Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật và độc tế bào của riềng nếp - alpinia galanga (L.) swartz họ zingiberaceae

Nghiên cứu nhằm mục tiêu khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm và ức chế tế bào ung thư để tìm nguồn nguyên liệu mới phát triển các thuốc kháng vi sinh vật và điều trị ung thư trong thời gian sắp tới. Nguyên liệu để thực hiện nghiên cứu gồm thân rễ và rễ riếng nếp alpinia galanga (L.) được chiết xuất bằng phương pháp ngấm kiệt với dung môi cồn 96%.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG VI SINH VẬT VÀ ĐỘC TẾ BÀO CỦA RIỀNG NẾP - ALPINIA GALANGA (L.) SWARTZ HỌ ZINGIBERACEAE Võ Đăng Khoa*, Đỗ Thị Hồng Tươi*, Nguyễn Đinh Nga* TĨM TẮT Mục tiêu: Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm ức chế tế bào ung thư để tìm nguồn nguyên liệu phát triển thuốc kháng vi sinh vật điều trị ung thư thời gian tới Nguyên vật liệu phương pháp: Thân rễ rễ riếng nếp Alpinia galanga (L.) chiết xuất phương pháp ngấm kiệt với dung mơi cồn 96% Sau lắc phân bố với dung môi, hệ dung môi (n-hexan, n-hexan – cloroform (1:1), cloroform, ethyl acetat, aceton) với thể tích, phân đoạn chiết sau sử dụng để sàng lọc hoạt tính sinh học in vitro so sánh hoạt tính phân đoạn với Phương pháp khuếch tán thạch, phương pháp pha lỗng kỹ thuật hình sinh học trực tiếp dùng để khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật Các phân đoạn chiết đáng giá khả gây độc tế bào ung thư vú dòng MDA – MB – 231 phương pháp MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromid] Kết quả: Kết bước đầu nghiên cứu cho thấy phân đoạn n-hexan – cloroform (1:1) cho hoạt tính kháng vi sinh vật tốt nhất, đặc biệt ức chế chủng Klebsiella pneumoniae tiết beta lactamse phổ rộng (mẫu vi khuẩn ly trích từ bệnh phẩm lấy từ bệnh viện Quận 2) với giá trị MIC  0,31 µg/ml Bằng phương pháp MTT xác định hai phân đoạn n-hexan n-hexan – cloroform (1:1) cho tác động mạnh (ở nồng độ 6,25 µg/ml ức chế 80 % tế bào ung thư) Kết luận: Kết nghiên cứu cho thấy riếng nếp Alpinia galanga (L.) có hoạt tính kháng vi sinh vật độc tế bào ung thư đáng ghi nhận Đây dược liệu tiềm để tiếp tục nhiều nghiên cứu phát triển kháng sinh thuốc trị ung thư thời gian tới Từ khóa: Alpinia galanga, kháng vi sinh vật, độc tế bào ABSTRACT RESEARCH ON ANTIMICROBIAL AND CYTOTOXIC ACTIVITIES OF ALPINIA GALANGA (L.) SWARTZ Vo Dang Khoa, Do Thi Hong Tuoi, Nguyen Dinh Nga * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 1- 2018: 460 - 464 Objectives: This study aimed to evaluate antimicrobial and cytotoxic activities of Alpinia galanga (L.) Swartz Materials and methods: Ethanol extract of rhizomes and roots of Alpinia galanga (L.) in ethanol solvent (96 %) has been investigated After separated with different solvents (n-hexan, n-hexan – chloroform (1:1), chloroform, ethyl acetate, acetone) by the same volume, respectively, the fractions have been used for screening biological activities in vitro and made a comparison Agar well diffusion method, antimicrobial gradient method and thin – layer chromatography (TLC) – bioautography were used for screening the antimicrobial activity The fractions was also evaluated for their cytotoxic activity against breast cancer cells (MDA – MB – 231) by 3-(4,5*Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS TS Nguyễn Đinh Nga ĐT: 0908836969 460 Email: nganguyendinh@ump.edu.vn Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay Results: Preliminary results showed that the n-hexan – chloroform (1:1) fraction gives the highest antimicrobial activity, especialy againts ESBL – producing Klebsiella pneumoniae (sample from Hospital of District at Ho Chi Minh city) with minimal inhibitory concentration (MIC)  0,31 µg/ml With MTT assay, both two fractions n-hexan and n-hexan – chloroform (1:1) give the good inhibitory effects (inhibited over 80 % of cancer cells at the concentration 6,25 µg/ml) Conclusion: Our results suggest that Alpinia galanga (L.) has valuable potential in biological activities which should be continuous researches in vivo and clinical trials to develop new antibiotic and anticancer drugs in the future Keywords: Alpinia galanga, antimicrobial, cytotoxic MỞ ĐẦU Tỉ lệ ung thư tăng cao bệnh nhiễm liên quan đến vi khuẩn kháng thuốc vấn nạn y tế Việt Nam Tốc độ phát triển bệnh ung thư Việt Nam đ{ng báo động, ung thư gây thiệt hại lớn kinh tế chất lượng sống hàng trăm ngàn bệnh nhân Ung thư chiếm tới 19,2 % tổng số năm sống tử vong sớm Số người mắc ung thư năm Việt Nam ước tính 125036 theo Globocan năm 2012, dự báo vào năm 2020 có 189344 ca ung thư mắc(2) Bên cạnh đó, tượng vi khuẩn đa kháng thuốc gây khó khăn điều trị bệnh nhiễm Vì vậy, việc tìm hợp chất để đối phó với vấn đề quan tâm Riềng nếp (Alpinia galanga) dược liệu dùng từ lâu đời y học cổ truyền Việt Nam để kích thích tiêu hóa, chữa đau bụng, nơn mửa, ăn, sốt rét(4) Trong y học đại, công dụng riềng nếp ngày khai thác triệt để tác dụng vượt trội kháng khuẩn, kháng nấm gây độc tế bào(6) Những tác dụng sinh học mở hướng nghiên cứu thuốc kháng sinh, kháng nấm đặc biệt thuốc trị ung thư Hiện nay, cơng trình nghiên cứu nước tập trung nghiên cứu sâu tác động nấm da riềng nếp chưa có nghiên cứu khảo sát tác động vi khuẩn đa đề kháng tiết β – lactamse phổ rộng, khả ức chế ung thư Chúng chưa ghi Chuyên Đề Dƣợc nhận tài liệu quốc tế có báo cáo khảo sát khả ức chế tế bào ung thư in vitro phương pháp MTT riềng nếp Vì vậy, mục tiêu nghiên cứu khảo sát đặc tính vừa đề cập thân rễ rễ riềng nếp Nghiên cứu cung cấp thêm liệu để thiết lập thơng tin có giá trị hoạt tính sinh học riềng nếp mở hướng cho nghiên cứu dược lý học NGUYÊNLIỆU -PHƢƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Dƣợc liệu Rễ thân rễ riềng nếp thu hái huyện Trà Cú, tỉnh Trà Vinh định danh Bộ môn Thực Vật, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Mẫu làm nước máy, phơi âm can nghiền thành kích cỡ bột thơ Chiết xuất cao tồn phần cao phân đoạn Bột dược liệu chiết ngấm kiệt với ethanol 96% Dịch chiết ethanol bốc 45 oC Cao toàn phần chiết phân bố lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần (n-hexan, n-hexan - cloroform (1:1), cloroform, etyl acetat, aceton) để thu cao phân đoạn Phƣơng pháp khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật Tác động kháng khuẩn kháng nấm cao toàn phần cao phân đoạn riềng nếp thực phương pháp khuếch tán, phương pháp pha loãng tự sinh đồ(1) với điều kiện thử nghiệm sau: 461 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Chủng vi sinh vật: Staphylococcus aureus nhạy cảm với Methicillin (MSSA) ATCC 25923, Staphylococcus aureus đề kháng với methicillin (MRSA) ATCC 33591, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Streptococcus faecalis ATCC 29212, Klebsiella pneumoniae (ESBL) (K26-ESBL) (mẫu từ Bệnh viện Quận – thành phố Hồ Chí Minh), Candida albicans ATCC 10231, Candida glabrata ND31, C tropicalis PNT20, Mallasezia furfur ATCC 44344 Môi trường thử nghiệm: MHA cho vi khuẩn, MHA bổ sung glucose cho Candida sp mDixon cho M furfur giếng (Propanol ưu tiên sử dụng giảm tỉ lệ bay hơi) Sau đĩa lắc rung mạnh để đảm bảo hòa tan formazan Mật độ quang giếng đo máy đo quang ELISA Elx800 (Bio Tek - USA) với bước sóng thử nghiệm 570 nm(3,5) Chứng dương Paclitaxel M KẾT QUẢ Tác động kháng vi sinh vật cao chiết phân đoạn từ riềng nếp Kết thử nghiệm cho thấy chứng âm DMSO không gây ức chế vi sinh vật thử Đọc kết quả: 24 sau ủ 37 oC cho vi khuẩn 48 cho nấm men nghiệm Tác động kháng vi sinh vật tập trung Kết thể đường kính vòng ức chế (mm) phương pháp khuếch tán MIC phương pháp pha loãng đoạn n-hexan - cloroform Cả hai cao phân đoạn Ở kỹ thuật tự sinh đồ giúp phát vết cho tác động ức chế vi sinh vật sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng đặc điểm hóa học vết (Rf, màu phun thuốc thử, đặc điểm phát quang UV,