Bài viết xác định tần suất lưu hành và kiểu đột biến gen thalassemia và bệnh huyết sắc tố ở dân tộc Chơ Ro tại Đồng Nai. Tỷ lệ mang gen thalassemia chung của dân tộc Chơ Ro là 73,6%. Tỷ lệ mang gen α-thal và HbE là 62,6% và 38%. Có 4 kiểu đột biến trên gen α-globin là SEA, 3.7, Cs, 4.2 với tỷ lệ 2,7 %, 53,3%, 12% và 0,4%. Đột biến trên nhóm gen β-thal chỉ thấy có Cd26 (HbE), không tìm thấy các đột biến β0-thal và β+-thal.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học THỰC TRẠNG MANG GEN BỆNH THALASSEMIA CỦA DÂN TỘC CHƠ RO SỐNG TẠI TỈNH ĐỒNG NAI Bạch Quốc Khánh*, Hoàng Thị Thùy Linh*, Nguyễn Thị Thu Hà*, Ngô Mạnh Quân*, Hồng Chí Cương*, Đỗ Khải Hồn*, Dương Quốc Chính*, Nguyễn Anh Trí* TĨM TẮT Mục tiêu: Xác định tần suất lưu hành kiểu đột biến gen thalassemia bệnh huyết sắc tố dân tộc Chơ Ro Đồng Nai Phương pháp nghiên cứu: mô tả cắt ngang Đối tượng: 518 người dân tộc Chơ ro sinh sống Đồng Nai Kết nghiên cứu: Tỷ lệ mang gen thalassemia chung dân tộc Chơ Ro 73,6% Tỷ lệ mang gen α-thal HbE 62,6% 38% Có kiểu đột biến gen α-globin SEA, 3.7, Cs, 4.2 với tỷ lệ 2,7 %, 53,3%, 12% 0,4% Đột biến nhóm gen β-thal thấy có Cd26 (HbE), khơng tìm thấy đột biến β0-thal β+-thal Kết luận: Tỷ lệ mang gen thalassemia bệnh huyết sắc tố dân tộc Chơ Ro Đồng Nai cao, chủ yếu α -thal HbE + Từ khóa: huyết sắc tố, dân tộc Chơ ro ABSTRACT SITUATION OF THALASSEMIA GENE-CARRIER OF CHORO ETHNIC GROUP IN DONG NAI, VIETNAM Bach Quoc Khanh, Hoang Thi Thuy Linh, Nguyen Thi Thu Ha, Ngo Manh Quan, Hoang Chi Cuong, Do Khai Hoang, Duong Quoc Chinh, Nguyen Anh Tri * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 274 – 279 Objectives: Determine the prevalence and genetics mutation of thalassemia and hemoglobinopathies of Choro ethnic in Dong Nai province Method: Cross sectional description Subject: 518 people of Choro ethnic in Dong Nai province Result: The overall rate of thalassemia in the Choro ethnic group was 73.6% The prevalences of α-thal, HbE were 62.6% and 38% , respectively There were4 different mutations in α-globin gen, prevalences of SEA, α3.7, αCs, -α4.2 were 2.7%, 53.3%, 12%, 0.4%, respectively Only CD 26 (GAG-AAG) mutation was detected in βglobin gen, other β-globin mutation was not detected Conclusion: The prevalence of thalassemia and hemoglobinopathies among Choro ethnic group in Dong Nai, Vietnam was very high, the majority of them were α+-thal and HbE Key word: thalassemia, Chơ ro ĐẶT VẤN ĐỀ Thalassemia bệnh lý di truyền phổ biến giới, có Việt Nam Bệnh *Viện Huyết học Truyền máu Trung Ương Tác giả liên lạc: TS.BS Nguyễn Thị Thu Hà 274 Thalassemia liên quan đến nguồn gốc, dân tộc có tính địa dư rõ rệt(1) Ngun nhân chế gây bệnh đột biến gen tổng hợp chuỗi alpha và/hoặc beta globin di truyền từ cha ĐT: 0985826986 Email: nguyenthuhanihbt@gmail.com Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 mẹ sang Tùy kiểu đột biến khác mà kiểu hình thể nặng, trung bình, nhẹ tình trạng mang gen Hiện nay, việc truyền thông phổ biến kiến thức bệnh Thalassemia sàng lọc tiền hôn nhân sàng lọc trước sinh bệnh Thalassemia hạn chế Việt Nam, đặc biệt vùng sâu vùng xa, dân tộc thiểu số Với sách sàng lọc tích cực, số nước Iran, Síp, Thái Lan thành cơng việc thực phòng bệnh sinh trẻ mắc bệnh Thalassemia(2,4,5) Ở nước ta, dân tộc Kinh chiếm đa số, có dân tộc thiểu số khác với số lượng người khơng nhỏ, có dân tộc Chơ Ro, sinh sống chủ yếu Đồng Nai Việc xác định tỷ lệ mang gen bệnh, tỷ lệ kiểu gen đột biến góp phần tích cực vào cơng tác tư vấn phòng bệnh Chúng thực nghiên cứu nhằm vào mục tiêu: Xác định tần suất lưu hành kiểu đột biến gen bệnh huyết sắc tố thalassemia dân tộc Chơ Ro sinh sống tỉnh Đồng Nai, Việt Nam Nghiên cứu Y học - Chọn đối tượng nghiên cứu: Đối với học sinh, trường lớp chọn toàn học sinh dân tộc Chơ Ro danh sách, lãnh đạo nhà trường giáo viên chủ nhiệm tư vấn cháu tự nguyện tham gia nghiên cứu; người dân, tỉnh chọn người Chơ Ro quyền địa phương tư vấn tự nguyện tham gia nghiên cứu Cỡ mẫu Áp dụng cơng thức tính cỡ mẫu cho tỷ lệ: p(1-p) n= Với mức có Z21-α/2=1,96 Z21-α/2 ý nghĩa (p x Ɛ)2 thống kê α=0,05, Do chưa biết tỉ lệ mang gen trước đó, ước tính tỷ lệ mang gen p=0,20, hệ số thiết kế Ɛ=0,25, từ ước tính cỡ mẫu dự kiến 492 Cỡ mẫu thực tế thu 518 Các xét nghiệm thực Viện Huyết học – Truyền máu Trung Ương Phương pháp tiến hành Người dân tập trung, tư vấn tổ chức thu thập thông tin cá nhân, lấy mẫu xét nghiệm Mẫu nghiên cứu làm xét nghiệm tổng phân tích tế bào máu máy đếm tự động, sinh hóa máu (sắt huyết kỹ thuật so màu ferritin huyết kỹ thuật miễn dịch hóa phát quang), xét nghiệm thành phần huyết sắc tố kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC); Xác định đột biến gen kỹ thuật Multiplex PCR, Gap – PCR: xác định đột biến gen tổng hợp chuỗi alpha globin, chuỗi beta globin Phương pháp nghiên cứu Tiêu chuẩn chẩn đốn Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu mơ tả cắt ngang Có đột biến alpha thalassemia: có ≥1 đột biến; mang gen α0 xác định có SEA, THAI; α+ xác định có đột biến: 3,7, 4,2, c2delT, HbCs, HbQs ĐỐITƯỢNGPHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Có 518 người, người dân tộc Chơ Ro Đối tượng nghiên cứu có bố mẹ dân tộc, quyền địa phương, nhà trường tư vấn phụ huynh đồng ý cho tham gia nghiên cứu Thời gian địa điểm nghiên cứu Từ tháng 1-12/2017 tỉnh Đồng Nai Phương pháp chọn mẫu Chọn mẫu qua nhiều giai đoạn, tiến hành qua bước: - Chọn tỉnh: Chọn tỉnh có chủ đích, nơi có nhiều bà dân tộc danh sách sinh sống, tỉnh chọn Đồng Nai Có đột biến beta Thalassemia: xác định có ≥1 đột biến; mang gen β0 xác định có đột biến Cd17, Cd41/42, Cd 71/72, Cd95, IVS1-1, IVS1-5, IVS2-654; mang gen β+ có đột biến 28, -88, -90 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 275 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Mang gen đột biến bệnh huyết sắc tố (HbE): Cd26 (GAG-AAG) Phân tích xử lý số liệu Phần mềm Excel 2010 SPSS 20.0 KẾT QUẢ Tỷ lệ mang gen bệnh Thalassemia/HST người Chơ Ro cao (73,6%) Chủ yếu αthal (62,6%) HbE (38%), phối hợp α- thal HbE 27% (Hình 1) thể α+-thal, chiếm 61,4% Khơng có khác biệt vể tỷ lệ mang gen theo giới (p>0,05) Không gặp người mang đột biến β-globin giới (Bảng 1) Có kiểu gen α-globin phát hiện, kiểu gen -α3.7/αα chiếm tỷ lệ cao Có kiểu đột biến α-globin, tỷ lệ mang gen –SEA 2,7% tỷ lệ mang gen cao -α3.7 với 53,3% Có trường hợp có HbH kiểu gen -SEA/ αCsα SEA/ -α3.7 (Bảng 2) Người dân tộc Chơ Ro chủ yếu mang gen Hình Tỷ lệ mang gen globin đột biến Bảng Đặc điểm mang gen bệnh theo thể bệnh giới Alpha Thể bệnh Giới Nam (n=210) Nữ (n=308) Tổng (n=518) α (2,4%) (2,9%) 14 (2,7%) Beta + α 131 (62,4%) 187 (60,7%) 318 (61,4%) + β 0 β 0 HbE Chung 77 (36,7%) 120 (39%) 197 (38%) 156 (74,3%) 225 (73,1%) 381 (73,6%) Bảng Tỷ lệ kiểu gen kiểu alen đột biến gen alpha globin Kiểu gen 3.7 -α /αα 4.2 -α /αα Cs α α/αα 3.7 3.7 -α /-α 3.7 4.2 -α /-α 3.7 Cs -α /α α SEA - - /αα SEA Cs /α α SEA 3.7 - - / -α Số lượng (n=518) 167 38 82 21 Tỷ lệ 32,3% 0,2% 7,3% 16% 0,2% 4,1% 1,1% 0,6% 1% Kiểu alen đột biến SEA 3.7 Cs 4.2 Số lượng (n=518) 14 276 62 Tỷ lệ 2,7% 53,3% 12% 0,4% Bảng Đặc điểm đột biến gen β-thal Cd26 Số mẫu (n=518) Tỷ lệ (%) 276 β/β 183 35,3 Cd26 β Cd26 /β 14 2,7 Số alen đột biến 211 40,7 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Trong 518 người, có đột biến Cd26 (HbE), 35,3% kiểu dị hợp tử, 2,7% đồng hợp tử, khơng tìm thấy đột biến β-thal khác (Bảng 3) BÀN LUẬN Theo kết điều tra dân số năm 2009 Tổng cục Thống kê, khu vực Đông Nam Bộ nơi tập trung đơng dân cư nơi có nhiều dân tộc thiểu số sinh sống với văn hóa đa dạng Dân tộc Chơ Ro có 26.855 người nước, có 15.174 người sinh sống tập trung Đồng Nai(14) Chúng chọn lấy mẫu tỉnh Đồng Nai, chọn người có bố mẹ dân tộc để phản ánh nguồn gen đặc trưng mà có pha trộn với dân tộc khác nhất, kết tỷ lệ mang gen Thassemia xác đáng tin cậy Dân tộc Chơ Ro có tỷ lệ mang gen cao 73,6% (Hình 1) Trong tỷ lệ HbE α-thal chiếm tỷ lệ cao, chủ yếu α+-thal, tỷ lệ SEA thấp, không phát β-thal (Bảng 2, 3) Theo Tổng cục Thống kê, tỉnh Đồng Nai, ngồi Chơ Ro có dân tộc khác chiếm số lượng khơng nhỏ, nhiều dân tộc có nguồn gốc từ phía Bắc di cư xuống Kinh, Hoa, Tày, Nùng, Dao(13,14) So sánh với dân tộc tỷ lệ mang gen bệnh Thalassemia/huyết sắc tố dân tộc Kinh, dân tộc Tày, Nùng, Dao nghiên cứu Viện Huyết học Truyền máu TW năm 2017(9,11), đặc điểm người Hoa nghiên cứu He S(4), dân tộc có tỷ lệ mang gen bệnh chung thấp người Cho Ro tỷ lệ mang gen β-thal α0-thal (đột biến SEA) lại cao Như vậy, dân tộc Chơ Ro có tỷ lệ mang gen đặc trưng, không bị pha trộn với dân tộc khác sinh sống Đồng Nai có khác biệt rõ rệt với dân tộc có nguồn gốc từ phía Bắc Dân tộc Chơ Ro với Stieng Khmer dân tộc có nguồn gốc lâu đời Đơng Nam Bộ, hệ ngôn ngữ Môn-Khmer(7) Theo nghiên cứu Lê Minh Hoài An cs người dân tộc Stieng Bình Dương(7) có tỷ lệ mang gen chung 63,9%; nghiên cứu S O'Riordan 2010(12), dân tộc Stieng có tỷ lệ HbE 35,6%, tỷ Nghiên cứu Y học lệ alen SEA 3%, 3.7 22%, HbCs 3%, βthalassemia 0,3%; nghiên cứu Lê Thị Hồng Mỹ 2018(8) dân tộc Khmer có tỷ lệ mang gen chung 39,4%; với tỷ lệ α-thal 15,7%, βthal 1,4% HbE 28,9%, 3,7 12,2%, 4,2 0,5%, SEA 1,2%, HBCs 2,2%; Qua so sánh với nghiên cứu cho thấy dân tộc Chơ Ro có nét tương đồng với dân tộc Stieng Khmervới đặc điểm tỷ lệ mang gen chung cao, tỷ lệ HbE α+-thal cao, tỷ lệ SEA β-thal thấp Dân tộc Chơ Ro có tỷ lệ mang gen tương đồng với dân tộc Stieng với dân tộc Khmer Dân tộc Chơ Ro Đồng Nai có khoảng cách địa lý gần với Bình Dương, Bình Phước (nơi tập trung chủ yếu người Stieng) với Đồng Bằng Sông Cửu Long (nơi sinh sống chủ yếu người Khmer)(13) Như vậy, với kết giúp phần củng cố thêm quan điểm bệnh Thalassemia có liên quan mật thiết đến nguồn gốc, dân tộc có tính địa dư rõ rệt(1) Đồng Nai thuộc Đông Nam Bộ, vùng tiếp giáp với Tây Nguyên Campuchia Kết nghiên cứu Trần Thị Thúy Minh (2015) người Ê đê M’nông với tỷ lệ mang gen α-globin 31,6% (Ê đê) 17,5% (M’nông), tỷ lệ đột biến SEA 2,1%, tỷ lệ đột biến 3.7 14,4%, tỷ lệ đột biến Cs 16,9%, tỷ lệ đột biến β-thal 0,3% (Ê đê) 0,2% (M’nông)(15), nghiên cứu Munkongdee T Campuchia với tỷ lệ mang gen bệnh chung 62,7%, tỷ lệ HbE (13,9%-33,1%), tỷ lệ đột biến 3.7 (9,8–25,5%), đột biến HbCs (0,9– 3,6%), đột biến SEA (0,3%-0,8%), đột biến βthal (0,1-0,3%)(10) Qua phân tích tỷ lệ mang gen bệnh kiểu đột biến cho thấy đặc điểm gen bệnh Thalassemia/huyết sắc tố dân tộc Chơ Ro tương đồng với người Tây Nguyên Campuchia, với tỷ lệ mang gen α+-thal HbE phổ biến, tỷ lệ mang gen SEA β-thal thấp Các tỉnh Tây Nguyên số tỉnh Đông Nam Bộ thuộc vùng dịch tễ bệnh sốt rét Việt Nam Đồng Nai thuộc vùng dịch tễ sốt rét lưu hành, giáp với Bình Phước Lâm Đồng tỉnh có dịch sốt rét lưu hành nặng, tỷ lệ mắc sốt Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 277 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 rét cao(16) Theo nghiên cứu Wambua S, Mwangi TW cs cho thấy người mang gen α+thalassemia bị nhiễm KST sốt rét P.falciparum khơng có triệu chứng lâm sàng(17) Tác giả Kesinee Chotivanich cs nghiên cứu in vitro xâm nhập P.falciparum vào hồng cầu có thành phần huyết sắc tố khác (HbAA, HbH, AE, EE, HbCS, β-thal/E) cho thấy tỷ lệ hồng cầu có huyết sắc tố bất thường bị P falciparum xâm nhập thấp so với hồng cầu bình thường Đặc biệt hồng cầu HbAE có khả kháng lại xâm nhập KST sốt rét cao nhất(3) Nghiên cứu chúng tơi có tỷ lệ mang gen α+-thal HbE Chơ Ro cao, liên quan mật thiết đến dịch tễ vùng sốt rét Việt Nam Qua phân tích trên, chúng tơi nhận thấy tình hình mang gen bệnh Thalassemia dân tộc Chơ Ro sinh sống Đồng Nai cao Theo kết điều tra dân sô, Đồng Nai có 15 dân tộc sinh sống, có dân tộc Tày, Nùng, Dao, Hoa Tỷ lệ mang gen α0-thal dân tộc 9,1%, 9,1%, 10,2%, 6,7%, tỷ lệ mang gen βthal dân tộc 7,4%, 5,8%, 9,5%, 4,5%(5,11) Nên, mặc không tìm thấy đột biến β- thal dân tộc Cho Ro, tỉ lệ HbE α+-thal cao, dân tộc kết hôn với người dân tộc Tày, Nùng, Dao, Hoa có nguy cao sinh bị bệnh Alpha Thalassemia (HbH) Beta Thalassemia/HbE Chính vậy, người dân tộc Cho Ro cần tư vấn sàng lọc mang gen bệnh Thalassemia, tư vấn tiền hôn nhân sàng lọc trước sinh để phòng tránh sinh trẻ mắc bệnh Thalassmia Bước đầu nhận thấy tỷ lệ kiểu đột biến gen globin có nét đặc trưng theo vùng địa lý, dân tộc liên quan mật thiết đến dịch tễ vùng sốt rét Việt Nam Chúng xin chân thành cảm ơn Dự án “Nghiên cứu sản xuất chip sinh học DNA microarray để chẩn đoán số bệnh người” mã số 01/2017/CNC – HDKHCN tài trợ kinh phí để chúng tơi thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 KẾT LUẬN Người dân tộc Chơ Ro có tỷ lệ mang gen bệnh Thalassemia/HST cao với tỷ lệ chung 73,6% Chỉ có hai thể alpha Thalassemia HbE với tỷ lệ 62,6% 38% Có kiểu đột biến gen α-globin SEA, 3.7, Cs, 4.2 với tỷ lệ 2,7%, 53,3%, 12% 0,4% Đột biến nhóm gen β-globin có Cd26 (HbE), khơng tìm thấy đột biến β0-thal β+-thal 278 12 13 14 15 Angastiniotis MA & Hadjiminas MG (1981) Prevention of thalassaemia in Cyprus Lancet, 317(8216):369-371 Chaibunruang A, et al (2018) Prevanlence of Thalassemia among Newbrons, A Re-visited after 20 years of a Prevention and Control Program in Northeast Thailand Mediterranean Journal of Hematology and Infectious Dieases, 10(1) Chotivanich K, et al (2002) Hemoglobin E: a balanced polymorphism protective against high parasitemias and thus severe Pfalciparum malaria Blood, 100(4):1172-1176 Đỗ Khải Hoàn (2019) Thực trạng mang gen bệnh Thalassemia học sinh dân tộc Kinh số tỉnh thành phố năm 2017 Y học Việt Nam, 477:321-327 He S, Li J (2018) Mocular characterization of α- and βthalassemia in the Yulin region of Southern China Gene, 655:6164 Joulaei H, Shahbazi M, Nazemzadegan B, Rastgar M, Hadibarhaghtalab M, Heydari M, Ghaffarpasand F, Rahimi N (2014) The diminishing trend of β-thalassemia in Southern Iran from 1997 to 2011: the impact of preventive strategies Hemoglobin, 38(1):19–23 Lê Minh Hoài An, Phùng Thị Dung, Phạm Thị Lan (2002) Khảo sát đặc điểm huyết sắc tố 147 người dân tộc Stieng tỉnh Bình Dương Tạp chí Y học Việt Nam, 268(1):14-26 Lê Thị Hoàng Mỹ (2018) Nghiên cứu tần suất, đặc điểm thalassemia bệnh hemoglobin cộng đồng dân tộc người Khmer Đồng sông Cửu Long Luận án Tiến sĩ Modell B Darlison M (2008) Global epidemiology of haemoglobin disorders and derived indicators Bull World Heath Organ, 86(6):480-487 Munkongdee T, et al (2016) Molecular Epidemiology of Hemoglobinpathies in Cambodia Hemoglobin, 40(3):163-167 Nguyễn Thị Thu Hà (2019) Khảo sát tình hình mang gen Thalassemia bệnh huyết sắc tố số dân tộc người miền núi phía Bắc Việt Nam Y học Việt Nam, 477:241-250 O'Riordan S, et al (2010) Large scale screening for haemoglobin disorders in southern Vietnam: implications for avoidance and management Br J Haematol, 150(3):359-64 Phan Huy Lê (2017) Vùng đất Nam Bộ: Quá trình hình thành phát triển Nhà xuất Chính trị Quốc gia thật Hà Nội, pp.861 – 874 Tổng cục thống kê (2009) Tổng điều tra Dân số Nhà Việt Nam năm 2009 Nhà xuất Thống kê, pp.208-210 Trần Thị Thúy Minh (2015) Tỷ lệ mắc kiểu hình gen bệnh alpha beta thalassemia trẻ em dân tộc Ê đê M’nông tỉnh Đắc Lắc Luận án Tiến sỹ Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 16 Viện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Trung Ương (2000) Dịch sốt rét Phòng chống dịch Sốt rét Việt Nam Nhà xuất Y học, pp.61-62 17 Wambua S, Mwangi TW, Kortok M, Uyoga SM, Macharia AW, et al (2006) The effect of α+-thalassaemia on the incidence of malaria and other diseases in children living on the coast of Kenya PLoS Medicine, 3(5):e158 Nghiên cứu Y học Ngày nhận báo: 15/08/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 21/08/2019 Ngày báo đăng: 15/10/2019 Hội Nghị Khoa Học BV Truyền máu Huyết học 279 ... thấy dân tộc Chơ Ro có nét tương đồng với dân tộc Stieng Khmervới đặc điểm tỷ lệ mang gen chung cao, tỷ lệ HbE α+-thal cao, tỷ lệ SEA β-thal thấp Dân tộc Chơ Ro có tỷ lệ mang gen tương đồng với dân. .. Đồng Nai cao Theo kết điều tra dân sơ, Đồng Nai có 15 dân tộc sinh sống, có dân tộc Tày, Nùng, Dao, Hoa Tỷ lệ mang gen α0-thal dân tộc 9,1%, 9,1%, 10,2%, 6,7%, tỷ lệ mang gen βthal dân tộc 7,4%,... tỷ lệ mang gen β-thal α0-thal (đột biến SEA) lại cao Như vậy, dân tộc Chơ Ro có tỷ lệ mang gen đặc trưng, không bị pha trộn với dân tộc khác sinh sống Đồng Nai có khác biệt rõ rệt với dân tộc có