Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 10110-1:2013 qui định phương pháp đo màu để xác định hàm lượng phospho trong dầu mỡ động vật và thực vật. Phương pháp này không thích hợp để xác định hàm lượng phospho trong lecithin thương mại vì cần phải tro hóa ở nhiệt độ 800 0C.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 10110-1:2013 ISO 10540-1:2003 DẦU MỠ ĐỘNG VẬT VÀ THỰC VẬT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PHOSPHO - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP ĐO MÀU Animal and vegetable fats and oils - Determination of phosphorus content - Part 1: Colorimetric method Lời nói đầu TCVN 10110-1:2013 hồn toàn tương đương với ISO 10540-1:2003; TCVN 10110-1:2013 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F2 Dầu mỡ động vật thực vật biên soạn, Tổng cục tiêu chuẩn Đo lượng Chất lượng thẩm định, Bộ khoa học Công nghệ công bố Bộ tiêu chuẩn TCVN 10110 (ISO 10540) Dầu mỡ động vật thực vật - Xác định hàm lượng phospho gồm có phần sau: TCVN 10110-1:2013 (ISO 10540-1:2003), Phần 1: Phương pháp đo màu; TCVN 10110-2:2013 (ISO 10540-2:2003), Phần 2: Phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử dùng lò graphit; TCVN 10110-3:2013 (ISO 10540-3:2002), Phần 3: Phương pháp đo phổ phát xạ quang học plasma cảm ứng cao tần (ICP) DẦU MỠ ĐỘNG VẬT VÀ THỰC VẬT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PHOSPHO - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP ĐO MÀU Animal and vegetable fats and oils - Determination of phosphorus content - Part 1: Colorimetric method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp đo màu để xác định hàm lượng phospho dầu mỡ động vật thực vật Phương pháp khơng thích hợp để xác định hàm lượng phospho lecithin thương mại cần phải tro hóa nhiệt độ 800 0C Nguyên tắc Phần mẫu thử nung (cacbon hóa) với có mặt magie hydroxycacbonat sau tro hóa Tro hòa tan axit clohydric lỗng Sau đó, hàm lượng phospho xác định phương pháp đo màu xanh molybden Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích trừ có qui định khác 3.1 Magie hydroxycacbonat, [(MgCO3)n Mg(OH)2] H2O, có hàm lượng magie oxit từ 40 % đến 46 % (khối lượng) Magie cacbonat hydrat hóa, dạng bazơ, [(MgCO3)4 Mg(OH)2] 5H2O phù hợp 3.2 Axit clohydric, c(HCl) = mol/l 3.3 Dung dịch natri hydroxit, c (NaOH) = mol/l 3.4 Dung dịch khử Cân 0,500 g p-methylaminophenol sulfat [HOC6H4NHCH3)2 H2SO4], 2,5 g natri sulfit ngậm bảy phân tử nước (Na2SO3 7H2O) 58,5 g natri metabisulfit (Na2S2O5) Chuyển lượng cân vào bình định mức l Hòa tan nước, sau pha lỗng đến vạch trộn Giữ dung dịch chai màu nâu kín 3.5 Thuốc thử sulfat/molybdat Hòa tan 25,0 g amoni molybdat ngậm bốn phân tử nước [(NH 4)6Mo7O24 4H2O] 250 ml axit sulfuric mol/l [được chuẩn bị cách dùng nước pha loãng 278 ml axit sulfuric đậm đặc (18 mol/l) đến l)] Chuyển dung dịch vào bình định mức l Pha loãng nước đến vạch trộn Bảo quản dung dịch chai màu nâu CẢNH BÁO - Phải cẩn thận pha loãng axit sulfuric đậm đặc 3.6 Dung dịch natri axetat Hòa tan 340 g natri axetat ngậm ba phân tử nước (CH 3COONa 3H2O) nước Chuyển vào bình định mức l Pha loãng nước đến vạch trộn Bảo quản dung dịch chai màu nâu 3.7 Dung dịch phosphat chuẩn để hiệu chuẩn 3.7.1 Dung dịch gốc (hàm lượng phospho khoảng 100 g / ml) Cân 440 mg kali dihydro phosphat(KH 2PO4), xác đến 0,1 mg Hòa tan nước chuyển định lượng vào bình định mức l Pha loãng nước đến vạch trộn Tính hàm lượng phospho dung dịch theo cơng thức sau: p= ms MP V Ms Trong đó: p hàm lượng phospho dung dịch gốc, tính microgam mililit ( g / ml); ms khối lượng kali dihydro phosphat, tính miligam (mg); MP khối lượng phân tử phospha, tính gam (g) (MP = 31,03 g); V thể tích dung dịch gốc bình, tính lít (l) (V = l); Ms khối lượng phân tử kali dihydro phosphat, tính gam (g) (M s = 136,09 g) 3.7.2 Dung dịch chuẩn phosphat (hàm lượng phospho khoảng 10 g / ml ) Dùng pipet lấy 25 ml dung dịch gốc (3.7.1) cho vào bình định mức 250 ml Pha loãng nước đến vạch trộn Tính hàm lượng phospho dung dịch theo cơng thức sau: s1 = 0,1 Trong đó: hàm lượng phospho dung dịch chuẩn phosphat 1, tính microgam mililit ( g / ml); s1 hàm lượng phospho dung dịch gốc (3.7.1), tính microgam mililit ( g / ml); 3.7.3 Dung dịch chuẩn phosphat (hàm lượng phospho khoảng 50 g/ml) Dùng pipet lấy 50 ml dung dịch gốc (3.7.1) cho vào bình định mức 100 ml Pha loãng nước đến vạch trộn Tính hàm lượng phospho dung dịch theo cơng thức: s2 Trong đó: = 0,5 s2 hàm lượng phospho dung dịch chuẩn phosphat 2, tính microgam mililit ( g/ml); hàm lượng phospho dung dịch gốc (3.7.1), tính microgam mililit ( g/ml) Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 4.1 Ống nghiệm, dung tích 25 ml, làm thủy tinh bosilicat, có nắp cổ hình chuẩn chia vạch ml nhỏ Kiểm tra độ tái lập việc chia vạch 15 ml độ bền vạch hiệu chuẩn làm nóng 550 0C 4.2 Lò dạng khối lò muff, kiểm sốt nhiệt độ ổn định đến 400 0C 4.3 Lò tro hóa lò muff, trì đến 700 0C 4.4 Giá đựng ống nghiệm, bền nhiệt độ cao, tốt thép chống ăn mòn, dùng cho lò muff Giá phải giữ ống nghiêng góc cho miệng ống cao đáy ống khoảng cm 4.5 Máy đo quang phổ, thích hợp cho phép đo bước sóng 720 nm, sử dụng cuvet từ cm đến cm 4.6 Cuvet đo quang phổ, có chiều dài đường quang từ cm đến cm thích hợp với phép đo bước sóng 720 nm Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không bị hư hỏng thay đổi suốt trình bảo quản vận chuyển Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 2625 (ISO 5555) Bảo quản mẫu chai thủy tinh chai poly (ethylen terephtalat) (PET) Chuẩn bị mẫu thử Nếu mẫu khơng dạng lỏng hồn tồn nhiệt độ phòng làm nóng mẫu đến nhiệt độ tối đa cao điểm nóng chảy 10 0C Nếu mẫu dạng lỏng mà khơng đồng hóa mẫu trước cân phần mẫu thử Mọi chất lắng chứa nhiều phospho, cần gộp vào để đồng hóa mẫu Cách tiến hành 7.1 Xác định hệ số hiệu chuẩn 7.1.1 Đối với hàm lượng phospho từ mg/kg đến 125 mg/kg (trong dầu) Cho vào dãy gồm bảy ống nghiệm (4.1), ống 30 mg magie hydroxycacbonat (3.1) Dùng microburet pipet thêm vào ống: ml (mẫu trắng); 0,25 ml; 0,5 ml; 1,0 ml; 1,5 ml; 2,0 ml; 2,5 ml dung dịch chuẩn phosphat (3.7.2) Các ống nghiệm chứa lượng phospho dải từ g đến khoảng 25 g, tương đương với lượng phospho 0,2 g dầu chứa từ mg/kg đến khoảng 125 mg/kg phospho CHÚ THÍCH: Độ hấp thụ chất chuẩn cao chứa 2,5 ml dung dịch chuẩn phosphat (trong điều kiện này) xấp xỉ 0,8 Thêm ml axit clohydric (3.2) vào ống nghiệm đợi thu dung dịch Sau thêm 0,5 ml dung dịch natri hydroxit (3.3) vào ống nghiệm trộn Dùng pipet buret, thêm ml dung dịch khử (3.4) vào ống nghiệm trộn Theo cách tương tự, thêm 2,5 ml thuốc thử sulfat/molybdat (3.5) vào ống nghiệm trộn Đậy nắp ống để yên 20 nơi tối Thêm dung dịch natri axetat (3.6) đến vạch 15 ml trộn Đo độ hấp thụ dung dịch so với mẫu trắng cuvet cm bước sóng 720 nm Cách khác, đo độ hấp thụ tất dung dịch so với nước, kiểm tra mẫu trắng, sau hiệu chỉnh tất phép đo giá trị trắng, trừ phương trình hồi qui tuyến tính tính máy tính Tính hệ số hiệu chuẩn theo 7.1.3 Cách khác, phương trình hồi quy tuyến tính phép hiệu chuẩn (xem 7.1.3.2) tính máy tính 7.1.2 Đối với hàm lượng phospho từ 125 mg/kg đến 500 mg/kg (trong dầu) Cho vào dãy gồm sáu ống nghiệm (4.1), ống 30 mg magie (hydroxycacbonat (3.1) Dùng microburet pipet thêm vào ống nghiệm: ml (mẫu trắng); 0,5 ml; 0,8 ml; 1,2 ml; 1,6 ml; 2,0 ml dung dịch chuẩn phosphat (3.7.3) Các ống nghiệm chứa lượng phospho dải từ 25 g đến khoảng 100 g , tương đương với lượng phospho khoảng 125 mg/kg đến 500 mg/kg dầu Độ hấp thụ chất chuẩn cao nhất, cuvet cm, xấp xỉ 0,8 Thêm ml axit clohydric (3.2) vào ống nghiệm đợi thu dung dịch Sau thêm 0,6 ml dung dịch natri hydroxit (3.3) vào ống nghiệm trộn Dùng pipet buret, thêm ml dung dịch khử (3.4) vào ống nghiệm trộn Theo cách tương tự, thêm 2,5 ml thuốc thử sulfat/molybdat (3.5) vào ống nghiệm trộn Đậy nắp ống để yên 20 nơi tối Thêm dung dịch natri axetat (3.6) đến vạch 15 ml trộn Đo độ hấp thụ dung dịch so với mẫu trắng, cuvet cm bước sóng 720 nm Cách khác, đo độ hấp thụ tất dung dịch so với nước, kiểm tra mẫu trắng, sau hiệu chỉnh tất phép đo với giá trị trắng, trừ phương trình hồi qui tuyến tính tính máy tính Tính hệ số hiệu chuẩn theo 7.1.3 Cách khác, phương trình hồi quy tuyến tính phép hiệu chuẩn (xem 7.1.3.2) tính máy tính 7.1.3 Tính hệ số hiệu chuẩn 7.1.3.1 Đối với dung dịch, i, dãy mẫu đo theo 7.1.1 7.1.2, tính hệ số hiệu chuẩn sử dụng Công thức sau: fi = Vi s Ai đó: fi hệ số hiệu chuẩn dung dịch i dãy mẫu, tính microgam ( g ); Vi thể tích dung dịch phosphat chuẩn dung dịch i, tính mililit (ml); hàm lượng phospho dung dịch phosphat sử dụng, tính microgam mililit ( g /ml); s Ai độ hấp thụ đo dung dịch i Sử dụng giá trị trung bình hệ số fi hệ số hiệu chuẩn f cho phép tính Điều 7.1.3.2 Cách khác, sử dụng máy tính để tính phương trình hồi qui tuyến tính từ tất giá trị mật độ quang đo so với nước, khơng hiệu giá trị mẫu trắng Hàm lượng phospho dung dịch mẫu tính từ phương trình 7.2 Tro hóa mẫu dầu 7.2.1 Cân khoảng 30 mg magie hydroxycacbonat (3.1) cho vào ống nghiệm (4.1) cân ống với magie hydroxycacbonat, xác đến 0,1 mg Dùng pipet Pasteur, thêm khoảng 0,2 g (10 giọt đến 15 giọt) mẫu dầu (Điều 6), ý để tất mẫu đáy ống nghiệm trộn với magie hydroxycacbonat Khơng để mẫu dính vào bắn lên thành ống nghiệm Cân lại ống nghiệm, xác đến 0,1 mg Chuẩn bị ống nghiệm trắng chưa magie hydroxycacbonat 7.2.2 Đặt ống nghiệm vào gia nhiệt giá đựng ống nghiệm (4.4) cho vào lò muff (4.2) nguội Làm nóng ống nghiệm đến 350 0C mẫu bị cacbon hóa thành than đen (từ h đến h) Sau cacbon hóa, tăng nhiệt độ đến 550 0C nung mẫu nhiệt độ tro có màu trắng hồn tồn (khoảng h) Lấy ống nghiệm (và giá đựng ống nghiệm) để nguội 7.3 Phép xác định đo màu Hòa tan tro ml axit clohydric (3.2) cách làm ấm từ từ chất lỏng sôi Để nguội ống nghiệm trung hòa lượng chứa ống nghiệm cách thêm 0,6 ml dung dịch natri hydroxit (3.3) vào ống Sau đó, dùng pipet chia vạch buret chia vạch thêm ml dung dịch khử (3.4) trộn Theo cách tương tự, thêm 2,5 ml thuốc thử sulfat/molybdat (3.5) trộn Đậy ống nghiệm để yên nơi tối 20 Thêm dung dịch natri axetat (3.6) đến vạch 15 ml trộn Đo độ hấp thụ dung dịch so với mẫu trắng cuvet cm bước sóng 720 nm Cách khác, đo độ hấp thụ tất dung dịch so với nước, kiểm tra mẫu trắng, sau hiệu chỉnh tất phép đo với giá trị mẫu trắng Nếu độ hấp thụ đo cao độ hấp thụ chất chuẩn cao (khoảng 0,8) tức nằm dải hiệu chuẩn lặp lại phép đo sử dụng cuvet cm Tính kết Tính hàm lượng phospho sử dụng Công thức sau: wP = f A m Trong đó: wP hàm lượng phospho mẫu thử, tính miligam kilogam (mg/kg); f hệ số hiệu chuẩn trung bình tính theo 7.1.3, tính microgam ( g ); A độ hấp thụ đo 7.3; m khối lượng mẫu thử, tính gam (g) Khi dùng phương trình hồi qui tuyến tính để tính hàm lượng phospho phần mẫu thử sử dụng Cơng thức sau: wP = mP m Trong đó: wP hàm lượng phospho dầu, tính miligam kilogam (mg/kg); mP hàm lượng phospho phần mẫu thử (7.2), tính microgam ( g); m khối lượng phần mẫu thử (7.2), tính gam (g) Độ chụm 9.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp nêu Phụ lục A Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ mẫu khác với dải nồng độ mẫu nêu 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử độc lập, riêng rẽ thu sử dụng phương pháp, tiến hành vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không vượt % trường hợp lớn giới hạn lặp lại r, suy theo phép nội suy tuyến tính từ Bảng 9.3 Độ tái lập Khi giá trị hai kết thử riêng rẽ, thu sử dụng phương pháp, tiến hành thử vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm khác nhau, người khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, nằm dải giá trị nêu Bảng chênh lệch tuyệt đối hai kết thử không % trường hợp lớn giới hạn tái lập R, suy theo phép nội suy tuyến tính từ Bảng Bảng - Giới hạn lặp lại tái lập hàm lượng phospho khác Hàm lượng phospho r R mg/kg mg/kg mg/kg 10 50 18 100 12 41 300 13 105 400 34 135 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - điều kiện thao tác không quy định tiêu chuẩn xem tùy chọn, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; - kết thử nghiệm thu PHỤ LỤC A (Tham khảo) KẾT QUẢ PHÉP THỬ LIÊN PHÒNG THỬ NGHIỆM Hai phép thử nghiệm quốc tế tiến hành mẫu dầu đậu nành sử dụng phương pháp đo màu Phép thử liên phòng thử nghiệm lần thứ Liên đồn Dầu, Hạt Chất béo (FOSFA) tổ chức thực gồm tám phòng thử nghiệm bốn quốc gia tham gia Phép thử tiến hành vào tháng bảy năm 1995 Các kết thu được phân tích thống kê theo ISO 5725:19861), cho liệu độ chụm nêu Bảng A.1 Bảng A.1 - Kết phân tích thống kê phép thử liên phòng thử nghiệm lần thứ (1995) Mẫua Thông số A B 8 Giá trị trung bình, mg/kg 10,51 318,31 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, mg/kg 0,68 4,41 Hệ số biến thiên lặp lại, % 6,47 1,39 Giới hạn lặp lại r (r = 2,8 sr), mg/kg 1,92 12,34 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, mg/kg 2,12 17,93 Hệ số biến thiên tái lập, % 20,17 5,63 Giới hạn tái lập R (R = 2,8 sR), mg/kg 5,96 50,21 Số phòng thử nghiệm tham gia sau trừ ngoại lệ a Mẫu A: dầu đậu nành tinh luyện tẩy trắng khử mùi Mẫu B: dầu đậu nành thô tách nước gum Phép thử liên phòng thử nghiệm lần thứ hai FOSFA quốc tế Hiệp hội Hóa Dầu Mỹ (AOCS) tổ chức, gồm 13 phòng thử nghiệm tham gia Phép thử tiến hành năm 1999 Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994) TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994) cho liệu độ chụm nêu Bảng A.2 Bảng A.2 - Kết phân tích thống kê phép thử liên phòng thử nghiệm lần thứ hai (1992) Thơng số Số phòng thử nghiệm tham gia sau trừ ngoại lệ Mẫua A B C D E F G H 7 7 7 7 Giá trị trung bình, mg/kg 473,1 305,0 131,6 101,4 56,6 32,0 13,8 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, mg/kg 14,2 5,1 3,5 4,3 3,0 2,8 1,1 2,4 Hệ số biến thiên lặp lại, % 3,0 1,7 2,7 4,2 5,3 8,6 8,2 2,9 Giới hạn lặp lại r (r = 2,8 sr), mg/kg 39,8 14,3 9,8 12,0 8,4 7,9 3,2 6,7 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, mg/kg 56,4 59,2 31,0 14,6 6,5 3,3 2,2 56,4 Hệ số biến thiên tái lập, % 11,9 19,4 23,6 14,4 11,5 10,4 16,2 20,7 Giới hạn tái lập R (R = 2,8 sR), mg/kg 158,0 165,7 86,8 40,9 18,2 158,0 a 9,3 6,3 273,8 Mẫu dầu đậu nành chứa mức phospho khác Các mẫu tương tự thử nghiệm sử dụng phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) theo qui định TCVN 10110-2 (ISO 10540-2) sử dụng phổ phát xạ nguyên tử plasma cảm ứng cao tần (ICP) theo qui định TCVN 10110-3 (ISO 10540-3) Các kết thống kê liên quan đến 1) ISO 5725:1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory test dùng để thu liệu độ chụm Tiêu chuẩn hủy thay tiêu chuẩn ISO 5725 (gồm phần) chấp nhận thành TCVN 6910 (ISO 5725) các phương pháp AAS ICP tương ứng có TCVN 10110-2 (ISO 10540-2) TCVN 10110-3 (ISO 10540-3) THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6128:2007 (ISO 661:2003) Dầu mỡ động vật thực vật - Chuẩn bị mẫu thử [2] TCVN 2625:2007 (ISO 5555:2001) Dầu mỡ động vật thực vật - Lấy mẫu [3] ISO 5725:1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests (withdrawn in 1994) [4] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994) Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung [5] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994) Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp đo tiêu chuẩn [6] TCVN 10110-2 (ISO 10540-2) Dầu mỡ động vật thực vật - Xác định hàm lượng phospho Phần 2: Phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử dùng lò graphit [7] TCVN 10110-3 (ISO 10540-3) Dầu mỡ động vật thực vật - Xác định hàm lượng phospho Phần 3: Phương pháp đo phổ phát xạ quang học plasma cảm ứng cao tần (ICP) ... chấp nhận thành TCVN 6910 (ISO 5725) các phương pháp AAS ICP tương ứng có TCVN 1011 0-2 (ISO 1054 0-2 ) TCVN 1011 0-3 (ISO 1054 0-3 ) THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6128:2007 (ISO 661:2003) Dầu... tham gia Phép thử tiến hành năm 1999 Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 691 0-1 :2001 (ISO 572 5-1 :1994) TCVN 691 0-2 :2001 (ISO 572 5-2 :1994) cho liệu độ chụm nêu Bảng A.2 Bảng A.2 - Kết... inter-laboratory tests (withdrawn in 1994) [4] TCVN 691 0-1 :2001 (ISO 572 5-1 :1994) Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung [5] TCVN 691 0-2 :2001 (ISO 572 5-2 :1994)