Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá ảnh hưởng của dịch chiết nấm xốp gây nôn lên một số chỉ tiêu hóa sinh, huyết học và tim mạch trên động vật. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA DỊCH CHIẾT NẤM XỐP GÂY NƠN (RUSSULA EMETICA) LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU HĨA SINH, HUYẾT HỌC VÀ TIM MẠCH TRÊN ĐỘNG VẬT Nguyễn Tiến Dũng*; Nguyễn Kim Sơn*; Hồng Cơng Minh** TĨM TẮT Nấm xốp gây nơn (Russula emetica) lồi nấm thường gặp Việt Nam, loại nấm chứa nhiều độc tố gây ngộ độc Vì vậy, chúng tơi nghiên cứu đề tài với mục tiêu: ®ánh giá ảnh hưởng dịch chiết nấm xốp gây nôn (NXGN) lên số tiêu hóa sinh, huyết học, tim mạch động vật Đối tượng nghiên cứu: NXGN, thỏ, chuột cống trắng Phương pháp: thực nghiệm động vật cách gây ngộ độc động vật qua đường tiêu hóa với liều nấm khô thỏ 6,628 g/kg, chuột cống 5,865 g/kg thể trọng Lấy máu thỏ để xác định tiêu hóa sinh, huyết học đo mạch, huyết áp chuột cống trắng Kết cho thấy hoạt độ ALT, GGT huyết tăng, nồng độ glucose máu giảm ngày thứ sau ngộ độc so với trước ngộ độc (p < 0,001) Hoạt độ AST, nồng độ billirubin tồn phần, ure, creatinin khơng thay đổi rõ rệt (p > 0,05) toàn thời gian theo dõi Số lượng hồng cầu, bạch cầu, nồng độ hemoglobin tăng ngày thứ sau ngộ độc Tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng, bạch cầu lympho giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ thứ sau ngộ độc Bạch cầu ưa axít tăng toàn thời gian theo dõi Sự thay đổi mạch, huyết áp chuột cống trắng trước sau ngộ độc khơng có ý nghĩa thống kê * Từ khóa: Nấm xốp gây nơn; Chỉ tiêu hóa sinh; Huyết học; Tim mạch; Động vật STUDY ON EFFECTS OF THE EXTRACT OF MUSHROOM RUSSULA EMETICA ON SOME BIOCHEMICAL, HEMATOLOGICAL AND CARDIOVASCULAR PARAMETERS IN ANIMALS SUMMARY Mushroom Russula emetica usually grows in Vietnam The aims of the study are to assess effect of extracts of the mushroom on some biochemical, hematological and cardiovascular parameters in animals Objects of the study were mushroom Russula emetica, rabbits, white rats Method: experimental poisoning animals with extracts of the dried mushroom was taken on rabbit by dose of 6.628 g/kg and on rat by dose of 5.865 g/kg body weight The rabbit blood was taken for testing Pulse and blood pressure of the rats were checked The results showed that the activity of serum ALT, GGT was increased, concentration of glucose in blood was decreased in the first days after exposure in comparison with before exposure (p < 0.001) The activity of serum AST, concentration of total billirubin, urea, creatinine were not significantly changed (p > 0.05) Number of red blood cells, white blood cells, concentration of hemoglobine and th proportion of neutrophils were increased, proportion of lymphocytes was decreased in the first and the day after exposure Proportion of eosinophils was increased in all time of study Blood pressure and pulse of the white rats were not significantly changed * Key words: Mushroom Russula emetica; Biochemical; Hematological; Cardiovascular parameter; Animal * Bệnh viện Bạch Mai ** Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Tiến Dũng (dung.bachmai@yahoo.com.vn) Ngày nhận bài: 21/05/2014; Ngày phản biện đánh giá báo: 22/07/2014 Ngày báo đăng: 31/07/2014 72 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nước có khí hậu nhiệt đới, có hệ thực vật phong phú với nhiều loài nấm Theo Trịnh Tam Kiệt (2008), tính đến năm 2007, Việt Nam ghi nhận 1.300 lồi nấm lớn, có nhiều loài nấm độc [3] NXGN lồi nấm thường gặp tỉnh phía Bắc Việt Nam NXGN có mũ màu đỏ, phiến nấm màu trắng cuống nấm màu hồng nhạt màu trắng [2] Trong năm gần đây, vụ ngộ độc nấm liên tục xảy Việt Nam [1] Theo kinh nghiệm nhân dân ta thường coi NXGN độc mũ nấm có màu đỏ Các cơng trình nghiên cứu NXGN Theo Edwards J.N, Henry J.A (1989), lồi nấm gây rối loạn tiêu hóa với triệu chứng buồn nôn, nôn, đau bụng, ỉa chảy [4, 6] Các nhà khoa học Kobata K, Kano S, Shibata H (1995) xác định độc tố loài nấm sesquiterpenoids (lactarorufin A, furandiol, methoxyfuranalcohol) [5] Hiện nay, chưa có tài liệu cơng bố ảnh hưởng loài nấm lên chức gan, thận, tim mạch tế bào máu ngoại vi Vì vậy, đặt vấn đề nghiên cứu đề tài với mục tiêu: Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết NXGN lên số tiêu hóa sinh, huyết học tim mạch động vật ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu - NÊm xốp gây nôn (Rusulla emetica), c thu hỏi vo hè huyện Trùng Khánh, tỉnh Cao Bằng Bảo quản mẫu nấm dạng khô 73 - Thỏ: 10 con, không phân biệt đực cái, khoẻ mạnh, trọng lượng 2,0 ± 0,2 kg dùng cho nghiên cứu tiêu hóa sinh, huyết học - Chuột cống trắng: 10 con, khoẻ mạnh, trọng lượng 200 ± 20g dùng cho nghiên cứu mạch, huyết áp Nuôi thỏ thức ăn chuyên dùng Công ty Chế biến Thức ăn gia súc cung cấp rau xanh Rau rửa trước cho ăn Chuột cống trắng nuôi thức ăn chế biến theo công thức dùng cho chuột Theo dõi triệu chứng, mức tiêu thụ thức ăn, tình trạng động vật hàng ngày Phƣơng pháp nghiên cứu * Phương pháp gây ngộ độc động vật: Nghiền nhỏ mẫu nấm chiết chloroform theo phương pháp thường quy Sau sục khí đuổi hết dung mơi, cặn lại pha chế thành dịch chiết Dùng dụng cụ chuyên dụng bơm dịch chiết nấm vào dày động vật với liều nấm khô thỏ 6,628 g nấm khô/kg, chuột cống 5,865 g/kg thể trọng Liều 2/3 liều tối thiểu gây chết thỏ (LDmin) xác định trước gây ngộ độc * Phương pháp xác định tiêu: - Lấy máu tĩnh mạch tai thỏ trước sau gây ngộ độc ngày thứ 1, 10 để tiến hành xét nghiệm tiêu hoá sinh huyết học - Phương pháp xác định tiêu hóa sinh: ly tâm máu lấy huyết Đưa ống chứa huyết vào máy phân tích hố sinh tự động CHEMIX-180 (Nhật Bản) TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 để xác định tiêu: hoạt độ AST, ALT, GGT, nồng độ billirubin toàn phần, ure, creatinin glucose Tùy theo tiêu cần xét nghiệm, máy tự động xử lý mẫu với loại hóa chất tương ứng để tạo thành phức chất, đo độ hấp thu bước sóng thích hợp với tiêu, tự động tính in kết - Phương pháp xét nghiệm tiêu huyết học: mẫu máu chống đông đưa vào máy xét nghiệm huyết học tự động XE 2100 (Nhật Bản) Máy tự động hút lượng máu cần thiết xác định số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, công thức bạch cầu theo kỹ thuật nhuộm huỳnh quang biểu đồ tán xạ tia laser cho khả phân biệt loại tế bào máu khác - Xác định mạch, huyết áp thiết bị chuyên dụng tự động đo mạch, huyết áp chuột cống Hãng Ugo Basile (CHLB Đức) Thời điểm đo mạch, huyết áp trước sau gây ngộ độc thứ 1, 24 * Xử lý số liệu: số liệu tính trung bình ( X ), độ lệch chuẩn (SD) theo Excel so sánh hai giá trị trung bình trước sau ngộ độc theo t-test KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU vµ bµn luËn Ảnh hƣởng dịch chiết NXGN lên số tiêu hoá sinh thỏ Bảng 1: Thay đổi số tiêu hóa sinh máu ( X SD, n = 10) (ngµy) AST 45,5 4,8 (U/l) ALT 62,6 6,2 (U/l) GGT 16,5 1,4 (U/l) Billirubin toàn phần (mol/l) 3,61 0,38 Glucose 6,59 0,57 (mmol/l) Ure 5,81 0,57 (mmol/l) Creatinin (mol/l) 74 71,2 7,3 10 49,8 5,9 47,3 6,0 44,9 5,3 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 82,8 8,1 68,3 7,6 63,7 5,9 p < 0,001 p > 0,05 p > 0,05 21,2 2,2 17,7 2,0 16,9 1,8 p < 0,001 p > 0,05 p > 0,05 3,58 0,42 3,64 0,39 3,53 0,36 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 5,38 0,63 6,75 0,68 6,52 0,59 p < 0,001 p > 0,05 p > 0,05 5,93 0,61 5,88 0,57 5,77 0,54 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 74,8 8,04 69,9 7,16 75,2 7,51 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 Hoạt độ ALT, GGT huyết có hoạt tính tương đối ổn định bào thỏ bị ngộ độc dịch chiết NXGN tăng, tương tế bào gan Khi tế bào gan bị tổn nồng độ glucose giảm có ý nghĩa thống thương, AST, ALT, GGT thoát từ bào tương kê ngày thứ sau ngộ độc Hoạt độ vào máu làm cho hoạt độ enzym AST, nồng độ billirubin, ure creatinin huyết tăng Tế bào gan bị tổn không thay đổi rõ rệt so với trước ngộ độc thương nặng, hoạt độ AST, ALT huyết (p > 0,05) toàn thời gian nghiên tăng Bilirubin sản phẩm cứu Nồng độ glucose giảm có ý nghĩa thoái biến hemoglobin Hàm lượng thống kê ngày thứ sau ngộ độc so bilirubin tăng máu nhiều nguyên với trước ngộ độc với p < 0,001 Các loại nhân tổn thương tế bào gan, tắc mật, enzym AST, ALT GGT thông thường tan máu Ảnh hƣởng NXGN lên số tiêu huyết học thỏ Bảng 2: Sự thay đổi số tiêu huyết học ( X SD, n = 10) (ngµy) Hồng cầu (T/l ) Huyết sắc tố (g/l) Tiểu cầu (G/l) Số lượng bạch cầu (G/l) 4,47 0,41 98,7 9,4 257,2 31,4 8,48 0,81 10 4,92 0,43 4,63 0,52 4,51 0,45 p < 0,05 p > 0,05 p > 0,05 109,6 8,8 99,8 8,7 101,2 9,4 p < 0,05 p > 0,05 p > 0,05 275,3 36,1 269,6 33,8 252,4 35,6 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 13,21 1,54 9,16 0,92 8,66 0,95 p < 0,001 p > 0,05 p > 0,05 Số lượng hồng cầu, bạch cầu, nồng độ huyết sắc tố thỏ bị ngộ độc dịch chiết NXGN tăng có ý nghĩa thống kê ngày thứ Số lượng tiểu cầu không khác biệt so với trước ngộ độc tất thời điểm nghiên cứu (p > 0,05) Số lượng hồng cầu, nồng độ huyết sắc tố tăng lên ngày thứ máu cô (do thỏ bị nôn mửa nhiều sau ngộ độc làm thể nước gây nơn nhiều nên lồi nấm có tên NXGN) Ngồi ra, thỏ bỏ ăn rau nên lượng nước cung cấp cho thể giảm làm cho máu cô Qua theo dõi thấy thỏ nôn mửa, chảy nhiều đờm dãi thứ - sau ngộ độc, thỏ bỏ ăn, phân nhão 75 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 Bảng 3: Thay đổi công thức bạch cầu máu ( X SD, n = 10) (ngµy) Bạch cầu trung tính (%) Bạch cầu lympho (%) Bạch cầu mono (%) Bạch cầu ưa axít (%) Bạch cầu ưa kiềm (%) 48,5 4,4 44,5 5,2 4,3 0,4 1,3 0,2 1,0 0,2 10 56,3 6,4 53,5 4,6 48,5 5,2 p < 0,01 p < 0,05 p > 0,05 36,6 4,3 38,9 5,8 44,1 4,9 p < 0,001 p < 0,05 p > 0,05 4,5 0,5 4,7 0,9 4,4 0,4 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 1,7 0,2 1,9 0,2 1,8 0,2 p < 0,001 p < 0,001 p < 0,001 0,9 0,2 1,0 0,1 1,2 0,2 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 Tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng, bạch cầu lympho giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ thứ sau ngộ độc Bạch cầu ưa axít tăng có ý nghĩa thống kê (p < 0,001) tất thời điểm nghiên cứu sau ngộ độc Số lượng bạch cầu tăng lên phản ứng thể tác nhân độc hại, bạch cầu tổ chức gan, lách, cơ, tủy xương… đổ máu ngoại vi làm cho số lượng bạch cầu tăng lên tăng chủ yếu bạch cầu trung tính, tỷ lệ bạch cầu lympho giảm ngày thứ sau ngộ độc Ảnh hƣởng dịch chiết NXGN lên số tiêu tim mạch chuột cống trắng Bảng 4: Thay đổi mạch, huyết áp chuột cống trắng ( X SD; n = 10) (ngµy) Mạch (nhịp/phút) Huyết áp tối đa (mmHg) Huyết áp tối thiểu (mmHg) 352 25 187 16 105 10 giờ 24 369 33 372 29 350 35 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 195 19 201 23 185 20 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 116 14 107 12 113 11 p > 0,05 p > 0,05 p > 0,05 Sự thay đổi mạch, huyết áp tối đa, tối thiểu chuột cống trắng bị ngộ độc NXGN so với trước ngộ độc khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Điều chứng tỏ dịch chiết NXGN liều 2/3 liều chết tối thiểu không gây rối loạn tim mạch Chúng tiếp tục nghiên cứu liều cao để đánh giá ảnh hưởng loài nấm động vật 76 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 KẾT LUẬN Khi gây ngộ độc động vật qua đường tiêu hóa dịch chiết NXGN thu hái Cao Bằng với liều 2/3 liều chết tối thiểu thấy hoạt độ ALT, GGT huyết tăng, nồng độ glucose máu thỏ giảm ngày thứ sau ngộ độc so với trước ngộ độc (p < 0,001) Hoạt độ AST, nồng độ billirubin toàn phần, ure, creatinin không thay đổi rõ rệt (p > 0,05) Số lượng hồng cầu, bạch cầu, nồng độ huyết sắc tố tăng ngày thứ sau ngộ độc Tỷ lệ bạch cầu trung tính tăng, bạch cầu lympho giảm có ý nghĩa thống kê ngày thứ thứ sau ngộ độc Bạch cầu ưa axít tăng tất thời điểm nghiên cứu (p < 0,001) Sự thay đổi mạch, huyết áp chuột cống trắng khơng có ý nghĩa thống kê so với trước ngộ độc (p > 0,05) TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngô Thị Thanh Hải, Hồng Cơng Minh, Bế Hồng Thu Nghiên cứu tình hình ngộ độc nấm độc Bắc Kạn năm gần (2004 - 2011) Tạp chí Y - Dược học Quân Học viện Quân y 2012, 37 (7), tr.89-93 Trần Công Khánh, Phạm Hải Cây độc Việt Nam NXB Y học Hà Nội 2004, tr.233-242 Trinh Tam Kiet Poisonous mushrooms of Vietnam J Genetics and Applications-Special Issue: Biotechnology 2008, No 4, pp.70-73 Edwards JN, Henry JA Medical problems of mushroom ingestion Mycologist 1989, pp.13-15 (1), Kobata K, Kano S, Shibata H New lactarane sesquiterpenoid from the fungus Russula emetica Bioscience Biotechnology and Biochemistry 1995, 59 (2), pp.316-318 Wikipedia, the free encyclopedia Russula emetica Reference Encyclopedia 2013 77 ... vấn đề nghiên cứu đề tài với mục tiêu: Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết NXGN lên số tiêu hóa sinh, huyết học tim mạch động vật ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU i tng nghiờn cu - Nấm xốp gây nôn. .. loạn tim mạch Chúng tiếp tục nghiên cứu liều cao để đánh giá ảnh hưởng lồi nấm động vật 76 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 6-2014 KẾT LUẬN Khi gây ngộ độc động vật qua đường tiêu hóa dịch chiết. .. ngộ độc Ảnh hƣởng dịch chiết NXGN lên số tiêu tim mạch chuột cống trắng Bảng 4: Thay đổi mạch, huyết áp chuột cống trắng ( X SD; n = 10) (ngµy) Mạch (nhịp/phút) Huyết áp tối đa (mmHg) Huyết áp