Styryl-lactones là một lớp chất chính được phân lập từ chi Goniothalamus- họ Na (Annonaceae). Trong số các styryl-lactone phân lập được, một số hợp chất thể hiện hoạt tính chống ung thư đối với các dòng tế bào ung thư khác nhau như howiinol A, goniotriol, goniodiol và goniothalamin. Trước đây, chúng tôi công bố quy trình tổng hợp howiinol A. Trong bài báo này, chúng tôi công bố quy trình tổng hợp và kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào của 6 hợp chất styryl-lactone. Trong đó hợp chất 3 thể hiện hoạt tính tôt nhất đối với dòng tế bào ung thư KB với giá trị IC50 = 0,88 µg/ml. Cấu trúc của các hợp chất được xác định bằng các phương pháp phổ như COSY, HSQC, HMBC, NOESY, MS, 19F NMR.
Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 52 (1) (2014) 83-90 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TỔNG HỢP VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO CỦA MỘT SỐ ANALOGUE STYRYLLACTONE Đoàn Thị Mai Hương1, *, Phạm Văn Cường1, Nguyễn Văn Hùng1, Triệu Quý Hùng1, Daniele Bonnet-Delpon2, Châu Văn Minh1 Viện Hóa sinh biển – Viện HLKHCNVN, 18 Hồng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Trường đại học Paris XI – CH Pháp * Email: doanhuong7@yahoo.com Đến Tòa soạn: 10/11/2012; Chấp nhận đăng: 15/10/2013 TÓM TẮT Styryl-lactones lớp chất phân lập từ chi Goniothalamus- họ Na (Annonaceae) Trong số styryl-lactone phân lập được, số hợp chất thể hoạt tính chống ung thư dòng tế bào ung thư khác howiinol A, goniotriol, goniodiol goniothalamin Trước đây, chúng tơi cơng bố quy trình tổng hợp howiinol A Trong báo này, chúng tơi cơng bố quy trình tổng hợp kết thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất styryl-lactone Trong hợp chất thể hoạt tính tơt dòng tế bào ung thư KB với giá trị IC50 = 0,88 µg/ml Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ COSY, HSQC, HMBC, NOESY, MS, 19F NMR Từ khoá: styryl-lactone, Goniothalamus, howiinol A MỞ ĐẦU Các hợp chất tự nhiên sản phẩm tổng hợp mô dựa theo hợp chất tự nhiên đã, đóng vai trò quan trọng việc cung cấp cho nhân loại vũ khí để chống lại bệnh tật, nâng cao sức khỏe lồi người.Việt Nam nước có khí hậu nhiệt đới với hệ thực vật đa dạng, tiềm ẩn nhiều lồi thực vật sử dụng để làm thuốc y học cổ truyền, ví dụ số loài thuộc chi Goniothalamus- họ Na (Annonaceae) [1] Các cơng trình nghiên cứu giới cho thấy chi chứa nhiều styryl lactone có hoạt tính chống ung thư lý thú [2, 3, 4], từ kết nghiên cứu đó, có nhiều hợp chất styryl-lactone có hoạt tính chống ung thư tổng hợp dựa theo styryl lactone phân lập từ loài Goniothalamus L [5, 6] Truớc công bố quy trình tổng hợp hợp chất howiinol A số dẫn xuất [7, 8] Trong báo này, thông báo số kết nghiên cứu tổng hợp thử hoạt tính độc tế bào số analogue styryl lactone THỰC NGHIỆM 2.1 Thiết bị, hố chất Đồn T M Hương, P V Cường, N V Hùng, T Q Hùng, D Bonnet-Delpon, Châu Văn Minh Phổ NMR ghi máy Bruker Avance 500 MHz với TMS làm chất chuẩn nội Phổ khối lượng đo máy MS 5989B Engine (Hewlet Packard) máy sắc kí lỏng ghép khối phổ với đầu đo MSD (LC/MSD Agilert series 1100), sử dụng mode ESI đầu dò DAD Tủ ấm CO2 INNOVA CO-170, tủ cấy sinh học an toàn cấp II, máy li tâm Universal 320R, kính hiển vi ngược Zeizz, tủ lạnh sâu -25 0C,-80 0C, buồng đếm tế bào Fisher, máy quang phổ Genios Tecan sử dụng để thử hoạt tính gây độc tế bào Hoá chất dùng cho tổng hợp hữu mua hãng Merck Aldrich Bốn dòng tế bào ung thư người cung cấp ATTC gồm: KB - ung thư biểu mô (CCL – 17TM); Hep G2 - ung thư gan (HB – 8065TM); MCF-7 - ung thư vú (HTB – 22TM) LU-1 HTB-57TM - ung thư phổi 2.2 Tổng hợp Hợp chất tổng hợp từ D-glycero-D-glucoheptono-γ-lactone (1) qua bước chúng tơi trình bày cơng trình công bố trước [8] Tổng hợp (E) - (2,2 - dimethyl - - oxo - 4, 4a, 6, 8a - tetrahydropyrano [3, 2-d] [1,3] dioxin -4 - yl) (phenyl) methyl 4,4,4-trifluorobut-2-enoate (3) Cho 49 mg 4,4,4-trifluoro crotonic acid (0,35 mmol, eq) vào bình cầu chứa hỗn hợp gồm 50 mg chất (0,17 mmol), 100 mg EDC (0,35 mmol), 83 mg DMAP (0,68 mmol) 10 ml CH2Cl2 khan Sau khuấy hỗn hợp phản ứng nhiệt độ phòng giờ, dừng phản ứng thêm 10 ml nước chiết với CH2Cl2 (4 × 30 ml) Phần dung dịch hữu làm khan Na2SO4 quay cạn dung môi áp suất giảm thu 170 mg cặn thô Cặn thô tinh chế cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH gradient, cho 74 mg chất dạng chất rắn màu trắng Hiệu suất phản ứng đạt 94 % Đ.n.c 187 - 190o; [α]D28 = + 60,1 (0,24, CH2Cl2); Phổ IR (KBr) νmax (cm-1): 3010, 1725, 1637, 1385, 1311, 1260, 1137, 989, 706; Phổ ESI-MS: positive m/z 435: [M+Na]+; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δ (ppm): 1,32 (3H, s, CH3); 1,36 (3H, s, CH3); 4,31 (1H, t, J = 1,5 Hz, H-5); 4,35 (1H, dd, J = 1,5; 9,0 Hz, H-6); 4,38 (1H, dd, J = 1,5; 6,0 Hz, H-4); 6,14 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-7); 6,25 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-2); 6,49 (1H, dq, 3JH-H = 15,5 Hz, 4JF-H=2,0 Hz, H-2’); 6,79 (1H, dq, 3JH-H = 15,5 Hz, 3JF-H = 6,5 Hz, H-3’); 6,88 (1H, dd, J = 9,5; 6,0 Hz, H-3); 7,30 - 7,41 (5H, m, -C6H5); Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δ (ppm): 18,5 (CH3); 29,0 (CH3); 60,2 (C-4); 69,0 (C-6); 71,5 (C-7); 73,8 (C-5); 99,8 (-C(CH3)2); 121,9 (q, 1JC-F = 270,5 Hz, CF3); 125,6 (C-2); 127,5 (C-9+C-13); 128,3 (q, 3JC-F = 6,2 Hz, C-2’); 128,4 (C-10 + C-12); 128,7 (C-11); 132,2 (q, JC-F = 35,6 Hz, C-3’); 136,7 (C-8); 140,3 (C-3); 161,8 (C-1’); 162,3 (C-1); Phổ 19F-NMR (CDCl3, 188 MHz): -66,0 (3F, dd, 3JH-F = 6,4 Hz; 4JF-H = 1,9 Hz) Tổng hợp (E)-2-hydroxy-2-(3-hydroxy-6-oxo-3,6-dihydro-2H-pyran-2-yl)-1-phenyl ethyl 4,4,4trifluorobut-2-enoate (4) Cho ml dung dịch axit axetic 80 % vào bình cầu chứa 50 mg este (0,12 mmol) Hỗn hợp phản ứng khuấy 80 – 90 oC sau quay khơ dung mơi áp suất giảm tinh chế cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH gradient thu 25 mg chất dạng chất rắn màu trắng Hiệu suất phản ứng đạt 57 % Đ.n.c 117 - 119o; [α]D28 = + 45,8 (0,34, CH2Cl2); Phổ IR (KBr) νmax (cm-1): 3357 (OH), 1703, 1630, 1312, 1266, 1136; Phổ ESI-MS: negative m/z 743: [2M-H]-; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 84 N/c quy trình tổng hợp khảo sát hoạt tính gây độc tế bào số analogue styryl-lactone 500 MHz), δ (ppm): 4,25 (1H, br d, J = 3,5 Hz, OH-C-6); 4,37 (3H, m, H-4 + H-5 + OH-C-4); 4,58 (1H, m, H-6); 6,07 (1H, d, J = 7,0 Hz, H-7); 6,10 (1H, d, J=9,5 Hz, H-2); 6,52 (1H, dd, 3JH4 3 H = 15,5 Hz, JF-H = 2,0 Hz, H-2’), 6,81 (1H, dq, JH-H = 15,5 Hz, JF-H = 6,5 Hz, H-3’); 6,99 (1H, br d, J = 9,5 Hz, H-3), 7,38 (3H, m, H-10 + H-12 + H-11); 7,52 (2H, br d, J = 6,5 Hz, H-9 + H13); Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δ (ppm): 62,6 (C-4); 73,1 (C-6); 75,4 (C-7); 77,9 (C-5); 122,2 (q, 1JC-F = 271,0 Hz, CF3); 122,7 (C-2); 127,9 (C-9+C-13); 128,3 (q, 3JC-F = 6,5 Hz, C-2’); 128,7 (C-10+C-12); 129,1 (C-11); 132,4 (q, 2JC-F = 35,1 Hz, C-3’); 135,8 (C-8); 143,9 (C-3); 162,6 (C-1’); 163,7 (C-1); 19F (CDCl3, 188 MHz): -66,0 (3F, d, 3JF-H = 5,0 Hz) Tổng hợp 2,2-dimethyl-4-(phenyl(2,2,2-trifluoroethoxy)methyl)-4,4a-dihydro pyrano [3,2d][1,3]dioxin-6(8aH)-one (5) 5-hydroxy-6-(1-hydroxy-2-phenyl-2-(2,2,2trifluoroethoxy)ethyl)-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one (6) 0,175 ml boron trifluoride diethyl etharate BF3.OEt2 (0,14 mmol, 0,2 eq) nhỏ giọt vào hỗn hợp chứa 200 mg chất (0,69 mmol) 12 ml trifluoroethanol (0,16 mol) oC Sau khuấy 0oC, thêm 12ml dung dịch bão hòa NaHCO3 vào hỗn hợp phản ứng chiết với Et2O (3 × 40 ml) Pha hữu rửa lại dung dịch nước muối làm khan MgSO4 khan Dịch lọc sau quay khô áp suất thấp tinh chế cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH gradient thu 17 mg chất (hiệu suất đạt 5,1 %) 80 mg chất (hiệu suất đạt 27,1 %) Dữ kiện phổ chất 5: Đ.n.c 97 - 99o; [α]D28 = + 53,6 (c 1,20, CH2Cl2); Phổ IR (KBr) νmax (cm ): 2988, 2917, 1732, 1632, 1255, 1166, 1129, 873; Phổ ESI-MS: negative m/z 743,1 [2MH]-; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δ (ppm): 1,27 (6H, s, x CH3), 3,75 (2H, m, -CH2CF3); 4,07 (1H, dd, J = 2,0; 9,0 Hz, H-6); 4,35 (1H, dd, J = 6,0; 2,0 Hz, H-4), 4,50 (1H, t, J = 2,0 Hz, H-5); 4,78 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-7); 6,27 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-2); 6,89 (1H, dd, J = 9,0; 6,0 Hz, H-3), 7,35 (5H, m, -C6H5); Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δ (ppm): 18,5 (CH3); 29,0 (CH3); 60,4 (C-4); 66,3 (q, 2JC-F = 34,3 Hz, CH2-CF3); 69,3 (C-5); 72,6 (C-6); 79,3 (C-7); 99,5 (C (CH3)2); 123,6 (q, 1JC-F = 276,4 Hz, CF3); 125,5 (C-2), 127,7 (C-9 + C-13); 128,4 (C-10 + C-12); 128,6 (C-11); 137,1 (C-8); 140,6 (C-3); 162,9 (C-1); Phổ 19F-NMR (CDCl3, 188 MHz): -75,0 (t, JH-F = 8,6 Hz, 3F, CF3) -1 Dữ kiện phổ chất 6: Đ.n.c 113-115o; [α]D28 = + 103,6 (c 0,58, CH2Cl2); Phổ IR (KBr) νmax (cm-1): 3356, 2926, 1713, 1629, 1277, 1158, 838; Phổ ESI-MS: negative m/z 663,2 [2M-H]-; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δ (ppm): 3,64 (2H, q, 3JF-H = 8,5 Hz, CH2-CF3); 4,13 (1H, OHC-6); 4,25 (1H, m, H-6), 4,36 (1H, m, H-4); 4,58 (2H, br d, J = 8,5 Hz, H-7+OH); 4,66 (1H, t, J = 2,5 Hz, H-5); 6,09 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-2); 6,95 (1H, dd, J = 6,0; 9,5 Hz, H-3), 7,35 (5H, m, -C6H5); Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δ (ppm): 63,3 (C-4); 65,7 (q, 2JC-F = 34,7 Hz, CH2CF3); 74,4 (C-6); 77,5 (C-5); 81,0 (C-7); 122,7 (C-2), 123,8 (q, 1JC-F = 276,8 Hz, CF3); 128,1 (C9+C-13); 128,7 (C-10+C-12); 128,9 (C-11); 136,6 (C-8); 144,0 (C-3); 164,2 (C-1); Phổ 19FNMR (CDCl3, 188 MHz): -76,0 (t, 3JH-F = 8,6 Hz, 3F, CF3) Tổng hợp 4-(fluoro(phenyl)methyl)-2,2-dimethyl-4,4a-dihydropyrano [3,2-d][1,3] dioxin6(8aH)-one (7) Cách Nhỏ giọt Deoxo-fluor (91,6 mg, 0,41 mmol) vào bình cầu chứa 50 mg chất (0,17 mmol) ml CH2Cl2 oC Đưa hỗn hợp phản ứng nhiệt độ phòng khuấy tiếp giờ, sau dừng phản ứng, quay cạn dung môi áp suất giảm thu đuợc cặn chất 85 Đoàn T M Hương, P V Cường, N V Hùng, T Q Hùng, D Bonnet-Delpon, Châu Văn Minh Tinh chế cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2/ MeOH gradient thu 25 mg chất dạng chất rắn màu trắng Hiệu suất phản ứng đạt 50 % Cách Nhỏ giọt (diethylamino)sulfur trifluoride (32,8 mg, 0,20 mmol) vào bình cầu chứa 50 mg chất (0,17 mmol) ml CH2Cl2 oC Hỗn hợp phản ứng khuấy nhiệt độ phòng Cơ cạn dung môi áp suất giảm tinh chế cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH gradient thu 40 mg chất Hiệu suất phản ứng 79,5 % Đ.n.c 190 - 191o; [α]D28 = + 287,6 (c 0,88, CH2Cl2); Phổ IR (KBr) νmax (cm-1): 2993, 1732, 1633, 1255, 1126, 1052, 866; Phổ ESI-MS: positive m/z 293: [M+H]+; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δ (ppm): 1,36 (3H, s, CH3); 1,38 (3H, s, CH3); 4,24 (1H, ddd, J = 1,5; 3,5; 9,0 Hz, H-6); 4,42 (1H, dd, J = 6,0; 2,0 Hz, H-4); 4,49 (1H, ddd, J = 2,0; 2,0; 1,5 Hz, H-5); 5,79 (1H, dd, JF-H = 45,0 Hz, 3JH-H = 9,0 Hz, H-7); 6,31 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-2); 6,93 (1H, dd, J = 6,0; 9,5 Hz, H-3); 7,41 (5H, m, -C6H5); Phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz), δ (ppm): 18,6 (CH3); 29,0 (CH3); 60,2 (C-4); 69,1 (d, 3JC-F = 1,5 Hz, C-5); 71,5 (d, 2JC-F = 34,8 Hz, C-6); 89,2 (d, 1JC-F = 168,8 Hz, C-7); 99,6 (C-1’); 125,6 (C-3); 126,8 (C-9+C-13); 128,3 (C-10+C-12); 128,9 (C-11); 136,7 (d, 2JC-F = 19,6 Hz, C-8); 143,7 (C-3); 164,2 (C-1); Phổ 19F-NMR (CDCl3, 188 MHz): 188,3 (1F, dd, 2JF-H = 45,1 Hz; 3JF-H = 1,9 Hz) Tổng hợp 6-(2-fluoro-1-hydroxy-2-phenylethyl)-5-hydroxy-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one (8) 40 mg chất hòa tan ml dung dich axit axetic 50 % khuấy 80 – 90 oC Hỗn hợp sau quay khơ tinh chế cột silica gel với hệ dung môi cyclohexan/AcOEt gradient thu 20 mg chất dạng chất rắn màu trắng Hiệu suất phản ứng đạt 46,4 % Đ.n.c 138 - 140o; [α]D28 = + 154,7 (c 0,84, CH2Cl2); Phổ IR (KBr) νmax (cm-1): 3385, 1720, 1630, 1379, 1255, 1052, 702; Phổ ESI-MS : positive m/z 527,6: [2M+Na]+; Phổ ESI-MS : negative m/z 503,5 [2M-H]-; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 500 MHz), δ (ppm): 3,89 (1H, d, J = 4,5 Hz, OH-C-6); 4,18 (1H, d, J = 7,0 Hz, OH-C-4); 4,41 (2H, m, H-4 + H-6); 4,65 (1H, m, H-5); 5,53 (1H, dd, 2JF-H = 45,9; 3JH-H =8,5 Hz, H-7); 6,15 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-2); 7,01 (1H, dd, J = 5,5; 9,5 Hz, H-3); 7,40 (5H, m, -C6H5); Phổ 13C-NMR (CDCl3, 75 MHz), δ (ppm): 63,3 (C-4); 73,6 (d, 2JC-F = 38,9 Hz, C-6); 77,3 (C-5); 90,6 (d, 1JC-F = 173,5 Hz, C-7); 122,9 (C-2); 127,0 (C-9), 127,1 (C-13); 128,6 (C-10+C-12); 129,3 (C-11); 136,2 (d, 2JCF = 18,1 Hz, C-8); 143,8 (C-3); 164,0 (C-1); Phổ 19F-NMR (CDCl3, 188 MHz): -181,3 (1F, dd, 2JF-H =45,1 Hz; 3JF-H = 5,6 Hz) 2.3 Phương pháp thử hoạt tính độc tế bào Độ độc tế bào in vitro thực theo phương pháp Monks (1991), Viện Ung thư Quốc gia Hoa kỳ (NCI) xác nhận phép thử độc tế bào chuẩn nhằm sàng lọc, phát chất có khả kìm hãm phát triển diệt tế bào ung thư điều kiện in vitro [9] Phương pháp ni cấy Các dòng tế bào ung thư nghiên cứu nuôi cấy môi trường ni cấy RPMI 1640 DMEM có bổ xung thêm 10% huyết phơi bò (FBS) thành phần kèm theo gồm mM L-Glutamine, 1mM sodium pyruvate, hỗn hợp kháng sinh 100 đơn vị Penicillin 100 µg Streptomycin, điều kiện nuôi % CO2; 37 oC; độ ẩm 98 %; vô trùng tuyệt đối Thời gian cấy chuyển khác tùy thuộc vào đặc tính dòng tế bào Tế bào phát triển pha log sử dụng để thử độc tính 86 N/c quy trình tổng hợp khảo sát hoạt tính gây độc tế bào số analogue styryl-lactone Phép thử sinh học xác định độ độc tế bào 200 µl dung dịch tế bào sau thu hoạch pha log với nồng độ × 104 tế bào/ml cho vào phiến vi lượng 96 giếng mơi trường RPMI 1640 cho dòng tế bào HepG2, MCF7, KB mơi trường DMEM cho dòng tế bào LU-1 Mẫu chất thử pha nồng độ 64 µg/ml; 16 µg/ml; µg/ml; µg/ml 0,25 µg/ml cho thêm vào phiến vi lượng 96 giếng Giếng điều khiển (chuẩn) gồm 200 µl dung dịch tế bào × 104 tế bào/ml ủ 37 0C, % CO2 ngày Sau ngày, thêm 50 µl MTT (1mg/ml pha mơi trường nuôi cấy không huyết thanh) vào phiến vi lượng 96 giếng giếng điều khiển ủ tiếp 37 0C giờ, sau loại bỏ mơi trường, thêm 100 µl DMSO lắc đều, đọc kết bước sóng 540 nm máy spectrophotometter Genios TECAN Giá trị IC50 tính dựa kết số liệu phần trăm kìm hãm phát triển tế bào phần mềm Tablecurve Ellipticine sử dụng làm đối chứng dương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hợp chất tổng hợp từ D-glycero-D-glucoheptono-γ-lactone (1) qua bước chúng tơi trình bày cơng trình công bố trước [8] Sáu dẫn xuất styryl-lactone tổng hợp từ hợp chất trung gian theo sơ đồ Cho hợp chất tác dụng với 1,5 eq axit trifluoro crotonic với có mặt EDC 4DMAP CH2Cl2 thu este với hiệu suất phản ứng 94 % Loại bỏ nhóm acetonide hợp chất dung dịch axit axetic 80 % 80 – 90 oC thu hợp với hiệu suất 57 % Phổ khối ion hóa bụi điện tử (ESI-MS) cho pic ion giả phân tử m/z 435[M+Na]+ Phổ 13C-NMR cho tín hiệu 20 nguyên tử cacbon tương ứng với 12 cacbon lai hóa sp2 cacbon lai hóa sp3 có nhóm cacbonyl, 13 nhóm CH, nhóm CF3, nhóm CH3 cacbon bậc Sự có mặt nhóm trifluoro crotonate xác định phổ 13C-NMR δC 121,9 (q, 1JC-F = 270,5 Hz, CF3); 128,3 (q, 3JC-F = 6,2 Hz, C-2’), 132,2 (q, 2JC-F = 35,6 Hz, C-3’) 161,8 (C-1’) Phổ 1H-NMR cho thấy có mặt proton thuộc nhóm trifluoro crotonate δH 6,49 (1H, dq, 3JH-H = 15,5 Hz, 4JF-H = 2,0 Hz, H-2’) δH 6,79 (1H, dq, 3JH-H = 15,5 Hz, 3JF-H=6,5 Hz, H-3’), số tương tác spin-spin H-2’ H-3’ lớn (J = 15,5 Hz) chứng tỏ proton dạng đồng phân hình học trans Trên phổ 19F cho thấy có tín hiệu nhóm CF3 dạng double doublet δF -66,0 (3F, 3JF-H = 6,4 Hz; 4JF-H = 1,9 Hz) Cấu hình cacbon bất đối xác định dựa vào việc so sánh độ chuyển dịch hóa học số tương tác với dẫn xuất tổng hợp Phổ 1H 13C-NMR có liệu phổ giống với chất 3, vắng mặt tín hiệu nhóm metyl cacbon bậc bốn Phổ 19F chất howi F2 có tín hiệu doublet nhóm CF3 δF -182 (3F, 3JF-H = 5,0 Hz) Phổ khối ion hóa bụi điện tử negative (ESI-MS) cho pic ion giả phân tử m/z 743 [2M-H]- Kết hợp liệu phổ COSY, HSQC, HMBC, NOESY, MS cho phép ta xác định chất chất dự định tổng hợp Cho tác dụng với trifluoroethanol với có mặt boron trifluoride diethyl etharate (BF3.Oet2) thu hợp chất Phổ khối ion hóa bụi điện tử negative (ESI-MS) cho pic ion giả phân tử m/z 743 [2M-H]- Phổ 13C-NMR DEPT cho tín hiệu 18 nguyên tử cacbon tương ứng với cacbon lai hóa sp2 cacbon lai hóa sp3 có nhóm CH2, 11 nhóm CH, nhóm CH3, nhóm C=O, nhóm CF3 cacbon bậc bốn Nhóm CH2 nhóm CF3 xuất dạng quartet δC 66,3 (q, 2JC-F=34,3 Hz, CH2-CF3) δC 123,6 (d, 1JC-F = 276,4 Hz, CF3) Trên phổ 1H-NMR cho thấy có mặt proton thuộc nhóm CH2 gắn với nhóm CF3 δ 3,71 – 3,82 (2H, m, -CH2CF3) Trên phổ HMBC có tương tác xa H87 Đồn T M Hương, P V Cường, N V Hùng, T Q Hùng, D Bonnet-Delpon, Châu Văn Minh với CH2, C-5, C-6, C-8; đồng thời proton nhóm CH2 tương tác với CF3 C-7, chứng tỏ nhóm OH vị trí C-7 bị nhóm OCH2CF3 Trên phổ 19F cho thấy có tín hiệu nhóm CF3 dạng triblet δF -75,0 (t, 3JH-F = 8,6 Hz, 3F, CF3) Hợp chất có liệu phổ NMR giống với chất 5, phổ 1H-NMR thấy vắng mặt tín hiệu nhóm metyl Đồng thời phổ 13C-NMR có 15 nguyên tử cacbon, vắng mặt tín hiệu nhóm metyl cacbon bậc Phổ 19F-NMR có triplet δF -76,0 (3F, 3JH-F = 8,6 Hz, CF3) Phổ khối ion hóa bụi điện tử negative (ESI-MS) cho pic ion m/z 663 [2M-H]- Kết hợp liệu phổ COSY, HSQC, HMBC, NOESY, MS, 19F NMR cho phép xác định chất chất dự định tổng hợp O O O O O O CF 3' H O O 1' O O OH OH CF 2' 10 11 13 12 CF3CH=CHCOOH EDC, DMAP O O OH O O OH HO OH O b- í c O OH O O CF3 CH OH O O CF3 + Ph BF OEt2 OH O O CF3 OH O O OH DAST CH2Cl O O F O O O F O H OH OH Sơ đồ Quy trình tổng hợp số dẫn xuất styryl-lactone Để tổng hợp chất 7, ban đầu sử dụng tác nhân phản ứng Deoxo-fluor cho tác dụng với chất oC CH2Cl2 Hiệu suất phản ứng với tác nhân 50 % Để tăng hiệu suất phản ứng, thay đổi tác nhân phản ứng, sử dụng (dimethylamino)sulfur trifluoride (DAST) Kết cho thấy hiệu suất phản ứng cao hơn, đạt 79,5 % Loại bỏ nhóm bảo vệ acetal dung dịch axit axetic thu hợp chất với hiệu suất 60 % Cơ chế phản ứng ancol với tác nhân DAST nghiên cứu nhiều, phản ứng có đảo cấu hình giải thích theo sơ đồ Phổ khối ion hóa bụi điện tử (ESI-MS) cho pic ion phân tử proton hóa m/z 293 [M+H]+ Phổ 13C-NMR cho tín hiệu 16 nguyên tử cacbon, tương ứng với cacbon lai hóa sp2 cacbon lai hóa sp3 có nhóm CH3, nhóm cacbonyl, 11 nhóm CH cacbon bậc Tín hiệu C-6, C-7 C-8 phổ 13CNMR xuất dạng doublet δC 89,2 (1JC-F = 168,8 Hz, C-7); 71,5 (2JC-F = 34,8 Hz, C-6) δC 136,7 (d, J= 18,1 Hz, C-8), dựa vào số tương tác cabon flo cho phép xác định sơ có mặt nguyên tử F gắn với C-7 Phổ 1H-NMR cho tín hiệu proton H-7 δH 5,74 - 5,85 dạng double doublet với số tương tác 2JH-F = 45,0 Hz 3JH-H = 9,0 Hz, 88 N/c quy trình tổng hợp khảo sát hoạt tính gây độc tế bào số analogue styryl-lactone tín hiệu đặc trưng proton olefinic thuộc vòng unsaturated-lactone δH 6,31 (1H, d, J = 9,5 Hz, H-2), 6,93 (1H, dd, J = 9,5; 6,0 Hz, H-3) Trên phổ 19F-NMR có tín hiệu double doublet δF -186,4 (1F, dd, 2JF-H = 47,0 Hz; 3JF-H = 1,9 Hz) O OH O F O F F S N F H O O N SN2 F O Ph Ph O O F S O O O Ph F O O Sơ đồ Cơ chế phản ứng tạo chất Hợp chất có liệu phổ NMR gần giống với chất 7, phổ 1D-NMR thấy vắng mặt tín hiệu nhóm metyl cacbon bậc Phổ 19F NMR có tín hiệu double doublet δF 181,3 (1F, dd, 2JF-H = 45,1 Hz; 3JF-H = 5,6 Hz) Kết hợp liệu phổ COSY, HSQC, HMBC, NOESY, MS, 19F NMR cho phép xác định chất chất dự định tổng hợp Các dẫn xuất 3-8 thử hoạt tính độc tế bào dòng tế bào ung thư LU-1, HepG2, KB MCF7 Kết thử hoạt tính trình bày bảng 1, hợp chất có hoạt tính cao đặc biệt dòng tế bào ung thư biểu mơ KB với giá trị IC50 = 0,88 µg/ml Bảng Kết thử hoạt tính độc tế bào chất TT Tên mẫu Tên dòng tế bào (IC50 µg/ml) LU-1 HTB HepG2 KB MCF7 1,61 2,07 0,88 1,23 7,5 2,78 2,78 2,67 2,35 2,5 2,05 2,03 7,97 8,77 7,04 6,05 1,91 2,50 2,16 1,88 5,09 8,81 7,21 6.5 Ellipticine 0,31-0,62 0,31-0,62 0,31-0,62 0,31-0,62 Lời cảm ơn Cơng trình thực với hỗ trợ kinh phí quỹ Nafosted, Bộ Khoa học Công nghệ, mã số đề tài 104.01.76.09 TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi - Từ điển thực vật thông dụng, Tập 2, Nhà xuất KH&KT, 2003, tr 13021304 89 Đoàn T M Hương, P V Cường, N V Hùng, T Q Hùng, D Bonnet-Delpon, Châu Văn Minh Ze Tian, Chen S., Zhang Y., Huang M., Shi L., Huang F., Fong C., Yang M., Xiao P The cytotoxicity of naturally occurring styryl lactone, Phytomedicine 13 (2006) 181 Christophe W - Goniothalamus species: A source of drugs for the treatment of cancers and bacterial infection, Evid Based Complement Alternat Med (3) (2007) 299 Amparo Blazquez M., Bermejo A., Carmen Zafra-Polo M and Cortes D - Styryl-lactones from Goniothalamus species – A Review, Phytochemical Analysis 10 (1999) 161 Masayoshi T., Kazuo K., Hiromasa N., and Toshio H - Stereocontrolled Syntheses of Novel Styryl Lactones, (+)-Goniodiol, (+)-Goniotriol, (+)-8-Acetylgoniotriol, (+)Goniofufurone, (+)-9-Deoxygoniopypyrone, (+)-Gonipypyrone, and (+)-Altholactone from Common Intermediates and Cytotoxicity of Their congeners, Tetrahedron 55 (1999) 2493 Tonny K M S and Vicint W F T - Facile and Enantiospecific Syntheses of Goniotriol Analogues, J Org Chem 64 (1999) 2140 Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Đoàn Thị Mai Hương, Phạm Văn Cường, Nguyễn Văn Hùng Nghiên cứu quy trình tổng hợp howiinol A, Tạp chí Khoa học Cơng nghê 46 (6) (2008) 83 Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Đoàn Thị Mai Hương, Phạm Văn Cường, Nguyễn Văn Hùng, Bá Thị Châm - Nghiên cứu tổng hợp hoạt tính độc tế bào Goniotriol, dimer-goniotriol, howiinol A số tiền chất chúng, Tạp chí Khoa học công nghệ 48 (3) (2010) 43 Scudiero D A., Shoemaker R H., Kenneth D P., Monks A., Tierney S., Nofziger T H., Currens M J., Seniff D., Boyd M R – Evaluation of a Soluble Tetrazolium/Formazan Assay for Cell Growth and Drug Sensitivity in Culture Using Human and Other Tumor Cell Lines, Cancer Research 48 (17) (1988) 4827 ABSTRACT STUDY ON SYNTHESIS AND CYTOTOXIC ACTIVITY OF ANALOGUE STYRYL-LACTONE Doan Thi Mai Huong1,*, Pham Van Cuong1, Nguyen Van Hung1, Trieu Quy Hung1, Daniele Bonnet-Delpon2, Chau Van Minh1 Institute of Marine Biochemistry, Vietnam Academy os Science and Technology University Paris XI – France * Email: doanhuong7@yahoo.com The styryl-lactones belong to a group of secondary metabolites commonly isolated from the family Annonaceae Among them, howiinol A, goniotriol, goniodiol and goniothalamin were demonstrated to have significant antitumour activity against several human tumor cell lines Recently, we have announced the synthesis and cytotoxic evaluation of howiinol A and some derivatives In this paper, we report about our continuing attempts to synthesize analogue styryl-lactone One of them, specially, compound has high activity against KB cancer cell lines with IC50 = 0.88 µg/ml The structure of all compounds were confirmed by spectral methods, including COSY, HSQC, HMBC, NOESY, MS, 19F NMR Keywords: styryl-lactone, Goniothalamus, howiinol A 90 ... log sử dụng để thử độc tính 86 N/c quy trình tổng hợp khảo sát hoạt tính gây độc tế bào số analogue styryl-lactone Phép thử sinh học xác định độ độc tế bào 200 µl dung dịch tế bào sau thu hoạch... 1136; Phổ ESI-MS: negative m/z 743: [2M-H]-; Phổ 1H-NMR (CDCl3, 84 N/c quy trình tổng hợp khảo sát hoạt tính gây độc tế bào số analogue styryl-lactone 500 MHz), δ (ppm): 4,25 (1H, br d, J = 3,5 Hz,... double doublet với số tương tác 2JH-F = 45,0 Hz 3JH-H = 9,0 Hz, 88 N/c quy trình tổng hợp khảo sát hoạt tính gây độc tế bào số analogue styryl-lactone tín hiệu đặc trưng proton olefinic thuộc vòng