Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6187-1:1996

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6187-1:1996 quy định phương pháp phát hiện và đếm vi khuẩn coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt và escherichia coli giả định có trong nước sau khi lọc qua màng, tiếp theo nuôi cấy trong môi trường lactoza phân lập (xem ISO 7704) và tính toán số lượng của chúng có trong mẫu.

tCvn Tiªu chn ViƯt Nam TCVN 6187-1 : 1996 (ISO 9308-1: 1990) Chất lợng nớc - Phát đếm vi khuẩn coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt escherichia coli giả định Phần 1: Phơng pháp màng lọc Water quality - Detection and enumeration of coliform organisms thermotolerant coliform organisms and presumptive escherichiacoli Part 1: Membrane filtration method Hµ Nội - 1996 TCVN 6187-1 : 1996 Lời nói đầu TCVN 6187-1: 1996 hoàn toàn tơng đơng với ISO 93081: 1990 (E) TCVN 6187-1: 1996 TiÓu ban kü thuËt N−íc tinh läc TCVN/TC/F9/SC1 thc Ban kü tht tiªu chn TCVN/TC/F9 Đồ uống biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lờng - Chất lợng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành TCVN 6187-1 : 1996 TIêuchuẩn vIệt nam tcvn 6187-1 : 1996 Chất lợng nớc - Phát đếm vi khuẩn coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt escherichia coli giả định Phần 1: Phơng pháp màng lọc Water quality - Detection and enumeration of coliform organisms thermotolerant coliform organisms and presumptive escherichiacoli Part 1: Membrane filtration method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phơng pháp phát đếm vi khuẩn coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt escherichia coli giả định có nớc sau lọc qua màng, nuôi cấy môi trờng lactoza phân lập (xem ISO 7704) tính toán số lợng chúng có mẫu Phơng pháp áp dụng cho tất loại nớc trừ nớc có chất lơ lủng gây ảnh hởng việc lọc có nhiều vi sinh vật khác gây ảnh hởng việc sinh trởng Việc lựa chọn phép thử dùng để phát xácnhận vi khuẩn nhóm coliform, kể E.coli đợc xem nh phần dÃy liên tiếp Qui mô việc xác nhận với mẫu thử riêng biệt phần tuỳ thuộc vào chất mẫu nớc, phần khác tuỳ thuộc vào mục đích việc xét nghiệm Trên thực tế việc phát E.coli giả định nêu 3.3 thông thờng để cung cấp chứng bị nhiễm phân TCVN 6187-1 : 1996 Tiªu chuÈn trÝch dÉn - ISO 3696:1987 Nớc dùng phòng thí nghiệm phân tích - Yêu cầu kỹ thuật phơng pháp thử - ISO 5667-1: 1980 Chất lợng nớc- Lấy mẫu Phần 1: Hớng dẫn phơng án lấy mẫu - TCVN 5992: 1995 (ISO 5667-2: 1982 ChÊt l−ỵng n−íc - LÊy mÉu - H−íng dÉn c¸c kü tht lÊy mÉu) - TCVN 5993: 1995 (ISO 5667-3: 1985) ChÊt l−ỵng n−íc - Lấy mẫu Hớng dẫn bảo quản xử lý mẫu thư - ISO 6887:1983 ChÊt l−ỵng n−íc - Vi sinh vật học Hớng dẫn chung chuẩn bị dung dịch pha loÃng để kiểm tra vi sinh vật - ISO 7704:1985 Chất lợng nớc- Đánh giá màng lọc dùng để phân tích vi sinh - ISO 8199:1980 Chất lợng nớc- Hớng dẫn chung cách đếm vi sinh vật cách nuôi cấy Định nghĩa Với mục đích tiêu chuẩn này, áp dụng định nghĩa sau: 3.1 Vi khuÈn coliform - c¸c sinh vËt (vi khuÈn) cã khả tạo thành khuẩn lạc 350C 0,50C 370C 0,50C điều kiện hiếu khí mét m«i tr−êng lactoza nu«i cÊy chän läc kÌm theo việc tạo thành axit (và andehyt) vòng 24 3.2 Các vi khuẩn coliform chịu nhiệt: vi khuẩn coliform nh đà nêu mục 3.1 có đặc tính lên men vòng 24 h, 440C ± 0,250C , hc ë 44,50C ± 0,250C Chú thíchDo việc sinh khí phát thấy màng lọc, nên cácvi khuẩn thu đợc mànglọc không thiết giống nh phát phơng pháp nhiều ống { có số xác xuất cao (MPN)} 3.3 escherichia coli (E.coli giả định): vi khuẩn coliform chịu nhiệt nh mô tả 3.2 chúng cịng sinh khÝ tõ lactoza (vµ manitol) cịng nh− sinh indol từ tryptophan vòng 24 440C ± 0,250C , hc ë 44,50C ± 0,250C Nguyên tắc TCVN 6187-1 : 1996 Lọc lợng mẫu thử qua màng lọc để giữ lại vi khuẩn, đặt màng lọc lên môi trờng nuôi cấy thạch lactoza chọn lọc miếng đệm hấp thụ bÃo hoà môi trờng lỏng chọn lọc chứa lactoza Nuôi cấy màng lọc 24 nhiệt độ 350C 370C để phát vi khuẩn coliform, 440C để phát vi khuẩn coliform chịu nhiệt Đếm trực tiếp khuẩn lạc đặc trng đợc hình thành màng; Cấy số khuẩn lạc để thử nghiệm xác nhận việc sinh khí indol Tính toán số vi khuẩn coliform, coliform chịu nhiệt E.coli giả định có 100 ml mẫu Môi trờng nuôi cấy, pha loÃng thuốc thử 5.1 Các vật liệu Sử dụng thành phần với chất lợng đồng hoá chất thuộc loại phân tích để chuẩn bị môi trờng nuôi cấy thuốc thử theo hớng dẫn phụ lục B Thông tin bảo quản xem ISO 3199 Có thể thay cách dùng môi trờng hoàn toàn khô phải tuân thủ nghiêm ngặt hớng dẫn nhà sản xuất Để chuẩn bị môi trờng, dùng n−íc cÊt b»ng thiÕt bÞ cÊt n−íc b»ng thủ tinh nớc đà khử ion không chứa chất có thĨ øc chÕ sù sinh tr−ëng cđa c¸c vi sinh vật dới điều kiện thử theo ISO 3696 5.2 Dịch pha loÃng Nên dùng dung dịch phụ lục B để pha loÃng mẫu.Chuẩn bị dịch pha lo·ng cÇn theo h−íng dÉn ë phơ lơc B 5.3 Môi trờng phân lập Dùng môi trờng sau dạng rắn với thạch canh thang dùng để bÃo hoà chất đệm hấp thụ Hớng dẫn để chuẩn bị môi trờng theo phụ lục B 5.3.1 Th¹ch lactoza TTC víi Tegitol 5.3.2 Th¹ch lactoza víi Tegitol 5.3.3 Canh thang Teepol lµm giµu mµng 5.3.4 Canh thang lauryl sufat mµng TCVN 6187-1 : 1996 5.3.5 Môi trờng Endo 5.3.6 Thạch LES Endo 5.3.7 Môi trờng mFC 5.4 Môi trờng khẳng định Dùng môi trờng sau 5.4.1 Môi trờng để kiĨm tra sù sinh khÝ N−íc pepton lactoza 5.4.2 M«i tr−êng ®Ĩ kiĨm tra sù sinh indol N−íc trypton 5.4.3 Môi trờng ống đơn để kiểm tra sinh khí indol Canh thang manitol lauryl trypto víi tryptophan 5.5 Thuèc thư 5.5.1 Thc thư kovac ®Ĩ thư indol 5.5.2 Thc thư oxidaza dïng cho phÐp thư oxidaza ThiÕt bÞ Thiết bị phòng thí nghiệm vi sinh thông thờng gồm: 6.1 Tủ sấy để khử trùng khô nồi hấp áp lực Trừ thiết bị đà đợc vô trùng sẵn, dụng cụ thuỷ tinh trang bị khác cần phải khử trùng theo dẫn đà nêu ISO 8199 6.2 Tủ ấm nồi cách thuỷ kiểm tra đợc nhiệt độ 350C 0,50C ë 370C ± 0,50C 6.3 Tđ Êm hc nåi cách thuỷ kiểm tra đợc nhiệt độ 440C 0,250C hc 44,50C ± 0,250C 6.4 pH mÐt 6.5 Dơng läc mµng TCVN 6187-1 : 1996 6.6 Màng lọc, thông thờng có đờng kính 47 mm 50 mm, có đặc tính lọc tơng đơng với lỗ có đờng kính danh định 0,45 àm, cha đợc khử trùng phải khử trùng theo hớng dẫn nhà sản xuất 6.7 Kẹp để giữ màng lọc Lấy mẫu Lấy mẫu chuyển phòng thí nghiÖm theo ISO 8199, ISO 5667-1, TCVN 5992-1995 (ISO 56672) TCVN 5993-1995 (ISO 5667-3) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu thử, lọc cấy vào môi trờng Để chuẩn bị mẫu, pha loÃng, lọc môi trờng cấy phân lập theo hớng dẫn nêu ISO 8199 ISO 6887 8.1.1 Đối với vi khuẩn coliform , tiến hành lọc lợng mẫu dịch pha loÃng qua màng lọc Đặt vào môi trờng đà chọn nhng phải đảm bảo không tạo thành bọt không khí dới màng 8.1.2 Đối với vi khuẩn coliform chịu nhiệt, tiến hành lọc lợng mẫu dịch pha loÃng qua màng lọc Đặt vào môi trờng đà chọn nhng phải đảm bảo không tạo thành bọt không khí dới màng Chú thích - Thể tích mẫu lọc đợc phải giống nh thể tích mẫu 8.1.1 8.2 Nuôi màng lọc 8.2.1 Đối với vi khuẩn coliform, nuôi màng lọc từ 18 đến 24 350C 0,50C 370C ± 0,50C 8.2.2 §èi víi vi khn coliform chịu nhiệt, nuôi màng lọc từ 18 đến 24 giê ë 440C ± 0,250C hc 44,50C ± 0,250C Chó thÝch 3) Nãi chung cïng mét m«i tr−êng cã thể dùng đẻ khử vi khuẩn coliform lẫn vi khuẩn coliform chịu nhiệt nhng dùng môi trờng m FC 440C dùng môi trờng Endo LES Endo ë 350C hc 370C; TCVN 6187-1 : 1996 4) Giai đoạn nuôi đầu nên giữ nhiệt độ thấp 300C để làm vi khuẩn cố sống lại, đặc biệt việc xét nghiệm nớc ng 8.3 KiĨm tra mµng läc 8.3.1 Vi khn coliform Kiểm tra màng lọc đếm tất khuẩn lạc vi khuẩn coliform giả định, không kể kích thớc thấy đợc sau ủ 350C 370C với đặc tính sau đây: - Trên môi trờng thạch TTC lactoza với Tegitol (5.3.1): màu vàng, da cam hoặc đỏ gạch với vòng sáng trung tâm màu vàng môi trờng dới màng; -Trên môi trờng thạch lactoza với Tegitol (5.3.2): với vòng sáng trung tâm màu vàng môi trờng dới màng; - Trên màng canh thang Teepol đợc làm giàu (5.3.3): màu vàng lan rộng màng lọc; - Trên màng canh thang sufat Lauryl (5.3.4): màu vàng lan rộng màng lọc; - Trên thạch Endo canh thang (5.3.5): màu đỏ sẫm với ánh kim loại xanh vàng; - Trên thạch LES Endo (5.3.6): màu đỏ sẫm với ánh kim loại xanh vàng; 8.3.2 Vi khuẩn coliform chịu nhiệt Tất bào tử sau nu«i ë 440C cã biĨu hiƯn cïng mét đặc tính bào tử có màu xanh nh mô tả 8.3.1 với môi trờng mFC (5.3.7) đợc coi vi khuẩn coliform giả định chịu nhiệt 8.4 Thử khẳng định Điều quan trọng cần lu ý việc đếm bào tử màng lọc 350C 370C 440C kết coliform giả định Khi việc sinh khí không phát đợc, có giả định khác vi khuẩn tạo thành khuẩn lạc tạo khí từ lactoza Thí dụ nớc thô nớc đà đợc xử lý sơ điều đủ nhng nớc uống trờng hợp khác, điều quan trọng tiến hành thử khẳng định, tốt hết chủng cấy khiết 8.4.1 Cấy truyền, nuôi kiểm tra 8.4.1.1 Vi khuẩn coliform Để khẳng định kết quả, cấy truyền khuẩn lạc (8.3.1) số đại diện chúng vào ống nớc pepton lactoza (5.4.1) nuôi 350C hc 370C 48 giê, viƯc sinh khÝ thêi gian nµy chøng tá cã vi khuÈn coliform TCVN 6187-1 : 1996 8.4.1.2 Vi khn coliform chÞu nhiƯt E Coli giả định Để xác định vi khuẩn coliform chịu nhiệt E Coli giả định màng đợc nuôi 440C 350C 370C, cấy truyền khuẩn lạc (8.3.2) số đại diện chúng vào ống nớc pepton lactoza nuôi 440C 24 giê ViƯc sinh khÝ n−íc pepton lactoza khẳng định có mặt vi khuẩn coliform chịu nhiệt việc tạo nên màu đỏ bề mặt môi trờng nuôi cấy nớc trypton sau thêm 0,2 ml đến 0,3 ml thuốc thử Kovac (5.5.1) khẳng định có mặt E Coli giả định Chú thích 5) ViƯc sư dơng canh thang manitol trypto lauryl cã tryptophan cho phép phát triển sinh khí indol ống đơn; 6) Việc phát E Coli giả định đợc xem nh chứng chắn ô nhiễm phân; 7) Khi cấy truyền khuẩn lạc màng vào ống môi trờng khẳng định, tốt nên cấy lên đĩa môi trờng thạch dinh dỡng để thử oxidaza 8.5 Thử oxidaza Một vài chđng vi khn t×m thÊy n−íc cã thĨ phï hợp với định nghĩa vi khuẩn coliform hầu hết khÝa c¹nh, nh−ng chóng chØ cã thĨ sinh khÝ tõ lactoza ë nhiƯt ®é d−íi 370C Do ®ã chóng cho kết thử âm tính phép thử khẳng định chuẩn vi khuẩn coliform diện chúng nớc thờng không đáng kể Các chủng aeromonas xuất cách tự nhiên n−íc sinh tr−ëng tèt nhÊt ë nhiƯt ®é tõ 300C đến 350C nhng không sinh axit khÝ tõ lactoza ë 370C Cã thĨ nhËn biÕt chóng nhóm vi khuẩn coliform phản ứng oxidaza dơng tính 8.5.1 Tiến hành thử oxidaza cách cấy truyền khiết từ vi khuẩn lên men lactoza, phát triển môi trờng thạch dinh dỡng nh sau: cho ®Õn giät thc thư oxidaza võa míi chn bị lên giấy lọc đĩa Petri que cấy thuỷ tinh, tẩm que cấy có dây bạch kim (không phải loại nicrom), dàn mỏng mẫu cÊy lªn giÊy läc (xem chó thÝch 7) sù xt màu xanh thẫm vòng 10 giây thể phản ứng dơng tính Chú thích _ Trong trờng hợp sử dụng thuốc thử oxidaza cần tiến hành kiểm tra thử cách cấy vi khuẩn đà biết phản ứng dơng tính (pseudomonas aeruginosa) phản øng ©m tÝnh (E Coli) TCVN 6187-1 : 1996 Biểu thị kết Từ số khuẩn lạc đặc trng đếm đợc màng lọc có tính đến kết phép thử khẳng định đà nhận đợc, tÝnh sè vi khn coliform, vi khn coliform chÞu nhiƯt E Coli giả định có 100 ml mẫu theo ISO 8199, điều 8.4 theo công thức: C= Aì N ìVs ì F BìV1 C số bào tử đợc khẳng định, tính 100 ml; A số bào tử thực đợc khẳng định; B số bào tử đợc cấy truyền để thử khẳng định; N số bào tử đặc trng màng (8.3.1 vµ 8.3.2); V1 lµ thĨ tÝch thư cđa mÉu nớc đợc lọc (8.1 8.1.2); Vs thể tích chuẩn để tính kết (100 ml); F hệ số pha loÃng 10 Báo cáo kết Báo cáo kết cần bao gồm thông tin sau: a) tham khảo tiêu chuẩn này; b) tất chi tiết cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu; c) kỹ thuật môi trờng phân lập đà sử dụng; d) môi trờng phép thử xác nhận đà sử dụng; e) thời gian, nhiệt độ điều kiện nuôi cấy; f) kết biểu thị theo điều 9; g) thông tin khác liên quan đến phơng pháp 10 TCVN 6187-1 : 1996 Phơ lơc A (Tham kh¶o) Thông tin sâu vi sinh học liên quan tíi kiĨm tra n−íc ®èi víi nhãm vi khn coliform Đối với mục đích kiểm tra nớc hàng ngày, nhóm vi khuẩn coliform đợc mô tả thuật ngữ vi sinh chung, không mang tính phân loại học, nh sau: Các vi khuẩn coliform vi khuẩn hình que (dạng thẳng), gram âm, bào tử, oxidaza âm tính; chúng có khả sinh trởng hiếu khí kị khí không bắt buộc có mặt muối mật (hoặc yếu tố tác động bề mặt khác có đặc tính ức chế sinh trởng tơng tự) Chúng lên men lactoza (và mannit) kèm theo tạo thành axit, khí, andehyt vòng 48 giờ, nuôi cấy nhiệt độ từ 350C tới 370C Các vi khuẩn coliform chịu nhiệt vi khuẩn coliform cho thấy có khả lên men đặc tính sinh hoá nuôi cấy nhiệt độ từ 440C đến 44,50C E coli giả định vi khuẩn coliform chịu nhiệt, chúng có khả sinh indol từ tryptophan E Coli đợc xem E coli giả định, chúng cho kết dơng tính phép thử metyl đỏ loại cacboxyl axit glutamic, nhng chúng khả tạo metyl axetyl cacbinol, sư dơng xitrat nh− ngn c¸cbon nhÊt, hc sinh tr−ëng canh thang kali xyanua (KCN) 11 TCVN 6187-1 : 1996 Phơ lơc B (tham kh¶o) Môi trờng nuôi cấy, thuốc thử dịch pha loÃng Môi trờng phân lập Thạch lactoza TTC có Tegitol Môi trờng Lactoza 20 g Pepton 10 g Cao men 6g Canh thÞt 5g Bromothymol xanh 0,05 g Thạch từ 16 đến 25 g 1) Nớc cất 1.000 ml 1) Phụ thuộc vào độ bền gel thạch Hoà tan thành phần nớc sôi Nếu cần thiÕt ®iỊu chØnh pH cho sau khư trïng có pH 7,2 0,2 Cho môi trờng vào chai 100 ml khử trùng nồi hấp áp lực ë 1210C ± 10C 15 Dung dÞch TTC 2, 3, - Tryphenol-tetrazo clorua (TTC) 0,05 g N−íc cÊt 100 ml Hoµ tan TTC mét Ýt n−íc thêm nớc đến 100 ml Khử trùng cách lọc qua màng lọc có kích thớc lỗ < 0,2 àm Dung dịch Tegitol Tegitol 0,2 g N−íc cÊt 100 ml Hoµ tan Tegitol mét nớc thêm nớc đến 100 ml Khử trùng nåi hÊp ¸p lùc ë 1210C ± 10C 15 phút 12 TCVN 6187-1 : 1996 Môi trờng hoàn chỉnh Môi trờng 100 ml Dung dịch TTC ml Dung dịch Tegitol ml Làm tan môi trờng làm nguội xuống 450C đến 500C Thêm dung dịch TTC Tegitol Khuấy kỹ nhng tránh để tạo bọt sau lần thêm Cho vào đĩa petri lớp môi trờng dày khoảng mm Nếu không dùng ngay, bảo quản 40C chỗ tối nhng không 10 ngày Thạch lactoza có Tegitol Pepton 5g Cao men 3g Lactoza 10 g Tegitol 0,1 ml 0,025 g Bromothymol xanh 15 g Th¹ch N−íc cất 1.000 ml Hoà tan thành phần nớc Cho vào chai 100 ml hấp áp lực 1210C ± 10C 15 pH ci cïng ph¶i 6,9 0,2 Để sử dụng, làm tan cho vào đĩa petri lớp dày khoảng mm Bảo quản 40C chỗ tối nhng không 10 ngày Canh thang Teepol làm giàu màng Pepton 40 g Cao men 6g Lactoza 30 g Phenol ®á (0,4% khối lợng/khối lợng) dung dịch nớc 50 ml Teepol 610 ml 1.000 ml Nớc cất Thêm pepton cao men vào nớc dùng nóng để hoà tan Thêm lactoza, phenol đỏ sau Teepol, khuấy nhẹ để tránh tạo bọt pH sau khử trùng phải từ 7,4 đến 7,5, để đạt đợc pH điều chỉnh pH trớc khử trùng 7,6 Cho vào chai có nút xoáy hấp nồi hấp áp lực 1100C đến 1150C 10 13 TCVN 6187-1 : 1996 Mµng canh thang sunfat lauryl Pepton 40 g Cao men 6g Lactoza 30 g Phenol đỏ (0,4% khối lợng/khối lợng) nớc 50 ml Natri lauryl sunfat rÊt tinh khiÕt 1g 1000 ml Nớc cất Cho thành phần vào nớc khuấy nhẹ để tránh tạo bọt pH cuối phải 7,4 ®Õn 7,5, nÕu cÇn cã thĨ ®iỊu chØnh pH ®Õn khoảng 7,6 trớc khử trùng để đạt đợc độ pH nói trên, phân phối vào chai có nút xoáy hấp áp lực 1100C đến 1150C 10 phút Môi trờng Endo Cảnh báo - Fuchsin kiềm có thĨ g©y ung th− Tryptoza 10 g Thio pepton 5g Trypticase (casiton hc trypton) 5g Cao men 1,5 g Lactoza 12,5 g Natri clorua 5g Dikali hydro photphat 4,375 g Kali dihydro photphat 1,375 g Natri lauryl sunfat 0,05 g Natri desoxycolat 0,1 g Natri sunfat 2,1 g Fuchsin nÒn 1,05 g Nớc cất 1000 ml Hoà tan thành phÇn n−íc cã chøa 20 ml cån (etanola) 95% (thể tích) Không hấp áp lực nhng phải đun đến sôi Lấy làm nguội đến 450C - 500C pH cuối phải 7,2 0,2 Bảo quản môi trờng 40C chỗ tối vứt bỏ môi trờng không sử dụng sau ngày Chú thích - Có thể làm đặc môi trờng cách thêm 12 g/l - 15 g/l thạch trớc đun sôi 14 TCVN 6187-1 : 1996 Thạch LES Endo Cảnh báo - Fuchsin gây ung th− Cao men 1,2 g Trypicase (casiton hc tryptone) 3,7 g Thiopepton 3,7 g Tryptoza 7,5 g Lactoza 9,4 g Dikali hydro photphat 3,3 g Natri dihydro photphat 1,0 g Natri clorua 3,7 g Natri lauryl sunfat 0,1 g Natri sunphit 0,05 g Fuchsin nỊn 1,6 g Th¹ch 0,8 g Nớc cất 15 g 1.000 ml Hoà tan thành phÇn n−íc cã chøa 20 ml etanol 95% (nång độ thể tích) Không hấp nồi hấp áp lực nhng phải đun đến sôi, làm nguội đến 450C đến 500C cho ml vào đĩa petri nhỏ (đờng kính 60 mm) pH cuối phải 7,2 0,2 Bảo quản đĩa 40C chỗ tối loại bỏ môi trờng không dùng sau hai tuần Tránh ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp Môi trờng mFC Tryptoza 10,0 g Proteose pepton No.3 hc poly-pepton 5,0 g Cao men 3,0 g Natri clorua 5,0 g Lactoza 12,5 g Muối mật No.3 hỗn hợp muối mật 1,5 g Anilin xanh 0,1 g N−íc cÊt 1000 ml Hydrat hoá lại nớc cất đà chứa 10 ml axit rosolic 1% NaOH nồng độ 0,2 mol/l Đun nóng môi trờng đến điểm sôi Lấy làm nguội xuống 450C đến 500C Không khử trùng nồi hấp áp lực pH cuối phải 7,4 0,2 Bảo quản môi trờng cuối nhiệt độ từ 20C đến 100C đổ môi trờng kh«ng sư dơng sau 96 giê Chó thÝch 15 TCVN 6187-1 : 1996 10) Có thể làm đặc môi trờng cách thêm 1,2% đến 1,5% thạch trớc đun sôi; 11) Axit rosolic phân huỷ khử trùng nồi áp lực Dung dịch gốc cần phải bảo quản chỗ tối từ 20C đến 100C loại bỏ sau hai tuân, loại bỏ sớm màu dung dịch chuyển từ màu đỏ sẫm đến nâu đục Môi trờng khẳng định Nớc pepton lactoza (®Ĩ kiĨm tra sù sinh khÝ) Pepton 10 g Natri clorua 5g Lactoza 10 g Phenol đỏ (0,4% khối lợng/khối lợng) dung dịch nớc (hoặc thị Andrad) 2,5 ml (10 ml) 1000 ml Nớc cất Hoà tan thành phần nớc điều chỉnh pH đến 7,5 0,2 Thêm thị phenol đỏ lấy ml vào ống nghiệm chứa ống lên men lộn ngợc (Durham) Có thể làm cách khác cách điều chỉnh pH từ 6,8 đến 7,0 thêm thị Andrad Hấp nåi ¸p lùc ë 1100C 10 Cã thể hấp ngày liên tục, ngày 20 phút Kiểm tra mức độ khử trùng cách ủ nhiệt độ 370C 24 Điều quan trọng phải đảm bảo sau hấp áp lực trớc sử dụng, ống Durham phải đợc chứa đầy hoàn toàn môi trờng Nếu không nhận đợc việc sinh khí kết phản ứng dơng tính giả Chất thị Andrad Chất thị đợc chuẩn bị cách hoà tan 0,5 g axit fuchsin 100 ml n−íc cÊt Thªm 17 ml dung dịch natri hydroxit (1 mol/l) để nhiệt độ phòng qua đêm Sáng ngày hôm sau dung dịch phải chuyển thành màu vàng nhạt Nếu dung dịch có màu nâu, thêm dung dịch natri hydroxit lại để yên Dung dịch có tính kiềm mạnh phải điều chỉnh pH môi trờng thờng xuyên để có pH khoảng 6,8 Nớc trypton (để thử phản ứng sinh indol) Lợng pepton định cho kết thích hợp phép thử 350C 370C lại không đủ cho phép thử indol 440C Lợng tryptol thích hợp nên dùng nh sau 16 Trypton 20 g Natri clorua 5g N−íc cÊt 1000 ml TCVN 6187-1 : 1996 Hoà tan thành phần nớc ®iỊu chØnh pH ®Õn 7,5 LÊy ml vµ hÊp ë nåi hÊp ¸p lùc ë 1150C 10 Chó thÝch 12 - ViƯc thªm 0,1% (thĨ tÝch) D DL tryptophan cải thiện đợc đặc tính cđa m«i tr−êng Canh thang manitol Lauryl trytoza cã tryptophan (Môi trờng ống đơn để kiểm tra sinh khí vµ indol) Tryptoza 20 g Manitol 5g Natri clorua 5g Dikali hydro photphat 2,75 g Kali dihydro photphat 2,75 g Natri Lauryl sunfat 0,1 g L (-) tryptophan 0,2 g N−íc cÊt 1000 ml Thªm trypto, natri clorua, manitol, photphat tryptophan vào nớc đun nóng để hoà tan Thêm natri lauryl sunfat khuấy nhẹ để tránh tạo bọt Điều chỉnh pH đến 6,8 0,2 Lấy ml vào ống chứa ống lên mên lật ngợc phÝa (durham) HÊp ¸p lùc ë 1150C 10 Thc thư Thc thư Kovac ®Ĩ thư indol p - dimetylaminbezandehyt 5g Amyl alcol (không chứa gốc hữu c¬) 75 ml Axit clohydric (p = 1,18 g/ml) 25 ml Hoà tan andehyt amyl alcol Cẩn thận thêm axit đậm đặc vào Bảo quản 40C tránh ánh sáng Chú thích 13 - Thuốc thử phải có màu vàng nhạt đến màu nâu; số mẫu amyl alcol không phù hợp cho màu tối với andehyt Thuốc thö oxidaza Tetrametyl - p - phenylenediamin hydro clorua 0,1 g Nớc cất 10 ml Thuốc thử không bền nên chuẩn bị lợng nhỏ trớc sử dụng theo yêu cầu Dịch pha loÃng 17 TCVN 6187-1 : 1996 DÞch pha lo·ng pepton (0,1%) Pepton 1,0 g Nớc cất 1000 ml Hoà tan pepton khoảng 950 ml nớc Điều chỉnh pH dung dịch dung dịch natri hydroxit axit clohydric (1 mol/l) cho sau khử trùng pH phải 7,0 0,1 Thêm nớc đến 1000 ml, phân chia theo thể tích thích hợp hấp áp lực 1210C 10C 15 phút Dung dịch Ringer - nồng độ phÇn t− Natri clorua 2,25 g Kali clorua 0,105 g Canxi clorua khan 0,12 g Natri bicacbonat 0,05 g N−íc cất 1000 ml Hoà tan thành phần phân chia theo thể tích thích hợp Khử trùng c¸ch hÊp ë 1210C ± 10C 15 pH sau khử trùng phải 7,0 0,1 Dung dịch đệm photphat Kali dihydro photphat 42,5 mg Magie clorua 190 mg N−íc cÊt 1000 ml Chn bÞ a) dung dịch photphat Hoà tan 34 g photphat 500 ml nớc cất Điều chỉnh pH đến 7,2 0,5 dung dịch natri hydroxit (1 mol/l) thêm nớc cất đến 1000 ml; b) dung dịch magie clorua Hoà tan 38 g magie clorua 1000 ml n−íc cÊt Dung dịch cuối 18 TCVN 6187-1 : 1996 Để sử dụng, thêm 1,25 ml dung dịch photphat 5,0 ml dung dịch magie clorua vào 1000 ml nớc cất Phân chia theo thể tích thích hợp khử trùng b»ng c¸ch hÊp ¸p lùc ë 1210C ± 10C 15 phút pH sau khử trùng phải 7,0 0,1 Thạch dinh dỡng Cao thịt 1,0 g Pepton 1,0 g Natri clorua 5g Thạch 15 g Cho thành phần vào nớc đà đun nóng để hoà tan §iỊu chØnh pH vỊ kho¶ng 8,2 b»ng natri hydroxit (1 mol/l) đun sôi 10 phút Lọc ®iỊu chØnh pH tõ 7,2 ®Õn 7,4 Cho vµo chai dung tích 100 ml hấp áp lực 1210C ± 10C 15 19 ... TCVN/ TC/F9 Đồ uống biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lờng - Chất lợng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành TCVN 6187-1 : 1996 TIêuchuẩn vIệt nam tcvn 6187-1 : 1996 Chất lợng nớc - Phát.. .TCVN 6187-1 : 1996 Lời nói đầu TCVN 6187-1: 1996 hoàn toàn tơng đơng với ISO 93081: 1990 (E) TCVN 6187-1: 1996 TiĨu ban kü tht N−íc tinh läc TCVN/ TC/F9/SC1 thuộc Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/ TC/F9... thí nghiệm theo ISO 8199, ISO 5667-1, TCVN 5992-1995 (ISO 56672) vµ TCVN 5993-1995 (ISO 5667-3) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu thử, lọc cấy vào môi trờng Để chuẩn bị mẫu, pha loãng, lọc môi trờng