Nghiên cứu ảnh hưởng của dịch chiết nấm độc trắng hình nón (amanita virosa) lên một số chỉ tiêu huyết học và tim mạch trên động vật thực nghiệm

Mục đích nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá ảnh hưởng của dịch chiết nấm độc trắng hình nón lên một số chỉ tiêu huyết học và tim mạch trên động vật thí nghiệm (giới hạn ở chỉ tiêu mạch, huyết áp). Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.

TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013 NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA DỊCH CHIẾT NẤM ĐỘC TRẮNG HÌNH NĨN (AMANITA VIROSA) LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC VÀ TIM MẠCH TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Nguyễn Tiến Dũng*; Phạm Duệ*; Hồng Cơng Minh** TĨM TẮT Thực nghiệm thỏ chuột cống trắng tiêm ổ bụng dịch chiết nấm độc trắng (NĐT) hình nón (amanita virosa) với liều 2/3 liều chết tối thiểu (LDmin) Kết cho thấy có thay đổi số tiêu huyết học tim mạch so với trước ngộ độc Số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố máu thỏ giảm ngày thứ 10 Số lượng bạch cầu, tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng, tỷ lệ bạch cầu lympho mono giảm ngày thứ thứ Tỷ lệ bạch cầu ưa axít tăng, bạch cầu ưa bazơ giảm ngày thứ sau ngộ độc Số lượng tiểu cầu giảm, thời gian máu đông, máu chảy tăng ngày thứ 10 Mạch tăng, huyết áp giảm chuột cống trắng thứ 24 sau ngộ độc * Từ khóa: Nấm độc trắng hình nón; Huyết học; Tim mạch; Động vật thực nghiệm The effects of toxic mushroom extract (amanita virosa) on some hemological and cardio-vascular parameters in experimental animals Summary Rabbits and Wistar white rats exposed to extract of Amanita virosa in dose of 2/3 LD had some changes of hematological and cardio-vascular parameters in camparison with before exposure The number of red blood cells and content of hemoglobine were decreased in the 5th and 10th days after exposure The number of white blood cells, proportion of neutrophils were increased, proportion of lymphocytes and monocytes were decreased in the first and the fifth days Proportion of eosinophils was decreased and proportion of basophils was increased in the first day after exposure The number of platelets was decreased, clotted blood time and bleeding time were increased with statistical significance in the 5th and 10th days Pulse was increased, blood pressure was decreased in exposed white rats at the 24th hour after exposure * Key words: Amanita virosa mushroom; Hemological, cardio-vascular parameter; Experimental animals ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần tỉnh miền núi phía Bắc nước ta liên tục xảy vụ ngộ độc nấm độc, có tỉnh Cao Bằng Theo điều tra Trung tâm Phòng chống Nhiễm độc, Học viện Quân y, năm (2003 - 2009) Cao Bằng * Bệnh viện Bạch Mai ** Học viện Quân y Chịu trách nhiệm nội dung khoa học: PGS TS Nguyễn Hoàng Thanh TS Phạm Văn Trân 14 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013 xảy 29 vụ ngộ độc nấm độc với tổng số 81 người mắc, tử vong 17 người (21%) Một loài nấm độc gây chết người Cao Bằng NĐT hình nón (Amanita virosa) Đã có số vụ ngộ độc chết người huyện Thạch An, tỉnh Cao Bằng ăn phải loại nấm Từ trước đến nay, nhiều người dân nghĩ nấm độc thường có màu sặc sỡ màu đỏ, màu vàng, màu xanh đen… Tuy nhiên, loài NĐT hình nón lại có màu trắng tinh khiết, mập mạp, người dân nghĩ lồi nấm khơng độc nên hái ăn bị ngộ độc Theo số cơng trình nghiên cứu nước ngồi, độc tố lồi nấm độc trắng hình nón amanitin (hay gọi amatoxin) Loại độc tố bền với nhiệt, nên đun nấu không làm độc tính nấm [3, 4] Cùng lồi nấm mọc vùng khí hậu, thổ nhưỡng khác có độc tính khác Các cơng trình nghiên cứu độc tính nấm độc mọc Việt Nam Cho đến chưa có cơng trình nghiên cứu độc tính ảnh hưởng NĐT hình nón mọc Cao Bằng lên thể Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài nhằm: Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết NĐT hình nón lên số tiêu huyết học tim mạch động vật thí nghiệm (giới hạn tiêu mạch, huyết áp) VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu * Động vật thí nghiệm: - Thỏ: 10 con, trọng lượng 2,0  0,2 kg nghiên cứu tiêu huyết học - Chuột cống trắng dòng Wistar: 10 con, trọng lượng 200  20 g, dùng để nghiên cứu số tiêu tim mạch * Mẫu nấm: NĐT hình nón (Amanita virosa), thu hái vào mùa xuân xã Lê Lai, huyện Thạch An, tỉnh Cao Bằng Phƣơng pháp nghiên cứu * Phương pháp chiết mẫu nấm: Mẫu NĐT hình nón khơ nghiền nhỏ, cân trọng lượng chiết methanol theo phương pháp thường quy Trước gây ngộ độc, đun sôi mẫu dịch chiết ống nghiệm để đảm bảo vô khuẩn * Phương pháp gây ngộ độc động vật: Tiêm ổ bụng dịch chiết mẫu nấm với liều 2/3 liều chết tối thiểu (LDmin) tương ứng với 0,618 g nấm khô/kg thể trọng (đối với thỏ) 0,412 g/kg thể trọng (đối với chuột cống trắng) Liều chết tối thiểu (LDmin) xác định trước gây ngộ độc * Phương pháp nghiên cứu tiêu: - Lấy ml máu từ tĩnh mạch tai thỏ, chống đông heparin trước gây ngộ độc ngày sau gây ngộ độc ngày thứ 1, 10 để xét nghiệm - Các tiêu huyết học máu thỏ gồm: số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố (hemoglobin), số lượng bạch cầu, tiểu cầu, công thức bạch cầu, tiến hành máy xét nghiệm huyết học tự động XE 2100 (Nhật Bản) - Xác định thời gian máu đông, máu chảy thời điểm theo phương pháp thường quy tai thỏ - Xác định mạch, huyết áp chuột cống trước sau ngộ độc thứ 1, 24 máy đo mạch, huyết áp chuyên dụng hãng UGO Basile (Đức) * Phương pháp xử lý thống kê: Số liệu tính giá trị trung bình (X), độ lệch chuẩn (SD) so sánh hai giá trị trung bình, tính p trước sau ngộ độc theo t-test 16 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Bảng 1: Thay đổi số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố thỏ (n = 10) CHỈ TIÊU NGHIấN CU Hồng cầu (x 1012/l) Huyết sắc tố (g/l) SAU NGỘ ĐỘC (ngày thứ) TRƯỚC NGHIÊN CỨU 4,62  0,41 97,3  9,2 10 4,97  0,56 3,41  0,52 3,89  0,42 p > 0,05 p < 0,001 p < 0,01 111,0  12,3 76,7  8,2 88,5  9,0 p > 0,05 p < 0,001 p < 0,01 Số l-ợng hồng cầu, hàm l-ợng huyết sắc tố máu thỏ bị ngộ độc NĐT hình nón giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ 10 sau ngộ độc NĐT hình nón có chứa độc tố amatoxin Một đặc điểm amatoxin gây hoại tử ạt tế bào gan dẫn đến suy gan [5] Suy chức gan làm giảm tổng hợp yếu tố đông máu gan nhprotrombin vµ fibrinogen, dÉn tíi xt hut [1] Xt hut làm cho số l-ợng hồng cầu, hàm l-ợng huyết sắc tố máu thỏ giảm xuống Theo Giannini CS (2007), tr-ờng hợp ngộ độc nấm có chứa amatoxin th-ờng có xuất huyết quan nội tạng [2] Những tr-ờng hợp suy gan ngộ độc nấm kèm theo giảm prothrombin d-ới 10% th-ờng có tiên l-ợng xấu [4] Bảng 2: Thay đổi số l-ợng bạch cầu công thức bạch cầu thỏ (n = 10) CH TIÊU NGHIÊN CỨU TRƯỚC NGHIÊN CỨU Số lượng bạch cầu (x 10 /l) 8,65  0,81 Bạch cầu trung tính (%) 42,3  4,8 Bạch cầu lympho (%) Bạch cầu mono (%) Bạch cầu ưa axít (%) Bạch cầu ưa kiềm (%) 46,8  5,6 5,5  0,5 2,5  0,3 0,8  0,1 SAU NGỘ ĐỘC (ngày thứ) 10 13,04  1,42 11,34  0,98 9,45  0,93 p < 0,001 p < 0,001 p > 0,05 54,6  5,4 48,7  5,0 44,8  4,2 p < 0,001 p < 0,01 p > 0,05 36,5  3,9 41,3  4,2 45,9  5,6 p < 0,001 p < 0,05 p > 0,05 4,2  0,4 3,4  0,39 5,8  0,7 p < 0,001 p < 0,001 p > 0,05 1,8  0,2 2,3  0,2 2,7  0,2 p < 0,001 p > 0,05 p > 0,05 1,2  0,2 1,1  0,1 1,0  0,2 p < 0,05 p > 0,05 p > 0,05 Số lượng bạch cầu máu thỏ bị ngộ độc NĐT hình nón tăng cao ngày thứ thứ sau ngộ độc so với trước ngộ độc (p < 0,001) 18 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013 Tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng tỷ lệ bạch cầu lympho, bạch cầu mono giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ thứ sau ngộ độc Tỷ lệ bạch cầu ưa axít giảm tỷ lệ bạch cầu ưa kiềm tăng ngày thứ sau ngộ độc Có tượng theo phản ứng thể trước tác nhân độc hại Bình thường, số lượng lớn bạch cầu nằm tổ chức thể (gan, lách, cơ, tủy xương ) Khi có tác nhân độc hại thâm nhập vào thể, số lượng bạch cầu xuất máu ngoại vi để chống lại tác nhân gây độc, số lượng bạch cầu tăng Về cơng thức bạch cầu: tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng lên tỷ lệ bạch cầu lympho, bạch cầu mono giảm xuống ngày thứ thứ sau ngộ độc Khi chất độc tác động lên thể, số lượng bạch cầu tăng chủ yếu bạch cầu trung tính, nên tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng làm cho tỷ lệ bạch cầu lympho tỷ lệ bạch cầu mono giảm Bảng 3: Thay đổi số lượng tiểu cầu, thời gian máu đông, máu chảy thỏ (n = 10) CHỈ TIÊU NGHIÊN CỨU SAU NGỘ ĐỘC (ngày thứ) TRƯỚC NGỘ ĐỘC Số lượng tiểu cầu (x 10 /l) Thời gian máu đông (phút) Thời gian máu chảy (phút) 284,6  31,5 5,2  0,4 2,4  0,2 10 295,2  34,8 194,5  26,7 234,6  31,9 p > 0,05 p < 0,001 p < 0,01 5,4  0,5 8,7  0,9 7,5  0,8 p > 0,05 p < 0,001 p < 0,001 2,5  0,3 4,9  0,6 4,1  0,5 p > 0,05 p < 0,001 p < 0,001 Số lượng tiểu cầu máu thỏ bị ngộ độc NĐT hình nón giảm, thời gian máu đơng, máu chảy tăng lên có ý nghĩa thống kê (p < 0,001) ngày thứ 10 sau ngộ độc Thời gian máu đông, máu chảy tăng lên sau ngộ độc theo hậu suy gan làm giảm yếu tố đông máu giảm tiểu cầu Những trường hợp suy gan thường có rối loạn đông máu hàm lượng protrombin máu giảm mạnh Bảng 4: Thay đổi mạch, huyết áp chuột cống (n = 10) CH TIấU NGHIấN CU Mạch (nhịp/phút) Huyết áp tèi ®a (mmHg) Huyết áp tối thiểu (mmHg) TRƯỚC NGỘ ĐỘC 348  43 181  21 110  12 SAU NGỘ ĐỘC (ngày thứ) giê giê 24 giê 362  48 379  50 436  47 p > 0,05 p > 0,05 p < 0,001 193  27 204  32 153  14 p > 0,05 p > 0,05 p < 0,001 116  13 124  16 86  11 p > 0,05 p > 0,05 p < 0,001 18 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013 Ở thời điểm sau ngộ độc NĐT hình nón, mạch, huyết áp tối đa tối thiểu chuột cống trắng thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê so với trước ngộ độc (p > 0,05) Đến thời điểm 24 sau ngộ độc, mạch tăng lên huyết áp tối đa, tối thiểu giảm thấp so với thời điểm trước ngộ độc (p < 0,001) Ngộ độc amatoxin nấm trải qua giai đoạn ban đầu nôn mửa, ỉa chảy nặng [6] Ở giai đoạn rối loạn tiêu hóa, động vật thường bỏ ăn uống, nên giảm lượng nước cung cấp cho thể Chúng cho huyết áp giảm khối lượng máu lưu hành giảm nước chất điện giải Huyết áp giảm làm cho mạch tăng lên theo chế bù trừ Theo logic giảm khối lượng máu lưu hành (máu cô) làm tăng số lượng hồng cầu hemoglobin Tuy nhiên, xét nghiệm huyết học tiến hành thỏ (loài động vật ăn rau, cỏ) ngày thứ mức độ tăng hồng cầu hemoglobin chưa có ý nghĩa thống kê Trên chuột cống bị ngộ độc NĐT hình nón thấy mạch tăng, huyết áp giảm thứ 24 sau ngộ độc TÀI LIỆU THAM KHẢO Diaz J.H Syndromic diagnosis and management of confirmed mushroom poisonings Crit Care Med 2005, 33 (2), pp.427-436 Giannini L, et al Amatoxin poisonings: A 15-year retrospective analysis and follow-up evaluation of 105 patients Clin Toxicol 2007, 45 (5), pp.539-542 3.Goldfrank L.R Mushrooms In: Goldfrank's Toxicological Emergencies 8th New York: McGrawHill 2006, pp.1564-1576 IPCS - Intox system Mushrooms Amatoxins Canada 2002 Larry F Grand Wild mushrooms and poisoning GPIN-004 and VGIN-012 Department of Plant pathology, USA 2005 Olesen L.L Amatoxin intoxication Scand J Urol Nephrol 1990, 24 (3), pp.231-234 KẾT LUẬN Thỏ bị ngộ độc NĐT hình nón có thay đổi số tiêu huyết học so với trước ngộ độc Số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ 10 sau ngộ độc Số lượng bạch cầu, tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng, tỷ lệ bạch cầu lympho bạch cầu mono giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ thứ sau ngộ độc Tỷ lệ bạch cầu ưa axít giảm tỷ lệ bạch cầu ưa kiềm tăng ngày thứ sau ngộ độc Số lượng tiểu cầu máu giảm, thời gian máu đơng, máu chảy tăng có ý nghĩa thống kê ngày thứ 10 sau ngộ độc Ngày nhận bài: 15/11/2012 Ngày giao phản biện: 4/1/2013 Ngày giao thảo in: 6/2/2013 19 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2013 20 ... Bằng lên thể Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài nhằm: Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết NĐT hình nón lên số tiêu huyết học tim mạch động vật thí nghiệm (giới hạn tiêu mạch, huyết áp) VẬT... nghiên cứu số tiêu tim mạch * Mẫu nấm: NĐT hình nón (Amanita virosa), thu hái vào mùa xn xã Lê Lai, huyện Thạch An, tỉnh Cao Bằng Phƣơng pháp nghiên cứu * Phương pháp chiết mẫu nấm: Mẫu NĐT hình. .. mạch, huyết áp) VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu * Động vật thí nghiệm: - Thỏ: 10 con, trọng lượng 2,0  0,2 kg nghiên cứu tiêu huyết học - Chuột cống trắng dòng Wistar: 10