Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 6508:2011 về Sữa – Xác định hàm lượng chất béo – Phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn) quy định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng chất béo của sữa có đặc tính chất lượng lí hóa tốt.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6508:2011 ISO 1211:2010 SỮA – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO – PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Milk Determination of fat content – Gravimetric method (Reference method) Lời nói đầu TCVN 6508:2011 thay TCVN 6508:2007; TCVN 6508:2011 hoàn toàn tương đương với ISO 1211:2010/IDF 1:2010; TCVN 6508:2011 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị Bộ Khoa học Công nghệ công bố SỮA – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO – PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Milk Determination of fat content – Gravimetric method (Reference method) CẢNH BÁO – Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an toàn sức khỏe thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng chất béo sữa có đặc tính chất lượng lí hóa tốt Phương pháp áp dụng cho sữa bò nguyên liệu, sữa cừu nguyên liệu, sữa dê nguyên liệu, sữa tách phần chất béo, sữa gầy, sữa bảo quản hóa chất sữa chế biến dạng lỏng Tiêu chuẩn không áp dụng yêu cầu xác cao sữa gầy, ví dụ: để thiết lập hiệu làm việc tách cream CHÚ THÍCH TCVN 6833 (ISO 7208)[7] quy định phương pháp đặc thù cho sản phẩm sữa gầy Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) ISO 3889 Milk and milk products – Mojonnier type fat extraction flasks (Sữa sản phẩm sữa – Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier) Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Hàm lượng chất béo sữa (fat content of milk) Phần khối lượng chất xác định quy trình quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH Hàm lượng chất béo tính phần trăm khối lượng Nguyên tắc Mẫu thử dung dịch etanol amoniac chiết dietyl ete dầu nhẹ Loại bỏ dung môi cách chưng cất cho bay Xác định khối lượng chất chiết CHÚ THÍCH Nguyên tắc thường gọi nguyên tắc Rose-Gottlieb Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử tinh khiết phân tích, trừ có quy định khác sử dụng nước cất, nước loại khống nước có chất lượng tương đương Các thuốc thử không để lại lượng cặn đáng kể thực phép thử theo quy định (xem 9.3.2) 5.1 Dung dịch amoniac, chứa khoảng 25% khối lượng NH3, [ρ20 (NH3) = 910 g/l] Nếu khơng có sẵn dung dịch amoniac nồng độ sử dụng dung dịch có nồng độ đậm đặc biết (xem 9.5.1) 5.2 Etanol (C2H5OH), etanol biến tính metanol, có chứa 94% thể tích etanol (xem A.4) 5.3 Dung dịch đỏ Congo Hòa tan g đỏ Congo (C32H22N6Na2O6S2) nước đựng bình định mức vạch dung tích 100 ml (6.14) Pha lỗng nước đến vạch CHÚ THÍCH Dung dịch để phân biệt rõ lớp phân cách dung môi với nước việc sử dụng dung dịch tùy chọn (xem 9.5.2) Có thể sử dụng dung dịch màu vàng khác với điều kiện chúng không ảnh hưởng đến kết xác định CẢNH BÁO – Đỏ congo chất gây ung thư 5.4 Diety ete (C2H5OC2H5) Không chứa peroxit (xem A.3) phù hợp với yêu cầu phép thử trắng (xem 9.3.2 A.2) CẢNH BÁO – Việc sử dụng dietyl ete gây nguy hiểm Cần tuân thủ quy định an toàn xử lý, sử dụng thải bỏ thuốc thử 5.5 Dầu nhẹ, có dải nhiệt độ sơi từ 30 oC đến 60 oC tương đương, pentan (CH3[CH2]3CH3) có điểm sơi 36 oC, phù hợp với yêu cầu cho phép thử trắng (xem 9.3.2, A.1 A.2) 5.6 Dung môi hỗn hợp Ngay trước sử dụng, trộn thể tích dietyl ete (5.4) dầu nhẹ (5.5) Thiết bị, dụng cụ CẢNH BÁO – Vì việc xác định buộc phải sử dụng dung môi bay dễ cháy, nên thiết bị điện dùng phải tuân theo quy định an toàn sử dụng dung môi Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 6.1 Cần phân tích, có khả cân xác đến mg, đọc đến 0,1 mg 6.2 Máy li tâm, giữ bình chiết chất béo ống chiết (6.6) quay với vận tốc từ 500 r/min đến 600 r/min để tạo gia tốc hướng tâm khoảng 80g đến 90g miệng bình chiết ống chiết Việc sử dụng máy li tâm tùy chọn, nên sử dụng loại thiết bị (xem 9.5.5) 6.3 Thiết bị chưng cất thiết bị làm bay hơi, thích hợp để chưng cất dung mơi etanol từ bình nón bình đun sơi, làm bay từ đĩa (xem 9.5.12) nhiệt độ không 100 oC 6.4 Tủ sấy, chạy điện, có cửa thơng gió mở hồn tồn, trì nhiệt độ 102 oC ± o C toàn khoang sấy Tủ sấy gắn với nhiệt kế thích hợp 6.5 Nồi cách thủy, trì nhiệt độ khoảng 35 oC đến 40 oC 6.6 Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier, theo quy định ISO 3889 CHÚ THÍCH Cũng dùng ống chiết chất béo, có si phơng nối với chai rửa, quy trình có khác (xem Phụ lục B) Các bình chiết chất béo phải đậy nút bần chất lượng tốt nắp vật liệu khác [ví dụ: cao su silicon polytetrafloetylen (PTFE)] không bị ảnh hưởng thuốc thử sử dụng Nút bần phải chiết dietyl ete (5.4), ngâm nước 15 nhiệt độ 60 oC lớn sau làm nguội nước cho chúng bão hòa nước sử dụng 6.7 Giá, thích hợp để giữ bình chiết chất béo (hoặc ống chiết chất béo) (6.6) 6.8 Chai rửa, thích hợp để sử dụng với dung môi hỗn hợp (5.6) Không dùng chai rửa làm chất dẻo 6.9 Bình thu nhận chất béo, bình đun sơi (đáy phẳng), có dung tích từ 125 ml đến 250 ml, bình nón có dung tích 250 ml đĩa kim loại Nếu sử dụng đĩa kim loại đĩa phải thép khơng rỉ, đáy phẳng, đường kính từ 80 mm đến 100 mm, chiều cao khoảng 50 mm 6.10 Hạt trợ sôi, không chứa chất béo, sứ không xốp cacbua silicon thủy tinh Việc sử dụng chúng tùy ý 6.11 Ống đong, dung tích ml 25 ml, phù hợp với loại A TCVN 8488 (ISO 4788) [4] dụng cụ khác thích hợp sản phẩm 6.12 Pipep chia độ, dung tích 10 ml, phù hợp với loại A TCVN 7150 (ISO 835) [2] 6.13 Bộ kẹp, kim loại để giữ bình, cốc có mỏ đĩa 6.14 Bình định mức vạch, dung tích 100 ml, phù hợp với loại A TCVN 7153 (ISO 1042) [3] Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) [1] Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không bị hư hỏng bị biến đổi chất lượng suốt trình bảo quản vận chuyển Bảo quản mẫu phòng thử nghiệm nhiệt độ khoảng từ oC đến oC từ lấy mẫu tiến hành thử nghiệm Chuẩn bị mẫu thử Làm ấm mẫu thử đến nhiệt độ 38 oC ± oC nồi cách thủy (6.5) Trộn kỹ mẫu thử cách nhẹ nhàng, cách lật ngược chai đựng mẫu, tránh tạo bọt tạo kem Sau làm nguội nhanh mẫu thử đến khoảng 20 oC ± oC Nếu thu mẫu thử đồng mà không cần phải làm ấm trước (ví dụ: mẫu sữa gầy) đưa mẫu thử nhiệt độ 200C 20C, trộn kỹ mẫu cách nhẹ nhàng, cách lật ngược chai đựng mẫu nhiều lần Giá trị thực hàm lượng chất béo khơng mong muốn khi: a) sữa bị đảo trộn mạnh; b) cảm nhận mùi đặc trưng axit béo tự CHÚ THÍCH Sữa dê thường chứa axit béo tự mức thấp, mà thường khơng chiết hồn tồn phương pháp c) nhìn thấy hạt trắng bám thành chai đựng mẫu mảng chất béo nhỏ bề mặt mẫu thử hay sau chuẩn bị mẫu thử Cách tiến hành 9.1 Yêu cầu chung Nếu cần phải kiểm tra giới hạn lặp lại (11.2) có đáp ứng hay khơng tiến hành hai phép xác định riêng lẻ theo 9.2 đến 9.5 CHÚ THÍCH Quy trình thay sử dụng ống chiết chất béo có gắn với si phơng chai rửa (xem Chú thích 6.6) nêu Phụ lục B 9.2 Phần mẫu thử Trộn mẫu thử chuẩn bị (Điều 8) cách đảo ngược chai nhẹ nhàng ba lần bốn lần Cân ngày từ 10 g đến 11 g mẫu thử, trực tiếp gián tiếp, xác đến mg, cho vào bình chiết chất béo (6.6) Chuyển triệt để tốt phần mẫu thử sang bầu thấp (nhỏ) bình chiết chất béo 9.3 Phép thử trắng 9.3.1 Phép thử trắng phương pháp Tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định, sử dụng quy trình dùng loại thuốc thử, thay phần mẫu thử 9.2 10 ml nước (xem A.1) Khi phân tích mẻ mẫu thử số lần làm khơ khác mẫu khác Nếu mẫu trắng sử dụng cho tồn mẻ phải đảm bảo giá trị mẫu trắng dùng tính tốn hàm lượng chất béo mẫu riêng rẽ thu điều kiện giống với điều kiện mẫu riêng rẽ Nếu giá trị thu phép thử trắng vượt 1,0 mg kiểm tra thuốc thử, trước chưa kiểm tra (9.3.2) Việc hiệu giá trị lớn 2,5 mg cần nêu báo cáo thử nghiệm 9.3.2 Phép thử trắng thuốc thử Tiến hành phép thử trắng theo 9.3.1 để kiểm tra chất lượng thuốc thử Sử dụng thêm bình thu nhận chất béo rỗng, chuẩn bị theo 9.4 với mục đích kiểm sốt khối lượng Các thuốc thử không để lại lượng cặn lớn 1,0 mg (xem A.2) Nếu phần cặn thu phép thử trắng thuốc thử lớn 1,0 mg xác định lượng cặn dung môi riêng rẽ cách chưng cất 100 ml dietyl ete (5.4) dầu nhẹ (5.5) Sử dụng bình thu nhận chất béo rỗng, chuẩn bị theo mô tả với mục đích kiểm sốt khối lượng, để thu khối lượng thực cặn, khối lượng không lớn 1,0 mg Thay thuốc thử, dung môi không đạt yêu cầu, chưng cất lại dung mơi 9.4 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Làm khơ bình thu nhận chất béo (6.9) vài hạt trợ sôi (6.10) tủ sấy (6.4) trì nhiệt độ 102 o C ± oC thời gian h CHÚ THÍCH Hạt trợ sơi để giúp sơi nhẹ suốt q trình loại bỏ dung môi, đặc biệt trường hợp sử dụng bình thu nhận chất béo thủy tinh Bảo vệ bình thu nhận chất béo khỏi bụi để nguội đến nhiệt độ phòng cân Làm nguội bình thu nhận chất béo thủy tinh h, đĩa kim loại 30 Khơng nên đặt bình thu nhận chất béo bình hút ẩm để tránh chưa đủ nguội thời gian làm nguội bị kéo dài Dùng kẹp (6.13) đặt bình thu nhận chất béo lên cân Cân bình thu nhận chất béo, xác đến 1,0 mg CHÚ THÍCH Tốt dùng kẹp để tránh làm thay đổi nhiệt độ 9.5 Phép xác định 9.5.1 Tiến hành xác định vòng h mẫu cân Thêm ml dung dịch amoniac (5.1) thể tích tương ứng dung dịch amoniac đậm đặc (xem Chú thích 5.1) vào phần mẫu thử bình chiết chất béo (9.2) Trộn kỹ phần mẫu thử đựng bầu nhỏ bình chiết chất béo 9.5.2 Thêm 10 ml etanol (5.2) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng cách cho lượng chứa bình chiết chất béo chảy chảy lại bầu lớn bầu nhỏ Tránh chất lỏng dâng lên gần cổ bình Nếu cần, thêm hai giọt dung dịch đỏ Congo (5.3) 9.5.3 Thêm 25 ml dietyl ete (5.4) Đậy bình chiết chất béo nút bần bảo hòa nước (xem 6.6) đậy nắp làm vật liệu khác làm ẩm nước (xem 6.6) Lắc mạnh bình vòng khơng lắc q mạnh để tránh tạo nhũ Trong trình lắc, giữ bình chiết chất béo tư nằm ngang bầu nhỏ hướng lên trên, định kì cho chất lỏng bầu lớn chảy sang bầu nhỏ Cẩn thận mở nắp đậy, tráng nắp phía cổ bình chiết chất béo dung mơi hỗn hợp (5.6) Dùng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào bình 9.5.4 Thêm 25 ml dầu nhẹ (5.5) Đậy nắp bình Trộn lại vòng 30s theo 9.5.3 9.5.5 Li tâm bình chiết chất béo đậy kín thời gian từ đến gia tốc quay từ 80g đến 90g Nếu khơng có máy li tâm (6.2) để n bình chiết chất béo đậy kín giá đỡ (6.7) 30 lớp phía tách hẳn khỏi lớp nước 9.5.6 Cẩn thận tháo nắp bình, dùng dung mơi hỗn hợp (5.6) để tráng nắp phía cổ bình chiết chất béo Dùng chai rửa (6.8) để tráng cho nước rửa chảy vào bình Nếu mặt lớp phân cách thấp chỗ thắt cổ bình cần nâng cao mức lên chút cách nhẹ nhàng thêm nước theo thành bình (xem Hình 1) để dung mơi gạn dễ dàng CHÚ THÍCH Trong Hình Hình mơ tả ba loại bình chiết chất béo quy định ISO 3889, điều không nghĩa loại bình ưu tiên loại khác 9.5.7 Giữ bầu nhỏ bình chiết chất béo cẩn thận gạn triệt để tốt lớp bề mặt (xem Hình 1) vào bình thu nhận chất béo chuẩn bị (9.4) Khơng gạn phần lớp nước vào bình (xem Hình 2) 9.5.8 Tráng phía ngồi cổ bình chiết chất béo dung môi hỗn hợp (5.6) Thu lấy nước rửa vào bình thu nhận chất béo Chú ý khơng để dung mơi hỗn hợp tràn bên ngồi bình chiết Nếu cần, loại bỏ dung môi phần dung mơi khỏi bình thu nhận chất béo cách chưng cất làm bay theo 9.5.12 9.5.9 Thêm ml etanol (5.2) vào bình chiết chất béo Trộn theo 9.5.2 Nếu trước dùng dung dịch đỏ Congo (5.3) khơng thêm dung dịch CHÚ DẪN CHÚ DẪN Dung môi Lớp phân cách Lớp phân cách Lớp chất lỏng Lớp chất lỏng a Ở lần chiết thứ hai lần chiết thứ ba a Ở lần chiết thứ hai lần chiết thứ b Ở lần chiết thứ b Ở lần chiết thứ Hình – Trước gạn Hình – Sau gạn 9.5.10 Thực chiết lần thứ hai cách lặp lại thao tác theo quy định 9.5.3 đến hết 9.5.7 Chỉ dùng 15 ml dietyl ete (5.4) 15 ml dầu nhẹ (5.5) thay dùng 25 ml Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình (xem Hình 1) cách nhẹ nhàng thêm nước theo thành bình (xem Hình 1) để gạn dung mơi triệt để tốt (xem Hình 2) 9.5.11 Thực chiết lần ba, không cho thêm etanol, cách lập lại thao tác theo quy định 9.5.3 đến 9.5.7 Chỉ sử dụng 15 ml dietyl ete (5.4) 15 ml dầu nhẹ (5.5) Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình (xem Hình 1) cách nhẹ nhàng thêm nước theo thành bình để gạn dung mơi triệt để tốt (Xem hình 2) Có thể bỏ qua lần chiết thứ ba sữa có hàm lượng chất béo nhỏ 0,5 % khối lượng 9.5.12 Loại bỏ dung môi (kể etanol) triệt để tốt khỏi bình thu nhận chất béo cách chưng cất sử dụng bình đun sơi bình nón, cách làm bay sử dụng cốc có mỏ đĩa (xem 6.3) Tráng thành cổ bình đun sơi bình nón dung hỗn hợp (5.6) trước bắt đầu chưng cất 9.5.13 Đun sơi bình thu nhận chất béo tủ sấy (6.4) trì nhiệt độ 102 oC ± oC thời gian h, bình nón bình đun sơi đặt chúng nằm nghiêng để dung mơi Lấy bình thu nhận chất béo khỏi tủ sấy kiểm tra xem chất béo hay chưa Nếu chất béo khơng chứa tạp chất béo phải lặp lại tồn q trình Nếu chất béo bảo vệ bình thu nhận chất béo khỏi bụi để nguội bình đến nhiệt độ phòng cân Làm nguội bình thu nhận chất béo thủy tinh h đĩa kim loại 30 Tránh việc làm nguội chưa đủ làm nguội lâu, không làm nguội bình thu nhận chất béo bình hút ẩm Khơng lau bình thu nhận chất béo trước lúc cân Dùng kẹp (6.13) để đặt bình thu nhận chất béo lên cân phân tích (6.1) Cần bình thu nhận chất béo, xác đến 1,0 mg 9.5.14 Đun nóng bình thu nhận chất béo thêm 30 tủ sấy (6.4) trì nhiệt độ 102 oC 20C, bình nón bình đun sơi đặc chúng nằm nghiêng để dung mơi Để nguội cân lại theo 9.5.13 Nếu cần, lặp lại quy trình đun nóng cân chênh lệch khối lượng bình thu nhận chất béo hai lần cân liên tiếp nhỏ 2,0 mg Ghi khối lượng tối thiểu khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết 10 Tính biểu thị kết 10.1 Tính kết Tính hàm lượng chất béo mẫu thử, wf, biểu thị phần trăm khối lượng, theo Công thức (1): wf (m1 m2 ) (m3 mo m4 ) 100 Trong đó: mo khối lượng phần mẫu thử (9.2), tính gam (g); (1) m1 khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết được, xác định 9.5.14, tính gam (g); m2 khối lượng bình thu nhận chất béo chuẩn bị (9.4), tính gam (g); m3 khối lượng bình thu nhận chất béo sử dụng phép thử trắng (9.3.1) chất chiết xác định 9.5.14, tính gam (g); m4 khối lượng bình thu nhận chất béo (9.4) sử dụng phép thử trắng (9.3.1), tính gam (g) 10.2 Biểu thị kết Làm tròn kết đến hai chữ số thập phân 11 Độ chụm 11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các giá trị độ lặp lại tái lập thu từ phép thử nghiệm liên phòng xác định theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1)[5] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) [6] Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp nêu Phụ lục C Phụ lục D tương ứng (xem [8]) Các giá trị khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu 11.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ độc lập, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, người phân tích, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không 5% trường hợp lớn hơn: a) 0,031 % khối lượng, sữa bò gầy; b) 0,036 % khối lượng, sữa bò tách phần chất béo; c) 0,043 % khối lượng, sữa bò nguyên chất; d) 0,030 % khối lượng, sữa dê; e) 0,069 % khối lượng, sữa cừu 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ độc lập, thu tiến hành thử vật liệu thử giống hệt nhau, người phân tích khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác phòng thử nghiệm khác nhau, khơng q 5% trường hợp lớn hơn: a) 0,043 % khối lượng, sữa bò gầy; b) 0,042 % khối lượng, sữa bò tách phần chất béo; c) 0,056 % khối lượng, sữa bò nguyên chất; d) 0,052 % khối lượng, sữa dê; e) 0,096 % khối lượng, sữa cừu 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: a) thông tin cần thiết nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) điều kiện thao tác không quy định tiêu chuẩn xem tùy chọn, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; e) việc điều chỉnh, giá trị lớn 2,5 mg thu phép thử trắng phương pháp; f) kết thử nghiệm thu kiểm tra độ lặp lại nêu kết cuối thu PHỤ LỤC A (tham khảo) LƯU Ý VỀ CÁCH TIẾN HÀNH A.1 Tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định (xem 9.3.1) Giá trị thu phép thử trắng, tiến hành đồng thời với phép xác định, cho giá trị biểu kiến chất chiết từ phần mẫu thử (m – m2) phải điều chỉnh theo có mặt chất khơng bay chiết từ thuốc thử có thay đổi điều kiện môi trường phòng cân chênh lệch nhiệt độ bình thu nhận chất béo phòng cân hai lần cân (9.5.14 9.4) Khi mẫu trắng sử dụng cho mẻ mẫu thử phải đảm bảo bình mẫu trắng với bình mẫu thử đạt tới khối lượng khơng đổi Để tính hàm lượng chất béo, sử dụng khối lượng bình thu nhận chất béo phép thử trắng tương ứng với chu kì sấy khơ bình đựng mẫu thử [nghĩa bình đựng mẫu thử đạt khối lượng khơng đổi chu kì sấy khơ n sử dụng khối lượng mẫu trắng chu kì sấy khơ n; chu kì sấy (n + 1) sử dụng khối lượng mẫu trắng có chu kỳ sấy khơ (n +1) … (xem 9.3.1)] Trong điều kiện thích hợp giá trị thấp phép thử trắng thuốc thử, nhiệt độ phòng cân khơng đổi, thời gian đủ để bình thu nhận chất béo nguội, giá trị thường nhỏ 1,0 mg bỏ qua phần tính kết phép xác định thông thường Cũng thường gặp giá trị lớn đến 2,5 mg (dương âm) Sau điều chỉnh giá trị này, thu kết Khi phải điều chỉnh giá trị lớn 2,5 mg phải nêu báo cáo thử nghiệm (Điều 12) Nếu giá trị thu phép thử trắng thường lớn 1,0 mg cần kiểm tra lại thuốc thử trước chưa kiểm tra Thuốc thử có lẫn tạp chất có vết cần phải thay làm lại (xem 9.3.2 A.2) A.2 Phép thử trắng để kiểm tra thuốc thử (xem 9.3.2) Trong phép thử trắng này, bình thu nhận chất béo dùng để kiểm tra khối lượng sử dụng để đảm bảo thay đổi điều kiện mơi trường phòng cân ảnh hưởng nhiệt độ bình thu nhận chất béo khơng ảnh hưởng đến việc xem xét có mặt hay khơng có mặt chất khơng bay có dịch chiết thuốc thử Chênh lệch khối lượng biểu kiến (m3 – m4 10.1) bình thu nhận chất béo dùng cho mục đích kiểm chứng phải xem xét kiểm tra khối lượng bình thu nhận chất béo dùng phép thử trắng Khối lượng biểu kiến bình thu nhận chất béo, hiệu cho thay đổi khối lượng biểu kiến bình kiểm chứng, khơng tăng q 1,0 mg Rất dung mơi có chứa chất bay hơi, chất bị giữ lại nhiều chất béo Nếu thấy có mặt chất đó, cần tiến hành phép thử trắng tất thuốc thử dung mơi sử dụng bình thu nhận chất béo với khoảng g butterfat khan Nếu cần, chưng cất lại dung môi với có mặt g butterfat 100 ml dung môi Chỉ dùng dung môi khoảng thời gian ngắn sau chưng cất lại A.3 Phép thử peroxit Để thử peroxit, cho ml dung dịch kali iodua 100 g/l chuẩn bị vào 10 ml dietyl ete (5.4) đựng ống đong nhỏ có nắp thủy tinh trước tráng loại dung môi sử dụng Lắc ống đong sau để n Khơng có màu vàng lớp ete Có thể sử dụng phương pháp thích hợp khác để thử peroxit Để đảm bảo dietyl ete không chứa peroxit, xử lý dietyl ete ba ngày trước sử dụng sau: Cắt kẽm thành dải để chúng chạm đến nửa chai đựng dietyl ete Như vậy, cần đến khoảng 000 mm2 kẽm cho lít dietyl ete Trước sử dụng, nhúng hoàn toàn dải kẽm dung dịch chứa 10 g đồng (II) sulfat ngậm năm phân tử nước (CuSO 4.5H2O) ml axit sulfuric đậm đặc (98% khối lượng) lít Rửa kỹ dải nhẹ nhàng nước, đặt dải mạ đồng ướt vào chai đựng dietyl ete để chúng chai Có thể dùng phương pháp khác với điều kiện chúng không ảnh hưởng đến kết xác định A.4 Etanol Có thể sử dụng etanol biến tính cách thêm metanol với điều kiện chất làm biến tính không ảnh hưởng đến kết xác định PHỤ LỤC B (Tham khảo) QUY TRÌNH THAY THẾ DÙNG ỐNG CHIẾT CHẤT BÉO CĨ SI PHƠNG HOẶC CĨ NỐI VỚI CHAI RỬA B.1 Yêu cầu chung Nếu sử dụng ống chiết chất béo có si phơng có nối với chai rửa tiến hành theo quy định Phụ lục Các ống phải có nắp đậy nút bần chất lượng tốt quy định bình cầu 6.6 (xem Hình B.1 ví dụ) B.2 Cách tiến hành B.2.1 Chuẩn bị mẫu thử Xem Điều B.2.2 Phần mẫu thử Tiến hành theo 9.2 dùng ống chiết chất béo (xem Chú thích 6.6 Hình B.1) Phần mẫu thử phải chuyển vào đáy ống chiết chất béo triệt để tốt B.2.3 Phép thử trắng Xem 9.3 A.1 B.2.4 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Xem 9.4 B.2.5 Phép xác định B.2.5.1 Tiến hành phép xác định Thêm ml dung dịch amoniac (5.1), thể tích tương đương dung dịch amoniac đậm đặc (xem Chú thích 5.1) vào phần mẫu thử đựng ống chiết chất béo (B.2.2) Trộn kỹ với phần mẫu thử xử lý trước đáy ống chiết chất béo B.2.5.2 Thêm 10 ml etanol (5.2) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng hỗn hợp đáy ống chiết chất béo Nếu cần, thêm giọt dung dịch đỏ Congo (5.3) B.2.5.3 Thêm 25 ml dietyl ete (5.4) Đậy nắp ống chiết chất béo nút bần bão hòa nước nắp làm chất liệu khác làm ướt nước (xem 6.6) Lắc mạnh ống chiết, không mạnh, cách đảo chiều khoảng để tránh tạo nhũ Cẩn thận mở nắp, sử dụng chai rửa (6.8) để tráng nắp cổ ống chiết dung mơi hỗn hợp (5.6) cho nước rửa chảy vào ống chiết B.2.5.4 Thêm 25 ml dầu nhẹ (5.5), đậy ống chiết chất béo nút bần nút khác thấm lại nước (bằng cách ngâm vào nước) Lắc nhẹ ống 30 s B.2.5.3 B.2.5.5 Li tâm ống chiết chất béo đậy nắp máy li tâm (6.2) từ đến gia tốc 80g đến 90g Nếu khơng có máy li tâm (6.2) đặt ống chiết đậy nắp giá đỡ (6.7) 30 lớp phía tách hẳn khỏi lớp nước Nếu cần, làm nguội ống chiết dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng B.2.5.6 Cẩn thận tháo nắp, tráng nắp cổ ống chiết chất béo dung mơi hỗn hợp (5.6) Sử dụng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào ống chiết B.2.5.7 Lắp khớp nối si phông nối chai rửa vào ống chiết chất béo Đẩy ống nối bên cao mặt tiếp xúc lớp khoảng mm Ống nối phía bên phải song song với trục ống chiết chất béo Cẩn thận gạn triệt để tốt lớp bề mặt ống chiết chất béo vào bình thu nhận chất béo (xem 9.4) có chứa vài hạt trợ sơi (6.10) trường hợp bình đun sơi bình nón (tùy chọn) Khơng để lớp nước lẫn vào Tráng phía ngồi khớp nối dung mơi hỗn hợp, thu lấy nước rửa vào bình thu nhận chất béo CHÚ THÍCH Lớp phía chuyển khỏi ống chiết chất béo, ví dụ cách dùng bầu cao su nối với thân ngắn để tạo áp lực B.2.5.8 Tháo khớp nối khỏi cổ ống chiết chất béo Nâng nhẹ ống nối tráng phần thấp ống nối bên dung môi hỗn hợp (5.6) Hạ thấp chèn lại ống nối chuyển nước rửa vào bình thu nhận chất béo Tráng rửa lại khớp nối dung mơi hỗn hợp, cho nước rửa vào bình thu nhận chất béo Loại bỏ dung môi phần dung mơi khỏi bình thu nhận cách chưng cất làm bay theo 9.5.12, cần B.2.5.9 Tháo lắp khớp nối khỏi cổ ống chiết Nâng nhẹ ống nối thêm ml etanol vào ống chiết chất béo Dùng etanol để tráng thành khớp nối Trộn theo B.2.5.2 B.2.5.10 Thực chiết lần hai cách lặp lại thao tác B.2.5.3 đến hết B.2.5.8 Thay 25 ml 15 ml dietyl ete (5.4) 15 ml dầu nhẹ (5.5) Dùng dietyl ete để tráng thành khớp nối, suốt trình tháo khớp nối khỏi ống chiết béo sau lần chiết trước B.2.5.11 Thực chiết lần ba, không thêm etanol, cách lặp lại thao tác theo quy định B.2.5.3 đến B.2.5.8 Lặp lại, dùng 15 ml dietyl ete 15 ml dầu nhẹ Dùng dietyl ete để tráng thành khớp nối B.2.5.10 Lần chiết thứ ba nên bỏ qua sữa có hàm lượng béo nhỏ 0,5 % khối lượng B.2.5.12 Tiến hành 9.5.12 đến 9.5.14 Kích thước tính milimét a) có gắn ống si phơng b) có gắn bình rửa CHÚ DẪN Dung dịch tháo khớp nối 105 ml ± ml Độ dày thành 1,5 mm ± 0.5 mm Hình B.1 – Các ví dụ ống chiết chất béo PHỤ LỤC C (tham khảo) PHÉP THỬ LIÊN PHÒNG QUỐC TẾ TRÊN SỮA NGUYÊN LIỆU C.1 Yêu cầu chung Phép thử nghiệm liên phòng quốc tế gồm có 19 phòng thử nghiệm từ 13 nước tham gia thực tháng 12 năm 2005 [8] Phép thử tiến hành 12 cặp mẫu mù gồm: a) ba cặp mẫu sữa gầy có hàm lượng chất béo, wf < 0,5 g/100 g; b) ba cặp mẫu sữa tách phần chất béo có hàm lượng chất béo dải 0,5 g/100g ≤ w f ≤ g/100 g; c) sáu cặp mẫu sữa nguyên liệu có hàm lượng chất béo dải g/100 g ≤ w f ≤ g/100 g Phép thử liên phòng Associazione Italiana Allevatori, Laboratorio Standard Latte, Maccarase, Italy tổ chức Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) [5] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2)[6] để thu liệu Bảng C.1, C.2 C.3 C.2 Các kết phép thử Bảng C.1 – Các kết sữa gầy Mẫu Thơng số Trung bình tổng 12 11 10 11 - Giá trị trung bình, g/100g 0,222 0,336 0,487 0,348 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, g/100 g 0,011 0,010 0,012 0,011 Giới hạn lặp lại r (2,8 sr), g/100 g 0,030 0,028 0,034 0,031 Hệ số biến thiên lặp lại, CV, r, % 13,7 8,3 7,0 8,9 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/100 g 0,018 0,010 0,017 0,016 Giới hạn tái lập R (2,8sR), g/100 g 0,051 0,028 0,047 0,043 Hệ số biến thiên tái lập, CVR % 23,0 8,5 9,6 12,5 Số phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ a a Các giá trị trung bình tính tốn cách sử dụng liệu mẫu trừ ngoại lệ Tất giá trị trung bình thống kê khác tính từ bậc hai trung bình độ lệch bình phương Bảng C.2 – Các kết sữa tách chất béo Mẫu Thơng số Trung bình tổng 11 11 11 - Giá trị trung bình, g/100g 0,561 1,368 2,039 1,323 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, g/100 g 0,011 0,011 0,016 0,013 Giới hạn lặp lại r (2,8 sr), g/100 g 0,031 0,032 0,044 0,036 5,5 2,4 2,2 2,7 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/100 g 0,016 0,013 0,016 0,015 Giới hạn tái lập R (2,8sR), g/100 g 0,044 0,036 0,045 0,042 7,8 2,6 2,2 3,2 Số phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ Hệ số biến thiên lặp lại, CV, r, % Hệ số biến thiên tái lập, CVR % a a Các giá trị trung bình tính tốn cách sử dụng liệu mẫu trừ ngoại lệ Tất giá trị trung bình thống kê khác tính từ bậc hai trung bình độ lệch bình phương Bảng C.3 – Các kết sữa nguyên chất Mẫu 10 11 Trung bình tổng a 10 11 10 11 11 - Giá trị trung bình, g/100g 3,032 3,287 4,052 4,305 5,503 5,825 4,334 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, g/100 g 0,010 0,017 0,011 0,022 0,014 0,013 0,015 Giới hạn lặp lại r (2,8 sr), g/100 g 0,028 0,047 0,031 0,063 0,040 0,038 0,043 0,9 1,4 0,8 1,5 0,7 0,7 1,0 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/100 g 0,014 0,021 0,013 0,025 0,015 0,025 0,020 Giới hạn tái lập R (2,8sR), g/100 g 0,040 0,059 0,037 0,071 0,043 0,069 0,056 1,3 1,8 0,9 1,7 0,8 1,2 1,3 Thơng số Số phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ Hệ số biến thiên lặp lại, CV, r, % Hệ số biến thiên tái lập, CVR % a Các giá trị trung bình tính toán cách sử dụng liệu mẫu trừ ngoại lệ Tất giá trị trung bình thống kê khác tính từ bậc hai trung bình độ lệch bình phương PHỤ LỤC D (tham khảo) PHÉP THỬ LIÊN PHÒNG QUỐC TẾ TRÊN SỮA CỪU NGUYÊN LIỆU VÀ SỮA DÊ NGUYÊN LIỆU D.1 Yêu cầu chung Phép thử cộng tác quốc tế (xem [8] gồm có 16 phòng thử nghiệm từ nước tham gia thực tháng 11 năm 2006 Phép thử tiến hành sáu cặp mẫu mù lặp lại mẫu sữa Các mẫu sữa cừu chứa hàm lượng chất béo từ 4,5 g/100 g đến 8,5 g/100 g, lại mẫu sữa dê chứa từ 1,5 g/ 100 g đến 5,0 g/ 100 g Các nghiên cứu Associazione Italiana Allevatori, Laboratorio Standard Latte, Maccarase, Italy tổ chức Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) [5] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2)[6] để thu liệu Bảng D.1 D.2 D.2 Các kết thử nghiệm Bảng D.1 – Các kết sữa cừu Mẫu 10 11 Trung bình tổng a 14 12 13 14 12 14 - Giá trị trung bình, g/100g 6,492 4,497 5,554 8,334 7,312 7,877 6,678 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, g/100 g 0,032 0,022 0,013 0,032 0,012 0,028 0,025 Giới hạn lặp lại r (2,8 sr), g/100 g 0,090 0,062 0,038 0,090 0,033 0,078 0,069 1,4 1,4 0,7 1,1 0,4 1,0 1,0 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/100 g 0,044 0,022 0,033 0,042 0,025 0,033 0,034 Giới hạn tái lập R (2,8sR), g/100 g 0,123 0,062 0,091 0,119 0,069 0,092 0,096 1,9 1,4 1,6 1,4 0,9 1,2 1,4 Thông số Số phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ Hệ số biến thiên lặp lại, CV, r, % Hệ số biến thiên tái lập, CVR % a Các giá trị trung bình tính tốn cách sử dụng liệu mẫu trừ ngoại lệ Tất giá trị trung bình thống kê khác tính từ bậc hai trung bình độ lệch bình phương Bảng D.2 – Các kết sữa dê Mẫu Thơng số Trung bình tổng a 12 14 12 14 14 13 - Giá trị trung bình, g/100g 3,017 1,542 4,870 2,200 4,405 3,673 3,285 Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, g/100 g 0,008 0,012 0,011 0,008 0,012 0,010 0,011 Giới hạn lặp lại r (2,8 sr), g/100 g 0,023 0,035 0,031 0,023 0,035 0,029 0,030 0,7 2,3 0,6 1,1 0,8 0,8 0,9 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, g/100 g 0,017 0,018 0,020 0,019 0,023 0,015 0,019 Giới hạn tái lập R (2,8sR), g/100 g 0,048 0,051 0,055 0,053 0,063 0,042 0,052 1,6 3,3 1,1 2,4 1,4 1,1 1,6 Số phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ Hệ số biến thiên lặp lại, CV, r, % Hệ số biến thiên tái lập, CV.R % a Các giá trị trung bình tính tốn cách sử dụng liệu mẫu trừ ngoại lệ Tất giá trị trung bình thống kê khác tính từ bậc hai trung bình độ lệch bình phương THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] TCVN 7150 (ISO 835), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Pipet chia độ [3] TCVN 7153 (ISO 1042), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Bình định mức [4] TCVN 8488 (ISO 4788), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Ống đong chia độ [5] TCVN 6910-1 (ISO 5725-1), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung [6] TCVN 6910-2 (ISO 5725-2), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp đo tiêu chuẩn [7] TCVN 6833 (ISO 7208), Sữa gầy, whey buttermilk - Xác định hàm lượng chất béo - Phương pháp khối lượng (Phương pháp chuẩn) [8] INTERNATIONAL DAIRY FEDERATION Interlaboratory collaborative studies on reference method ISO 1211 | IDF for the determination of the fat content in cow milk, sheep milk and goat milk Bull Int Dairy Fed 2009, (439), pp 1-34 ... kê theo TCVN 691 0-1 (ISO 572 5-1 ) [5] TCVN 691 0-2 (ISO 572 5-2 )[6] để thu liệu Bảng C.1, C.2 C.3 C.2 Các kết phép thử Bảng C.1 – Các kết sữa gầy Mẫu Thơng số Trung bình tổng 12 11 10 11 - Giá trị... kê theo TCVN 691 0-1 (ISO 572 5-1 ) [5] TCVN 691 0-2 (ISO 572 5-2 )[6] để thu liệu Bảng D.1 D.2 D.2 Các kết thử nghiệm Bảng D.1 – Các kết sữa cừu Mẫu 10 11 Trung bình tổng a 14 12 13 14 12 14 - Giá trị... [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] TCVN 7150 (ISO 835), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Pipet chia độ [3] TCVN 7153 (ISO 1042), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Bình