Sàng lọc vi khuẩn có tiềm năng sản xuất chất chống oxy hóa

Nội dung bài viết với mục tiêu trình bày về việc sàng lọc tiềm năng sinh chất chống oxy hóa của các vi khuẩn phân lập từ các mẫu đất và nước tại một số tỉnh thành ở miền Nam Việt Nam. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học SÀNG LỌC VI KHUẨN CÓ TIỀM NĂNG SẢN XUẤT CHẤT CHỐNG OXY HĨA Vũ Thanh Thảo*, Vòng Phượng*, Lê Thị Hồng Anh*, Nguyễn Minh Thái*, Trần Cát Đơng* TĨM TẮT Mở đầu: Sự cân động trình sản xuất oxy hoạt động hệ thống đánh bắt gốc tự tăng theo lứa tuổi nguyên nhân dẫn đến nhiều bệnh nguy hiểm, có bệnh tiểu đường bệnh Alzheimer Vì vậy, cần có nghiên cứu phát triển tối ưu hóa hiệu chất chống oxy hóa có nguồn gốc tự nhiên nhằm bảo vệ thể trước gốc tự làm chậm diễn tiến bệnh mạn tính Nhiều lồi thực vật nấm bậc cao chứng minh có chứa chất oxy hóa, chưa có nhiều nghiên cứu vi khuẩn có tiềm sinh chất chống oxy hóa Mục tiêu: Sàng lọc tiềm sinh chất chống oxy hóa vi khuẩn phân lập từ mẫu đất nước số tỉnh thành miền Nam Việt Nam Phương pháp: Phân lập phương pháp pha loãng trải đĩa môi trường Trypticase Soy Agar Định tính hoạt tính chống oxy hóa phương pháp mỏng DPPH cải tiến, thành phần nội bào chiết hệ thống bể siêu âm dung môi thích hợp Kết quả: Từ 204 mẫu ban đầu, sàng lọc 367 chủng vi khuẩn, có 40 chủng có hoạt tính chống oxy hóa Một số chủng có chất chống oxy hóa dịch nội bào dịch ngoại bào Các chủng vi khuẩn có hoạt tính chống oxy hóa định danh, có 17 chủng thuộc lồi xem an toàn Kết luận: Đây nghiên cứu sử dụng phương pháp mỏng DPPH kết hợp với bể tán siêu âm dung mơi thích hợp để sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa từ vi khuẩn Nghiên cứu chứng tỏ chủng vi khuẩn phân lập từ đất nước có hoạt tính oxy hóa dịch nội bào dịch ngoại bào Cần có nghiên cứu nhằm định lượng khảo sát đặc tính probiotic chủng tiềm Từ khóa: Chống oxy hóa, vi khuẩn, mỏng DPPH, siêu âm, dung mơi ABSTRACT SCREENING POTENTIAL ANTIOXIDANT PRODUCING BACTERIA Vu Thanh Thao, Vong Phuong, Le Thi Hoang Anh, Nguyen Minh Thai, Tran Cat Dong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 277 - 282 Background: The disruption of the delicate balance between generation of reactive oxygen species (ROS) and antioxidant scavenging systems of increasing age could lead to serious health problems such as diabetes and Alzheimer’s disease Thus, it is essential to develop and utilize effective natural antioxidants in order to protect human body from free radicals and retard the progress of many chronic diseases A number of plants and mushrooms are commonly known as source of antioxidants but there are few reports on bacteria Objectives: Screening antioxidant producing bacteria isolated from soil and water sample that collected from different regions in Southern of Vietnam Methods: Isolate bacteria using dilution technique, then spread on Trypticase Soy Agar Screening antioxidant activity applying modify dot blot DPPH assay method, extract intracellular compoment with ultrasonic bath and suitable solvent ∗ Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS Vũ Thanh Thảo ĐT: 0985353384 Chuyên Đề Dược Học Email: vuthanhthao@uphcm.edu.vn 277 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Results: From initial 204 samples, 367 strains have been isolated in which 40 strains have potential antioxidant Some strains have both intracellular and extracellular antioxidant substances Preliminary identification of 40 strains have antioxidant activity, obtained 17 strains of species are considered safe for use Conclusion: It is the first study that use modified DPPH dot blot method and sonication with organic solvent for screening antioxidant activity, this study demonstrate that isolated bacteria from soil and water possess good antioxidant activity from intracellular and extracellular extract We intend to assay antioxidant activity and characterize probiotic of the potential strain Keywords: antioxidant, bacteria, DPPH dot blot, ultrasonic, solvent làm tiền đề cho nghiên cứu sâu ĐẶT VẤN ĐỀ Khi môi trường điều kiện sống trở nên ĐỐI TƯỢNG– PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU khắc nhiệt hạn hán bị tác động chiếu xạ UV mạnh hay tác nhân oxi hố Vật liệu làm tăng việc hình thành ROS (reactive Mơi trường ni cấy TSA (Trypticase Soy oxygen species)-phân tử oxi có hoạt tính cao Agar), TSB (Trypticase Soy Broth) Merk Các có nguy gây hại cho vi khuẩn Để ngăn dung môi hữu n-hexan, cloroform, methanol chặn nguy hại tác nhân oxi hoá này, Merk Bộ kit định danh trực khuẩn gram âm hệ thống enzym chống oxi hoá bị hoạt IDS 14 GNR công ty Nam Khoa Thuốc thử động tải, vi khuẩn sinh chất chống DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) chất oxi hố Vì vậy, vùng đất khơ cằn, hạn chuẩn vitamin C Sigma Chủng vi khuẩn đối hán, cát biển, hay sa mạc thường có chứng: Bacillus subtilis 001, Bacillus indicus HU36 nhiều vi khuẩn có hoạt tính chống oxi hố cao Phòng thí nghiệm Vi sinh Công nghệ Dược, Đối với người, gốc tự nguyên nhân Khoa Dược ĐH Y Dược Tp.HCM cung cấp gây nhiều bệnh nguy hiểm thúc đẩy Trong đó, chủng Bacillus 001 Đức trình lão hóa, việc sử dụng dược phẩm có cộng chứng minh khơng có khả tác dụng chống oxy hóa yếu tố bảo vệ sinh chất chống oxi hoá xem thể quan tâm Hiện nay, chứng âm chủng HU36 chứng minh chưa có nhiều báo cáo chất chống oxi hố có khả sinh carotenoid xem từ vi khuẩn, sản xuất chất chống oxy chứng dương(5) hóa từ vi sinh vật có nhiều hiệu kinh tế Lấy mẫu phân lập khơng tốn diện tích lớn, dễ kiểm sốt Tiến hành lấy mẫu đất, nước, cát, bùn quy trình, sử dụng nguồn nguyên liệu đầu khu vực giàu ánh sáng, nhiệt độ cao thuộc vào rẻ tiền tỉnh thành phía Nam Việt Nam Mẫu ban Các nghiên cứu trước cho thấy vi đầu đựng ống falcon cỡ 50 ml, khuẩn nguồn tiềm lớn cung cấp sản mẫu đất, cát, bùn chiếm khoảng ¼ thể tích xuất chất chống oxi hoá tự nhiên, đặc biệt vi ống, mẫu nước chiếm đến vạch 30-40 ml Sử khuẩn thuộc chi Bacillus, nhiên kết dụng phương pháp pha loãng trải đĩa để tập trung số chủng cụ thể, chưa có phân lập: Pha lỗng mẫu với dung dịch NaCl nhiều nghiên cứu thực sàng lọc quy 0,85% độ pha loãng từ cấp số đến 5, trải 100 mơ lớn(8,9,10) Vì vậy, nghiên cứu μl mẫu độ pha loãng cuối lên môi trường tiến hành phân lập sàng lọc TSA Ủ 37 oC từ 24 đến 36 Quan sát chủng vi khuẩn có hoạt tính chống oxy hóa nội khác biệt hình dạng, màu sắc khuẩn bào ngoại bào từ nhiều mẫu đất nước khác nhau, kết thu nghiên cứu 278 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 lạc, tách lấy khuẩn lạc riêng biệt tiếp tục làm mơi trường TSA(4) Định tính hoạt tính chống oxi hoá phương pháp mỏng DPPH Phương pháp mỏng DPPH thực dựa cải tiến phương pháp nhuộm nhanh vết chấm silicagel vào dung dịch DPPH theo Huang cộng báo cáo (2006)(7) Mục đích phương pháp xác định hoạt tính chống oxi hố dịch ngoại bào dịch chiết nội bào vi khuẩn thông qua việc đánh bắt gốc tự làm màu DPPH vị trí chấm dịch mỏng silicagel 60 F254 sau thời gian tác dụng(1) Theo đó, mẫu thử chấm lên mỏng silicagel 60 F254, để khô tự nhiên, nhuộm mỏng với dung dịch DPPH 0,8M cách lật ngược mỏng giữ 10 giây, đọc kết nhuộm sau phút Nghiên cứu Y học vòng/phút, 15 phút thu sinh khối, tiến hành chiết chất chống oxi hoá nội bào Cắn rửa lần với nước để loại bỏ dịch ni cấy, sau phân tán cắn với nước, tiến hành tán siêu âm đầu dò (đối với trực khuẩn thực chu kì tán, chu kì kéo dài gồm 30 giây cầu khuẩn thực chu kỳ tán) Dịch vi khuẩn sau tán siêu âm ly tâm 9600 vòng/phút, 15 phút Đối với phần dịch thu được, đem xác định chất chống oxi hoá phương pháp mỏng DPPH Đối với phần cắn, tiến hành chiết với dung mơi methanol, chloroform, n-hexan Hồ cắn với dung mơi, tiến hành lắc 30 phút Sau đó, huyền dịch ly tâm loại cắn, thu dịch để xác định hoạt tính chống oxi hố phương pháp mỏng DPPH Phương pháp thu nhận chất chống oxi hoá ngoại bào Để xác định hoạt tính chống oxi hố ngoại bào, nuôi cấy vi khuẩn cần thử nghiệm mơi trường TSB, lắc 200 vòng/phút, 370C Sau 24 ni cấy, tiến hành ly tâm 9600 vòng/phút, 15 phút, thu dịch Sau xác định hoạt tính chống oxi hố ngoại bào phương pháp mỏng DPPH Phương pháp thu nhận chất chống oxi hoá nội bào Tùy thuộc vào khả hòa tan nước dung mơi hữu cơ, chất chống oxy hóa chiết nước dung mơi có độ phân cực tăng dần với phương pháp (sử dụng đầu dò tán siêu âm) phương pháp (sử dụng bể tán siêu âm), xem hình Phương pháp 1: Quy trình chiết chất chống oxi hố nội bào siêu âm đầu dò Ni cấy vi khuẩn cần thử nghiệm: B subtilis 001 (chủng chứng âm), chủng 18 (chủng phân lập được), B indicus HU36 (chủng chứng dương) Nuôi cấy vi khuẩn với mơi trường TSB, lắc 200 vòng/phút 37 0C Sau 24 nuôi cấy, thực ly tâm 9600 Chuyên Đề Dược Học Hình 1: Sơ đồ quy trình chiết chất oxy hóa nội bào (phương pháp bên trái, phương pháp bên phải) Phương pháp 2: Quy trình chiết chất chống oxi hố nội bào bể tán siêu âm Tiến hành nuôi cấy thu sinh khối chủng thử nghiệm : Bacillus subtils 001, chủng 18, Bacillus indicus HU36 tương tự phương pháp Phân tán cắn sinh khối thu sau ly tâm chloroform tiến hành tán siêu âm bể 30 phút Mục đích việc bổ sung chloroform trình siêu âm bể để làm tăng tính thấm màng tế bào vi khuẩn Huyền dịch vi khuẩn sau tán siêu âm đem ly tâm 9600 vòng/phút, 15 phút, thu cắn Hoà cắn với nước, methanol, chloroform, n-hexan Siêu âm bể siêu âm 30 phút Ly tâm, 9600 vòng/phút, 15 phút, thu dịch từ ống chứa dung mơi khác nhau, xác định hoạt tính chống oxi hoá phương pháp mỏng DPPH 279 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Sau xác định phương pháp tách chiết nội bào phù hợp, tiến hành thu dịch chiết nội bào bao gồm dịch chiết nội bào nước dịch chiết nội bào dung môi Tiến hành xác định hoạt tính chống oxi hố phương pháp mỏng DPPH Định danh sơ chủng có hoạt tính chống oxi hố Đối với cầu khuẩn trực khuẩn gram dương tiến hành định danh theo sơ đồ phân loại “Bergey’s Manual Of Determinative Bacteriology Ninth Edition” cho nhóm 17 bao gồm cầu khuẩn Gram dương, nhóm 18 gồm trực khuẩn có bào tử, nhóm 19, 20, 21 gồm khực khuẩn gram dương không bào tử(3) Đối với trực khuẩn gram âm, sử dụng kit IDS14 GNR công ty Nam Khoa để định danh phân lập không nhiều không đa dạng mẫu đất Trong 367 chủng vi khuẩn phân lập được, số cầu khuẩn không nhiều (30/367), trực khuẩn chiếm phần lớn (337/367) bao gồm trực khuẩn Gram dương (252/367) nhiều so với Gram âm (85/367) Trong số trực khuẩn gram dương có 94 trực khuẩn sinh bào tử 158 trực khuẩn không sinh bào tử Kết sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá từ dịch chiết ngoại bào Kết sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa ngoại bào chủng vi khuẩn mỏng DPPH trình bày Hình KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Lấy mẫu phân lập Số mẫu thu thập 204 mẫu Mẫu lấy đa dạng từ nhiều tỉnh vùng khác tỉnh phía Nam Trong đó, mẫu đất, cát chiếm phần lớn Sau thực phân lập môi trường TSA thu 367 chủng vi khuẩn Các chủng vi khuẩn phân lập có nhiều màu sắc khác vàng cam, hồng, trắng đục, tím… Hình 3: Kết sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá ngoại bào vi khuẩn VitC (dung dịch vitamin C 0,1%):chứng dương, MT (môi trường) nước : chứng âm Tại vị trí chấm dịch ni cấy chủng 5, 28, 154, 163,164,167, 265 làm màu DPPH tương đương mẫu chứng dương Bằng phương pháp sàng lọc này, thu 18 chủng bao gồm: 5, 28, 69, 85, 111, 112, 154, 163, 167, 265, 277, 287, 293, 301, 346, 354, 366 có hoạt tính chống oxi hoá từ dịch chiết ngoại bào Kết sàng lọc chủng sinh chất chống oxi hoá từ dịch chiết nội bào Kết thử nghiệm phương pháp chiết chất chống oxi hố nội bào minh họa hình Hình 2: Một số chủng vi khuẩn phân lập Đa số mẫu đất phân lập nhiều loại vi khuẩn khác Đặc biệt mẫu đồi cát Phan Thiết (PT), hay đất ruộng khô cằn Ngã Ba Giòng-Xn Thới Thượng-Hóc Mơn (HM), chủng vi khuẩn phân lập chủ yếu có màu Trong mẫu nước, số chủng vi khuẩn 280 Hình 4: Sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá nội bào với tán siêu âm đầu dò tán bể siêu âm Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 hoá(6) Do chúng tơi lựa chọn hexan để chiết chất chống oxi hoá nội bào So sánh hiệu chiết hai phương pháp tán siêu âm đầu dò bể, màu DPPH dịch chiết dung môi tương đương hiệu chiết xác định hoạt tính chống oxi hoá tương đương Phương pháp sử dụng bể siêu âm có ưu điểm thực lúc nhiều mẫu, tính tương đồng mẫu chiết cao, tiết kiệm thời gian so với tán đầu dò (1 lần thực mẫu) Do chúng tơi chọn phương pháp tán siêu âm bể sử dụng dung môi n-hexan để chiết chất chống oxi hoá nội bào cho 367 chủng phân lập Kết xác định hoạt tính chống oxi hố nội bào chủng trình bày bên hình 5, hình Quan sát bảng mỏng DPPH hai phương pháp chiết chất chống oxi hố nội bào trên, vị trí chấm dịch chiết nước chủng không làm màu DPPH (so với nước- chứng âm) Điều chứng tỏ chủng khơng có chất chống oxi hố nội bào tan nước Tại vị trí chấm dịch chiết dung môi methanol, chloroform, n-hexan chủng Bacillus indicus HU36 làm màu DPPH, vị trí chấm dịch chủng Bacillus subtilis 001 vị trí chấm dịch dung môi thử nghiệm không thấy làm màu DPPH So sánh hiệu chiết dung mơi, nhận thấy vị trí dịch chiết hexan, màu DPPH quan sát rõ so với dung môi khác Theo tài liệu nghiên cứu dung môi tách chiết chất chống oxi hố, dung mơi hexan sử dụng phổ biến để tách chiết chất chống oxi 10 11 13 14 15 16 19 20 21 25 26 Nước 001 Nghiên cứu Y học 150 151 152 153 154 155 65 180 181 182 183 185 65 12 166 157 158 159 160 161 186 187 188 189 17 18 162 163 164 165 166 167 192 193 194 195 196 197 22 23 24 168 169 170 171 172 173 198 199 200 201 202 203 27 28 29 30 174 175 176 177 178 179 204 205 206 207 208 209 HU36 VitC Nước 001 HU36 VitC Nước 001 HU36 184 191 190 VitC Hình 5: Sàng lọc chủng vi khuẩn sinh chất chống oxi hoá nội bào tan nước VitC (dung dịch vitamin C 0,1%):chứng dương, MT (môi trường) nước : chứng âm 180 181 182 183 184 185 65 240 241 242 243 244 245 10 11 12 186 187 188 189 190 191 246 247 248 249 250 251 13 14 15 16 17 18 192 193 194 195 196 197 252 253 254 255 256 257 19 20 21 22 23 24 198 199 200 201 202 203 258 259 260 261 262 263 25 26 27 28 29 30 204 205 206 207 208 209 264 265 266 267 268 269 HU36 VitC Hexan 001 HU36 VitC HU36 VitC Hexan 001 Hexan 001 Hình 6: Sàng lọc chủng vi khuẩn sinh chất chống oxi hoá nội bào tan n-hexan Chuyên Đề Dược Học 281 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 (VitC (dung dịch vitamin C 0,1%):chứng dương, MT (môi trường) nước : chứng âm) Kết sàng lọc cho thấy có 40 vi khuẩn có hoạt tính chống oxi hố tổng kết bảng Bảng 1: Kết sang lọc chủng có hoạt tính chống oxi hố Hoạt tính Hoạt tính chống oxi hố nội bào chống oxi hoá Tan nước Tan hexan ngoại bào Chủng 5, 28, Chủng 5, 16, 44, Chủng 1, 16, 44, 45, 56, 69, 85, 111, 56, 59, 69, 87, 99, 69, 85, 98, 121,134, 112, 154, 163, 134, 136, 140, 277, 136, 140, 164, 167, 202, 287, 293 282, 265, 301, 325, 339, 167, 265, 277, 287, 293, 301, 346, 353, 354, 362, 365, 346, 354, 366 366, 367 Ngoài số chủng có hoạt tính chống oxi hố ngoại bào (28, 85, 112, 154…) nội bào (339 353, 365, 366…), số chủng vi khuẩn 287, 293, 346…vừa có hoạt tính chống oxi hố ngoại bào vừa có hoạt tính chống oxi hố nội bào Kết tương tự chủng Bacillus subtilis B38 Wang cộng cáo báo vừa có hoạt tính chống oxi hố nội bào vừa có hoạt tính chống oxy hóa dịch ngoại bào (2010)(2) Một số chủng vi khuẩn 134, 136, 140 có chất chống oxi hoá nội bào vừa tan nước, vừa tan dung môi hexan Kết định danh sơ Sau tiến hành định danh thu kết sau, 40 chủng có hoạt tính chống oxy hóa có: cầu khuẩn gram dương thuộc loài: Staphylococcus aureus, Micrococcus varians; cầu khuẩn gram âm thuộc chi Tetracoccus; 11 trực khuẩn gram âm thuộc loài: Salmonella choleraesuis, Burkholderia cepacia, Yersinia pseudotuberculosis,Yersinia bercovieri, Citrobacter youngae, Serratia marcescens biogroup , Pasteurella multocida, Pseudomonas vesicularis, Vibrio metschnikovii, Chrombacterium violaceum; trực khuẩn gram dương không bào tử thuộc loài: Corynebacterium kutsceri, Corynebacterium xerosis; 17 trực khuẩn gram dương có bào tử thuộc lồi: Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Bacillus polymyxa, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus pasteurii, 282 Bacillus insolitus, Bacillus marinus Trong có chủng thuộc loài Bacillus xem chủng khơng gây bệnh chủng an tồn để định hướng làm probiotic nguồn sản xuất chất chống oxi hoá tự nhiên KẾT LUẬN Đã cải tiến sử dụng thành công phương pháp mỏng DPPH tăng hiệu quả, rút ngắn thời gian chiết chất oxy hóa nội bào việc sử dụng dung mơi tăng tính thấm bể siêu âm Dựa sở sàng lọc 40 chủng có tiềm sinh chất chống oxy hóa từ 367 chủng phân lập được, đồng thời tiến hành định danh chủng Để ứng dụng kết này, cần có nghiên cứu nhằm định lượng hoạt tính chống oxy hóa khảo sát đặc điểm probiotic chủng tiềm TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 Antolovich M, Prenzler PD et al (2002) Methods for testing antioxidant activity Analyst, 127(1):183-198 Tabbene O, Karkouch I et al (2010) A new antibacterial and antioxidant S07-2 compound produced by Bacillus subtilis B38 FEMS Microbiol Lett, 303(2):176-182 Bergey DH, Holt JG (1994) Bergey's manual of determinative bacteriology (eds) Williams & Wilkins, Baltimore Bùi Minh Giao Long, Vũ Thanh Thảo, et al (2010) Sàng lọc chủng vi khuẩn sinh carotenoid từ biển hô tôm Việt Nam Y học TP Hồ Chí Minh, 14(1):1-5 Duc LH, Fraser PD et al (2006) Carotenoids present in halotolerant Bacillus spore formers FEMS Microbiol Lett, 255(2):215-24 Grevenstuk T, et al (2009) Evaluation of the antioxidant and antimicrobial properties of in vitro cultured Drosera intermedia extracts Nat Prod Commun, 4(8):1063-1068 Huang DJ, Chen HJ, et al (2006) Sweet potato (Ipomoea batatas (L.) Lam ‘Tainong 57’) storage root mucilage with antioxidant activities in vitro Food Chemistry, 98(4):774-781 Lin MY, Yen CL (1999) Antioxidative ability of lactic acid bacteria J Agric Food Chem, 47(4):1460-1466 Marshall JH, Wilmoth GJ (1981) Pigments of Staphylococcus aureus, a series of triterpenoid carotenoids J Bacteriol, 147(3):900-913 Newton GL, et al (2009) Bacillithiol is an antioxidant thiol produced in Bacilli Nat Chem Biol, 5(9):625-627 Ngày nhận báo: 13.12.2012 Ngày phản biện nhận xét báo: 24.12.2012 Ngày báo đăng: 10.03.2014 Chuyên Đề Dược Học ... HU36 chứng minh chưa có nhiều báo cáo chất chống oxi hố có khả sinh carotenoid xem từ vi khuẩn, sản xuất chất chống oxy chứng dương(5) hóa từ vi sinh vật có nhiều hiệu kinh tế Lấy mẫu phân lập... dương có 94 trực khuẩn sinh bào tử 158 trực khuẩn không sinh bào tử Kết sàng lọc hoạt tính chống oxi hố từ dịch chiết ngoại bào Kết sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa ngoại bào chủng vi khuẩn mỏng... 367 chủng vi khuẩn Các chủng vi khuẩn phân lập có nhiều màu sắc khác vàng cam, hồng, trắng đục, tím… Hình 3: Kết sàng lọc hoạt tính chống oxi hoá ngoại bào vi khuẩn VitC (dung dịch vitamin C