Sự bộc lộ của kháng nguyên p53, Her-2/neu, EMA, thụ thể Estrogen, Progesteron trong ung thư biểu mô tuyến bã ở mi mắt

Đề tài được tiến hành với mục tiêu nhằm xác định sự bộc lộ của các dấu ấn p53, Her-2/neu, EMA, thụ thể Estrogen, Progesteron và đánh giá mối liên quan giữa sự bộc lộ p53, Her-2/neu với độ biệt hóa của u. Nghiên cứu mô tả cắt ngang trên 30 trường hợp đã được khẳng định.về mặt mô bệnh học là ung thư biểu mô tuyến bã được nhuộm hóa mô miễn dịch với các dấu ấn p53,.Her-2/neu, EMA, ER và PR. Bệnh gặp nhiều hơn ở nữ giới với tỉ lệ nữ/nam là 2,7 và bệnh chủ yếu gặp ở người già với độ tuổi hay gặp nhất là từ 60-69 (36,6%).

NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SỰ BỘC LỘ CỦA KHÁNG NGUYÊN P53, HER-2/NEU, EMA VÀ THỤ THỂ ESTROGEN, PROGESTERONE TRONG UNG THƯ BIỂU MƠ TUYẾN BÃ Ở MI MẮT Hồng Anh Tuấn*, Lê Đình Hòe**, Tạ Văn Tờ***, Nguyễn Văn Chủ*** TÓM TẮT Mục tiêu: Xác định bộc lộ dấu ấn p53, Her-2/neu, EMA, thụ thể Estrogen, Progesteron đánh giá mối liên quan bộc lộ p53, Her-2/neu với độ biệt hóa u Đối tượng phương pháp: Nghiên cứu mô tả cắt ngang 30 trường hợp khẳng định mặt mô bệnh học ung thư biểu mô tuyến bã nhuộm hóa mơ miễn dịch với dấu ấn p53, Her-2/neu, EMA, ER PR Kết quả: Bệnh gặp nhiều nữ giới với tỉ lệ nữ/nam 2,7 bệnh chủ yếu gặp người già với độ tuổi hay gặp từ 60 - 69 (36,6%) Về mặt mơ bệnh học, thành phần biệt hóa vừa loại hay gặp với tỉ lệ 56,6%, loại biệt hóa cao (26,7%) gặp loại biệt hóa (16,7%) Tỉ lệ dương tính với p53, Her-2/neu, EMA, ER PR tương ứng 56,7%, 73,3%, 100%, 10% 13,3% Kết luận: Kết nghiên cứu cho thấy, bộc lộ dấu ấn miễn dịch p53, Her-2/neu mức cao ngược lại tỉ lệ dương tính với ER PR lại thấp Khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê bộc lộ p53 Her-2/neu độ biệt hóa u Từ khóa: Ung thư biểu mơ tuyến bã mi mắt, hóa mơ miễn dịch I ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư biểu mô tuyến bã (UTBMTB) u ác tính, chủ yếu gặp vùng quanh hốc mắt, đặc biệt mi mắt [8] U xâm lấn chỗ, di hạch vùng chí di xa Hầu hết, nghiên cứu UTBMTB mi mắt cho thấy bệnh gặp nữ nhiều nam với tỉ lệ từ 1,4 đến 2,8 [2], [7], [10] người ta chưa biết UTBMTB lại hay gặp nữ nam giới Liệu hormon giới tính có vai trò ảnh Khoa Xét nghiệm tổng hợp, Bệnh viện Mắt Trung ương Bộ môn Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Hà Nội *** Khoa Giải phẫu bệnh tế bào, Bệnh viện K * ** hưởng tới phát triển u hay không tế bào tuyến bã mi mắt có tế bào đích hormon giới tính khơng? Ở khía cạnh khác, nguyên nhân UTBMTB chưa rõ ràng Có tác giả cho yếu tố tiếp xúc với ánh nắng mặt trời, có tác giả lại cho tia xạ gây nên UTBMTB Một số nghiên cứu lại gợi vai trò virus sinh u nhú người (HPV), tượng bất hoạt gen p53 khuếch đại gen Her-2/neu Đột biến gen p53 đóng vai trò quan trọng phát triển nhiều loại ung thư người tích lũy bất thường protein p53 nhân tế bào, phát hóa mơ miễn dịch Nhãn khoa Việt Nam (Số 20 - 2010) 19 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC nhiều loại ung thư Her-2/neu tiền gen ung thư sản xuất glycoprotein có trọng lượng phân tử khoảng 185 - kDa, có chức yếu tố phát triển biểu bì Sự khuếch đại mức gen Her-2/neu phát nhiều loại ung thư biểu mô tuyến Cho đến nay, có cơng trình nghiên cứu UTBMTB lâm sàng, mô bệnh học, điều trị,… việc ứng dụng hóa mơ miễn dịch nghiên cứu UTBMTB chưa nhiều Ở Việt Nam, nay, chưa có nghiên cứu hóa mơ miễn dịch UTBMTB mi mắt, chúng tơi nghiên cứu đề tài nhằm mục tiêu: Xác định bộc lộ dấu ấn miễn dịch p53, Her-2/neu, EMA, ER PR UTBMTB mi mắt Đánh giá mối liên quan bộc lộ p53, Her-2/neu với độ biệt hóa u II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng Đối tượng nghiên cứu 30 bệnh nhân (BN) chẩn đoán mô bệnh học UTBMTB Bệnh viện Mắt Trung ương qua mẫu bệnh phẩm phẫu thuật từ tháng năm 2005 đến hết tháng năm 2007 Tiêu chuẩn lựa chọn BN: - Có ghi nhận kiện lâm sàng: họ tên, tuổi, giới - Được phẫu thuật cắt bỏ khối u mi mắt có kết chẩn đốn mơ bệnh học UTBMTB Phương pháp Chúng tiến hành nghiên cứu theo phương pháp nghiên cứu quan sát mô tả Bệnh phẩm: Các bệnh phẩm cố định dung dịch Bouin, sau chuyển, đúc paraffin Nhuộm tiêu - Phương pháp nhuộm HE: Tất khối nến cắt mảnh có độ dày 3cm nhuộm tiêu 20 Nhãn khoa Việt Nam (Số 20 - 2010) theo phương pháp nhuộm Hematoxylin - Eosin (HE) thường quy - Phương pháp hóa mơ miễn dịch: Các khối nến sau xếp dãy mô, cắt mảnh để tiến hành nhuộm hóa mơ miễn dịch với dấu ấn p53, Her - 2/neu, EMA (kháng nguyên màng biểu mô), ER (Estrogen Receptor) PR (Progesteron Receptor) theo phương pháp ABC (Avidin - Biotin Complex) Đánh giá kết quả: Tất tiêu đánh giá qua kính hiển vi quang học độ phóng đại cần thiết bác sĩ giải phẫu bệnh có kinh nghiệm kiểm định Phân loại mô bệnh học: Dựa tiêu nhuộm HE theo phân loại theo phân loại Font (1986) - Loại biệt hóa cao: Gồm đám tế bào u biệt hóa tiết chất bã với bào tương rộng, có hốc Các tế bào thường trung tâm đám tế bào u - Loại biệt hóa vừa: Chỉ vài vùng có tế bào biệt hóa tiết bã, lại phần lớn tế bào u với nhân kiềm tính, hạt nhân rõ, bào tương rộng, ưa kiềm - Loại biệt hóa: Phần lớn tế bào u có nhân đa hình thái, hạt nhân rõ, bào tương hẹp Rất nhiều nhân chia Đánh giá kết nhuộm hóa mơ miễn dịch: biểu dương tính khi: - p53, Her-2/neu EMA: Ít 10% tế bào u bắt màu vàng nâu (đối với p53 nhân tế bào, Her-2/neu EMA màng bào tương tế bào) - ER PR: Ít 5% nhân tế bào u bắt màu vàng nâu Địa điểm thực đề tài: Các mẫu bệnh phẩm nghiên cứu chuyển, đúc, cắt nhuộm HE Đọc kết mô bệnh học khoa Xét nghiệm tổng hợp, Bệnh viện Mắt Trung ương nhuộm, đánh giá kết hóa mơ miễn dịch khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện K, Hà Nội Xử lí số liệu: Số liệu nghiên cứu xử lí theo phương pháp thống kê phần mềm Epi - Info 6.04 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Đặc điểm tuổi giới Bảng Phân bố BN theo tuổi giới Nam Giới Nhóm tuổi n < 40 40-49 50-59 60-69 ³ 70 Tổng số Nữ % n 26,7 22 Tổng số % n % 73,3 2 11 30 6,7 6,7 20,0 36,6 30,0 100,0 Nhận xét: Tuổi từ 31 - 83, trung bình 62,5 ± 12,6 Tuổi hay gặp lứa tuổi từ 60 - 69 tuổi (36,6%), có BN lứa tuổi < 40 tuổi (6,7%) Bệnh gặp nữ nhiều nam với tỉ lệ nữ/nam = 2,7 Típ mơ bệnh học Bảng Độ biệt hóa u Độ biệt hóa Biệt hóa cao Biệt hóa vừa Kém biệt hóa Tổng số n 17 30 % 26,7 56,6 16,7 100,0 Nhận xét: Như vậy, loại biệt hóa vừa loại hay gặp (56,6%) gặp loại biệt hóa (16,7%) Kết hóa mơ miễn dịch Bảng Sự bộc lộ dấu ấn miễn dịch Biểu Dấu ấn miễn dịch P53 Her-2/neu EMA ER PR n 17 22 30 Dương tính % 56,7 73,3 100 10,0 13,3 n 13 27 26 Âm tính % 43,3 26,7 90,0 86,7 Nhận xét: Sự bộc lộ EMA chiếm tỉ lệ cao (100%), tiếp đến Her-2/neu (73,3%) p53 (56,7%) Tỉ lệ dương tính với PR ER thấp: PR (13,3%) ER (10%) Bảng Liên quan độ biệt hóa u p53 Dương tính Âm tính Tổng số Biểu n % n % n % Độ biệt hóa Biệt hóa cao 50,0 50,0 26,7 Biệt hóa vừa 47,1 52,9 17 56,6 Kém biệt hóa 100,0 16,7 Tổng số 17 56,7 13 43,3 30 P= 0,09 Nhãn khoa Việt Nam (Số 20 - 2010) 21 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Nhận xét: Như vậy, tỉ lệ dương tính với p53 cao khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỉ lệ dương tính độ biệt hóa u Bảng Liên quan độ biệt hóa u Her-2/neu Độ biệt hóa Biệt hóa cao Biệt hóa vừa Kém biệt hóa Tổng số Biểu Dương tính n % 62,5 12 70,6 100,0 22 73,3 n Âm tính % 37,5 29,4 0,0 36,7 n 17 Tổng số % 26,7 56,6 16,7 30 P= 0,306 Nhận xét: Tỉ lệ dương tính với Her-2/neu cao (73,3%) khơng có khác biệt tỉ lệ dương tính độ biệt hóa, nhiên loại biệt hóa 100% (5 trường hợp) dương tính IV BÀN LUẬN Về tuổi giới Hầu hết nghiên cứu UTBMTB nói chung, đặc biệt UTBMTB mi mắt nói riêng cho thấy bệnh trội nữ giới với tỉ lệ nữ/ nam 1,4 đến 2,8 [2], [7], [10] Trong nghiên cứu này, tỉ lệ nữ/nam 2,7 Nhiều tác giả cố gắng giải thích khác chưa tìm lời giải thích xác đáng UTBMTB gặp người trẻ tuổi, đặc biệt 30 tuổi mà hay gặp lứa tuổi trung niên người già [6] Điều thể nhiều nghiên cứu tác giả từ châu Âu, châu Mỹ tới châu Á, có nghiên cứu chúng tơi cho thấy bệnh gặp nhiều lứa tuổi từ 60 - 69 tuổi (36,6%) 70 tuổi (30%); lứa tuổi thấp 40 tuổi gặp (6,7%) Cho K.J [1] cho rằng, tiếp xúc lâu dài với tia X tia cực tím ánh nắng mặt trời yếu tố nguy quan trọng gây UTBMTB Về bộc lộ với dấu ấn miễn dịch mối liên quan với độ biệt hóa u Bình thường, protein p53 có đời sống bán hủy ngắn nên khơng phát hóa mơ miễn dịch, gen bị đột biến tạo p53 có đời sống bán hủy dài nên bị tích lũy lại tế bào phát hóa 22 Nhãn khoa Việt Nam (Số 20 - 2010) mô miễn dịch Bộc lộ mức protein p53 đột biến gen p53 phát nhiều loại ung thư, đặc biệt liên quan đến tiến triển tiên lượng ung thư Trong nghiên cứu chúng tôi, 56,7% trường hợp UTBMTB dương tính với p53 mức độ dương tính mạnh Tương tự vậy, nghiên cứu Hayashi cho thấy có tới 57,1% trường hợp UTBMTB dương tính với p53 phương pháp hóa mơ miễn dịch Tất trường hợp UTBMTB tái phát di dương tính với p53 đặc biệt vị trí u di tế bào u, cho thấy tỉ lệ dương tính cao với cường độ mạnh [5] Điều gợi ý rằng, bất hoạt p53 bộc lộ mức protein p53 yếu tố đóng vai trò quan trọng chế bệnh sinh UTBMTB đồng thời yếu tố để đánh giá tiến triển tiên lượng u [3], [5] Tiền gen ung thư Her-2/neu (c-erbB-2) gen đóng vai trò quan trọng đánh giá tiên lượng nhiều loại ung thư ung thư vú, phổi, dày, Một số nghiên cứu cho thấy có mối liên quan khuếch đại gen Her-2/neu biểu protein Her-2/neu qua nhuộm hóa mơ miễn dịch [4] Nghiên cứu Cho K.J [1] cho thấy rằng, 83,3% (15/18) trường hợp UTBMTB dương tính với Her-2/neu khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê tỉ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC lệ dương tính với Her-2/neu độ biệt hóa Tương tự vậy, nghiên cứu chúng tơi, có tới 73,3% trường hợp UTBMTB dương tính với Her-2/neu Điều gợi ý rằng, Her-2/ neu đóng vai trò quan trọng phát triển UTBMTB [1] Trong nghiên cứu chúng tôi, chưa phát mối liên quan độ biệt hóa u với bộc lộ p53 Her-2/neu (có thể cỡ mẫu nhỏ) chúng tơi thấy trường hợp UTBMTB biệt hóa dương tính với p53 Her-2/neu Sinard sử dụng phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch để phân biệt UTBMTB ung thư biểu mô tế bào đáy (UTBMTBD) Một kết nghiên cứu Sinard cho thấy rằng, 90,9% (10/11) trường hợp UTBMTB dương tính với EMA có 6,2% (1/16) UTBMTBD có dương tính với EMA [9] Trong nghiên cứu chúng tôi, 100% trường hợp UTBMTB dương tính dương tính mạnh với EMA Như vậy, với dấu ấn miễn dịch khác BRST-1 Cam5.2, EMA yếu tố quan trọng giúp chẩn đoán phân biệt UTBMTB với UTBMTBD ung thư biểu mô tế bào vảy Trong nghiên cứu hầu hết nghiên cứu khác ung thư tuyến bã mi mắt cho thấy, bệnh gặp nữ nhiều nam Một số tác giả nghi ngờ ảnh hưởng nội tiết tố giới tính Estrogen Progesteron tới phát triển UTBMTB Tuy nhiên, nghiên cứu Cho K.J (Hàn Quốc) [1] cho thấy, có số 18 (22,2%) số 18 (11,1%) trường hợp dương tính với Estrogen Progesteron, tất trường hợp dương tính gặp nữ giới Còn nghiên cứu chúng tơi, có số 30 (10%) số 30 (13,3%) trường hợp dương tính với ER PR có mức độ dương tính nhẹ Do đó, vấn đề liệu tế bào UTBMTB có phải tế bào đích hormon giới tính hay khơng hormon giới tính có ảnh hưởng tới phát triển u hay khơng cần phải có nhiều nghiên cứu sâu với cỡ mẫu lớn V KẾT LUẬN Qua nghiên cứu hóa mơ miễn dịch 30 trường hợp UTBMTB, chúng tơi rút số kết luận sau: Sự bộc lộ EMA chiếm tỉ lệ cao (100%), tiếp đến Her-2/neu p53 với tỉ lệ cao tương ứng 73,3% 56,7% Tỉ lệ dương tính với thụ thể nội tiết PR ER thấp, tương ứng 13,3% 10% Khơng có mối liên quan độ biệt hóa u với bộc lộ p53 Her-2/neu TÀI LIỆU THAM KHẢO CHO K J., KHANG S K, KOH J S, ET AL (2000): “Sebaceous Carcinoma of the Eyelids: Frequent Expression of c-erbB-2 Oncoprotein”, J Korean Med Sci, 15: 545- 550 DOXANAS M.T, GREEN R.W, (1984): “Sebaceous gland carcinoma: Review of 40 cases”, Arch Ophthalmology, 102: 245-249 GONZALEZ - FERNANDEZ F., KALTREIDER S A, PATNAIK B D, ET AL (1998): “Sebaceous carcinoma: Tumor Progression through Mutational Inactivation of p53”, Ophthalmology, 105(3): 497- 506 HASEBE T, MUKAI K, YAMAGUCHI N, ET AL (1994): “Prognotic value of Immunohistochemical Staining for Proliferating Cell Nuclear Antigen, p53 and c-erbB-2 in sebaceous gland carcinoma and Sweat Gland Carcinoma: Comparison with Histopathological Parameter”, Mordern Pathology, 7(1): 37- 43 HAYASHI N, FURIHATA M, OHTSUKI Y, ET AL (1994): “Search for accumulation of p53 protein and detection of human papillomavirus genomes in sebaceous gland carcinoma of the eyelid”, Virchows Arch, 424: 503- 509 Nhãn khoa Việt Nam (Số 20 - 2010) 23 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NELSON B R, HAMLET K R, GILLARD M, ET AL (1995): “Sebaceous carcinoma”, Journal of the American Academy of Dermatology, 33(1): 1-15 RAO NA, HIDAYAT A A, MCLEAN, ET AL (1982): “Sebaceous carcinoma of the ocular adnexa: a clinicopatholgic study of 104 cases, with five-year follow-up data”, Hum Pathol, 13:13-122 SHIELDS J A, DEMIRCI H, MARR B P, ET AL (2005): “Sebaceous carcinoma of the Ocu- lar Region: A Review”, Survey of Ophthalmology, 50(2): 103- 122 SINARD J H (1999): “Immunohistochemical distinction of ocular sebaceous carcinoma from basal cell and squamous cell carcinoma”, Arch Ophthalmol, 117(6): 776- 783 10 ZURCHER M, HINTSCHICH C R, GARNER A, ET AL (1998): “Sebaceous carcinoma of the eyelid: a clinicopathological study”, Br j Ophthalmol, 82(9): 1049-1055 SUMMARY EXPRESSION OF P53, HER-2/NEU, EMA ANTIGENS AND ESTROGEN,PROGESTERONE RECEPTORS IN SEBACEOUS CARCINOMA OF THE EYELIDS Objective: To determine the expression of p53, Her-2/neu, EMA, ER and PR in sebaceous carcinoma of the eyelids and to evaluate the relationships between p53, Her-2/neu and the differentiated degree Methods and materials: Thirty patients with histologically confirmed sebaceous carcinoma were studied using immunohistochemical staining for p53, Her-2/neu, EMA, ER and PR Results: There was a preponderance of female as female/male ratio was 2.7 Most patients were old with highest incidence in patients from 60 to 69 years old (36.6%) Histopathologically, moderatel differentiation was the most common type (56.6%), following well (26.7%) and poorly ones (16.7%) Rates of positive p53, Her-2/neu, EMA, ER and PR in sebaceous carcinoma were 56.7%, 73.3%, 100%, 10% and 13.3% respectively Conclusions: Our results showed that p53, Her-2/neu and EMA expressions were high and rates of positive ER, PR were low There was no significant diffierence about rates of the expressions of p53, Her-2/ neu in differentiated types Key words: Sebaceous carcinoma, Eyelid, immunohistochemistry 24 Nhãn khoa Việt Nam (Số 20 - 2010) ... cứu hóa mơ mi n dịch UTBMTB mi mắt, chúng tơi nghiên cứu đề tài nhằm mục tiêu: Xác định bộc lộ dấu ấn mi n dịch p53, Her-2/neu, EMA, ER PR UTBMTB mi mắt Đánh giá mối liên quan bộc lộ p53, Her-2/neu... UTBMTBD ung thư biểu mô tế bào vảy Trong nghiên cứu hầu hết nghiên cứu khác ung thư tuyến bã mi mắt cho thấy, bệnh gặp nữ nhiều nam Một số tác giả nghi ngờ ảnh hưởng nội tiết tố giới tính Estrogen Progesteron. .. Eosin (HE) thư ng quy - Phương pháp hóa mơ mi n dịch: Các khối nến sau xếp dãy mô, cắt mảnh để tiến hành nhuộm hóa mơ mi n dịch với dấu ấn p53, Her - 2/neu, EMA (kháng nguyên màng biểu mô) , ER (Estrogen