Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 9724:2013 - EN 14132:2009 trình bày nội dung về Thực phẩm - xác định Ochratoxin A trong cà phê rang và lúa mạch - phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) có làm sạch bằng cột miễn nhiễm. Mời các bạn tham khảo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 9724:2013 EN 14132:2009 THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG CÀ PHÊ RANG VÀ LÚA MẠCH PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CÓ LÀM SẠCH BẰNG CỘT MIỄN NHIỄM Foodstuffs - Determination Of Ochratoxin A In Barley And Roasted Coffee - Hplc Method With Immunoaffinity Column Clean-up Lời nói đầu TCVN 9724:2013 hoàn toàn tương đương với EN 14132:2009; TCVN 9724:2013 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F16 Cà phê sản phẩm cà phê biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH OCHRATOXIN A TRONG CÀ PHÊ RANG VÀ LÚA MẠCH PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CÓ LÀM SẠCH BẰNG CỘT MIỄN NHIỄM Foodstuffs - Determination Of Ochratoxin A In Barley And Roasted Coffee - Hplc Method With Immunoaffinity Column Clean-up CẢNH BÁO: Ochratoxin A gây độc gan, thận có tính chất ức chế miễn dịch Hợp chất Tổ chức quốc tế nghiên cứu Ung thư (IARC) xếp vào danh mục chất gây ung thư cho người (Nhóm 2B) Axetonitrit chất nguy hiểm Toluen chất có hại dễ cháy Cần quan sát cảnh báo an toàn thao tác với hợp chất nêu Phải ln đeo găng tay kính an toàn, tất chất chuẩn bước chuẩn bị mẫu phải thực tủ hút Các thao tác bên tủ hút đo phổ chất chuẩn máy đo quang phổ UV phải thực cách đặt chất chuẩn vật chứa đậy kín Các quy trình khử nhiễm chất thải phòng thử nghiệm IARC nêu Tài liệu tham khảo [1] Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng ochratoxin A cà phê rang lúa mạch, dùng cột làm miễn nhiễm máy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp đánh giá xác nhận hàm lượng ochratoxin A lúa mạch dải từ 0,1 g/kg đến 4,5 g/kg cà phê rang từ 0,2 g/kg đến 5,5 g/kg Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851:1992 (ISO 3696:1987), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Ochratoxin A chiết khỏi lúa mạch cách trộn với dung dịch axetonitril Dịch chiết tinh cách cho qua cột miễn nhiễm Ochratoxin A chiết khỏi cà phê rang xay cách trộn với metanol natri hydro cacbonat Dịch chiết làm sơ cách cho qua cột phenyl silan sau cho qua cột miễn nhiễm Ochratoxin A tách HPLC pha đảo xác định độ huỳnh quang Thuốc thử 4.1 Yêu cầu chung Trong suốt trình phân tích, sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích nước cất nước loại theo quy định TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có quy định khác Các dung mơi phải có chất lượng dùng cho phân tích HPLC Có thể sử dụng thuốc thử có bán sẵn có đặc tính tương đương với thuốc thử sau: 4.2 Natri clorua 4.3 Dinatri hydro phosphat 4.4 Kali dihydro phosphat 4.5 Kali clorua 4.6 Dung dịch natri hydroxit, (NaOH) = 0,8 g/l Hòa tan g natri hydroxit 900 ml, thêm nước đến lít 4.7 Muối đệm phosphat (PBS) Hòa tan g natri clorua (4.2), 1,2 g dinatri hydro phosphat (4.3), 0,2 g kali dihydro phosphat (4.4) 0,2 g kali clorua (4.5) 900 ml nước Chỉnh pH đến 7,4 dung dịch natri hydroxit (4.6) thêm nước đến lít Có thể sử dụng viên muối đệm phosphat bán sẵn có đặc tính tương đương 4.8 Dung dịch natri hydro cacbonat, (NaHCO3) = 30 g/l Hòa tan 30 g natri hydro cacbonat 900 ml nước bình định mức lít Thêm nước đến vạch 4.9 Axit axetic băng, (CH3COOH) = 98% 4.10 Metanol 4.11 Axetonitril 4.12 Toluen 4.13 Hỗn hợp dung môi toluen axit axetic băng Trộn 99 phần thể tích toluen (4.12) với phần thể tích axit axetic băng (4.9) 4.14 Hỗn hợp dung môi để chiết lúa mạch Trộn phần thể tích axetonitril (4.11) với phần thể tích nước 4.15 Hỗn hợp dung mơi để chiết cà phê rang Trộn phần thể tích metanol (4.10) với phần thể tích dung dịch natri hydro cacbonat (4.8) 4.16 Dung mơi bơm Trộn 30 phần thể tích metanol (4.10) với 70 phần thể tích nước phần thể tích axit axetic băng (4.9) 4.17 Pha động Trộn 102 phần thể tích nước với 96 phần thể tích axetonitril (4.11) phần thể tích axit axetic băng (4.9), lọc qua lọc cỡ lỗ 0,2 m (5.12) loại khí trước sử dụng, ví dụ khí heli để loại khí 4.18 Dung dịch rửa cột phenyl silan Trộn 20 phần thể tích metanol (4.10) với 80 phần thể tích dung dịch natri hydro cacbonat (4.8) 4.19 Dung dịch rửa cột phenyl silan 2, (NaHCO3) = g/ 100 ml Hòa tan g natri hydro cacbonat 90 ml nước đựng bình định mức 100 ml Thêm nước đến vạch 4.20 Dung dịch rửa giải cột phenyl silan Trộn phần thể tích metanol (4.10) với 93 phần thể tích nước 4.21 Dung dịch gốc ochratoxin A Hòa tan mg ochratoxin A (dạng tinh thể) lượng chứa ampun (nếu ochratoxin A thu dạng màng) hỗn hợp dung mơi (4.13) để có dung dịch chứa khoảng 20 g/ml đến 30 g/ml ochratoxin A Để xác định nồng độ ochratoxin A, ghi lại đường cong hấp thụ bước sóng từ 300 nm đến 370 nm khoảng bước sóng nm cuvet thạch anh cm (5.14), dùng hỗn hợp dung môi (4.13) làm dung dịch đối chứng Nhận biết bước sóng cho độ hấp thụ tối đa tính nồng độ khối lượng ochratoxin A, ota, microgam mililit ( g/ml), theo công thức (1): ota A max x M x 100 xb (1) Trong Amax độ hấp thụ tối đa xác định đường cong hấp thụ (ở đây: bước sóng 333 nm); M khối lượng phân tử ochratoxin A (M = 403,8 g/mol); hệ số phân tử hấp thụ ochratoxin A hỗn hợp dung môi (4.13), (trường hợp 544 m2/mol); b chiều dài đường quang cuvet thạch anh, tính centimet (cm) Khi bảo quản -180C, dung dịch bền năm 4.22 Dung dịch chuẩn ochratoxin A Pha loãng dung dịch gốc (4.21) hỗn hợp dung môi (4.13) để thu dung dịch chuẩn có nồng độ khối lượng ochratoxin A 10 g/ml Bảo quản dung dịch tủ lạnh khoảng 40C kiểm tra độ ổn định dung dịch 4.23 Dung dịch hiệu chuẩn ochratoxin A Dùng pipet lấy 200 l dung dịch chuẩn ochratoxin A nồng độ 10 g/ml (4.22) cho vào lọ thủy tinh pha loãng đến ml 800 l hỗn hợp dung mơi (4.13) Dung dịch có nồng độ ochratoxin A g/ml Dùng pipet lấy 100 l dung dịch ochratoxin A nồng độ g/ml cho vào lọ thủy tinh (5.2) Làm bay dung môi dòng nitơ Hòa tan lại 10 ml dung mơi bơm (4.16), lọc qua lọc cỡ lỗ 0,2 m (5.12), thu dung dịch hiệu chuẩn nồng độ 20 g/ml Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn ngày phân tích 4.24 Dung dịch bổ sung chuẩn Dùng pipét lấy 100 l dung dịch chuẩn ochratoxin A nồng độ 10 g/ml (4.22) cho vào lọ thủy tinh Pha loãng đến ml 1,9 ml hỗn hợp toluen axit axetic băng (4.13) Dung dịch chứa ochratoxin A với nồng độ khối lượng 500 ng/ml 4.25 Cột miễn nhiễm Cột miễn nhiễm chứa kháng thể tùy theo ochratoxin A Cột phải có khả chiết ochratoxin A khơng nhỏ 100 ng Tính cột phải kiểm tra cách dùng dung dịch ochratoxin A 100 ng hỗn hợp dung mơi có thành phần dịch chiết mẫu (6.1.3) sử dụng Cột phải cho độ thu hồi không nhỏ 85% 4.26 Cột chiết pha rắn phenyl silan Cột có chứa 500 mg chất hấp thụ dung tích bể ml (để đảm bảo cột có đủ độ sâu tránh để chất phân tích xuyên qua) Cột phải có khả chiết ochratoxin A khơng nhỏ 100 ng cho độ thu hồi không nhỏ 85% dung dịch chuẩn ochratoxin A dung môi chiết cà phê rang (4.15) chứa 100 ng ochratoxin A Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể thiết bị, dụng cụ sau: 5.1 Cân phân tích, có độ xác đến 0,01 mg 5.2 Lọ thủy tinh, dung tích nhỏ 10 ml Một số kiểu lọ thủy tinh làm thất ochratoxin A q trình bay Để tránh điều này, lọ cần silan hóa Chuẩn bị lọ cách đổ đầy thuốc thử silan hóa để thuốc thử lọ Tráng lọ hai lần dung mơi thích hợp (toluen, axeton hexan) sau nước (hai lần) làm khơ lọ 5.3 Máy trộn, loại chống nổ Bình dung tích lít, có nắp đậy có tốc độ trộn cao khoảng 20 000 -1 5.4 Pipet loại thay đổi dung tích: ml, ml 200 l có đầu típ thích hợp 5.5 Ống hút chân không: dùng cho cột miễn nhiễm phenyl silan 5.6 Bơm chứa phụ kiện kèm theo để gắn với cột miễn nhiễm 5.7 Bơm chân khơng, có khả rút chân khơng 10 mbar bơm với tốc độ 18 l/min 5.8 Máy lắc tay loại tương tự 5.9 Máy li tâm lạnh, có khả ly tâm 1300 g vận hành 40C 5.10 Ống ly tâm, ví dụ dung tích 50 ml 5.11 Giấy lọc, cỡ lỗ 20 m đến 25 m loại tương tự 5.12 Dụng cụ lọc dạng xyranh dùng lần, màng polysulfon, đường kính 25 mm, cỡ lỗ 0,2 m 5.13 Thiết bị HPLC gồm có: 5.13.1 Hệ thống bơm, có van bơm dạng syranh với vòng bơm 100 l loại tương đương 5.13.2 Máy bơm HPLC, đẳng dòng, có khả trì tốc độ dòng thể tích ml/min 5.13.3 Cột tách pha đảo phân tích, ví dụ C18 octyldecylsilan (ODS), đảm bảo rửa giải ochratoxin A khỏi tất pic khác Độ trùm tối đa pic phải nhỏ 10% (có thể cần chỉnh pha động để có độ phân giải đường thích hợp) Nên sử dụng tiền cột thích hợp 5.13.4 Detector huỳnh quang, gắn với cuvet dòng chảy cài đặt bước sóng 333 nm (bước sóng kích thích) 460 nm (bước sóng phát xạ) 5.13.5 Hệ thống liệu 5.14 Máy đo phổ UV, có cuvet thạch anh thích hợp Cách tiến hành 6.1 Lúa mạch 6.1.1 Chiết mẫu Cần 25 g phần mẫu thử lúa mạch nghiền (cỡ hạt 0,5 mm), xác đến 0,1 g, cho vào bình trộn (5.3) Thêm 100 ml hỗn hợp dung mơi chiết (4.14) Đậy kín bình trộn máy trộn tốc độ cao khoảng 20 000 min-1 Lọc dịch chiết qua giấy lọc (5.11) 6.1.2 Làm cột miễn nhiễm Chuẩn bị cột miễn nhiễm theo dẫn nhà sản xuất Dùng pipet lấy ml dịch lọc mẫu (xem 6.1.1) cho vào cốc thủy tinh có mỏ 100 ml (hoặc loại tương tự) pha loãng 44 ml PBS (4.7) Nối cột miễn nhiễm (4.25) với ống hút chân không (5.5) gắn bình (5.6) vào cột miễn nhiễm Cho tất dịch chiết mẫu pha lỗng vào bình cho qua cột miễn nhiễm Tốc độ dòng không vượt ml/min Không để cột miễn nhiễm bị khô Rửa cột miễn nhiễm 10 ml nước Làm khơ cột cách cho khơng khí qua hai lần Tháo cột miễn nhiễm khỏi ống hút chân không đặt lên lọ (5.2) 6.1.3 Chuẩn bị dung dịch mẫu thử Rửa giải ochratoxin A lọ (5.2) dung môi phù hợp theo hướng dẫn nhà sản xuất cột Làm bay dịch rửa giải cột miễn nhiễm đến khô, ví dụ dòng nitơ khoảng 500C Hòa tan lại 1,0 ml dung môi bơm (4.16), lọc qua lọc 0,2 m (5.12) Chuyển vào lọ HPLC (V3) Đây dung dịch mẫu thử 6.2 Cà phê rang 6.2.1 Chiết mẫu Cân 15 g phần mẫu thử mẫu cà phê rang xay (cỡ hạt mm), xác đến 0,1 g, cho vào bình nón 500 ml Thêm 150 ml dung môi chiết (4.15) Đậy nắp lắc nhẹ 30 Lọc dịch chiết qua giấy lọc (5.11) Chuyển khoảng 50 ml phần dịch chiết cà phê sang ống ly tâm (5.10) ly tâm 15 40C với gia tốc 1300 g 6.2.2 làm cột phenyl silan Gắn cột phenyl silan (4.26) với ống hút chân không (5.5) không sử dụng hút chân khơng cho cột (có thể dùng khí nitơ làm áp suất dương để hỗ trợ tốc độ dòng giai đoạn chuẩn bị cột, cần) Rửa cột 15 ml metanol (4.10) rửa ml dung dịch natri hydro cacbonat (4.8) Loại bỏ nước rửa Dùng pipet lấy 10 ml dịch chiết cà phê ly tâm (xem 6.2.1) cho vào cốc thủy tinh có mỏ thêm 10 ml dung dịch natri hydro cacbonat (4.8) Cho dịch chiết pha loãng qua phenyl silan tốc độ tối đa ml/min Rửa cột phenyl silan 10 ml dung dịch rửa (4.18), tốc độ dòng tối đa ml/min, sau rửa tiếp ml dung dịch rửa (4.19) Tháo cột phenyl silan khỏi ống hút chân khơng làm khơ cột cách bơm khơng khí ba lần, lần 10 ml qua vật liệu nhồi, dùng xyranh Sau đó, đặt cột lên bình thu nhận thích hợp rửa giải ochratoxin A 10 ml dung dịch rửa giải cột phenyl silan (4.20), tốc độ dòng tối đa ml/min 6.2.3 Làm cột miễn nhiễm Pha loãng dịch rửa giải cột phenyl silan column (6.2.2) 30ml PBS (4.7) Nối cột miễn nhiễm (4.25) với ống hút chân không (5.5), gắn bình chứa (5.6) vào cột miễn nhiễm Cho dịch chiết mẫu pha lỗng vào bình chứa cho qua cột miễn nhiễm Tốc độ dòng khơng ml/min Không để cột miễn nhiễm bị khô Rửa cột miễn nhiễm 10 ml nước Tháo cột miễn nhiễm khỏi ống hút chân không đặt lên lọ (5.2) 6.2.4 Chuẩn bị dung dịch mẫu thử Rửa giải ochratoxin A vào lọ (5.2), dùng bốn phần, phần ml dung môi rửa giải theo khuyến cáo nhà sản xuất Làm bay dịch rửa giải cột miễn nhiễm đến khô dòng khí nitơ, ví dụ khoảng 500C Hòa tan lại ml dung môi bơm (4.16) lọc qua lọc 0,2 m (5.12) Chuyển vào lọ HPLC (V3) Đây dung dịch mẫu thử 7 Quy trình bổ sung chuẩn 7.1 Quy trình bổ sung chuẩn lúa mạch Cân 25g mẫu trắng lúa mạch, xác đến 0,1 g, cho vào bình trộn Dùng pipet lấy 200 l dung dịch bổ sung ochratoxin A (4.24) cho vào mẫu trắng lúa mạch Để mẫu rắn bổ sung chuẩn tủ hút qua đêm, để dung môi bay Tiến hành tiếp 6.1 7.2 Quy trình bổ sung chuẩn cà phê rang xay Cân 15 g mẫu trắng cà phê rang xay (cỡ hạt mm), xác đến 0,1 g, cho vào bình nón 500 ml Dùng pipet lấy 120 µl dung dịch bổ sung ochratoxin A (4.24) cho vào mẫu trắng cà phê Để mẫu rắn bổ sung tủ hút qua đêm, để dung môi bay Tiến hành tiếp 6.2 Phân tích HPLC 8.1 Đường chuẩn Chuẩn bị đường chuẩn ngày phân tích có thay đổi điều kiện sắc ký Chuẩn bị năm dung dịch hiệu chuẩn (4.23) cho vào bình định mức ml riêng rẽ theo Bảng Pha loãng dung dịch hiệu chuẩn đến vạch dung môi bơm lọc (4.16) Bảng - Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn HPLC Số dung dịch hiệu Dung dịch hiệu chuẩn Dung môi bơm (4.16), Nồng độ khối lượng chuẩn HPLC (ng/ml) (4.23) ( l) lọc ( l) 125 4875 0,5 250 4750 1,0 500 4500 2,0 1250 3750 5,0 2500 2500 10,0 8.2 Các điều kiện vận hành HPLC Khi cột đáp ứng quy định kỹ thuật 5.13.3, (kích thước 4,6 mm x 250 mm với cỡ hạt µm) pha động quy định 4.17 sử dụng, việc cài đặt sau thích hợp: - Tốc độ dòng pha động (cột): 1,0 ml/min; - Detector huỳnh quang, bước sóng kích thích: 460 nm; bước sóng phát xạ: 333 nm; - Thể tích bơm: 100 µl (V4) 8.3 Nhận biết Nhận biết chất phân tích cách so sánh thời gian lưu pic liên quan mẫu với pic chất chuẩn sắc đồ Đơi cần nhận biết pic cách bơm đồng thời dung dịch mẫu thử dung dịch chuẩn 8.4 Xác định Tiến hành xác định phương pháp ngoại chuẩn, tích phân diện tích pic xác định chiều cao pic so sánh kết với giá trị tương ứng với chất chuẩn có diện tích pic chiều cao pic gần sử dụng đường chuẩn Trong trường hợp sử dụng đường chuẩn, chuẩn bị dung dịch bổ sung có nồng độ mẫu nằm dải tuyến tính chuẩn bị cho đường chuẩn Bơm thể tích dung dịch mẫu thử dung dịch chuẩn dùng cho đường chuẩn Nếu tín hiệu ochratoxin A mẫu nằm ngồi dải hiệu chuẩn chỉnh lượng mẫu bơm cách pha lỗng dung dịch mẫu thử Tính kết Đọc từ đường chuẩn hàm lượng ochratoxin A, có phần dịch lỏng dung dịch thử nghiệm bơm lên cột HPLC, tính nanogam Tính nồng độ khối lượng ochratoxin A, w OTA, microgam kilogam (µg/kg), dùng Cơng thức (2): w OTA m a x V3 V1 1000 x x x V4 V2 m s 1000 Trong đó: ma khối lượng ochratoxin A phần dịch lỏng dung dịch thử nghiệm bơm lên cột, tính nanogram (ng); V4 thể tích phần dịch lỏng dung dịch thử nghiệm bơm lên cột (8.2), tính mililit (ml); V3 thể tích dung dịch thử (6.1.3, 6.2.3), (V3 = 1,0 ml), tính mililit (ml); V2 thể tích dịch lọc mẫu lấy để làm sạch, [đối với lúa mạch V = 4,0 ml (6.1.2), cà phê rang V2 = 10 ml (6.2.2)], tính mililit (ml); V1 thể tích dung mơi chiết, (đối với lúa mạch V1 = 100 ml, cà phê rang V1 = 150 ml), tính mililit (ml); ms khối lượng mẫu chiết, (đối với lúa mạch ms = 25 g, cà phê rang ms = 15 g), tính gam (g); Biểu thị kết cuối microgam kilogam đơn vị đo tương đương với nanogam gam 10 Độ chụm 10.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm để xác định độ chụm phương pháp nêu Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu Phụ lục A 10.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử nghiệm đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt nhau, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không 5% trường hợp vượt giới hạn lặp lại r Các giá trị lúa mạch là: x = 0,1 µg/kg r = 0,112 µg/kg (mẫu trắng) x = 1,3 µg/kg r = 0,896 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 3,0 µg/kg r = 1,036 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 3,7 µg/kg r = 0,448 µg/kg (mẫu bổ sung chuẩn) x = 4,5 µg/kg r = 1,792 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) Các giá trị cà phê rang là: x = 0,2 µg/kg r = 0,112 µg/kg (mẫu trắng) x = 1,2 µg/kg r = 0,756 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 2,7 µg/kg r = 0,868 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 3,5 µg/kg r = 0,588 µg/kg (mẫu bổ sung chuẩn) x = 5,5 µg/kg r = 0,308 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) 10.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm đơn lẻ, tiến hành thử vật liệu giống thử hệt nhau, hai phòng thử nghiệm khác nhau, không 5% trường hợp vượt giới hạn tái lập R Các giá trị lúa mạch là: x = 0,1 µg/kg R = 0,280 µg/kg (mẫu trắng) x = 1,3 µg/kg R = 1,232 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 3,0 µg/kg R = 1,456 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 3,7 µg/kg R = 1,204 µg/kg (mẫu bổ sung chuẩn) x = 4,5 µg/kg R = 1,876 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) Các giá trị cà phê rang là: x = 0,2 µg/kg R = 0,308 µg/kg (mẫu trắng) x = 1,2 µg/kg R = 0,896 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 2,7 µg/kg R = 1,120 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) x = 3,5 µg/kg R = 1,288 µg/kg (mẫu bổ sung chuẩn) x = 5,5 µg/kg R = 2,184 µg/kg (mẫu bị nhiễm tự nhiên) 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin sau đây: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử (loại mẫu, nguồn gốc mẫu, tên gọi); b) viện dẫn tiêu chuẩn này; c) ngày phương pháp lấy mẫu (nếu biết); d) ngày nhận mẫu; e) ngày thử nghiệm; f) kết thử nghiệm đơn vị biểu thị kết quả; g) điểm cụ thể quan sát tiến hành thử nghiệm; h) chi tiết thao tác khác với quy định tiêu chuẩn tùy chọn ảnh hưởng đến kết thử nghiệm PHỤ LỤC A (Tham khảo) DỮ LIỆU VỀ ĐỘ CHỤM Các liệu sau thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm [2], [3] theo nguyên tắc hài hòa [4] Bảng A.1 - Dữ liệu độ chụm lúa mạch Mẫu Mẫu trắng a) Mức thấp Mức trung Mức cao bình Mẫu mù Năm tiến hành phép thử liên phòng thử 1998/1999 1998/1999 1998/1999 1998/1999 1998/1999 nghiệm Số lượng phòng thử nghiệm 15 15 15 15 15 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 14 15 14 12 12 Số lượng loại trừ (phòng thử nghiệm) 1 3 Số lượng kết chấp nhận 14 15 14 12 12 Giá trị trung bình, x , µg/kg 0,1 1,3 3,0 4,5 3,7 Độ lệch chuẩn lặp lại sr, µg/kg 0,04 0,32 0,37 0,64 0,16 26 24 12 14 Giới hạn lặp lại r [r = 2,8 x sr], µg/kg 0,112 0,896 1,036 1,792 0,448 Độ lệch chuẩn tái lập sR, µg/kg 0,10 0,44 0,52 0,67 0,43 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập RSDR, % 72 33 17 15 12 Giới hạn tái lập R [R = 2,8 x sR], µg/kg 0,280 1,232 1,456 1,876 1,204 - - - - (93 ± 10)% Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % Độ thu hồi, % a) Bộ liệu mẫu trắng mức giới hạn phát Bảng A.2 - Dữ liệu độ chụm cà phê rang Mẫu Mẫu trắng a) Mức thấp Mức trung Mức cao bình Mẫu mù Năm tiến hành phép thử liên phòng thử 1998/1999 1998/1999 1998/1999 1998/1999 1998/1999 nghiệm Số lượng phòng thử nghiệm 15 15 15 15 15 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 14 15 14 12 13 Số lượng phòng thử nghiệm loại trừ 1 Số lượng kết chấp nhận 14 15 14 12 13 Giá trị trung bình, x , µg/kg 0,2 1,2 2,7 5,5 3,5 Độ lệch chuẩn lặp lại sr, µg/kg 0,04 0,27 0,31 0,11 0,21 28 22 11 Giới hạn lặp lại r [r = 2,8 x sr], µg/kg 0,112 0,756 0,868 0,308 0,588 Độ lệch chuẩn tái lập sR, µg/kg 0,11 0,32 0,40 0,78 0,46 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % Độ lệch chuẩn tương đối tái lập RSDR, % 71 26 15 14 13 Giới hạn tái lập R [R = 2,8 x sR], µg/kg 0,308 0,896 1,120 2,184 1,288 - - - - (88 ± 15)% Độ thu hồi, % a) Bộ liệu mẫu trắng mức giới hạn phát THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Castegnaro M Barek J., Fremy J.M., Lafontaine M., Miraglia M., Sansone E.B and Telling G.M Laboratory decontamination and destruction of carcinogens in laboratory wastes; some mycotoxins IARC Scientific Publication No 113, International Agency for Research on Cancer, Lyon (France), 1991, 63 p [2] EC, BRC Information, Report on Workpackage 4.9, Immunoaffinity Column Clean-up with Liquid Chromatography for the Determination of Ochratoxin A in Barley: Collaborative Study, Contract No SMT4-CT96-2045, 1999, EUR 18954 EN [3] EC, BRC Information, Report on Workpackage 4.9, Combined Phenyl Silan & Immunoaffinity Column Clean-up HPLC Method for the Determination of Ochratoxin A in Roasted Coffee: Collaborative Study, Contract No SMT4-CT96-2045, 2000, EUR 19504 EN [4] Guidelines for Collaborative Study to Validate Characteristics of a Method of Analysis" J.AOAC Int 72, 1989, 694-704 ... Đường chuẩn Chuẩn bị đường chuẩn ngày phân tích có thay đổi điều kiện sắc ký Chuẩn bị năm dung dịch hiệu chuẩn (4.23) cho vào bình định mức ml riêng rẽ theo Bảng Pha loãng dung dịch hiệu chuẩn. .. với chất chuẩn có diện tích pic chiều cao pic gần sử dụng đường chuẩn Trong trường hợp sử dụng đường chuẩn, chuẩn bị dung dịch bổ sung có nồng độ mẫu nằm dải tuyến tính chuẩn bị cho đường chuẩn. .. 0,52 0,67 0,43 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập RSDR, % 72 33 17 15 12 Giới hạn tái lập R [R = 2,8 x sR], µg/kg 0,280 1,232 1,456 1,876 1,204 - - - - (93 ± 10)% Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại