Nghiên cứu với mục tiêu nhằm khảo sát tỉ lệ các loài Candida gây nhiễm ở bệnh viêm âm đạo và đánh giá mức nhạy cảm của các chủng phân lập được với clotrimazol và fluconazol. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ NHẠY CẢM CỦA CANDIDA SPP PHÂN LẬP TỪ BỆNH PHẨM ÂM ĐẠO VỚI CLOTRIMAZOL VÀ FLUCONAZOL Lương Thị Trang*, Huỳnh Mỹ Hạnh**, Nguyễn Tuấn Dũng*, Nguyễn Đinh Nga* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Viêm âm đạo Candida bệnh thường gặp phụ nữ, phụ nữ lứa tuổi sinh sản Loài nấm thường gặp Candida albicans, gần tỉ lệ nhiễm Candida non albicans với loài kháng thuốc có xu hướng gia tăng Mục tiêu: Khảo sát tỉ lệ loài Candida gây nhiễm bệnh viêm âm đạo đánh giá mức nhạy cảm chủng phân lập với clotrimazol fluconazol Phương pháp nghiên cứu: Lấy mẫu phân lập Candida từ bệnh nhân viêm âm đạo nấm khoa sản - Bệnh viện Đại học Y Dược TpHCM, Bệnh viện Đa khoa khu vực Thủ Đức phòng khám đa khoa MK (PK MK), quận 3, TpHCM Định danh C albicans, C krusei, C glabrata, C tropicalis C non albicans khác dựa vào đặc điểm sinh ống mầm, tạo sợi nấm giả-bào tử bao dày màu sắc khóm nấm môi trường CHROMagar Candida Xác định mức độ nhạy Candida phân lập từ bệnh phẩm với fluconazol clotrimazol theo hướng dẫn CLSI M44-A Kết bàn luận: Trong 164 chủng Candida phân lập, C albicans chiếm tỷ lệ cao 90,85%, C glabrata 3,05%, lại C krusei, C tropicalis C non albicans khác Đa số loài C albicans nhạy với fluconazol (147/149 chủng), trường hợp nhạy trường hợp đề kháng khơng hồn tồn; trường hợp đề kháng fluconazol rơi vào C krusei (50%) C glabrata (20%) Tỉ lệ C albicans C non albicans nhạy với clotrimazol mức cao (trên 99% 93%) Tỉ lệ C non albicans gây bệnh thấp lại kháng fluconazol tỉ lệ cao, cần phân biệt C albicans C non albicans để chọn phác đồ điều trị thích hợp Từ khóa: viêm âm đạo Candida, Candida albicans; Candida non albicans; clotrimazol; fluconazol ABSTRACT EVALUATING THE SENSIBILITY OF CANDIDA SPECIES ISOLATED FROM VAGINAL SAMPLES TO CLOTRIMAZOLE AND FLUCONAZOLE Luong Thi Trang, Huynh My Hanh, Nguyen Tuan Dung, Nguyen Dinh Nga * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 230 - 234 Background: Vaginal candidiasis is one of the most common vaginal infections in women, especially ones in the fertile period Objective: Surveying the prevalence of species of Candida, and evaluating the sensitivity of isolated Candida to fluconazole and clotrimazole Material and methods: After isolated Candida from vaginal samples of patients who were diagnosed vaginal candidiasis, pathogenic agents were identified by determining morphology and culturing in differential media The antifungal activity against 164 trains of Candida spp of fluconazole and clotrimazole were determined by the Disk diffusion method according to the guidline of CLSI M44-A Outcome: Candida albicans was in hight ratio of isolates (90.85%) and highly susceptible to fluconazole and + ∗ Khoa Sản, Bệnh viện Đại học Y Dược TP.HCM Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: DS Huỳnh Mỹ Hạnh ĐT: 0909948938 Email: myhanhhuynh5@yahoo.com 230 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học clotrimazole The other species were in low ratio including C glabrata (3.05%), C krusei (2.44%), C tropicalis (1.22%) and other non albicans species but several of these agents were less sensible or resistant to fluconazole Therefore, the differentiate between C albicans and C non albicans is necessary to propose a reasonable antifungal agent in treatment Key words: vaginal candidiasis; Candida albicans; C non albicans; clotrimazole, fluconazole ĐẶT VẤN ĐỀ VẬT LIỆU -PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Viêm âm đạo nấm bệnh phổ biến phụ nữ, chiếm 20-25% trường hợp viêm nhiễm trùng, đặc biệt phụ nữ độ tuổi sinh đẻ(10) Thống kê cho thấy, có khoảng 75% phụ nữ bị Candida âm đạo lần đời, 50% số bị viêm tái phát(14) Theo Geiger AM cộng sự, bệnh xuất khoảng 50% phụ nữ tuổi 25(4) Các liệu dịch tễ học bệnh không đầy đủ tỷ lệ nhiễm ghi nhận chủ yếu dựa chẩn đoán lâm sàng Theo thống kê có 50% phụ nữ chẩn đốn bệnh nguyên nhân thực tế lại nguyên nhân khác thiếu chẩn đoán cận lâm sàng(10) Đối tượng nghiên cứu Bệnh viêm âm đạo Candida, chủ yếu C albicans (chiếm đến 80-92%) điều trị hiệu với thuốc kháng nấm nhóm azol Tuy nhiên, gần tỉ lệ nhiễm C non albicans dần tăng cao có xuất chủng kháng thuốc(12) Điều việc lạm dụng thuốc kháng nấm nhóm azol đặc biệt fluconazol; chọn lọc chủng đề kháng tự nhiên với fluconazol C krusei C glabrata(6); bệnh nhân tự chẩn đoán điều trị theo kinh nghiệm dẫn đến viêm âm đạo tái phát Vì cần xác định tác nhân gây bệnh, đánh giá mức độ nhạy cảm tác nhân với thuốc kháng nấm, xem xét yếu tố nguy để đưa chế độ điều trị hợp lý Xuất phát từ nhu cầu đó, mục tiêu đề tài nhằm khảo sát tỷ lệ nhiễm, xác định loài đánh giá mức độ nhạy cảm chủng Candida gây viêm âm đạo phân lập từ bệnh phẩm với hai thuốc kháng nấm sử dụng phổ biến điều trị bệnh viêm âm đạo nấm fluconazol clotrimazol Chuyên Đề Dược Học Là phụ nữ đến khám phụ khoa, từ tháng đến tháng năm 2012, khoa Sản Bệnh viện Đại học Y Dược TpHCM (BV ĐHYD), Bệnh viện Đa khoa khu vực Thủ Đức (BVTĐ) phòng khám đa khoa MK (PK MK), quận 3, TpHCM, chẩn đoán bị nhiễm nấm âm đạo; chấp nhận cho can thiệp lâm sàng phương pháp quét mẫu huyết trắng âm đạo trả lời câu hỏi liên quan đến bệnh tiền sử bệnh Phương pháp lấy mẫu Mẫu âm đạo lấy tăm vô trùng, sau lưu giữ dung dịch pepton 0,1% vơ trùng, vận chuyển phòng thí nghiệm Vi-Ký sinh, khoa Dược, Đại học Y Dược TpHCM Phân lập Candida từ bệnh phẩm Bệnh phẩm phân lập mơi trường Sabouraud (SGA), chọn mẫu có tế bào nấm men chiếm ưu để tiếp tục nghiên cứu Định danh Candida C albicans định danh dựa vào tạo ống mầm thử nghiệm huyết thanh; tạo sợi nấm giả bào tử bao dày môi trường thạch bắp-tween 80 Phân biệt C albicans, C glabrata, C krusei, C tropicalis dựa vào màu sắc khóm nấm mơi trường CHROMagar Candida (CHROMagar Microbiology, Pháp) Các lồi lại chi Candida khơng định danh phương pháp liệt kê vào nhóm C non albicans Phương pháp xác định tính nhạy cảm chủng Candida phân lập với fluconazol (đĩa giấy fluconazol 25 μg, Liofilchem® s.r.l (Italie) 231 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học clotrimazol (Merck, tẩm lên đĩa giấy Whatman mm nồng độ 50 μg/đĩa), biện luận kết theo hướng dẫn NCCLS M44-A KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Phân bố theo độ tuổi bệnh nhân xác định viêm âm đạo Candida cận lâm sàng Từ 195 bệnh nhân nữ chẩn đoán lâm sàng viêm âm đạo nấm, có 164 trường hợp xác định phòng thí nghiệm nhiễm Candida 164 bệnh nhân có độ tuổi từ 18 - 51 tuổi, độ tuổi trung bình 29,09, số gần khơng thay đổi khu vực khảo sát (PK MK 29,1, BV ĐHYD 29,2 BVTĐ 28,7) Bảng Phân bố theo độ tuổi bệnh nhân nhiễm Candida âm đạo Tuổi 18 – 19 20 – 30 31 – 35 36 – 51 Tổng số ca nhiễm Số ca nhiễm Candida âm đạo (0,61%) 107 (65,24%) 34 (20,73%) 22 (13,41%) 164 Kết bảng cho thấy, bệnh nhân bị viêm âm đạo Candida chủ yếu độ tuổi sinh sản (từ 20 - 30 tuổi), bệnh giảm dần độ tuổi tiền mãn kinh mãn kinh (sau 40 tuổi), điều phù hợp với dịch tễ bệnh Candida âm đạo dẫn nhiều y văn(9,5) Phân bố loài Candida bệnh nhân viêm âm đạo Bảng Tỷ lệ nhiễm C albicans C non-albicans bệnh nhân Số chủng phân lập PK MK 52 (100%) BV ĐHYD 85 (100%) BVTĐ 27 (100%) Tổng 164 (100%) Nơi lấy Số chủng Số chủng C albicans C non albicans 44 (84,62%) (15,38%) 83 (97,65%) (2,35%) (18,52%) 22 (81,48%) 149 (90,85%) 15 (9,15%) Trong 164 chủng Candida phân lập, C albicans chiếm tỉ lệ cao (90,85%), C glabrata, C krusei, C tropicalis C non albicans (hình 1) Kết tương tự báo cáo trước đây(6,1,11) Qua vấn 46/164 bệnh nhân chọn vào nghiên cứu tần số mắc bệnh năm cho thấy: có 20 bệnh nhân (43,5%) thường tái nhiễm (từ lần vòng năm), kết khơng khác với báo cáo Trần Thị Lợi (45%)(13) Trong số này, có 15% (3/20 bệnh nhân) xác định nhiễm loài nonalbicans, tỷ lệ nhiều tài liệu ghi nhận từ 10-20%(12) Hình 1: Sự phân bố loài Candida bệnh nhân viêm âm đạo hoàn toàn với fluconazol, (trường hợp mặc Mức độ nhạy cảm Candida gây viêm dù vòng kháng nấm khơng hồn tồn, bên âm đạo với fluconazol vòng kháng nấm có khóm nấm dày Nhìn chung chủng C albicans phân lập đặc, kích thước từ 1-2 mm, nên theo hướng dẫn khảo sát nhạy với NCCLS M44-A, xếp vào nhóm đề fluconazol, có chủng nhạy tùy thuộc liều kháng, kết minh họa hình 2) với d = 16 mm chủng đề kháng không 232 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Bảng Mức độ nhạy cảm Candida spp gây viêm âm đạo với fluconazol Số chủng Candida C albicans Nơi lấy C non albicans S SDD R S SDD R PK MK 43 0 BV TĐ 22 0 BV ĐHYD 83 0 147/149 1/149 1*/149 11/15 1/15 3/15 Tỉ lệ chung (98,66% (0,67% (0,67%) (73%) (7%) (20%) ) ) Nghiên cứu Y học kháng khơng hồn tồn) Trong 15 chủng C non albicans phân lập được, có 3/15 chủng đề kháng với fluconazol (chiếm 20%), gồm C krusei (2 chủng) C glabrata (1 chủng) Kết phù hợp với nhiều nghiên cứu xác định hai lồi có tỷ lệ đề kháng cao với fluconazol(8,2) (S: nhạy; SDD: nhạy tùy thuộc liều; R: đề kháng, *: A B Hình C albicans nhạy (A) đề kháng khơng hồn tồn với fluconazol (B) clotrimazol cho tác động gần hoàn toàn Mức độ nhạy cảm Candida gây viêm chủng C glabrata, kết tương tự với âm đạo với clotrimazol nghiên cứu Sandra S Richter cộng Bảng Tỉ lệ Candida spp gây viêm âm đạo nhạy với (1998-2001) Sự khác biệt thời gian clotrimazol nghiên cứu tác giả xa so Chủng Candida S (%) SDD (%) R (%) với khảo sát chúng tôi, C albicans 99,33 0,67 xuất chủng nhạy với clotrimazol C non albicans 94,59 2,7 2,7 số chủng C glabrata gây bệnh Kết khảo sát cho thấy: 148 chủng C albicans phân lập nhạy cảm với clotrimazol, có chủng phân lập từ âm đạo phụ nữ 28 tuổi nhạy cảm trung bình với clotrimazol nhạy với fluconazol, nhiều nghiên cứu ghi nhận, C albicans đề kháng với clotrimazol kháng chéo với fluconazol(3,7) Trong số chủng C non albicans phân lập được, có chủng C glabrata nhạy cảm trung bình với clotrimazol chiếm 6,7% chiếm 20% tổng số C glabrata phân lập Tuy nhiên theo Paul L Fidel cộng (1999), Chuyên Đề Dược Học Các kết khảo sát cho thấy C albicans gây viêm âm đạo nhạy với fluconazol clotrimazol mức cao Tỉ lệ C non albicans gây bệnh thấp thường chủng nhạy kháng thuốc, việc phân biệt C albicans C non albicans thử nghiệm huyết lại đơn giản, tốn khơng thời gian; ngồi dùng môi trường CHROMagar Candida để xác định chủng thường kháng thuốc C krusei, C glabrata C tropicalis TÀI LIỆU THAM KHẢO 233 Nghiên cứu Y học 234 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Babic M, Hukic M (2010), “Candida albicans and non-albicans species as etiological agent of vaginitis in pregnant and nonpregnant women”, Bosnian Journal of basic medical sciences, 10 (1): 89-97 Buitrón-García-Figueroa R et al (2009) “Candida glabrata: an emergent opportunist in vulvovaginitis”, Cir Ciruj 77: 423427 Cross EW, Park S, Perlin DS (2000) “Cross-resistance of clinical isolates of Candida albicans and Candida glabrata to over-the-counter azols used in the treatment of vaginitis” Microb Drug Resist; 6:155–61 Geiger AM, Foxman B, Gillespie BW (1995), “The epidemiology of vulvovaginal candidiasis among university students”, Am J Public Health, 85: 1146-8 Hurley R, De Louvois J (1979), “Candida vaginitis” Postgrad Med J, 55: 645-647 Mathema B, Cross E, Dun E, Park S, Bedell J, Slade B, Williams M, Riley L, Chaturvedi V, and Perlin D S (2001), “Prevalence of Vaginal Colonization by Drug-Resistant Candida Species in College-Age Women with Previous Exposure to Over-the-Counter Azol Antifungals”, Brief reports, 33: 23-27 Pelletier R et al (2000), “Emergence of Resistance of Candida albicans to Clotrimazol in Human Immunodeficiency VirusInfected Children: In Vitro and Clinical Correlations”, Journal of Clinical microbiology, 38(4): 1563–1568 Pfaller MA et al (2008), Candida krusei, a Multidrug-Resistant Opportunistic Fungal Pathogen: Geographic and Temporal 10 11 12 13 14 Trends from the ARTEMIS DISK Antifungal Surveillance Program, 2001 to 2005” J of Clinical microbiology, 46:515–521 Sheary B and Dayan L (2005), “Recurrent vulvovaginal candidiasis”, Australian Family Physician 34 (3):147-150 Sobel JD (1997), “Vaginitis”, New England Journal Medecine, 337: 1896–903 Sobel JD (1999), “Limitations of antifungal agents in the treatment of Candida vaginitis: future challenges” Harcourt Publishers Ltd Drug Resistance Updates 2:148–152 Sobel JD, Faro S, Force RW et al (1998), “Vulvovaginal candidiasis: epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations”, Am J Obstet Gynecol, 178: 203–211 Trần Thị Lợi (2005), ”Viêm âm đạo”, Hội thảo viêm âm đạo TP HCM, 1-18 Weissenbacher T, Witkin SS, Ledger WJ, Tolbert V, Gingelmaier A, Scholz C, Weissenbacher ER, Friese K, Mylonas I.(2009), “Relationship between clinical diagnosis of recurrent vulvovaginal candidiasis and detection of Candida species by culture and polymerase chain reaction”, Arch Gynecol Obstet., 279(2):125-129 Ngày nhận báo: 13.12.2012 Ngày phản biện nhận xét báo: 24.12.2012 Ngày báo đăng: 10.03.2014 Chuyên Đề Dược Học ... đưa chế độ điều trị hợp lý Xuất phát từ nhu cầu đó, mục tiêu đề tài nhằm khảo sát tỷ lệ nhiễm, xác định loài đánh giá mức độ nhạy cảm chủng Candida gây viêm âm đạo phân lập từ bệnh phẩm với hai... từ 10-20%(12) Hình 1: Sự phân bố lồi Candida bệnh nhân viêm âm đạo hoàn toàn với fluconazol, (trường hợp mặc Mức độ nhạy cảm Candida gây viêm dù vòng kháng nấm khơng hồn tồn, bên âm đạo với fluconazol. .. lập nhạy cảm với clotrimazol, có chủng phân lập từ âm đạo phụ nữ 28 tuổi nhạy cảm trung bình với clotrimazol nhạy với fluconazol, nhiều nghiên cứu ghi nhận, C albicans đề kháng với clotrimazol