Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm đánh giá tác dụng của hít NO liều thấp và liều cao trên sự phát triển của phổi chuột mới đẻ. Đối tượng nghiên cứu đó là giống chuột con sprague-dawley mới đẻ được cho hít NO trong vòng 7 ngày. Phổi chuột được mổ lấy vào ngày thứ 7 và thứ 14 để đo trọng lượng, mật độ mạch máu (biểu hiện của CD34) đếm số lượng và kích thước phế nang.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Số * 2012 Nghiên cứu Y học mẫu qui mô để rút kết luận thuyết phục Chân thành cám ơn Ban Giám Đốc Bác sĩ, anh chị Cử nhân, Điều dưỡng khoa Xét nghiệm Ký sinh-Vi nấm, Nhiễm E, Nghiên cứu Sốt rét hỗ trợ tạo điều kiện cho nghiên cứu thực TÀI LIỆU THAM KHẢO Diamond R D., and Bennett, J E (1974) Prognostic factors in cryptococcal meningitis: a study of 111 cases Ann Intern Med., 80:176 – 181 Kwon – Chung KJ, and Bennett JE (1984) Epidemiologic differences between the two varieties of C neoformans Am J Epidemiol 120:123 – 130 Lê Hà Vân Anh (1986) Tổng luận Cryptococcosis nhân trường hợp VMN Cr neoformans bệnh viện Chợ Quán TPHCM Luận văn Tốt nghiệp Phó Trợ Lý, khóa 1982 – 1985, Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh Lê Minh (1995) VNMN C neoformans Đặc điểm dịch tễ học, lâm sàng, cận lâm sàng điều trị qua khảo sát hồi cứu 12 trường hợp TPHCM Luận văn chuyên khoa cấp II chuyên ngành thần kinh Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Mitchell DH, Sorrell TC, Allworth AM, Health CH, McGregor AR, Papahaoum K, M J Richards and T Gottlieb (1995) 10 11 Cryptococcal disease of the CNS in immunocompetent hosts: influence of cryptococcal variety on clinical manifestations and outcome Clin Infect Dis 20:611 – 616 Nguyễn Quang Trung (2005) VMN nấm C neoformans bệnh nhân AIDS bệnh viện Nhiệt Đới 2004 Luận Văn tốt nghiệp Bác sĩ Nội trú Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Nguyễn Trần Chính, Nguyễn Hữu Chí, Võ Minh Quang & cs (2004) Đặc điểm dịch tễ, lâm sàng nhiễm HIV/AIDS bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới năm 2003 Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới TPHCM Báo cáo tổng kết tình hình nhiễm trùng hội bệnh nhân HIV/AIDS Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới TPHCM năm 2003 Nhữ Thị Hoa (2002) Phân bố Cr neoformans var neoformans Cr neoformans var gattii 35 bệnh nhân điều trị TP.HCM 1996-1997 Tuyển tập Cơng trình Khoa học Chuyên đề Ký Sinh Trùng., trường Đại Học Y Hà Nội, tập 1, tr 80 – 84 Powerly WG (1993) Cryptococcal meningitis and AIDS Clinical Infectious Diseases 17:837 – 842 Speed B., and Dunt D (1995) Clinical and host differences between infections with the two varieties of Cryptococcus neoformans Clin Infect Dis 21:28 – 34 Swinne D, Nkurikiyinfura JB, and Muyembe TL (1986) Clinical isolates of C neoformans from Zaire Eur J Clin Microbiol 5:50 – 51 TÁC DỤNG CỦA HÍT NITRÍT OXÍT (NO) TRÊN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA PHỔI CHUỘT SAU ĐẺ Dương Qúy Sỹ*,** TÓM TẮT Mở đầu: Hít khí nitrít oxít (NO) điều trị bệnh lý trẻ sơ sinh sinh non biết đến từ nhiều năm Tuy nhiên ảnh hưởng hít NO phát triển phổi chưa nghiên cứu Mục tiêu: Đánh giá tác dụng hít NO liều thấp liều cao phát triển phổi chuột đẻ Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Chuột Sprague-Dawley đẻ cho hít NO vòng ngày Phổi chuột mổ lấy vào ngày thứ thứ 14 để đo trọng lượng, mật độ mạch máu (biểu CD34) đếm số lượng kích thước phế nang Kết quả: Hít NO khơng làm thay đổi có ý nghĩa trọng lượng phổi tỷ lệ trọng lượng phổi/trọng lượng thể Hít NO liều thấp (5 ppm) liều cao (20 ppm) có tác dụng làm tăng mật độ mạch máu phổi (P 0,05 Nhóm chứng 34,9 ± 1,4 0,014 ± 0,001 Chuột Hít NO – 14 ngày ppm 34,6 ± 2,2 0,014 ± 0,002 > 0,05 Hít NO – 20 ppm 37,2 ± 2,5 0,014 ± 0,001 > 0,05 Đo mật độ mạch máu phổi Mạch máu nhận diện đếm cấu trúc mạch máu có lòng mạch rỏ ràng có chứa hồng cầu khơng có biểu bắt màu nhuộm CD34 (màu nâu) Mật độ mạch máu thể số lượng mạch máu trung bình quan sát 1mm2 mô phổi Kết so sánh mật độ mạch máu phổi nhóm ngày thứ thứ 14 trình bày Bảng Mật độ mạch máu phổi tăng có ý nghĩa nhóm chuột hít NO vào ngày thứ so với nhóm chứng Khơng có khác biệt có ý nghĩa nhóm ngày thứ 14 Nghiên cứu Y học Bảng Đánh giá mật độ mạch máu qua biểu CD34 Chuột ngày Nhóm chứng Hít NO – ppm Hít NO – 20 ppm Chuột 14 ngày Nhóm chứng Hít NO – ppm Hít NO – 20 ppm Mật độ mạch P (so với máu (số mạch chứng) máu/mm²) 10,0 ± 4,3 13,2 ± 5,4 < 0,01 13,7 ± 5,7 < 0,01 15,2 ± 5,6 15,2 ± 6,7 14,7 ± 7,1 > 0,05 > 0,05 Đánh giá phế nang hóa Sự gia tăng khả tạo phế nang qúa trình phát triển phổi khẳng định co gia tăng số lượng phế nang giảm kích thước phế nang Số lượng phế nang trung bình đo tính từ trung tâm tiểu phế quản tận đến ngoại vi gần Kết cho thấy có gia tăng có ý nghĩa số lượng phế nang nhóm chuột hít NO với liều 20 ppm so với nhóm chứng vào ngày thứ Khơng có khác biệt nhóm chuột hít NO với liều ppm so với nhóm chứng (Bảng 3) Ở ngày thứ 14, khơng có khác biệt nhóm số phế nang trung bình đo (Bảng 3) * Kích thước trung bình phế nang: Kết cho thấy kích thước phế nang nhỏ nhóm chuột hít NO với liều 20 ppm so với nhóm chứng ngày thứ thứ 14 Ngồi khơng có khác biệt nhóm hít NO với liều ppm so với nhóm chứng ngày thứ thứ 14 (Bảng 3) Bảng Đánh giá tạo phế nang qua đếm số phế nang ngoại vi kích thước trung bình phế nang Nhóm chứng Chuột Hít NO – ppm ngày Hít NO – 20 ppm Nhóm chứng Chuột Hít NO – ppm 14 ngày Hít NO – 20 ppm P (so với nhóm chứng) RAC MLI (µm) 3,7 ± 0,9 60,4 ± 5,1 3,8 ± 0,7 58,8 ± 3,6 4,4 ± 0,9* 54,9 ± 4,1** 5,5 ± 1,2 54,7 ± 4,0 5,4 ± 1,3 53,6 ± 4,2 6,0 ± 1,2 50,2 ± 3,1 (*): < 0,05 (**): < 0,001 BÀN LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy rằng: 1) Hít NO với liều thấp (5 ppm) liều cao (20 ppm) 89 Nghiên cứu Y học vòng ngày khơng làm thay đổi trọng lượng phổi trọng lượng thể chuột đẻ; 2) Hít NO (5 ppm 20 ppm) làm tăng cách có ý nghĩa mật độ mạch máu phổi chuột ngày tuổi; 3) Hít NO với liều cao (20 ppm) làm tăng cách có ý nghĩa trình tạo phế nang vào ngày thứ 7; 4) Tác dụng hít NO hình thành mạch máu tạo phế nang xảy giai đoạn sớm (tuần đầu sau sanh) sau ngưng hít NO Tương tự nghiên cứu trước đây, kết nghiên cứu cho thấy với liều điều trị (5 – 20 ppm), hít NO khơng có tác dụng thay đổi trọng lượng phổi đặc biệt trọng lượng thể (Bảng 1) Kết cho thấy hít NO khơng có tác dụng gây phản ứng viêm làm thay đổi tính thấm mạch máu gây tình trạng phù phổi tổn thương với hậu làm tăng trọng lượng phổi Dù trọng lượng phổi không thay đổi nhóm chuột nghiên cứu, việc đánh giá mật độ mạch máu phổi chất đánh dấu CD34 cho thấy có gia tăng có ý nghĩa số lượng vi mạch máu chuột hít NO với liều khác (Bảng 2) Tuy nhiên tác dụng tồn hít NO (ngày thứ 7) sau ngưng hít NO (ngày thứ 14) Điều thú vị ngày thứ 14, mật độ mạch máu nhóm chuột nghiên cứu Sự gia tăng mật độ mạch máu tác dụng việc hít NO dược chứng minh nhiều nghiên cứu trước (4, 5) Thật vậy, qúa trình phát triển phổi, chất NO nội sinh có nguồn gốc từ tế bào nội mô biểu mô, NO ngoại sinh (hít NO) có vai trò quan trọng hình thành mạch máu phổi Kết nghiên cứu in vivo cho thấy hình thành mạch máu giảm mạnh chuột bị làm men NOS phụ thuộc tế bào nội mô (eNOS: endothelial nitride oxide synthase) có tác dụng sản xuất NO vào giai đoạn bào thai sau sanh Ở người, vai trò NO hình thành mạch máu chịu kiểm sốt chất VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor: yếu tố tăng trưởng nội mơ mạch 90 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Số * 2012 máu) thông qua thụ thể VEGF-2 (flk-1) Tuy nhiên chế kiểm soát hình thành mạch máu qúa trình phát triển phổi phức tạp với tham gia nhiều hệ thống tín hiệu khác PDGF (Platelet Derived Growth Factor: yếu tố tăng trưởng từ tiểu cầu), EGF (Epithelial Growth Factor: yếu tố tăng trưởng biểu mô) nhiều yếu tố tạo máu khác (9) Cơ chế sinh học phân tử tham gia vào qúa trình hình thành mạch máu tân tạo tác dụng hít NO chủ đề nghiên cứu khác thực Trong qúa trình phát triển phổi sau sanh, gia tăng qúa trình hình thành mạch máu nguồn gốc gia tăng việc tạo phế nang để đảm bảo qúa trình trao đổi khí (9) Trong nghiên cứu này, tạo phế nang đánh giá phương pháp chuẩn mơ tả Emery Dunnill, có cải biên Cooney Thurlbeck (1), dựa việc đếm số lượng phế nang kích thước trung bình phế nang Sự gia tăng qúa trình phế nang hố đặc trưng gia tăng số lượng phế nang đếm bắt nguốn từ tiểu phế quản tận giảm kích thước phế nang Nghiên cứu chúng tơi cho thấy hít NO làm gia tăng cách có ý nghĩa tạo phế nang với hít NO liều cao (20 ppm) Dù với liều hít NO thấp (5 ppm), kết cho thấy có xu hướng gia tăng tạo phế nang khơng có ý nghĩa thống kê (Bảng 2) Điều hít NO khơng có tác dụng trực tiếp tạo phế nang mà tăng tạo phế nang gia tăng tạo mạch máu Nhiều nghiên cứu thực nghiệm rối loạn phát triển phổi loạn dưỡng phế quản phổi nguy cập hô hấp sau sanh chứng minh tác dụng bảo vệ hít NO việc tạo phế nang Những nghiên cứu khỉ chuột sanh non phải thở máy chứng minh tác dụng bảo vệ hít NO phát triển phổi (6, 10) Nghiên cứu mô tả báo nghiên cứu thực chuột sơ sinh bình thường, đẻ ngày không kèm bất thường Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 16 * Số * 2012 phát triển phổi nhằm đánh giá tác dụng việc hít NO với liều khác vào giai đoạn sớm trình phát triển phổi sau sanh Dùng NO đường hít (ngoại sinh) có tác dụng tạo mạch máu tạo phế nang tương tự tác dụng NO nội sinh Tuy nhiên kết nghiên cứu cho thấy tác dụng hít NO xảy hít NO (ngày thứ 7) trở bình thường sau tuần (ngày thứ 14) Hiện tượng cho thấy phát triển phổi điều hòa nhiều chế khác nhằm đảm bảo hài hòa qúa phát triển mạch máu tạo phế nang vào giai đoạn sớm sau sanh Khi hít NO, chế điều hòa nội sinh bị bất hoạt NO ngoại sinh có tác dụng trực tiếp tế bào đích Tuy nhiên chế xác điều hòa cần phải nghiên cứu thêm Nghiên cứu Y học trình phát triển phổi sau sanh cần phải thực để làm sáng tỏ tượng Cám ơn: Tác giả xin trân trọng cám ơn TS Phạm Thị Hòa, GS TS Olivier Baud (INSERM-676, Bệnh viện Robert Debré - Paris), TS Hứa Huy Thông GS.TS Đinh Xuân Anh (Bệnh viện Cochin – Paris) giúp đỡ trình thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Tác dụng hít NO có liên quan chặt chẽ với liều dùng có tác dụng trực tiếp lên phát triển phổi trình sử dụng Cơ chế tác dụng việc hít NO hình thành mạch máu tạo phế nang liên quan đến nhiều yếu tố với tham gia nhiều hệ thống tín hiệu khác Việc thực nghiên cứu in vivo tác dụng hít NO 10 11 Cooney TP, Thurlbeck WM (1982) The radial alveolar count method of Emery and Mithal: a reappraisal 1- Postnatal lung growth Thorax; 37: 572-9 Dunnill MS (1962) Quantitative methods in the study of pulmonary pathology Thorax; 17: 320-8 Emery JL, Mithal A (1960) The number of alveoli in the terminal respiratory unit of man during late intrauterine life and childhood Arch Dis Child; 35: 544-7 Kinsella JP, Abman SH (2007) Inhaled nitric oxide in the premature newborn J Pediatr; 151: 10-5 Kinsella JP, Cutter GR, Walsh WF, et al (2006) Early inhaled nitric oxide therapy in premature newborns with respiratory failure N Engl J Med; 355: 354-64 Lin YJ, Markham NE, Balasubramaniam V, et al (2005) Inhaled nitric oxide enhances distal lung growth after exposure to hyperoxia in neonatal rats Pediatr Res; 58: 22-9 Neonatal inhaled Nitric Oxide Study Group (1997) Inhaled nitric oxide in full-term and nearly full-term infants with hypoxic respiratory failure New Engl J Med; 336: 597-604 Roberts JD, Polaner DM, Lang P, et al (1992) Inhaled nitric oxide in persistent pulmonary hypertension of the newborn Lancet; 340: 818-9 Stenmark KR, Abman SH (2005) Lung vascular development: Implications for the pathogenesis of bronchopulmonary dysplasia Annu Rev Physiol; 67:623–61 Ter Horst SA, Walther HJ, Poorthuis BJ, et al (2007) Inhaled nitric oxide attenuates pulmonary inflammation and fibrin deposition and prolongs survival in neonatal hyperoxic lung injury Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol; 293: L35–44 91 ... 2012 loài chuột đẻ với liều hít NO thấp (5 ppm) cao (20 ppm) Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá tác dụng hít NO liều thấp liều cao phát triển phổi chuột đẻ thông qua: 1) Sự thay đổi trọng lượng phổi theo... nhằm đánh giá tác dụng việc hít NO với liều khác vào giai đoạn sớm trình phát triển phổi sau sanh Dùng NO đường hít (ngoại sinh) có tác dụng tạo mạch máu tạo phế nang tương tự tác dụng NO nội sinh... cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Tác dụng hít NO có liên quan chặt chẽ với liều dùng có tác dụng trực tiếp lên phát triển phổi trình sử dụng Cơ chế tác dụng việc hít NO hình thành mạch máu tạo