Đang tải... (xem toàn văn)
Viêm gan siêu vi C (VGSV-C) là một quá trình bệnh lý miễn dịch với sự gia tăng ALT phản ánh sự tác động chống lại siêu vi C của tế bào lymphô T. Công trình được thiết kế nhằm khảo sát sự khác biệt của các dưới quần thể lymphô T trong máu ngoại vi của bệnh nhân VGSV-C mạn có ALT bình thường so với nhóm bệnh nhân có men gan tăng.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 Nghiên cứu Y học SỐ LƯNG TẾ BÀO T CD8 (+) VÀ TẾ BÀO T CD (+) Ở BỆNH NHÂN BỊ NHIỄM SIÊU VI VIÊM GAN C MẠN CÓ MEN GAN BÌNH THƯỜNG VÀ Ở BỆNH NHÂN CÓ MEN GAN TĂNG Đỗ Đại Hải*, Huỳnh Thanh Bình*, Võ Ngọc Quốc Minh*, Phạm Hoàng Phiệt* TÓM TẮT Viêm gan siêu vi C (VGSV-C) trình bệnh lý miễn dòch với gia tăng ALT phản ánh tác động chống lại siêu vi C tế bào lymphô T Công trình thiết kế nhằm khảo sát khác biệt quần thể lymphô T máu ngoại vi bệnh nhân VGSV-C mạn có ALT bình thường so với nhóm bệnh nhân có men gan tăng 16 bệnh nhân có ALT tăng (nhóm B), 13 bệnh nhân có men gan bình thường (nhóm A), nhóm bệnh nhân lựa chọn có tuổi giới tương đương Tỷ lệ số lượng tế bào TCD4 TCD8 thực máy đếm tế bào dòng chảy (FACS calibur flow cytometer Becton Dickinson) Kết cho thấy khác biệt TCD4+ nhóm bệnh nhân Số lượng tế bào TCD8+ tăng có ý nghóa thống kê nhóm A so với người bình thường nhóm B Phải gia tăng TCD8 yếu tố để tiên lượng tốt Chúng tiếp tục nghiên cứu cắt dọc bệnh nhân VG-C viêm gan C có điều trò SUMMARY SUBPOPULATION OF T CELLS (TCD4 AND TCD8) IN TWO GROUPS OF PATIENTS WITH CHRONIC HEPATITIS C: NORMAL ALT GROUP AND ELEVATED ALT GROUP Do Dai Hai, Huynh Thanh Binh, Vo Ngoc Quoc Minh, Pham Hoang Phiet * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol * Supplement of No * 2005: 52 – 56 It is well accepted that the chronic active hepatitis C is an immunopathologic process in which the elevation of ALT level may reflex the activation of Tc cells against infected hepatocytes The aim of this study is to investigate the differences of T cell subpopulations between the patients with chronic hepatitis C having elevated ALT level and those with normal ALT 16 chronic hepatitis C with elevated ALT level (group B) are matched with 13 patients with normal ALT (group A) Absolute number and percentage of T cell subpopulations (TCD4, TCD8, TCD3+8+, TCD3+4+) are performed on Cell Dyn 3500 (Abbott) and FACS calibur flow cytometer (Becton Dickinson) The results: The TCD4+ subpopulation is similar between the two groups The absolute number as well as the percentage of TCD8+ subpopulation is significantly higher in group A patients comparing with group B patients and normal population The mechanism of this difference is still an open question for the moment ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm gan siêu vi C bệnh lý miễn dòch Trên lâm sàng tổn thương tế bào gan biểu gián tiếp qua tăng men gan ALT Tổn thương mô bệnh học biểu trực tiếp hoại tử tế bào gan song thực tế Việt Nam việc sinh thiết gan thực bệnh nhân Về chế bệnh sinh, đáp ứng miễn dòch dòch thể không giữ vai trò quan trọng gây tổn thương tế bào gan, nghiên cứu cho thấy thân HCV không trực tiếp gây tổn thương tế bào gan Sự hủy hoại tế bào bò nhiễm tế bào lymphô T gây độc với hổ trợ tế bào T giúp * Bộ môn Sinh lý bệnh – Miễn dòch – ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh 52 Chuyên đề Y Học sở Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 đỡ Bởi mục tiêu nghiên cứu so sánh quần thể tế bào T máu ngoại vi (qua dấu ấn CD4, CD8, CD3) bệnh nhân nhiễm mạn tính siêu vi viêm gan C nhóm có men ALT bình thường nhóm có men ALT cao ĐỐI TƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đây nghiên cứu có kiểm soát tiền cứu Đối tượng Tiêu chuẩn chọn bệnh Bệnh nhân nhiễm HCV mạn tính có anti HCV dương tính đến khám theo dõi phòng khám viêm gan Bệnh Viện Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh từ tháng: 6-2002 đến tháng 12-2002, Thuộc giới lứa tuổi từ 30 đến 62, chưa điều trò Phân nhóm Các bệnh nhân đủ tiêu chuẩn có men ALT bình thường chọn (nhóm A) bệnh nhân khác khám sau có men ALT tăng ≥ 80IU/L, giới, tuổi không chênh lệch tuổi chọn (nhóm B) mềm Cell Quest để tính toán tỷ lệ quần thể (TCD3, TCD4, TCD8, TCD3+4+, TCD3+8+) Bộ Kit đònh danh gồm kháng thể đơn dòng có gắn huỳnh quang khác nhau: FITC, PE, Per CP, APC hãng Becton Dickinson cung cấp sử dụng Số liệu xử lý phương pháp thống kê y sinh học, sử dụng phần mềm SPSS 10.0 dùng để phân tích liệu KẾT QUẢ Bảng 1: Tuổi giới Nhóm A Nhóm B Tuổi trung bình Tổng số bệnh nhân 13 16 Nam 11 45,00 ± 8,68 Nữ 46.69 ± 9, 94 Nhận xét: khác biệt tuổi nhóm nam nữ (p= 0,629) Bảng 2: Số lượng tuyệt đối tế bào mang dấu ấn CD3, CD4,CD8 máu ngoại vi nhóm bệnh nhân Số lượng tế bào / μl Dấu ấn Nhóm A Nhóm B P Loại trừ CD3 1809 ± 648 1608 ± 458 0,200 Tất bệnh nhân đồng nhiễm HIV, HBV, bệnh nhiễm mạn kèm theo, sử dụng corticoids, có thai cho bú CD4 960 ± 429 901 ± 354 0,689 CD8 1125 ± 401 856 ± 547 0,151 Phương pháp Các đối tượng chọn lấy máu tónh mạch chất chống đông EDTA thử Công thức máu số lượng đếm máy tự động Cell Dyne 3500 hãng Abbott Chúng sử dụng phương pháp nhuộm huỳnh quang miễn dòch trực tiếp đếm tế bào dòng chảy (Direct Immunofluorescence Staining of Cell Surfaces and flow cytometry) Phân đònh tế bào dựa diện kháng nguyên bề mặt Với hệ thống FACS Calibur màu, nhận diện lúc dấu ấn bề mặt tế bào Trong nghiên cứu phân tích dấu ấn: CD3+, CD4+, CD8+ Sau đó, dùng phần Miễn Dòch– Sinh Lý Bệnh Nhận xét: Không có khác biệt có ý nghóa thống kê số lượng tế bào mang dấu ấn CD3+, CD4+, CD8+ nhóm có men gan bình thường (nhóm A) nhóm có men gan tăng (nhóm B) Bảng 3: Số lượng quần thể lymphô T máu ngoại vi hai nhóm bệnh nhân tính theo kết hợp dấu ấn Số lượng tế bào / μl Dấu ấn Nhóm A Nhoùm B P + CD3 CD4 925 ± 414 872 ± 360 0,718 + + 860 ± 337 613 ± 236 0.028 + CD3 CD8 Nhận xét: Không có khác biệt số lượng tế bào T CD3+CD4+ hai nhóm bệnh nhân Số lượng tế bào TCD3+CD8+ nhóm có men gan bình thường cao nhóm viêm gan có ý nghóa thống kê (p= 0,028) 53 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 BÀN LUẬN 1000 800 600 Nhoùm A 400 Nhoùm B 200 CD3+CD4+ CD3+CD8+ Biểu đồ Bảng 4: So sánh số lượng quần thể tế bào T nhóm bệnh nhân số lượng tế bào TCD3CD4 TCD3CD8 người bình thường Dấu ấn CD3+ CD4+ CD3 +CD8+ Nghiên cứu Y học Số lượng tế bào / μl Nhóm A Giá trò bình thường* P 925 ± 414 915 ± 339 0,928 860 ± 337 626 ± 245 0.005 1000 800 600 Nhóm A 400 Bình thườn g 200 CD3+ CD4+ CD3 +CD8+ Biểu đồ Nhận xét: Số lượng tế bào CD3+CD4+ bệnh nhân không viêm gan không khác với người bình thường Số lượng tế bào CD3+CD8+ nhiều người bình thường có ý nghóa thống kê (p=0,005) Đáp ứng miễn dòch chống HCV phức tạp, đến chưa có nhiều nghiên cứu trực tiếp người, hiểu biết chủ yếu thu từ nghiên cứu thực nghiệm (chimpanzee) Đáp ứng miễn dòch bẩm sinh không phát huy tác dụng loại trừ vi rút bò ức chế từ đầu tác động kháng nguyên vi rút protein E2 Kháng thể đặc hiệu thường hình thành sau 7-10 tuần [3] từ nhiễm dấu hiệu cho biết nhiễm HCV lọai trừ tế bào bò nhiễm kháng thể chống kháng nguyên protein vỏ thường có tác động trung hòa chống xâm nhập virus vào tế bào nhắm vào virus để chúng bò loại bỏ tế bào thực bào Kháng thể gây tổn thương tế bào gan nhận điện kháng nguyên màng tế bào, đến ngày kháng nguyên cấu trúc, E1, E2, NS3,NS4 thấy bào tương tế bào gan(6), chưa thấy màng tế bào (in vivo in vitro) (Hình 1) Vì tổn thương tế bào gan thông qua kháng thể không giữ vai trò quan trọng không tham gia vào chế viêm gan HCV Đến người ta nghó đáp ứng miễn dòch tế bào giữ vai trò quan trọng việc kiểm soát tình trạng nhiễm, gây tổn thương gan loại trừ tế bào bò nhiễm nên việc nghiên cứu đáp ứng miễn dòch tế bào thông qua việc nghiên cứu số lượng quần thể tế bào lymphô TH (TCD4+) TC (TCD8+) máu ngoại vi giúp ích cho việc đánh giá phần trạng thái miễn dòch người bệnh Bảng 5: Dấu ấn CD3+ CD4+ CD3 +CD8+ Số lượng tế bào / μl Nhóm B Giá trò bình thường* P 872 ± 360 915 ± 339 0,667 613 ± 236 626 ± 245 0.849 Nhaän xét: Số lượng tế bào CD3+CD4+ CD3+CD8+ bệnh nhân viêm gan không khác với người bình thường Ghi chú: Số lượng tế bào TCD4+ TCCD8+ người bình thường (5) 54 Hình 1: Đáp ứng miễn dòch chống HCV Chuyên đề Y Học sở Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 Nghiên cứu Y học Trong công trình nghiên cứu hai nhóm bệnh nhân bò nhiễm HCV, nhóm A nhóm có ALT bình thường nói lên trạng thái tự giới hạn tình trạng nhiễm, thấy số lượng tế bào TCD4+ không khác với người bình thường, số lượng tế bào TCD8+ nhiều người bình thường có ý nghóa thống kê (p=0,005) (Bảng 4) Khi so sánh với số lượng tế bào TCD8+ nhóm có viêm gan nhận thấy số lượng tế bào TCD8+ bệnh nhân có men gan bình thường cao (p=0.028) (Bảng 3) Phải có tình trạng đáp ứng tăng sinh mạnh tế bào T gây độc, nhờ việc kiểm soát tình trạng nhiễm có hiệu Chúng thấy nhận đònh phù hợp với chuyên gia viêm gan nghiên cứu chimpanzee là: có đáp ứng tăng sinh lâu dài tế bào TCD8+ vật loại trừ HCV (7), điều không xảy vật tiếp tục bò viêm gan mạn Điều khác với viêm gan siêu vi B mà trước chúng tối nghiên cứu, nhóm bệnh nhân có viêm gan (ALT tăng), số lượng tế bào TCD4+ TCD8+đều gia tăng HCV / tổn thương gan 1000 100 ALT HCV 10 /ml 10 01 10 12 14 Thời gian (tuần) 16 18 20 Biểu đồ 3: Gần công trình tổng quan nghiên cứu động học đáp ứng miễn dòch HCV HBV (3) cho thấy HCV chép sớm, vòng tuần sau nhiễm số lượng HCV đạt đến 106/ml trước men gan ALT gia tăng (Hình 2), gia tăng kích thích TCD8+ đặc hiệu hoạt động Cerney(8) nghiên cứu tế bào TCD8+ bệnh nhân viêm gan vi rút C, phương pháp hồi qui tuyến tính để tính số tế bào tiền thân T gây độc (CTLs), ước đoán số lượng tế bào TCD8+ máu ngoại vi gấp 10-100 lần số lượng tế bào TCD8+ diện gan Mặc dù có tạo khoang (compartmentalization), việc nghiên cứu tế bào lymphô từ máu ngoại vi mang lại nhiều ý nghóa thực hành Trên nhóm bệnh nhân bò viêm gan vi rút C mạn, nhận thấy số lượng tế bào TCD4+, Miễn Dòch– Sinh Lý Bệnh TCD8+ không khác với người bình thường (Bảng 4) so sánh với nhóm A, số lượng TCD8+ có trò số thấp có ý nghóa thống kê (p=0.028) (Bảng 3) Với số liệu nói đáp ứng tăng sinh tế bào T gây độc, điều phù hợp với chuyên gia viêm gan vi rút (3): có suy sụp đáp ứng miễn dòch dòch thể tế bào bệnh nhân viêm gan siêu vi C mạn, số lượng tế bào CTLs giảm dần số lượng chất lượng gan máu ngoại vi đáp ứng lệch hướng đáp ứng Th2 Do dù CTLs giữ vai trò tổn thương tế bào gan không đủ khả loại trừ siêu vi Tóm lại, bệnh nhân có khả tự kiểm soát tình trạng nhiễm, có đáp ứng tăng sinh tế bào TCD8+ máu ngoại vi 55 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2005 KẾT LUẬN Số người bò nhiễm HCV ngày tăng, Việt Nam tỷ lệ nhiễm tùy theo thống kê từ đến 10%, có 80% diễn tiến thành viêm gan mạn Hiện việc điều trò dựa nguyên lý ức chế chép phối hợp với thuốc điều biến miễn dòch (IFN α, Thymosine α) Việc kích hoạt hệ thống miễn dòch vaccine trò liệu (therapeutic vaccine) phối hợp với ức chế chép virút (ribavirin) chiến lược cổ vũ Qua nghiên cúu nhận thấy có gia tăng tế bào TCD8+ rõ nét bệnh nhân tự kiểm soát vi rút Như trình điều trò, gia tăng số lượng tế bào TCD8+ phải yếu tố để tiên lượng tốt, để chúng minh điều thực nghiên cứu cắt dọc bệnh nhân viêm gan C có điều trò 56 Nghiên cứu Y học TÀI LIỆU THAM KHẢO Bertoletti A Ferrari C Kinetics of immune response during HBV and HCV infection July 2003- Volume 23Number Cerney A, MacHutchinson JG Cytotoxic T lymphocyte response to hepatitis C derived peptids containing the HLA A.2.1 binding motif Journal of Clincal Investigation 1995; 95: 521-530 Nelson DR Lau JYN Pathogenesis of chronic hehatitis C virus infection, page 65-76, 1998 Schinazi RF Therapies for viral hepatitis International medical press, 1998 Selby MJ, Choo QL, Berger K Expression, identification and subcellular localization of proteins encoded by the hepatitis C genome Journal of General Virology 1993; 74:1103-1113 Thimme R, Oldach D, Chang KM Determinants of viral clearance and persistence during acute hepatitis C infection J Exp Med 2001: 194:1395-1406 Tran Khiem Hung, Lymphocyte subpopulation in healthy adults donors of Ho Chi Minh City Viet Nam Journal of Medical Research Vol 26 No 2003 pp 27-32 Võ Ngọc Quốc Minh Điều trò viêm gan siêu vi C phối hợp Ribavirin Interferon Luận văn thạc só y học 2003 Chuyên đề Y Học sở ... thường, số lượng tế bào TCD8+ nhiều người bình thường c ý nghóa thống kê (p=0,005) (Bảng 4) Khi so sánh với số lượng tế bào TCD8+ nhóm c vi m gan nhận thấy số lượng tế bào TCD8+ bệnh nhân c men gan. .. 400 Bình thườn g 200 CD3+ CD4+ CD3 +CD8+ Biểu đồ Nhận xét: Số lượng tế bào CD3+CD4+ bệnh nhân không vi m gan không kh c với người bình thường Số lượng tế bào CD3+CD8+ nhiều người bình thường c ... Với số liệu nói đáp ứng tăng sinh tế bào T gây đ c, điều phù hợp với chuyên gia vi m gan vi rút (3): c suy sụp đáp ứng miễn dòch dòch thể tế bào bệnh nhân vi m gan siêu vi C mạn, số lượng tế bào