Khảo sát điều kiện tách chiết và hoạt tính kháng oxy hóa, kháng khuẩn của hợp chất polyphenol từ vỏ thân cây quao nước

Bài viết nghiên cứu tách chiết hợp chất polyphenol từ vỏ thân cây quao nước thích hợp là dung môi ethanol 90%, tỉ lệ nguyên liệu:dung môi là 1:12 (g/mL), nhiệt độ 60 °C, thời gian 9 giờ. Cao chiết polyphenol thể hiện hoạt tính kháng oxy hóa khá cao với giá trị IC50 là 81,82 mg/mL, khả năng kháng Escherichia coli và Vibrio cholerae với đường kính vòng vô khuẩn là 2,1 và 1,8 cm ở nồng độ cao chiết là 90 mg/mL.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH TẠP CHÍ KHOA HỌC HO CHI MINH CITY UNIVERSITY OF EDUCATION JOURNAL OF SCIENCE KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ CÔNG NGHỆ NATURAL SCIENCES AND TECHNOLOGY ISSN: 1859-3100 Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 Vol 14, No 12 (2017): 181-193 Email: tapchikhoahoc@hcmue.edu.vn; Website: http://tckh.hcmue.edu.vn KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN TÁCH CHIẾT VÀ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HĨA, KHÁNG KHUẨN CỦA HỢP CHẤT POLYPHENOL TỪ VỎ THÂN CÂY QUAO NƯỚC (Dolichandrone spathacea) Phạm Ngọc Khôi 1*, Nguyễn Thị Mỹ Duyên Bộ môn Mô Phôi - Di truyền – Trường Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch Trường Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh Ngày nhận bài: 27-01-2017; ngày nhận sửa: 18-06-2017; ngày duyệt đăng: 20-12-2017 TÓM TẮT Điều kiện tách chiết hợp chất polyphenol từ vỏ thân quao nước thích hợp dung mơi ethanol 90%, tỉ lệ nguyên liệu:dung môi 1:12 (g/mL), nhiệt độ 60 °C, thời gian Cao chiết polyphenol thể hoạt tính kháng oxy hóa cao với giá trị IC50 81,82 mg/mL, khả kháng Escherichia coli Vibrio cholerae với đường kính vòng vơ khuẩn 2,1 1,8 cm nồng độ cao chiết 90 mg/mL Từ khóa: quao nước, kháng khuẩn, kháng oxy hóa, IC50 ABSTRACT Consider of conditioning agent extracted and antibacterial, antioxidant activities of polyphenol from mangrove trumpet tree (Dolichandrone spathacea) The results showed that ethanol (90%); sample:ethanol rate (1:12, g/mL); temperature (60 °C); time (9 hours) to extract efficiency mangrove trumpet tree is highest Moreover, mangrove trumpet tree extracts evaluated the ability to capture free radicals DPPH of this extract (IC50 = 81.82 mg/mL), inhibited the expression of Escherichia coli (2.1 cm) and Vibrio cholerae (1.8 cm) at 90 mg/mL Keywords: Mangrove trumpet tree, antibacterial, antioxidant, IC50 Mở đầu Cây quao nước (Dolichandrone spathacea) loài thực vật họ Núc nác (Bignoniaceae), phân bố vùng nhiệt đới châu Á, mọc rải rác Campuchia, Malaysia, Thái Lan, Việt Nam… Cây quao nước dược liệu quen thuộc người Việt Nam sử dụng thuốc cổ truyền trị bệnh gan mật Theo Y học cổ truyền, dân gian thường dùng quao nước, phối hợp với ích mẫu, ngải cứu, cỏ gấu, muồng hòe để làm thuốc điều kinh, bổ huyết Lá quao nước dùng cho phụ nữ sau sinh uống vào để khoẻ người ăn ngon cơm Vỏ dùng làm thuốc nhuận gan Lá dùng trị hen suyễn Vỏ rễ dùng làm thuốc tiêu độc Người ta dùng rễ quao nước phối hợp với rễ ô rô chế thành * Email: pnkhoi@pnt.edu.vn 181 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 biệt dược ô rô - quao nước làm thuốc giải độc nhuận gan Thường dùng vỏ cây, rễ sắc nước để uống, dùng phận nấu thành cao lỏng để dùng [1, 2] Tuy nhiên, chưa có đề tài nghiên cứu nói đến tác dụng dược lí vỏ, thân, lá, rễ quao nước thấy nghiên cứu cho biết hạt quao nước có tác dụng kháng khuẩn chống co thắt [1, 2, 3, 4, 5] Vì thế, mục tiêu nghiên cứu nhằm khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến q trình trích li hàm lượng polyphenol để thu hàm lượng polyphenol cao trích từ vỏ thân quao nước (Dolichandrone spathacea) nhằm sử dụng việc kháng oxy hóa kháng vi khuẩn có hại Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nghiên cứu thực xuyên suốt từ tháng 09/2016 đến tháng 01/2017 Phòng Thí nghiệm Cơng nghệ Sinh học - Bộ môn Công nghệ Sinh học - Khoa Khoa học Ứng dụng - Trường Đại học Tôn Đức Thắng Vỏ thân quao nước thu hái vào tháng 07/2016, xã Cẩm Sơn, thị xã Cai Lậy, tỉnh Tiền Giang Chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus, Shigella spp., Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium difficile Vibrio cholerae Phòng Vi sinh - Khoa Xét nghiệm - Bệnh viện Từ Dũ TPHCM hỗ trợ nghiên cứu 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Xử lí nguyên liệu Vỏ thân quao nước thu hái, rửa sạch, sấy khô hay phơi đến trọng lượng không đổi nhiệt độ 40 °C xay nhuyễn mẫu máy xay thơng thường đến mẫu thành bột mịn, sau đem chia khối lượng cho mẫu trích li Mục đích việc xay nhuyễn mẫu làm tăng diện tích tiếp xúc ngun liệu dung mơi, tăng khả khuếch tán thẩm thấu chất vào dung mơi làm tăng khả trích li mẫu [6] 2.2.2 Xác định độ tinh khiết dược liệu 2.2.2.1 Độ ẩm Xác định khối lượng dược liệu trước sau sấy khô đến khối lượng khơng đổi Từ suy phần trăm khối lượng nước 2.2.2.2 Độ tro Xác định tro toàn phần xác định độ tro lại sau đốt cháy dược liệu nung nóng 500 °C đến khối lượng không đổi Đốt cháy dược liệu bếp điện khơng bốc khói, cho vào lò nung đến vơ hóa hồn tồn Xác định tro không tan HCl lượng cắn khơng tan lại tro tồn phần sau hòa tan tro tồn phần HCl Tiến hành với chén nung xác định tro toàn phần, thêm acid đun bếp cho sôi lọc qua giấy lọc khơng tro Phần giấy lọc sau làm khơ nung nhiệt độ 500 °C Tro khơng tan HCl tính giống tro tồn phần 182 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Phạm Ngọc Khôi tgk 2.2.3 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số (TPC) flavonoid tổng số (TFC) 2.2.3.1 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số (TPC) phương pháp Foline - Ciocalteu Cơng thức tính: X V k PP = v m(1 − w) đó: PP: hàm lượng polyphenol tổng số (mg GAE/g db) X: nồng độ acid gallic xác định theo đường chuẩn (mg/mL) V: thể tích dịch chiết từ m (g) mẫu vỏ thân quao nước (mL) k: hệ số pha loãng v: Thể tích dịch dược liệu sử dụng (mL) m: khối lượng dược liệu thí nghiệm (g) w: độ ẩm dược liệu (%) [6, 7] 2.2.3.2 Xác định hàm lượng flavonoid tổng số (TFC) TFC xác định phương pháp đo màu mô tả Ozsoy cộng (2008) Các kết thể qua mg đương lượng quercetin (QE) gram chất khô mẫu phân tích (mg QE/g) Cơng thức tính: a V k 100 F(μg/g) = m(1 − w) đó: F: hàm lượng flavonoid tổng số (μg QE/g) a: hàm lượng quercetin (g/L) xác định từ phương trình đường chuẩn V: thể tích dịch chiết từ m (g) mẫu vỏ thân quao nước (mL) k: hệ số pha loãng m: khối lượng dược liệu thí nghiệm (g) w: độ ẩm mẫu (%) [6, 7] 2.2.4 Khảo sát ảnh hưởng số yếu tố đến hàm lượng polyphenol trích từ vỏ thân quao nước 2.2.4.1 Ảnh hưởng loại dung môi đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Khảo sát ảnh hưởng loại dung môi khác lên hiệu suất trích li để tìm loại dung mơi cho hiệu suất trích li cao nhất, ảnh hưởng đến chất lượng polyphenol Sử dụng loại dung môi ethanol, methanol, acetone, hexan nước Các thông số giữ cố định thời gian chiết, nhiệt độ, tỉ lệ nguyên liệu:dung môi giờ, 30 °C, 1:10 [6, 7] 2.2.4.2 Ảnh hưởng nồng độ dung môi đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước 183 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 Mục tiêu nhằm xác định nồng độ dung mơi thích hợp cho q trình trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Sử dụng dung mơi chọn thí nghiệm với nồng độ 60%, 70%, 80%, 96%, 99,9% Các thông số giữ cố định thời gian chiết, nhiệt độ, tỉ lệ nguyên liệu:dung môi giờ, 30 °C, 1:10 [6, 7] 2.2.4.3 Ảnh hưởng tỉ lệ ngun liệu:dung mơi đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Mục tiêu nhằm xác định tỉ lệ ngun liệu:dung mơi thích hợp cho q trình trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Các mẫu tiến hành trích li các tỉ lệ nguyên liệu:dung môi (g/mL) sau: 1:6; 1:8; 1:10; 1:12; 1:15 với nồng độ dung môi chọn từ thí nghiệm trên; nhiệt độ trích li 30 °C, thời gian trích li [6, 7] 2.2.4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Mục tiêu nhằm tìm nhiệt độ trích li tối ưu với loại dung mơi tối ưu (vừa khảo sát thí nghiệm loại dung mơi) để hiệu suất trích li cao Các mẫu tiến hành trích li các nhiệt độ sau 30 °C, 40 °C, 50 °C, 60 °C, 70 °C, 80 °C Thông số thời gian trích li giữ cố định [6, 7] 2.2.4.5 Ảnh hưởng thời gian đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Mục tiêu nhằm tìm mối quan hệ thời gian trích li hàm lượng polyphenol nguyên liệu với loại dung môi tối ưu nhiệt độ tối ưu (vừa khảo sát thí nghiệm trên), để từ tìm thời điểm thích hợp để dừng q trình trích li cho hiệu suất trích li cao lượng dung mơi hao hụt thích hợp Các mẫu thí nghiệm tiến hành trích li polyphenol theo mức thời gian khác nhau: 1, 2, 6, 9, 18, 24 [6, 7] 2.2.5 Định tính sơ thành phần hóa học quao nước Nguyên tắc nhằm chiết tách hỗn hợp chất có nguyên liệu thực vật thành phân đoạn theo độ phân cực tăng dần: phân cực, phân cực trung bình phân cực mạnh xác định nhóm hợp chất dung dịch chiết phản ứng hóa học đặc trưng Chiết tách nguyên liệu thành phân đoạn theo độ phân cực tăng dần với dung môi ether ethylic, ethanol nước Xác định nhóm hợp chất dịch chiết phản ứng hóa học đặc trưng theo phương pháp Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh [6, 7] 2.2.6 Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết trích từ vỏ thân quao nước DPPH gốc tự bền, dung dịch có màu tím, bước sóng cực đại hấp thu 515 nm Các chất có khả kháng oxy hóa trung hòa gốc DPPH cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thu bước sóng cực đại màu dung dịch phản ứng nhạt dần, chuyển từ tím sang vàng nhạt Thuốc thử DPPH pha trước tiến hành thí nghiệm để hạn chế ảnh hưởng đến kết thí nghiệm Vitamin C biết đến với khả kháng oxy hóa vượt trội Trong thí nghiệm này, ta dùng vitamin C làm dung dịch chuẩn để mẫu thử so sánh thông qua giá trị IC50 (50% inhibitor concertration, nồng độ ức chế 50%) 184 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Phạm Ngọc Khơi tgk IC50 giá trị dùng để đánh giá khả ức chế mạnh yếu mẫu khảo sát định nghĩa nồng độ mẫu mà ức chế 50% gốc tự do, tế bào, enzyme, mẫu có hoạt tính cao giá trị IC50 thấp [6, 7] 2.2.7 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết trích từ vỏ thân quao nước Hoạt tính kháng khuẩn thực dựa phương pháp pha loãng đa nồng độ Đây phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn nhằm đánh giá mức độ kháng khuẩn mạnh hay yếu mẫu thử thơng qua giá trị thể hoạt tính MIC (minium inhibitor concertration, nồng độ ức chế tối thiểu), IC50, MBC (minium bactericidal concentration, nồng độ diệt khuẩn tối thiểu) Mức độ kháng khuẩn mẫu đánh giá theo T Johnson cộng (1995): Có thể kháng khuẩn (đường kính vòng kháng từ 1,0 cm hơn), kháng khuẩn trung bình (đường kính vòng kháng từ 1,1 - 1,5 cm), kháng khuẩn mạnh (đường kính vòng kháng lớn 1,6 cm) [6, 7, 8] 2.2.8 Phương pháp xử lí số liệu Tất thí nghiệm bố trí lặp lại lần để đảm bảo tiến hành phân tích ANOVA Số liệu phân tích ANOVA phần mềm xử lí số liệu thống kê chuyên dụng SAS 8.0 Kiểm định Tukey thực để đánh giá mức độ khác biệt có ý nghĩa giá trị với mức ý nghĩa P < 0,05 Kết 3.1 Kết xác định độ tinh khiết dược liệu 3.1.1 Độ ẩm Bảng Độ ẩm bột thô vỏ thân quao nước Lần Trung bình Khối lượng (g) 0,99 1,03 1,02 1,01 Độ ẩm (%) 12,97 12,00 12,00 12,42 Độ ẩm trung bình dược liệu vỏ thân quao nước 12,42% Độ ẩm nằm giới hạn cho phép độ ẩm an toàn áp dụng đa số dược liệu Tất dược liệu, điều kiện bảo quản bình thường, có chứa lượng nước định Tỉ lệ phần trăm lượng nước dược liệu gọi độ ẩm (hay thủy phần) dược liệu Muốn bảo quản dược liệu, tránh tượng lên meo mốc, hoạt chất dược liệu bị biến đổi dược liệu phải có độ ẩm khơng q 13%, độ ẩm an toàn với đa số dược liệu Ngoài ra, xác định độ ẩm cần thiết việc tính kết định lượng hay hiệu suất chiết hoạt chất dược liệu 3.1.2 Độ tro Bảng Tro toàn phần tro không tan HCl vỏ thân quao nước 185 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 Lần Tro toàn phần (%) Trung bình 5,49 5,33 6,80 5,87 Tro không tan HCl (%) 2,74 2,33 2,22 2,43 Tro tồn phần tro khơng tan HCl dược liệu vỏ thân quao nước tương ứng 5,87% 2,43% Tro tồn phần cắn lại ta đốt cháy hoàn toàn dược liệu Các ion tro toàn phần dạng carbonate hay oxyd Tro không tan acid hydrochloric lượng cắn không tan lại tro tồn phần sau hòa tan tro tồn phần HCl Mỗi dược liệu có độ tro giới hạn khoảng định, thường khoảng từ - 12% Một vài trường hợp, độ tro cao tới 15 - 18% Nếu dược liệu có độ tro tồn phần bất thường (quá cao hay thấp so với quy định) phải nghĩ đến giả mạo dược liệu lẫn nhiều tạp chất Nếu dược liệu có độ tro khơng tan acid hydrochloric cao bất thường với quy định dược liệu bị lẫn nhiều đất cát 3.2 Kết khảo sát ảnh hưởng số yếu tố đến hàm lượng polyphenol trích từ vỏ thân quao nước 3.2.1 Kết ảnh hưởng loại dung mơi đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Biểu đồ Ảnh hưởng loại dung mơi đến hiệu trích li TPC TFC từ vỏ thân quao nước 40 80 120 160 200 240 Các loại dung môi Nước Ethanol Methanol Acetone Hexan 20 40 60 Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g db) 186 80 100 120 Hàm lượng flavonoid (µg QE/g) 140 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Phạm Ngọc Khôi tgk Kết cho thấy dung môi chiết ethanol 99,9%, methanol 99,9% cho hàm lượng polyphenol cao đáng kể so với dung môi chiết acetone 99,9%, hexan 99,9% nước Trong dung môi khảo sát ethanol cho hiệu trích li polyphenol cao với TPC đạt 118,93 mgGAE/g db TFC đạt 316,75µgQE/g Trong đó, hexan lại cho hiệu trích li polyphenol thấp với TPC đạt 36,79 mgGAE/g db TFC đạt 99,03µgQE/g Từ kết thu được, hiệu trích li polyphenol dung mơi xếp theo thứ tự tăng dần: hexan < nước < aceton < methanol < ethanol Trong thực tế, không tồn dung mơi lí tưởng, chọn lựa dung mơi sử dụng phải dựa vào yêu cầu sau đây: Giá thành khơng đắt (chi phí mát có giới hạn), trích li có chọn lọc dễ dàng, trơ với máy móc hư hỏng, hàm lượng bẩn thấp, khơng có khả cháy nổ, độc Vì vậy, khảo sát chúng tơi chọn dung mơi để trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước ethanol để thực thí nghiệm 3.2.2 Kết ảnh hưởng nồng độ dung mơi đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Biểu đồ Ảnh hưởng nồng độ dung mơi đến hiệu trích li TPC TFC từ vỏ thân quao nước 40 80 120 160 200 240 10 20 30 40 50 60 Nồng độ ethanol (%) 99.9 96 90 80 70 60 Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g db) Hàm lượng flavonoid (µg QE/g) Kết cho thấy tăng nồng độ dung môi chiết ethanol TPC TFC tăng dần Ở nồng độ 60% TPC 25,14 mg GAE/g db, TFC 51 µg QE/g Khi tăng nồng độ ethanol lên 70%, 80%, 90% TPC tăng dần tương ứng 28,41; 38,81; 52,75 mg GAE/g db TFC tăng dần tương ứng 56,46; 82,57; 110,23 µg QE/g Trong nồng độ dung mơi khảo sát mẫu chiết 90% cho giá trị TPC TFC cao tương ứng 52,75 mg GAE/g db,110,23 µg QE/g Khi tăng nồng độ ethanol lên 96% 187 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 99,9% TPC TFC mẫu chiết lại giảm: Ở 96% 37,53 mg GAE/g db; 81,79 µgQE/g 99,9% 27,42 mg GAE/g db; 55,68 µg QE/g Vì vậy, khảo sát chọn nồng độ ethanol để trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước 90% để thực thí nghiệm 3.2.3 Kết ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu:dung môi đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước Biểu đồ Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu:dung mơi đến hiệu trích li TPC TFC từ vỏ thân quao nước Tỷ lệ nguyên liệu:dung môi 40 80 120 160 200 240 1:15 1:12 1:10 1:8 1:6 20 40 60 Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g db) 80 100 120 140 Hàm lượng flavonoid (µg QE/g) Kết cho thấy tăng tỉ lệ nguyên liệu:dung mơi TPC TFC tăng dần Khi tăng tỉ lệ ngun liệu:dung mơi từ 1:6 lên 1:8 TPC tăng 8,78 mg GAE/g db (tăng 1,226 lần) TFC 30,69 µg QE/g (tăng 1,581 lần) Với tỉ lệ nguyên liệu:dung môi 1:15 cho hàm lượng cao TPC TFC tương ứng 115,94 mg GAE/g db 158,25 µg QE/g Khi sử dụng nhiều dung mơi để trích li khả khuếch tán polyphenol vào dung môi lớn Dung môi dễ dàng thẩm thấu vào nguyên liệu hòa tan cấu tử cần trích li nên lượng polyphenol dung môi cao Tuy nhiên, giới hạn định lượng polyphenol thu tăng lên không đáng kể dù tăng lượng dung môi Vì vậy, khảo sát chúng tơi chọn tỉ lệ ngun mẫu:dung mơi để trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước 1:12 để thực thí nghiệm 3.2.4 Kết ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước 188 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Phạm Ngọc Khôi tgk Biểu đồ Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu trích li TPC TFC từ vỏ thân quao nước 40 80 120 160 200 240 20 40 60 80 100 120 80 Nhiệt độ (° C) 70 60 50 40 30 Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g db) Hàm lượng flavonoid (µg QE/g) Kết cho thấy tăng nhiệt độ hàm lượng TPC TFC tăng dần giảm Từ 30 °C - 60 °C hiệu suất trích li tăng nhanh, hàm lượng TPC tăng 69,56 mg GAE/g db (tăng 3,327 lần) TFC 109,71 µg QE/g (tăng 2,753 lần) Từ 60 °C - 80 °C hiệu suất trích li giảm dần, hàm lượng TPC giảm 38,89 mg GAE/g db (giảm 1,642 lần) TFC 79,54 µg QE/g (giảm 1,722 lần) Nhiệt độ 60 °C cho hàm lượng cao TPC TFC tương ứng 99,45 mg GAE/g db 189,69 µg QE/g Bởi vì, nhiệt độ cao polyphenol dung mơi dễ hòa tan vào nhau, lượng polyphenol trích li nhiều Mặt khác, nhiệt giúp cho q trình trích li dễ dàng cách phá hủy màng tế bào việc làm biến tính màng tế bào bọt khí tạo thành, làm tăng khả hoà tan bột quao nước cần trích li Nhiệt độ trích li thấp q hiệu suất trích li khơng cao, hàm lượng polyphenol bã nhiều Nhiệt độ tác động phức tạp, nhiệt độ tăng làm tăng hiệu suất trích li Nhưng nhiệt độ cao có tác động ngược lại việc làm biến tính sản phẩm cần trích li Vì vậy, khảo sát chúng tơi chọn nhiệt độ để trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước 60 °C để thực thí nghiệm 3.2.5 Kết ảnh hưởng thời gian đến hiệu trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước 189 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 Biểu đồ Ảnh hưởng thời gian đến hiệu trích li TPC TFC từ vỏ thân quao nước 40 80 120 160 200 240 Thời gian (giờ) 24 18 20 40 60 Hàm lượng polyphenol (mg GAE/g db) 80 100 120 140 Hàm lượng flavonoid (µg QE/g) Kết cho thấy tăng thời gian hàm lượng TPC TFC tăng dần giảm Từ - hiệu suất trích li tăng nhanh đáng kể, hàm lượng TPC tăng 89,13 mg GAE/g db (tăng 3,308 lần) TFC 91,73 µgQE/g (tăng 1,886 lần) Từ - 24 hiệu suất trích li giảm dần, hàm lượng TPC giảm 33,38 mg GAE/g db (giảm 1,354 lần) TFC 13,31 µgQE/g (giảm 1,073 lần) Thời gian cho hàm lượng cao TPC TFC tương ứng 127,75 mg GAE/g db 195,27 µgQE/g Sự kéo dài thời gian kéo theo gia tăng hiệu suất trích li, khơng nên kéo dài điều làm giảm hiệu suất trích li, polyphenol bã ngày giảm Vì vậy, khảo sát chúng tơi chọn thời gian để trích li polyphenol từ vỏ thân quao nước để thực thí nghiệm 3.3 Kết định tính thành phần hóa học quao nước Bảng Phân tích sơ hóa học vỏ thân quao nước Nhóm hợp chất Alkaloid Coumarin Anthraglicosid Carotenoid Flavonoid Thuốc thử Thuốc thử chung alkaloid Kết - Phát quang kiềm +++ Đóng mở vòng lacton +++ Borntrager - Carr-Price - H2SO4 - Cyanidin + 190 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Glicoside Tannin Phạm Ngọc Khôi tgk Thuốc thử Fehling + FeCl3 1% (polyphenol) +++ Gelatin muối - Triterpenoid tự Liebermann-Burchard Saponin Tạo bọt +++ + Chất béo Nhỏ lên giấy lọc Ghi chú: (-): khơng có; (+): có; (+++): có nhiều + Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật cho thấy vỏ thân quao nước có hợp chất coumarin, acid hữu cơ, triterpenoid tự do, tannin, flavonoid, chất béo 3.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết trích từ vỏ thân quao nước Các nồng độ vitamin C phần trăm ức chế biểu thị dạng đường thẳng với phương trình y = 0,613x + 42,542 với hệ số tương quan R² = 0,99288 Thay x = 50% vào phương trình tìm IC50 = 73,192 (mg/mL) Các nồng độ cao chiết polyphenol trích từ vỏ thân quao nước phần trăm ức chế biểu thị dạng đường thẳng với phương trình y = 0,605x + 51,57 với hệ số tương quan R² = 0,938 Thay x = 50% vào phương trình tìm IC50 = 81,82 (mg/mL) Trong thử nghiệm DPPH, DPPH gốc tự có màu tím nhờ vào điện tử N chưa ghép đôi, sau phản ứng với oxy nguyên tử chất dập tắt gốc tự bị giảm màu tím Hoạt tính chống oxy hóa cao quao nước thể qua việc làm giảm màu DPPH dẫn đến giảm độ hấp thu bước sóng 515 nm Tuy nhiên, so sánh hai giá trị IC50 vitamin C cao quao nước thấy hoạt tính kháng oxy hóa cao quao nước vitamin C 3.5 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết trích từ vỏ thân quao nước Bảng Đường kính vòng kháng khuẩn cao polyphenol trích từ vỏ thân quao nước Đường kính vòng kháng khuẩn (cm) Loại vi sinh vật Nồng độ cao chiết (mg/ml) Staphylococcus aureus Shigella spp Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Clostridium difficile Vibrio cholerae 30 0 0,6 0 1,1 60 0 1,5 0 1,2 191 90 0 2,1 0 1,8 Mẫu đối chứng (DMSO) 0 0 0 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM Tập 14, Số 12 (2017): 181-193 Nồng độ ức chế tối thiểu nồng độ cao chiết thấp mà xuất vòng vơ khuẩn; nên nồng độ ức chế tối thiểu thấp khả kháng khuẩn cao Đối với Escherichia coli Vibrio cholerae đường kính vòng kháng khuẩn mẫu cao chiết từ vỏ thân quao nước có nồng độ 30 mg/ml nhỏ nhất, đường kính vòng kháng khuẩn tăng dần theo nồng độ cao chiết vỏ thân quao nước cao nồng độ 90 mg/ml Ở nồng độ cao chiết có vòng kháng khuẩn, cho thấy cao chiết từ vỏ thân quao nước có khả kháng Escherichia coli Vibrio cholerae mạnh Đối với Staphylococcus aureus, Shigella spp., Pseudomonas aeruginosa, Clostridium difficile tất nồng độ cao chiết khơng có vòng kháng khuẩn, giống mẫu đối chứng DMSO, điều cho thấy cao chiết từ vỏ thân quao nước khơng có khả kháng bốn loại vi khuẩn nói Nhìn chung, cao polyphenol trích từ vỏ thân quao nước có khả kháng vài lồi vi khuẩn Kết luận Trong nghiên cứu này, thu số kết thử độ tinh khiết dược liệu vỏ thân quao nước với kết độ ẩm 12,42%, độ tro toàn phần 5,87%, độ tro không tan HCl 2,43%; sơ phân tích thành phần hóa thực vật cho thấy quao nước có hợp chất coumarin, triterpenoid, tannin, flavonoid, chất béo; dùng cao quao nước để khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa, kết cho thấy hoạt tính kháng oxy hóa cao quao nước vitamin C; cuối dùng cao quao nước để khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kết cho thấy cao quao nước có khả kháng mạnh Escherichia coli Vibrio cholerae để xác định rõ chế nhằm định hướng nghiên cứu sâu cho chế phẩm điều trị Trong Y học cổ truyền, quao nước sử dụng để khử trùng vết thương, làm thuốc điều kinh, bổ huyết, nhuận gan, trị hen suyễn, tiêu độc [1, 2, 3, 4] Rõ ràng dược liệu có nhiều tác dụng sinh học quý mà lại dễ xây dựng nguồn nguyên liệu nên tiềm ứng dụng sản xuất lớn; đó, cần nghiên cứu đưa quy trình sản xuất chế phẩm đóng vai trò quan trọng nhằm phục vụ công tác điều trị bệnh thời đại Do điều kiện nghiên cứu giới hạn nên nhiều khía cạnh chưa thể khai thác được, chúng tơi xin có số đề nghị cần phân lập thành phần hóa học để làm sáng tỏ thêm tác dụng dược lí cây, chứng khảo sát sơ hóa thực vật, nhận thấy phản ứng triterpenoid rõ nên có thể, chúng tơi đề nghị tiến hành nghiên cứu thành phần để góp phần làm rõ mặt hóa học quao nước Bên cạnh đó, cần tiến hành thử nghiệm tác dụng quao nước điều trị số bệnh nhiễm khuẩn, nhiễm trùng động vật thử nghiệm, từ ứng dụng vào việc phòng trị bệnh người 192 TẠP CHÍ KHOA HỌC - Trường ĐHSP TPHCM  [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] Phạm Ngọc Khôi tgk Tuyên bố quyền lợi: Các tác giả xác nhận hồn tồn khơng có xung đột quyền lợi TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi, Trần Hợp, Cây cỏ có ích Việt Nam NXB Giáo dục, tập I, tr 619, 1999 Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học, tập II, tr 440 - 441, 2012 Trương Thị Đẹp, Thực vật dược NXB Giáo dục, tr 282 - 283, 2009 Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam NXB Trẻ, Tập II, tr 506 - 509, 2006 Viện Dược liệu, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam NXB Khoa học Kĩ thuật, tập I, tr 541 - 542, 2003 Nguyễn Minh Cẩm Tiên, Phạm Ngọc Khơi, “Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxy hóa hợp chất polyphenol chiết xuất từ rễ mướp gai (Lasia spinosa L.),” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 20, Phụ số 20, tr.436 - 446, 2016 Phạm Ngọc Khôi, Lê Trọng Nghĩa, “Khảo sát điều kiện thu hồi dịch chiết hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxy hóa dịch chiết bắp cải tím (Brassica oleracea),” Tạp chí Khoa học Yersin, số (11/2016), tr.23 - 29, 2016 Phạm Ngọc Khôi, Nguyễn Bùi Minh Tâm, “Khảo sát khả kháng khuẩn dịch chiết bromelain từ Dứa (Ananas comosus) vi khuẩn Shigella Salmonella ứng dụng phòng ngừa điều trị bệnh đường tiêu hóa,” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 20, Phụ số 5, tr.21 - 26, 2016 193 ... cao quao nước vitamin C 3.5 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết trích từ vỏ thân quao nước Bảng Đường kính vòng kháng khuẩn cao polyphenol trích từ vỏ thân quao nước Đường kính vòng kháng. .. cho thấy quao nước có hợp chất coumarin, triterpenoid, tannin, flavonoid, chất béo; dùng cao quao nước để khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa, kết cho thấy hoạt tính kháng oxy hóa cao quao nước vitamin... cho thấy vỏ thân quao nước có hợp chất coumarin, acid hữu cơ, triterpenoid tự do, tannin, flavonoid, chất béo 3.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao chiết trích từ vỏ thân quao nước Các