản phẩm PCR khuếch đại gen 16S rDNA (B) 37 Hình 3.3 Hoạt tính bacteriocin chủng L plantarum UL830 nhiệt độ nuôi cấy khác .39 Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn chủng UL830 40 Hình 3.5 Ảnh hƣởng pH đến hoạt tính bacteriocin từ chủng L plantarum UL830 42 Hình 3.6 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hoạt tính bacteriocin từ chủng L plantarum UL830 43 Hình 3.7 Ảnh hƣởng trypsin (A) chymotrypsin (B) đến hoạt tính bacteriocin từ chủng L plantarum UL830 44 Hình 3.8 Sắc ký đồ dịch ni cấy chủng UL830 qua cột Hitrap SP FF mL 45 Hình 3.9 Kết kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn rửa giải 46 Hình 3.10 Sắc ký phân tích HPLC bactericoin sinh tổng hợp chủng UL830 47 Hình 3.11 Kết kiểm tra hoạt tính bacteriocin đỉnh HPLC 48 vi MỞ ĐẦU Thực phẩm chứa mầm bệnh ảnh hƣởng nghiêm trọng đến sức khỏe ngƣời nguyên nhân gây dịch bệnh Mặc dù tiến kỹ thuật công nghệ nguyên tắc vệ sinh an toàn thực phẩm (GMP, HACCP,…) đƣợc áp dụng, nhƣng nguy nhiễm vi sinh vật gây bệnh trình chế biến thực phẩm ngày tăng Chính thế, chất bảo quản hóa học đƣợc sử dụng tràn lan Nhiều nghiên cứu chứng minh chất phụ gia thực phẩm gây tác dụng không mong muốn cho ngƣời tiêu dùng Do đó, việc tìm hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn từ nguồn gốc tự nhiên, an tồn đặc hiệu đƣợc quan tâm Trƣớc yêu cầu trên, vi khuẩn lactic (LAB) nhóm vi khuẩn đƣợc tập trung nghiên cứu nhiều chúng có khả sinh hợp chất kháng khuẩn nhƣ acid lactic, hydrogen peroxide, carbon dioxide, diacetyl, bacteriocin, reuterin reutericyclin Trong đó, bacteriocin hợp chất kháng khuẩn thu hút đƣợc nhiều quan tâm Chúng có khả kháng vi sinh vật gây hỏng thực phẩm nhƣ Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella… Do tính chất an toàn ngƣời động vật, LAB đƣợc ứng dụng rộng rãi chế biến thực phẩm đối tƣợng nghiên cứu nhiều nhà khoa học năm qua Việt Nam nƣớc nhiệt đới gió mùa với nguồn động thực vật phong phú Nguồn thực vật dồi dào, gần gũi với đời sống ngƣời nhƣ lô hội, ngải cứu, rau muống, sung… không thực phẩm hàng ngày mà có tác dụng y học Trên sở đó, chúng tơi tiến hành đề tài “Nghiên cứu đặc điểm kháng khuẩn vi khuẩn lactic phân lập từ số thực vật Việt Nam” Mục tiêu ban đầu phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả sinh tổng hợp bacteriocin định danh Qua đó, xác định ảnh hƣởng pH, nhiệt độ, enzyme tiêu hóa đến hoạt tính bacteriocin sơ tinh bacteriocin nhằm góp phần làm phong phú thêm thông tin nhƣ tiềm ứng dụng từ bacteriocin đƣợc sinh tổng hợp từ vi khuẩn LAB CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Sơ lƣợc loài thực vật dùng nghiên cứu Việt Nam có nguồn tài nguyên thực vật phong phú đa dạng Thống kê cho thấy Việt Nam có đến 12000 lồi thực vật có mạch bậc cao, sinh trƣởng điều kiện sinh thái hình thành kiểu thảm thực vật khác [2] Từ trƣớc đến có nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu thuốc vị thuốc để chữa trị bệnh nhƣ: GS Đỗ Tất Lợi (1999) “Những thuốc vị thuốc Việt Nam” giới thiệu 800 để làm thuốc; sách “Cây thuốc Việt Nam” lƣơng y Lê Trần Đức (1997) có ghi 830 thuốc; TS Võ Văn Chi (1997) với “Từ điển thuốc Việt Nam” có ghi 3200 thuốc có loài thuốc nhập ngoại… Theo tài liệu Viện dƣợc liệu (2000) Việt Nam có đến 3820 lồi làm thuốc Nhƣng qua điều tra tìm hiểu số đƣợc nâng lên kiến thức sử dụng thuốc ngƣời dân chƣa đầy đủ Ngồi cơng dụng làm thực phẩm sống hàng ngày số tác dụng y học mƣời loài thực vật đƣợc chọn làm đối tƣợng nghiên cứu đƣợc trình bày Bảng 1.1 dƣới đây: Bảng 1.1 Tác dụng y học 10 loài thực vật STT Tên thực vật Tác dụng y học Cải xanh - Lợi tiểu, chữa ho, viêm khí quản, trị đau Brassica juncea L., họ cải dây thần kinh [2,10] Brassicaceae Sung - Trị ăn, ngủ; ghẻ lở trẻ em, da Ficus racemosa, họ Dâu tằm mẩn sƣng đỏ…[2] Moraceae Kết Bảng 3.5 cho thấy, qua hệ thống tinh AKTA, độ mẫu tăng lên 4,537 lần so với dịch nuôi cấy thô ban đầu Theo Todorov đồng tác giả 2004, từ dịch nuôi cấy sau qua cột trao đổi cation SP FF, độ bacteriocin Plantaricin ST31 thu đƣợc tăng 110 lần với hiệu suất đạt 5,94% [75] Bacteriocin Lac-B23 sinh tổng hợp L plantarum J23 đƣợc tinh qua bƣớc (kết tủa ammonium sulfate - sắc ký trao đổi cation - RPHPLC) Độ bacteriocin thu đƣợc sau sắc ký trao đổi cation tăng 827,01 lần hiệu suất thu hồi bacteriocin đạt 11,36% [86] Còn nghiên cứu tăng 4,537 lần so với bacteriocin thô ban đầu hiệu suất thu hồi bacteriocin từ vi khuẩn L plantarum UL830 (2,363%) Nhƣ vậy, chƣơng trình tinh cần đƣợc cải thiện nhằm tăng hiệu suất thu hồi bacteriocin nhƣ độ 3.4.2 Kết tinh bacteriocin sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Để tinh thêm, phân đoạn rửa giải có hoạt tính sau cột Hitrap SP FF mL đƣợc dùng hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Sắc ký đồ kết kiểm tra hoạt tính bacteriocin với chủng vi khuẩn Lactobacillus sakei subsp.sakei JCM 1157 đỉnh sau sắc ký HPLC đƣợc trình bày Hình 3.10 Hình 3.11 tƣơng ứng 37.185 DAD1 E, Sig=280,16 Ref=360,100 (UYEN\PL1S0817.D) mAU Đỉnh 200 150 100 52.847 39.020 36.233 27.225 23.346 22.321 19.189 7.612 8.359 6.878 Đỉnh 20.382 21.008 Đỉnh 50 0 10 20 30 40 50 Hình 3.10 Sắc ký phân tích HPLC bactericoin sinh tổng hợp chủng UL830 47 MiliQ 830 830 MiliQ Đỉnh Đỉnh Đỉnh Hình 3.11 Kết kiểm tra hoạt tính bacteriocin đỉnh HPLC Kết cho thấy, trình tinh thu đƣợc đỉnh protein rõ ràng Trong đó, đỉnh đƣợc rửa giải 10 - 25% acetonitrile, tƣơng ứng với thời gian lƣu 18,90 phút có hoạt tính bacteriocin Müller đồng tác giả cơng bố thí nghiệm tinh bacteriocin đƣợc sản xuất chủng L plantarum lp 31 phân lập từ lạp xƣởng lên men Sau phân tích RP-HPLC cột C18 Kromasil hiệu suất thu hồi bacteriocin đạt 48% [54] Trong nghiên cứu Amina cộng (2015), plantaricin MZ sinh tổng hợp từ L plantarum DU10 qua hệ thống HPLC với cột C18 thu đƣợc đỉnh riêng biệt plantaricin M Z 16,90 23,38 phút [16] Bacteriocin chứa hai peptide đƣợc sản xuất chủng L plantarum MBSa4 sau tinh C18 RP-HPLC thu đƣợc đỉnh có hoạt tính kháng Listeria (L ivanovii subsp ivanovii ATCC 19119) [19] Mẫu bacteriocin đƣợc tiến hành điện di SDS-PAGE với mục đích kiểm tra độ nhƣ bƣớc đầu xác định khối lƣợng phân tử nhƣng không quan sát đƣợc băng protein 48 KẾT LUẬN 38 chủng vi khuẩn lactic đƣợc phân lập từ 10 mẫu thực vật, 10 chủng có khả sinh tổng hợp bacteriocin kháng chủng vi khuẩn kiểm định Chủng UL830 có hoạt tính mạnh (đƣờng kính vòng kháng khuẩn > 12mm) đƣợc định danh Lactobacillus plantarum Điều kiện nuôi cấy phù hợp chủng L plantarum UL830 để thu nhận bacteriocin với hoạt độ cao môi trƣờng lỏng MRS 30oC 24 Bacteriocin đƣợc sinh tổng hợp chủng L plantarum UL830 có phổ hoạt tính rộng hoạt độ cao vi khuẩn kiểm định Lactobacillus sakei subsp sakei JCM 1157 Lactococcus lactis subsp lactis ATCC 1935 với hoạt độ tƣơng ứng 3650 AU/mL 1830 AU/mL Bacteriocin thu đƣợc bền nhiệt (hoạt tính giữ nguyên 60 phút 100°C) Bacteriocin có khả hoạt động khoảng pH rộng (4 10) bị biến đổi trypsin, chymotrypsin Bacteriocin bƣớc đầu đƣợc tinh từ chủng L plantarum UL830 phƣơng pháp sắc ký trao đổi cation hệ thống AKTA với độ tăng 4,537 lần so với dịch nuôi cấy thơ ban đầu hiệu suất q trình tinh 2,363% Sau tinh bacteriocin qua hệ thống HPLC, đỉnh đƣợc thu, đỉnh có hoạt tính kháng chủng vi khuẩn kiểm định Lactobacillus sakei subsp sakei JCM 1157 49 KIẾN NGHỊ Từ kết thí nghiệm đạt đƣợc, chúng tơi có số kiến nghị sau nhằm hồn thiện cơng trình nghiên cứu: Tiếp tục nghiên cứu tối ƣu hóa trình tinh bacteriocin chủng L plantarum UL830 để thu đƣợc hàm lƣợng cao, đồng thời đánh giá hoạt tính bacteriocin Nghiên cứu khả ứng dụng bacteriocin L plantarum UL830 nhƣ chủng vi khuẩn thực tế 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Trần Hữu Anh (1997), Khảo sát tinh dầu quế điều chế số dẫn xuất Metilcavicol, Luận văn thạc sĩ, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, pp [2] Võ Văn Chi (1998), Cây rau làm thuốc, Nhà xuất tổng hợp Đồng Tháp [3] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (1997), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, pp 224-230 [4] Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo (1996), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, pp 133-138 [5] Nguyễn Thị Hồng (2011), Nghiên cứu xác định thành phần cấu tạo số hợp chất hóa học tinh dầu từ Ngải cứu Quảng Nam, Luận văn thạc sĩ, Trƣờng Đại học Đà Nẵng, pp 5-6 [6] Nguyễn Thúy Hƣơng, Trần Thị Tƣởng An (2008), “Thu nhận bacteriocin phƣơng pháp lên men tế bào Lactococcus lactic cố định chất mang Cellulose vi khuẩn (BC) ứng dụng bảo quản thịt tƣơi sơ chế tối thiểu”, Science & Technology Development, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh, 11(9), pp 100-109 [7] Phạm Thùy Linh (2011), Nghiên cứu khả tạo chất diệt khuẩn enterocin P tái tổ hợp nhằm ứng dụng bảo quản thực phẩm, Luận án Tiến sĩ, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Hà Nội [8] Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB y học, pp 710-712 [9] Bùi Thị Hồng Quyên (2007), Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính lơ hội (Alove vera, var Sinensis Berger) phương pháp nuôi cấy in vitro phương pháp giâm hom thân, Luận văn thạc sĩ, Trƣờng Đại học Nông nghiệp I, pp 8-10 51 [10] Lê Thị Hồng Tuyết (2004), Nghiên cứu bcateriocin sản xuất Lactobacillus acidophilus NrrlB - 2092, Luận văn thạc sĩ Sinh học, Đại học Quốc gia TPHCM [11] Lê Thị Hồng Tuyết, Hoàng Quốc Khánh (2004), “Một số đặc tính bacteriocin sản xuất vi khuẩn Lactobacillus acidophilus”, Báo cáo Khoa học, Viện Sinh học Nhiệt Ðới, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam [12] http://suckhoedoisong.vn/bat-mi-tac-dung-cua-rau-cang-cua-va-bi-mat-trongrau-cang-cua-n100565.html Tài liệu Tiếng Anh [13] Abee T (1995), “Pore-forming bacteriocins of Grampositive bacteria and selfprotection mechanisms of producer organisms”, FEMS Microbiol Lett., 129, pp 1-10 [14] Agarwal O P (1985), “Prevention of atheromatous heart disease”, Angiology, pp 485-492 [15] Ali W S., Musleh R M (2015), “Purification and Characterization of Plantaricinvgw8, A Bacteriocin Produced by Lactobacillus Plantarum VGW8”, Journal of Biolnogy, Agriculture and Healthcare, 5(1), pp 147-152 [16] Amina Z., Noureddine S., Venkatesan A., Hicham B., Yamina B., Leila B., Mebrouk K (2015), “Purification and Molecular Characterization of TwoAntimicrobial Peptides Produced by Lactobacillus plantarum DU10”, International Journal of Biological Chemistry, 9(2), pp 46-58 [17] Anacarso I., Bassoli L., Sabia C., Condò C (2015 ), “Isolation and identification of Acid lactic Bacteria from plants and other vegetable matrices and microbial recombination with Enterococcus spp.”, American research thoughts, 1(7), pp 1503-1515 [18] Atrih A., Rekhif N., Moir A J., Lebrihi A., Lefebvre G (2001), “Mode of action, purification and amino acid sequence of plantaricin C19, an anti-listeria 52 bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum C19”, Int J Food Microbiol, 68, pp 93-104 [19] Barbosa M S., Todorov S D., Ivanova I V, Belguesmia Y., Choiset Y., Rabesona H., Chobert J.-M., Haertle T., Franco B D G M (2016), “Characterization of a two-peptide plantaricin produced by Lactobacillus plantarum MBSa4 isolated from Brazilian salami”, Food Control, 60, pp 103-112 [20] Borrero J., Kelly E., M O’Connor P., Kelleher P., Scully C., D Cotter P., Jennifer Mahony J, van Sinderena D (2017), “Plantaricyclin A, a novel circular bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum NI326: purification, characterization, and heterologous production”, Applied Environmental Microbiol, 84(1), pp 1-10 [21] Bradford M., M (1976), “A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding”, Anal Biochem, 72(1-2), pp 248-254 [22] Broadbent J R., Chou C., Guillies K., Kondo J K (1989), “Nisin inhibits several gram-positive, mastitis-causing pathogens”, J Dairy Sci., 72, pp 33423345 [23] Bromberg R., Moreno I., Zaganini C L., Delboni R R., Oliveira J D (2004), “Isolation of bacteriocin-producing acid lactic bacteria from meat and meat products and its spectrum of inhibitory activity”, Brazilian Journal of Microbiology, 35(1), pp 1678-4405 [24] Chen H., Hoover D G (2003), “Bacteriocins and their Food Applications”, Comprehensive reviews in food science and food safety, 2, pp 82-100 [25] Cintas L M., Herranz C., Hernández P E., Casaus M P., Nes L F (2001), “Review: Bacteriocins of acid lactic bacteria”, Food Sci Tech Int., 7, pp 281-305 [26] Daeschel M A (1989), “Antimicrobial substances from acid lactic bacteria for use as food preservatives”, Food Technol, 43, pp 164-169 53 [27] da Silva Sabo S., Vitolo M., Gonz´alez J.M.D., de Souza Oliveira R.P (2014), “Overview of Lactobacillus plantarum as a promising bacteriocins producer among acid lactic bacteria”, Food Research International, pp 1-18 [28] Dalié D K D., Deschamps A M., Richard-Forget F (2010), “Acid lactic bacteria e potential for control of mould growth and mycotoxins: A review”, Food Control, 21, pp 370-380 [29] De Vuyst L., Leroy F (2007), “Bacteriocin from acid lactic bacteria: Production, purification and food applications”, J Mol Microbiol Biotechnol, 13, pp 194-199 [30] Deegan L H., Cotter P D., Hill C.,Ross P (2006), “Bacteriocins: Biological tools for biopreservation and shelf-life extension”, Int Dairy J., 16, pp 1058-1071 [31] Delesa D A (2017), “Bacteriocin as an advanced technology in food industry”, International Journal of Advanced Research in Biological Sciences, 4(12), pp 178-190 [32] Delves – Broughto J., Blackburn P., Evan R J., Hugeholtz J (1996), “Applications of the bacteriocin, nisin”, Antonie van Leeuwenhoek, 69, pp 193-202 [33] Deraz S F., Karlsson E N., Hedström M., Andersson M M., Mattiasson B (2005), “Purification and characterisation of acidocin D20079, a bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus DSM 20079”, Journal of Biotechnology, 117(4), pp 343-354 [34] Desriac F., Defer D., Bourgougnon N., Brillet B., Chevalier P L., Fleury Y (2010), “Bacteriocin as weapons in the Marine Animal-Associated bacteria warfare: inventory and potential applications as an aquaculture probiotic”, Marine Drugs, 8(4), pp 1153 - 1177 54 [35] Dobrogosz W J., Lindgren S E (1990), “Antagonistic activities of acid lactic bacteria in food and feed fermentations”, FEMS Microbiol Rev, 7(1-2), pp 149-163 [36] Drider D., Fimland G., Hechard Y., Mcmullen L M., Prevost H (2006), “The continuing story of class IIa bacteriocins”, Microbiology and Molecular Biology Reviews, 70, pp 564-582 [37] E Abo-Amer A (2007), “Characterization of a Bacteriocin-Like Inhibitory Substance Produced by Lactobacillus plantarum Isolated from Egyptian Home-Made Yogurt”, ScienceAsia, 33, pp 313-319 [38] Elyass M E., Shigidi M T., Attitalla I H., Mahdi A A (2017), “Characterization and optimization of bacteriocin from Lactobacillus plantarum isolated from fermented beef (Shermout)”, Open Journal of Applied Sciences, 7, pp 83-97 [39] Foulquié Moreno M R., Sarantinopoulos P., Tsakalidou E., De Vuyst L (2006), “The role and application of enterococci in food and health”, International Journal of Food Microbiology, pp 1-24 [40] Fugelsang K C., Edwards C G (2007), “Wine Microbiology”, Springer, 2, pp 29-44 [41] Gaspar C., Donders G G., Palmeira-de-Oliveira R., Queiroz J A., Tomaz C., Martinez-de-Oliveira J., Palmeira-de-Oliveira A (2018), “Bacteriocin production of the probiotic Lactobacillus acidophilus KS400”, AMB Express, 8(1):153 [42] Hammes W P., Hertel C (2009), “Genus I Lactobacillus Beijerink”, 1901 In: De Vos P, Garrity GM, Jones D, Krieg NR, Ludwig W, Rainey FA, Schleifer K-H, Whitman WB (eds) Bergey’s manual of systematic bacteriology, (3), Springer Berlin, pp 465-510 [43] Hayek S A., Ibrahim S A (2013), “Current Limitations and Challenges with Acid lactic Bacteria: A Review”, Food and Nutrition Sciences, 4, pp 73-87 55 [44] Hoover D G (1992), “Bacteriocins: Activities and Applications”, Encyclopedia of Microbiology, 1, pp 181-190 [45] Hu M., Dang L., Zhao H., Zhang C., Lu Y., Yu J (2016), "Characterization and Antibacterial Mode of a Novel Bacteriocin with Seven Amino Acids from Lactobacillus plantarum in Guizhou Salted Radish", Journal of Agricultural Science, 8(10), pp 120-130 [46] Ishibashi N., Seto H., Koga S., Zendo T., Sonomoto K (2015), “Identification of Lactococcus-specific bacteriocins produced by lactococcal isolates, and the discovery of a novel bacteriocin, Lactococcin Z”, Probiotics Antimicrob Proteins, 7(3), pp 222-231 [47] Kaškonienė V., Stankevičius M., Bimbiraitė-Survilienė K., Naujokaitytė G., Šernienė L., Mulkytė K., Malakauskas M., Maruška A (2017), “Current state of purification, isolation and analysis of bacteriocins produced by acid lactic bacteria”, Appl Microbiol Biotechnol [48] Katla T., Moretro T., Aasen I M., Holck A., Axelsson L (2001), “Inhibition of Listeria monocytogenes in cold smoked salmon by addtion of sakacin P and live Lactobacillus sakei cultures”, Food Microbiol, 18, pp 431-439 [49] Lee Y K., Nomoto K., Salminen S., Gorbach S L (1999), Handbook of probiotics, John Wiley & Sons, inc [50] Lin T-H., Pan T-M (2017), “Characterization of an antimicrobial substance produced by Lactobacillus plantarum NTU 102”, Journal of Microbiology, Immunology and Infection, pp 1-9 [51] Liu W., Pang H., Zhang H., Cai Y (2014), “Biodiversity of Acid lactic Bacteria, Chapter 2”, Springer, pp 103-203 [52] Maldonado A., Ruiz-Barba J L., Jimenez-Diaz R (2003), “Purification and genetic characterization of plantaricin NC8, a novel coculture-inducible twopeptide bacteriocin from Lactobacillus plantarum NC8”, Microbiol, 69, pp 383-389 56 Appl Environ [53] Moll G N., Konings W N., Driessen A J M (1999), “Bacteriocin: mechanism of membrane insertion and pore formation”, Antonie van Leeuwenhoek, 76, pp 185-198 [54] Müller D M., Carrasco M S., Tonarelli G G., Simonetta A C (2009), “Characterization and purification of a new bacteriocin with a broad inhibitory spectrum produced by Lactobacillus plantarum lp 31 strain isolated from dryfermented sausage”, J Appl Microbiol, 106(6), pp 2031-2040 [55] Nespolo C R., Brandelli A (2010), “Production of bacteriocin-like substances by acid lactic bacteria isolated from regional ovine cheese”, Brazilian Journal of Microbiology, 41, pp 1009-1018 [56] Noordiana N., Fatimah A B., Mun A S (2013), “Antibacterial agents produced by acid lactic bacteria isolated from Threadfin Salmon and Grass Shrimp”, International Food Research Journal, 20(1), pp 117-124 [57] Oscáriz J C., Pisabarro A G (2001), "Classification and mode of action of membrane-active bacteriocins produced by gram-positive bacteria", International Micribiology, 4(1), pp 13-19 [58] Ouwehand A C., Vesterlund S (2004), “Antimicrobial Components from Acid lactic Bacteria”, In: Acid lactic Bacteria: Microbiological and Functional Aspects, Salminen, S., A.V Wright and A Ouwehand (Eds.), Marcel Dekker, New York, pp 375-395 [59] Pilasombut K., Rumjuankiat K., Ngamyeesoon N., Duy L N D (2015), “In vitro characterization of bacteriocin produced by acid lactic bacteria isolated from Nem Chua, a traditional Vietnamese Fermented Pork”, Korean J Food Sci An, 35(4), pp 473-478 [60] Pingitore E V., Salvucci E., Sesma F., Nader-Macías M E (2007), “Different strategies for purification of antimicrobial peptides from Acid lactic Bacteria (LAB)”, Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in Applied Microbiology, pp 557-568 57 [61] Prescott L M., Harley J P., Klein D A (2002), Microbiology, th edition, McGraw-Hill Higher Educations, USA [62] Ruiz-Larrea F., Pozo-Bayón M A., G-Alegría E., Polo M C., Tenorio C., Martín-Alvarez P J., Calvo de la Banda M T., Moreno-Arribas M V (2005) “Wine volatile and amino acid composition after malolactic fermentation: effect of Oenococcus oeni and Lactobacillus plantarum starter cultures”, Journal of Agricultural Food Chemistry, 53(22), pp 8729-8735 [63] Rumjuankiat K., Perez R H., Pilasombut K., Keawsompong S., Zendo K., Sonomoto K., Nitisinprasert S (2015), “Purification and characterization of a novel plantaricin, KL-1Y, from Lactobacillus plantarum KL-1”, World J Microbiol Biotechnol [64] Salvetti E., Torriani S., Felis G E (2012), “The Genus Lactobacillus: A Taxonomic Update”, Probiotics & Antimicro Prot [65] Sambrook J., Russell D W (2001) Molecular Cloning A Laboratory Manual, 3rd ed Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY [66] Sankar N., Priyanka V., Reddy P.S., Rajanikanth P., Kumar V., Indira M (2012), “Purification and Characterization of Bacteriocin Produced by Lactobacillus plantarum Isolated from Cow Milk”, International Journal of Microbiology Research, 3(2), pp 133-137 [67] Satish K R., Arul V (2009), "Purification and characterization of phocaecin PI80: an anti-listerial bacteriocin produced by Streptococcus phocae PI80 Isolated from the gut of Penaeus indicus (Indian white shrimp)", J Microbiol Biotechnol, 19(11), pp 1393-1400 [68] Sidek N L M., Halim M., Tan J S., Abbasiliasi S., Mustafa S., B Ariff A (2018) “Stability of Bacteriocin-Like Inhibitory Substance (BLIS) Produced by Pediococcus acidilactici kp10 at Different Extreme Conditions”, BioMed Research International 58 [69] Sifour M., Tayeb I., Haddar H O., Namous H., Aissaoui S (2012), “Production and characterization of bacteriocin of Lactobacillus plantarum F12 with inhibitory activity against Listeria monocytogenes”, The Online Journalof Science and Technology, 2(1), pp 55-61 [70] Smaoui S., Elleuch L., Bejar W., Karray-Rebai I., Ayadi I., Jaouadi B., Mathieu F., Chouayekh H., Bejar S., Mellouli L (2010), “Inhibition of Fungi and Gram-Negative Bacteria by Bacteriocin BacTN635 Produced by Lactobacillus plantarum sp TN635, Applied Chemistry and Biotechnology, pp 1132-1146 [71] Song A A L., In L L A., Lim S H E., Rahim R A (2017), “A review on Lactococcus lactis: from food to factory”, Microbial Cell Factories, pp 16-55 [72] Song D F., Zhu M.Y., Gu Q (2014), “Purification and Characterization of Plantaricin ZJ5, a New Bacteriocin Produced by Lactobacillus plantarum ZJ5”, Plos One, 9(8) [73] Soomro A H., Masud T., Anwaar K (2002), “Role of Acid lactic Bacteria (LAB) in food Preservation and Human Health – A Review”, Pakistan Journal of Nutrition, 1(1), pp 20-24 [74] Teuber M (2003) , “The genera of Acid lactic Bacteria”, 6(3), pp 173-200 [75] Todorov S D., van Reenen C A., Dicks L M (2004), “Optimization of bacteriocin production by Lactobacillus plantarum ST13BR, a strain isolated from barley beer”, J Gen Appl Microbiol, 50(3), pp 149-57 [76] Todorov S D., Dicks L M (2007), "Bacteriocin production by Lactobacillus pentosus ST712BZ isolated from boza", Braz J Microbiol, 38(1), pp 1678-4405 [77] Todorov S D (2008), "Bacteriocin production by Lactobacillus plantarum AMA-K isolated from Amasi, a Zimbabwean fermented milk product and study of the adsorption of bacteriocin AMA-K to Listeriasp", Brazilian Journal of Microbiology, 39(1), pp 178-187 59 [78] Todorov S D (2009), "Bacteriocins from Lactobacillus plantarum production, genetic organization and mode of action", Brazilian Journal of Microbiology, 40(2), pp 209-221 [79] Tripuraneni S (2011), “Effect of Nutrient Supplements on Cucumber Fermentation by Acid lactic Bacteria”, A thesis submitted in partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in Food Science, University of Arkansas [80] Wang Y., Qin Y., Xie Q., Zhang Y., Hu J., Li P (2018), “Purification and Characterization of Plantaricin LPL-1, a Novel Class IIa Bacteriocin Produced by Lactobacillus plantarum LPL-1 Isolated From Fermented Fish”, Front Microbiol 9, 2276 [81] Wood B J B (1985), Microbiology of/ermented foods, voi I, Elsevier applied science publishers, London and New yerle [82] Yang S-C., Lin C-H., Sung C T., Fang, J-Y (2014), "Antibacterial activities of bacteriocins: application in foods and pharmaceuticals", Frontiers in Microbiology, 5, pp 1-10 [83] Zacharof M P., Lovitt R W (2012), "Bacteriocins produced by Acid lactic Bacteria: A Review Article ", Biotechnology and Food Science, 2, pp 50-56 [84] Zacharof M P., Coss G M., Mandale S J., Lovitt R W (2013), “Separation of lactobacilli bacteriocins from fermented broths using membranes”, Process Biochemistry, 48, pp 1252-1261 [85] Zhang H., Liu L., Hao Y., Xie Y (2013), “Isolation and partial characterization of a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum BM-1 isolated from a traditionally fermented Chinese meat product”, Microbiology and Immunology, 57(11), pp 746-755 [86] Zhang J., Yang Y., Yang H., Bu Y., Yi H., Zhang L., Han X., Ai L (2018), “Purification and Partial Characterization of Bacteriocin Lac-B23, a Novel 60 Bacteriocin Production by Lactobacillu plantarum J23, Isolated From Chinese Traditional Fermented Milk”, Front Microbiol, 9:2165 [87] Zhou F., Zhao H., Bai F., Piotr D., Liu Y., Zhang B (2014), “Purification and characterisation of the bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum, isolated from Chinese pickle”, Czech J Food Sci, 32, pp 430-436 [88] Zhu X., Shen L., Liu J., Zhang C., Gu Q (2015), “Purification of a bacteriocin from Lactobacillus plantarum ZJ217 active against methicillin-resistant Staphylococcus aureus”, Int J Food Eng, 11(1), pp 51-59 61 ... y học Trên sở đó, chúng tơi tiến hành đề tài Nghiên cứu đặc điểm kháng khuẩn vi khuẩn lactic phân lập từ số thực vật Vi t Nam Mục tiêu ban đầu phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn lactic có khả... KHOA HỌC TỰ NHIÊN Nguyễn Thị Mỹ Lệ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN LACTIC PHÂN LẬP TỪ MỘT SỐ THỰC VẬT Ở VI T NAM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ... bacteriocin sinh tổng hợp từ LAB định hƣớng Vi t Nam Chính vậy, chúng tơi thực đề tài Nghiên cứu đặc điểm kháng khuẩn vi khuẩn lactic phân lập từ số thực vật Vi t Nam với mục đích góp thêm