Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm xác định mức độ bộc lộ của Ki-67, p53, CK7, CK20 và mối liên quan với giai đoạn lâm sàng. Nghiên cứu thực hiện trên 78 bệnh nhân ung thư dạ dày tại bệnh viện K Hà Nội được nhuộm hóa mô miễn dịch (HMMD). Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
NGHIÊN CƢ!U SỰ BỘC LỘ CK7, CK20, KI-67, P53 VÀ GIAI ĐOẠN LÂM SÀNG CỦA UNG THƢ DẠ DÀY Nguyễn Văn Chủ*, Trần Văn Hợp*, Lê Đình Roanh*, Trần Đức Hưởng * TÓM TẮT Mục tiêu: Xác định mức độ bộc lộ Ki-67, p53, CK7, CK20 mối liên quan với giai đoạn lâm sàng Đối tượng phương pháp: 78 bệnh nhân UTDD bệnh viện K Hà Nội nhuộm hóa mơ miễn dịch (HMMD) Kết quả: Sự bộc lộc Ki-67 chiếm tỷ lệ 67,9%, p53(+) 44,9%, CK7(+) chiếm 42,3% CK20(+) 28,2% Sự bộc lộ Ki-67+p53+ chiếm tỷ lệ cao 76,9% (p0,05) Ki-67+ p53+ chiếm tỷ lệ cao giai đoạn IV (lần lượt 80 70%) Kết luận: Có kết hợp có ý nghĩa thống kê bộc lộ Ki-67 p53 ung thư dày Sự bộc lộ Ki-67 P53 có xu hướng tăng theo giai đoạn lâm sàng Từ khóa: Hóa mơ miễn dịch, giai đoạn lâm sàng, ung thư dày ABSTRACT STUDYING KI-67, P53, CK7, CK20 EXPRESSION AND CLINICAL STAGING OF GASTRIC CANCER IN HA NOI K HOSPITAL Nguyen Van Chu, Tran Van Hop, Le Đinh Roanh, Tran Duc Huong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 11 – Supplement of No - 2007: 61 – 67 Objectives: To determine the expression of CK7, CK20, Ki-67, p53 markers and the relationship between these markers and the clinical stage Methods: 78 cases were diagnosed gastric cancer at the Pathological Department of K Hospital Ki-67, p53, CK7, CK20 were detected with immunohistochemical staining in 78 case of gactric cancers Results: Expression of Ki-67, p53, CK7 and CK20 markers are positive (67,9%, 44,9%, 42,3% and 28,2% in turn) Coexpresion of positive Ki-67 and p53 are the most common (76,9%) (p0,05) Positive Ki-67 and p53 are the most common in stage IV (80% and 70% in turn) Conclusions: Expression of Ki-67 and p53 are combined significally in gastric cancer Expression of Ki-67 and p53 tend to increase with clinical stage Key words: Immunohistochemistry, stage, gastric cancer giới(4,11,12) Tiên lượng bệnh ung thư dày ĐẶT VẤNĐỀ phụ thuộc vào việc phát bệnh sớm tiếp Ung thư dày (UTDD) bệnh ác tính đến điều trị bệnh triệt để Việt Nam, đa thường gặp Theo số liệu Hiệp hội chống số bệnh nhân chẩn đoán điều trị ung thư quốc tế, năm 2000 có 876.000 người bệnh giai đoạn muộn, ảnh hưởng rõ rệt tới mắc UTDD, chiếm vị trí thứ tổng kết điều trị(4) số loại ung thư nước phát Với phát triển sinh học phân tử – triển, UTDD có tỷ lệ cao chiếm khoảng 2/3 men học miễn dịch học, kỹ thuật hóa mơ trường hợp UTDD mắc toàn miễn dịch (HMMD) đời giúp ích cho phân * Bộ mơn Giải Phẫu Bệnh - Đại học Y Hà Nội Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh – Tế Bào Bệnh Học 61 loại mô bệnh học (MBH) UTDD phương pháp có ích cho chẩn đoán, phân loại, điều trị đánh giá tiên lượng bệnh, đặc biệt khối u biệt hóa kém, khơng biệt hóa Trong UTBM tuyến dày phân bố dấu ấn cytokeratin (CK) tùy thuộc vào loại MBH giai đoạn biệt hóa tế bào u Sự bộc lộ sản phẩm đột biến gen p53 số tăng sinh nhân Ki-67 ung thư nói chung ung thư dày nói riêng phản ánh tính chất ác tính tiên lượng xấu bệnh Trong nước có nghiên cứu bộc lộ dấu ấn miễn dịch loại MBH UTDD, nhiên chưa có cơng trình nghiên cứu mối liên quan bộc lộ dấu ấn CK7, CK20, Ki-67 P53 với giai đoạn lâm sàng ung thư dày Vì lý trên, tiến hành nghiên cứu đề tài nhằm mục đích: (1) Xác định bộc lộ dấu ấn CK7, CK20, Ki-67 p53 ung thư dày (2) Đánh giá mối liên quan bộc lộ dấu ấn với giai đoạn lâm sàng ĐỐI TƢỢNG-PHƢƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tƣợng nghiên cứu 78 bệnh nhân chẩn đoán MBH UTDD bệnh viện K qua mẫu bệnh phẩm phẫu thuật Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân Bệnh nhân sau phẫu thuật UTDD, bệnh phẩm có đủ lớp thành dày, có hồ sơ ghi rõ thông số giai đoạn lâm sàng Tiêu chuản loại trừ Các bệnh nhân không đủ tiêu chuẩn khơng đưa vào nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Chúng tiến hành theo phương pháp nghiên cứu quan sát mô tả - Bệnh phẩm Các bệnh phẩm khối u dày sau mổ cắt mảnh rìa khối u trung tâm để cố định, chuyển đúc paraffin - Nhuộm tiêu - Phương pháp nhuộm thông thường: Tất khối nến cắt mảnh có độ dày m nhuộm tiêu theo phương pháp H.E thông thường - Phương pháp hóa mơ miễn dịch: Chúng tơi tiến hành kỹ thuật xếp dãy mô (tissue array) chuyển nhiều mẫu mô nhiều bệnh nhân vào block Là kỹ thuật áp dụng nước ngồi có sửa đổi để phù hợp với điều kiện nước ta, đơn giản, tiết kiệm hố chất, thời gian cơng sức nên hiệu - Nhuộm CK7, CK 20, Ki-67 p53 với 29 trường hợp chẩn đoán MBH sau phẫu thuật cắt bỏ khối u UTBM loại ruột lan tỏa, khơng có lt kèm theo có vùng không ung thư để làm chứng Địa điểm thực đề tài Các mẫu bệnh phẩm nghiên cứu chuyển, đúc, cắt, nhuộm H-E môn GPB trường Đại học Y Hà Nội nhuộm HMMD khoa GPB bệnh viện K Hà Nội Đánh giá kết Phân tích kết nhuộm HMMD + Biểu dương tính màng bào tương có màu vàng nâu, kết âm tính màng bào tương không bắt màu thuốc nhuộm + Đánh giá bộc lộ CK7, CK 20, Ki-67 p53 ung thư dày Xử lý số liệu Tất số liệu nghiên cứu thu xử lý theo phương pháp thống kê phần mềm Epi-Info 6.0 KẾT QUẢ NGHIÊNCỨU Nhận xét: ung thư dày tỷ lệ p53(+) Sự bộc lộ dấu ấn miễn dịch chiếm 44,9% Tỷ lệ p53(+) có xu hướng tăng Bảng 1: Mối liên quan bộc lộ p53 Ki-67 dần theo giai đoạn lâm sàng, cao giai Ki-67 đoạn IV (70,0%) Mức độ p53(+) có xu P53 Âm tính Dương tính Âm tính 22 Dương tính 21 60 43 35 25 53 78 Nhận xét: đồng bộc lộ Ki-67 p53 chiếm 60 bệnh nhân (76,9%) không đồng bộc lộ Ki-67 p53 22 bệnh nhân (28,2%), nhiên bộc lộ Ki-67 đơn cao p53 (21 bệnh nhân-26,9% trái ngược với bệnh nhân-3,8%) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p0,05 (p=0,23) Bảng 4: Mối liên quan giai đoạn lâm sàng Ki-67 Giai đoạn Âm tính N % IA 40,0 IB 11 57,9 II 20,8 IIIA 23,5 IIIB 33,3 IV 20,0 25 32,1 Bảng 2: Mối liên quan bộc lộ CK7 CK20 CK7 CK20 Âm tính Dương tính 29 16 Âm tính 27 Dương tính 56 22 45 33 78 Nhận xét: đồng bộc lộ CK7+CK20+ chiếm bệnh nhân (7,7%) không đồng bộc lộ CK7- CK20- 29 bệnh nhân (37,2%), bộc lộ CK7+CK20- 27 bệnh nhân (34,6%) bộc lộ CK7-CK20+ 16 bệnh nhân (20,5%) Sự khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với p>0,05 (P=0,09) Mối liên quan bộc lộ dấu ấn miễn dịch giai đoạn lâm sàng Bảng 3: Mối liên quan giai đoạn lâm sàng P53 Giai đoạn Âm tính N % IA 80,0 IB 15 78,9 II 11 45,8 IIIA 47,1 IIIB 66,7 IV 30,0 43 55,1 + Dương tính ++ +++ % 20,0 21,1 13 54,2 52,9 3 33,3 70,0 35 44,9 N % 6,4 19 24,4 24 30,8 17 21,8 3,8 10 12,8 78 + 1 Dương tính ++ +++ % 60,0 42,1 19 79,2 13 76,5 66,7 80,0 53 66,9 N % 6,4 19 24,4 24 30,8 17 21,8 3,8 10 12,8 78 Nhận xét: tỷ lệ Ki-67(+) ung thư dày chiếm 66,9% chiếm tỷ lệ cao giai đoạn IV (80%) Các giai đoạn khác chiếm tỷ lệ thấp >50% Mức độ Ki-67(+) từ 1+ tới 3+ khơng có khác biệt giai lâm sàng Tuy nhiên khác biệt ý nghĩa thống kê với p>0,05 (p=0,37) Bảng 5: Mối liên quan giai đoạn lâm sàng CK7, CK20 Giai CK7+CK20+ CK7+CK20- CK7-CK20+ đoạn N % N % N % IA 3,8 IB 18,5 12,5 II 66,6 10 37,0 31,3 IIIA 16,7 25,8 25,0 IIIB 3,8 6,2 IV 16,7 11,1 25,0 7,7 27 34,6 16 20,5 CK7-CK20N % 13,8 12 41,2 17,2 17,2 3,7 6,9 29 37,2 Nhận xét: ung thư dày, CK7CK20- chiếm tỷ lệ cao (37,2%), tiếp đến CK7+CK20- (34,6%), CK7-CK20+ chiếm tỷ lệ Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh – Tế Bào Bệnh Học 63 20,5%, đồng l\bộc lộ dấu ấn chiếm tỷ lệ thấp (7,7%) Sự khác biệt bộc lộ dấu ấn với giai đoạn lâm sàng khơng có ý nghĩa thống kê với p>0,05 (p=0,21) Hình UTBM tuyến dày (CK7+ x100) Hình 1: UTBM tuyến dày (p53+ x100) Hình 4: UTBM tuyến dày (CK20+ x250) BÀNLUẬN Sự bộc lộ dấu ấn miễn dịch ung thƣ dày Hình 2: UTBM tuyến dày (Ki-67+ x100) P53 phosphoprotein gắn DNA 53kd, mã hoá cho gen ức chế u nằm nhánh ngắn nhiễm sắc thể số 17 (17p13.1) Gen p53 điều hoà phát triển tế bào - chu kì tế bào, bao gồm chết tế bào theo chương trình (apoptois), thúc đẩy ổn định nhiễm sắc thể ức chế tế bào vào pha S(5) Sự đột biến gen p53 xảy chuyển đoạn G - T codon 157, 158, 248 273(14) Đột biến gen p53 bất hoạt chức với gen p53 nguyên vẹn phổ biến nhiều ung thư người số tình trạng tiền ung thư, phản ánh điều hoà phát triển bình thường(5,14) Sự chức gen p53 đóng vai trò quan trọng tạo ung thư Sự tích lũy p53 kết hợp mạnh với kích thước khối u giai đoạn u P53 (+) có khả di hạch di xa cao Sự tích lũy p53 thơng số độc lập có giá trị cao tiên lượng bệnh xấu, khơng có khác biệt bộc lộ p53 bệnh phẩm nội soi phẫu thuật Đột biến gen p53 dẫn tới thời gian bán huỷ kéo dài tích lũy protein p53 tới mức phát hố mơ miễn dịch (HMMD) nhân tế bào ung thư(6,14) Trong năm gần người ta tập trung vào việc nghiên cứu vận dụng hiểu biết vai trò p53 lâm sàng để điều trị bệnh nhân phân tích p53 dấu ấn có tiềm việc nghiên cứu mối tương quan bộc lộ p53 phát triển u, tiến triển, hậu việc vạch chiến lược điều trị đặc biệt nhằm phục hồi chức bình thường p53(17) Trong nghiên cứu (bảng 3) bộc lộ sản phẩm protein đột biến gen p53 chiếm 44,9% Theo nghiên cứu Liu cs (2001) thấy p53(+) chiếm tỷ lệ 42,1%, nghiên cứu Ikeguchi cs (1999) tỷ lệ p53(+) chiếm 42,5%(6,8) Trong nghiên cứu năm 2003 bộc lộ p53 (+) chiếm tỷ lệ 43,8%(1) Kết nghiên cứu tương tự kết tác giả ngồi nước Chúng tơi gặp số trường hợp niêm mạc biểu loạn sản có bộc lộ p53 (+) Phải bộc lộ p53 giúp cho việc đánh giá tổn thương tiền ung thư tổn thương ác tính tiêu nhuộm H-E khó đánh giá Ki-67 kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên nhân Ki-67 bộc lộ tế bào tăng sinh (pha G1, S, M, G2) chu kỳ tế bào Kháng nguyên phát nhuộm HMMD Những khối u có bộc lộ Ki-67 cao tiến triển nhanh Marhashemi CS tính hoạt động tăng sinh nhân nhuộm HMMD với Ki67(7) Kết nghiên cứu cho thấy (bảng 4) bộc lộ dấu ấn Ki-67 ung thư dày chiếm tỷ lệ 67,9% Chúng nhận thấy đồng bộc lộ Ki-67 p53 chiếm 60 bệnh nhân (76,9%) không đồng bộc lộ Ki-67 p53 22 bệnh nhân (28,2%), nhiên bộc lộ Ki-67 đơn cao p53 (21 bệnh nhân-26,9% trái ngược với bệnh nhân-3,8%) Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với p0,05 (P=0,09) Theo kết nghiên cứu Shen (2002) CK7+ CK20+ chiếm tỷ lệ cao nhất: 66,0%, thấp CK7-CK20- 8% Theo Wang cs (1995) bộc lộ CK7 CK20 dương tính chiếm tỷ lệ cao 38%, CK7(-) / CK20(+): 35%, thấp dấu ấn âm tính: 10%(13,16) Trái lại, nghiên cứu Chu cs (2000) biểu lộ CK7(-) / CK20(+) chiếm tỷ lệ cao nhất: 37%, thấp dấu ấn dương tính: 13%(4) Sự khác biệt tác giả nhiều lý mẫu nghiên cứu, kỹ thuật hoá chất nhuộm HMMD Mối liên quan bộc lộ dấu ấn miễn dịch giai đoạn lâm sàng UTDD Trong nghiên cứu (bảng 3) bệnh nhân bị ung thư dày giai đoạn II chiếm tỷ lệ cao (30,8%), tiếp đến giai đoạn IB IIIA 24,4% 21,8% Ung thư dày giai đoạn IV chiếm tỷ lệ đáng kể 12,8% Ung thư dày giai đoạn IA IIIB chiếm tỷ lệ thấp nghiên cứu chúng tơi (6,4% 3,8%) Theo nghiên cứu Đồn Hữu Nghị cs (2001) giai đoạn IIIA chiếm tỷ lệ cao 37,8%, tiếp đến giai đoạn II 32,6%, giai đoạn IV 12,6% giai đoạn IA IB 5,2 11,8%, không gặp trường hợp giai đoạn IIIB Trong Mỹ theo báo cáo Scott cs (2000) từ năm 1992-1996 có 24% UTDD giai đoạn IV, tiếp đến giai đoạn IIIA II 23 20%, giai đoạn Ib 14%, giai đoạn IIIB IA có tỷ lệ xấp xỉ 9%, đặc biệt có 1% bệnh nhân ung thư dày phát giai đoạn O(12) Kết nghiên cứu tương tự kết nghiên cứu Đoàn Hữu Nghị, chưa thống với kết nghiên cứu Scott Điều số lượng bệnh nhân ung thư dày giai đoạn IV tuyến không chuyển lên bệnh viện K để điều trị Về sản phẩm protein đột biến gen p53 ung thư dày, thấy tỷ lệ p53(+) có xu hướng tăng dần theo giai đoạn lâm sàng, cao giai đoạn IV (70,0%), thấp giai đoạn IA chiếm tỷ lệ 20,0% Mức độ p53(+) có xu hướng tăng dần từ 1+ tới 3+ Giai đoạn lâm sàng phản ánh tình trạng ác tính tiên lượng xấu bệnh Theo kết nghiên cứu chúng tơi, tình trạng đột biến gen p53 thể sản phẩn protein đột biến gen p53 qua nhuộm HMMD nhân tế bào ung thư mức độ p53(+) từ 1+ tới 3+ có xu hướng tăng dần giai đoạn lâm sàng Như bộc lộ protein bất thường p53(+) yếu tố phản ánh tình trạng ác tính tiên lượng xấu bệnh Tuy nhiên, để xác định ý nghĩa tình trạng đột biến gen p53 với giai đoạn lâm sàng cần có nghiên cứu sâu với số lượng bệnh nhân lớn Chỉ số tăng sinh nhân bất thường thường thấy tình trạng ác tính Trong nghiên cứu (bảng 4) mức độ bộc lộ Ki67 (+) chiếm tỷ lệ cao giai đoạn IV (80,0%), thấp giai đoạn IB (42,1%), giai đoạn II IIIA chiếm tỷ lệ 79,2% 76,5%, đứng thứ Mức độ Ki-67(+) từ 1+ tới 3+ khơng có khác biệt giai lâm sàng Sự bộc lộ Ki-67 theo giai đoạn lâm sàng ung thư dày tương tự bộc lộ sản phẩm protein bất thường gen p53 với giai đoạn ung thư dày Theo kết nghiên cứu (bảng 1) bộc lộ kết hợp Ki-67 p53 có khác biệt có ý nghĩa thống kê với P0,05 (p=0,21) Không thấy khác biệt bộc lộ CK7 CK20 theo giai đoạn lâm sàng KẾT LUẬN Qua nghiên cứu 78 trường hợp ung thư dày phẫu thuật Bệnh viện K nhuộm HMMD rút số kết luận sau: Mối liên quan bộc lộ dấu ấn giai đoạn lâm sàng Sự bộc lộ Ki-67 p53 xu hướng chiếm tỷ lệ cao giai đoạn IV thấp giai đoạn I (IA IB) CK7 CK20 khơng có khác biệt với giai đoạn lâm sàng TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 Mức độ bộc lộ dấu ấn miễn dịch: Trong ung thư dày bộc lộc Ki-67 chiếm tỷ lệ 67,9%, p53(+) 44,9%, CK7(+) chiếm 42,3% CK20(+) 28,2% Sự bộc lộ kết hợp Ki-67 p53 khác biệt có ý nghĩa thống kê 14 15 16 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh – Tế Bào Bệnh Học Boyer KL (1997): Cancers of the Upper Gastrointestinal Tract Primary Care Oncology W.B Saunders Company: 133-5 Chausovsky G, et al (1999) Expression of CK 20 in the blood of the ptients with disseminated carcinoma of the pancreas, colon, stomach, and lung Cancer 86 (11): 2389-405 Chu P, et al (2000) CK7 and CK20 expression in epithelial neoplasms: a survey of 435 cases Modern pathology 13: 962 – 72 David G et al (2002): Immunohistochemistry of the Prostaste and Bladder, Testis, and Renal Tumors in Diagnostic Immunohistochemistry Churchill Livingstone, 435-7 Đoàn Hữu Nghị cs (2001): Đánh giá giai đoạn ung thư dày qua số tuyến bệnh viện Hội thảo lần 2-trung tâm hợp tác nghiên cứu Tổ chức Y tế Thế giới ung thư dày.60-1 Ikeguchi M et al (1999: Mutated p53 protein expression and proliferative activity in advanced gastric cancer Hepatogastroenterology 46(28):2648-53 Kelsen DP (2002) Gastrointestinal Oncology: Principles and Practice Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins 312-7, 359-66 Liu XP et al (2001): Expression of p21(WAF1/CIP1) and p53 proteins in gastric carcinoma: its relationships with cell proliferation activity and prognosis Cancer Lett 170(2):183-9 Miettien M (1995) Keratine 20: Immunohistochemical marker for gastrointestinal, urothelial and Merkel cell carcinomas Mod Patho 8: 384-8 Nguyễn Văn Chủ cs (2003): Nghiên cứu mơ bệnh học số đặc điểm hóa mơ miễn dịch ung thư dày Bệnh viện K Luận văn Thạc sĩ Y học 45-50 Parkin M (2001) Global cancer statistics in the year 2000 The lancet oncology, vol2: 543- Scott A.H et al (2000): The national center data base report on poor survival of US gastric Carcinoma patients treated with gastrectomy Cancer, 88: 921-32 Shen B, et al (2002) CK expression patterns in noncardia, intestinal metaplasia-associated gastric adenocarcinoma: implication for the evaluation of intestinal metaplasia and tumors at the esophagogastric junction Cancer 94 (3): 820-31 Sirvent JJ (2001): Prognostic value of p53 expression and clicopathological factors in infiltrating ductal carcinoma of the breast A study of 192 patients Histol Hitopathol 16(1): 99-106 Taniere P, et al (2002) CK expression in adenocarcinoma of esophagogastric junction: a comparative study of adenocarcinoma of the distal esophagus and of the proximal stomach Am J Surg Pathol 26 (9): 1213-21 Wang NP, Zee S, Zarbo RJ, Bacchi CE, Gown AM (1995) Coordinate expression of CK7 and 20 defines unique subsets of carcinomas Appl Immunohistochemical 99-107 Ziyaie D et al (2000): p53 and breast cancer Breast 9(5): 239-46 67 Nghieân cứu Y học 68 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 11 * Số * 2007 ... Ki-67 theo giai đoạn lâm sàng ung thư dày tương tự bộc lộ sản phẩm protein bất thư ng gen p53 với giai đoạn ung thư dày Theo kết nghiên cứu (bảng 1) bộc lộ kết hợp Ki-67 p53 có khác biệt có ý... hành nghiên cứu đề tài nhằm mục đích: (1) Xác định bộc lộ dấu ấn CK7, CK20, Ki-67 p53 ung thư dày (2) Đánh giá mối liên quan bộc lộ dấu ấn với giai đoạn lâm sàng ĐỐI TƢỢNG-PHƢƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU... Trong nước có nghiên cứu bộc lộ dấu ấn miễn dịch loại MBH UTDD, nhiên chưa có cơng trình nghiên cứu mối liên quan bộc lộ dấu ấn CK7, CK20, Ki-67 P53 với giai đoạn lâm sàng ung thư dày Vì lý trên,