Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm phát hiện bất thường nhiễm sắc thể (NST) trước chuyển phôi trên các phôi thụ tinh trong ống nghiệm (TTTON) góp phần nâng cao hiệu quả chuyển phôi và phôi làm tổ của các phôi chuyển.
nghiên cứu (a) Bảng 1: Các dạng bất thường thu sau phân tích kết lai Số ƣợng Tỷ lệ % Patau 19,0 Edwards 9,5 Down 33,3 Turner 4,8 Klinefelter 4,8 Bất thường khác 28,6 Tổng số 21 100 Hội chứng Kết phân tích 50 TB phơi: tỷ lệ phôi cho kết trisomy 21 cao (33,3%), tiếp đến tỷ lệ phôi trisomy 13 (19%), NST 18 NST giới tính gặp bất thường 56 (b) Hình 1: Kết FISH phơi bào E8 E30 khơng có bất thường cặp NST 13, 18, 21 cặp NST giới tính (a) Phơi E8 có cặp NST giới tính XX; (b) Phơi E30 có cặp NST giới tính XY TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2016 Phân tích kính hiển vi huỳnh quang thấy: tín hiệu màu đỏ (red) ứng với NST 13, tín hiệu màu xanh (green) ứng với NST 21, tín hiệu màu xanh lơ (aqua) ứng với NST 18 Bên cạnh đó, tín hiệu màu xanh da trời (blue) ứng với NST X tín hiệu màu vàng (gold) ứng với NST Y Như vậy, với phôi (a) cặp NST giới tính XX có tín hiệu màu xanh da trời (blue), phơi (b) cặp NST giới tính XY có tín hiệu màu xanh da trời (blue) tín hiệu màu vàng (gold) Như vậy, với phơi bào có số lượng tín hiệu thu giống trên, kết chẩn đoán đưa sau tiến hành kỹ thuật FISH phơi bào khơng có bất thường số lượng cặp NST 13, 18, 21, X, Y Hình 2: Kết FISH phôi bào E2 mang NST cặp NST 13, 18, 21 NST giới tính X Hình 3: Kết FISH phơi bào E38 mang NST số 21 Sau thức đưa quy trình FISH chuẩn hóa vào chẩn đốn tiền làm tổ phôi BN thực IVF, phơi chẩn đốn FISH có kết bình thường, cấy chuyển vào tử cung người mẹ Điều giúp tăng khả mang thai bà mẹ trẻ sinh khỏe mạnh Trong phơi bào chúng tơi phân tích kỹ thuật FISH, ngồi phơi bào có kết bình thường cặp NST 13, 18, 21, X, Y, chúng tơi thu số hình ảnh phơi bất thường sau: Quan sát phân tích thấy phơi bào hình có tín hiệu màu đỏ (red), tín hiệu màu xanh (green), tín hiệu màu xanh lơ (aqua) tín hiệu với màu xanh da trời (blue) Như vậy, TB phôi có NST 13, NST 18, NST 21 cặp NST giới tính XXX TB phơi hình có tín hiệu màu xanh lơ, tín hiệu màu đỏ, tín hiệu màu xanh da trời tín hiệu màu xanh Như vậy, phơi bào có bất thường NST 21, có tới NST 21 Trẻ sinh mắc hội chứng Down 57 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2016 Hình 4: Kết FISH phơi bào E24 mang NST số 13 Hình 5: Kết FISH phôi bào E18 mang NST 18 TB phơi hình ngồi tín hiệu màu xanh cây, tín hiệu màu xanh lơ, tín hiệu màu xanh da trời, tín hiệu màu vàng tín hiệu màu đỏ Chứng tỏ phơi bào có bất thường có tới NST 13 Trẻ sinh mắc hội chứng Patau Trong hình ảnh lai TB phơi hình 5, ngồi tín hiệu màu xanh cây, tín hiệu màu đỏ, tín hiệu màu xanh da trời tín hiệu màu vàng có tới tín hiệu màu xanh lơ Chứng tỏ phơi bào có tới NST 18 Trẻ sinh mắc hội chứng Edwards Hình 6: Kết FISH phơi bào E40 mang cặp NST giới tính XO Hình 7: Kết FISH phơi bào E48 mang cặp NST giới tính XXY TB phơi hình thu tín hiệu lai gồm: tín hiệu màu xanh cây, tín hiệu màu đỏ, tín hiệu màu xanh lơ, tín hiệu màu xanh da trời Chứng tỏ phơi bào có cặp NST giới tính XO Trẻ sinh mắc hội chứng Turner Phôi bào hình cho kết lai có tín hiệu với màu xanh cây, đỏ, xanh lơ, xanh da trời tín hiệu với màu vàng Chứng tỏ có cặp NST giới tính XXY Trẻ sinh mắc hội chứng Klinefelter 58 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2016 KẾT LUẬN Đã chuẩn hóa quy trình kỹ thuật FISH TB phơi dư người nhằm chẩn đốn lệch bội NST cặp NST số 13, 18, 21, X Y Quy trình gồm bước với thao tác chuẩn hóa bảo đảm phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm, cho kết có độ xác cao Áp dụng quy trình hồn thiện 50 mẫu TB phôi cho thấy, tỷ lệ lệch bội NST cao chiếm tới 21/50 (42%) tổng số phôi chẩn đoán Do vậy, cần sàng lọc bất thường trước chuyển phôi nhằm hạn chế trẻ sinh mang dị tật bẩm sinh, đặc biệt nhóm có nguy cao KHUYẾN NGHỊ Trên thực tế, kỹ thuật FISH có hạn chế đánh giá số NST định Vì vậy, để có kết chẩn đốn di truyền tồn diện phôi trước cấy chuyển, cần kết hợp kỹ thuật FISH với kỹ thuật chẩn đoán khác, phù hợp với trường hợp cụ thể TÀI LIỆU THAM KHẢO Hoàng Thị Hương, Nguyễn Viết Tiến, Đặng Thu Hằng Ứng dụng kỹ thuật FISH sàng lọc số bệnh lệch bội NST cho chẩn đoán di truyền tiền làm tổ Tạp chí Phụ sản 2014, 12, tr.176-178 Blancato JK Fluorescence in situ hybridization The Principles of clinical cytogenetics Humana Press, New Jersey 1999, pp.443-471 Griffin DK Dual fluorescent in situ hybridization for simultaneous detection of X and Y chromosome-specific probes for the sexing of human preimplatation embryonic cuclei Human Genetic 1992, 89, pp.18-22 Lim HJ et al Amniotic fluid interphase fluorescence in situ hybrization (FISH) for detection of aneuploidy; Experiences in 130 prenatal cases J Korean Med Sci 2002, 17, pp.89-92 Rubio C, Bellver J, Rodrigo L et al Preimplantation genetic screening using fluorescence in situ hybridization in patients with repetitive implantation failure and advanced maternal age: two randomized trials Fertility and Sterility 2013, 99, pp.1400-1407 Munne, Sandalinas M, Cohen J Chromosome abnormalities in human embryos In textbook of Assited Reprodutive Techniques Laboratory and Clinical Perspectives (Eds) Gardner DK, Weissman A, Howles CM and Shoham Z 2001, pp.297-318 59 ... KHUYẾN NGHỊ Trên thực tế, kỹ thuật FISH có hạn chế đánh giá số NST định Vì vậy, để có kết chẩn đốn di truyền tồn diện phơi trước cấy chuyển, cần kết hợp kỹ thuật FISH với kỹ thuật chẩn đoán khác,... độ xác cao Áp dụng quy trình hồn thiện 50 mẫu TB phơi cho thấy, tỷ lệ lệch bội NST cao chiếm tới 21/50 (42%) tổng số phơi chẩn đốn Do vậy, cần sàng lọc bất thường trước chuyển phôi nhằm hạn chế... sau tiến hành kỹ thuật FISH phơi bào khơng có bất thường số lượng cặp NST 13, 18, 21, X, Y Hình 2: Kết FISH phơi bào E2 mang NST cặp NST 13, 18, 21 NST giới tính X Hình 3: Kết FISH phôi bào E38