Nghiên cứu thực vật học, phân lập các diterpenlacton từ dược liệu xuyên tâm liên góp phần xây dựng chuyên luận dược liệu xuyên tâm liên cho Dược điển Việt Nam, chuẩn hoá dược liệu và các chế phẩm. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA XUYÊN TÂM TÂM LIÊN (Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees) Nguyễn Ngọc Chương∗, Nguyễn Ngọc Vinh∗∗,Võ Thị Bạch Huệ∗∗∗ TÓM TẮT Mục tiêu: Nghiên cứu thực vật học, phân lập diterpenlacton từ dược liệu Xuyên tâm liên góp phần xây dựng chuyên luận dược liệu xuyên tâm liên cho Dược điển Việt Nam, chuẩn hố dược liệu chế phẩm Đối tương phương pháp nghiên cứu: Dược liệu Xuyên tâm liên Trung tâm nghiên cứu dược liệu miền trung cung cấp Mơ tả đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm vi học qua kính hiển vi, xác định nhóm họat chất hóa học phản ứng hóa học đặc trưng Chiết xuất phân lập diterpenlacton dựa vào ñộ phân cực khác dung mơi Đánh giá độ tinh khiết chất chiết xuất phản ứng hóa học, sắc ký lớp mỏng, phổ UV, phổ IR, HPLC khối phổ Kết quả: Đã xác định đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm vi học hóa học Xun tâm liên Phân lập ñược Andrograrpholid, dehydroandrographolid chúng ñã ñược ñánh giá mức ñộ tinh khiết Kết luận: Kết nghiên cứu góp phần xây dựng chuyên luận dược liệu Xuyên tâm liên cho Dược ñiển Việt Nam Các chất phân lập ñược cần thiết ñể chuẩn hóa dược liệu chế phẩm có chứa Xuyên tâm liên Từ khóa: Andrographolid, dehydroandrographolid, Diterpenlacton, Xuyên tâm liên, thực vật học, chiết xuất, phân lập ABSTRACT STUDIES ON MICROSCOPIC CHARACTERISTICS AND CHEMICAL COMPONENTS OF Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees Nguyen Ngoc Chuong, Nguyen Ngoc Vinh, Vo Thi Bach Hue Objective: The phytology research on Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees and isolation diterpenlactons from this traditional medicinal plant to contribute a special issue of medicinal plant for Vietnamese Pharmacopoeia and to standardize this plant and preparations Materials and methods: The plants were provided by The Medicinal plant research Center of Midle of Viet Nam Botanical characteristics were described by observation Microscopic characteristics determined by microscopy method Identify the chemical components by mean of chemical reaction Extraction and isolation diterpenlactons base on polarization of the solvents The purity of isolated substances were evaluated on the basic of chemical reaction, thin layer chromatography, UV spectral, IR spectral, HPLC and MS Results: Botany characteristics, Microscopic characteristics, chemical components were determined Androgarpholid and dehydroandrographolid were isolated and evaluated the purity Conclusion: The results can contribute a special issue of Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees for Vietnamese Pharmacopoeia The isolated substances are necessary for standardizing of this plant and preparations Key words: Andrographolid, dehydroandrographolid, Diterpenlacton, Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees, phytology, extraction, isolation ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Xuyên tâm liên có tên khoa học Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees, có thời gian sử dụng phổ biến, nhiều người quan tâm ñược xem vị thuốc khơng thể thiếu với tủ thuốc gia đình, trạm y tế bệnh viện nước ta, thần dược cho bệnh kèm theo sốt, bệnh gan mắt [7],[10],[11] Nhiều năm qua Việt Nam, Xuyên tâm liên bị lãng qn, nhà khoa học nhiều hãng dược phẩm nước ngồi chứng minh giá trị dược liệu nhiều kết nghiên cứu có nhiều ứng dụng thực tế lâm sàng, cho thấy có tác dụng kháng viêm, thải ñộc, nâng cao sức ñề kháng, kháng vi khuẩn virus [3],[4],[6],[8] Hiện nay, nước ta có nhiều nơi phát triển vùng trơng Xun tâm liên, tạo điều kiện khơi phục lại sản xuất sử dụng dược liệu quý Mặt khác Dược ñiển Việt nam chưa có chuyên luận dược liệu Vì việc xác định đặc điểm vi học thành phần hóa học xuyên tâm liên cần thiết giúp cho việc tiêu chuẩn hóa nguồn nguyên liệu chế phẩm có chứa Xuyên tâm liên ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu ∗ Khoa Y học Cổ Truyền- Đại học Y Dược Tp HCM Viện kiểm nghiệm thuốc Tp HCM ∗∗∗ Khoa Dược –Đại học Y Dược Tp HCM Địa liên hệ: ThS Nguyễn Ngọc Chương ĐT: 0913640750 ∗∗ Email: ngngchuong@yahoo.fr 157 Cây Xuyên tâm liên Trung tâm nghiên cứu sản xuất dược liệu miền trung cung cấp Chuẩn làm việc andrographolid dehydroandrographolid Viện công nghệ hóa học cung cấp, xác định cấu trúc Dung mơi, hóa chất, thuốc thử Chloroform, methanol (Trung Quốc, Merck), acetonitril (Merck), H3PO4, nước cất lần acid 3,5-dinitrobenzoic, kali hydroxid, acid sulfuric, vanillin, acid acetic băng, than hoạt tính Thuốc thử Vanillin sulfuric, Thuốc thử Kedde Máy móc – dụng cụ Bản mỏng silicagel F 254, bể nước ñun cách thủy, bể siêu âm Ultrasonic Branson 3510, cân phân tích Metler Toledo AB-204, máy quay Buchi, kính hiển vi quang học Olympus, tủ sấy Shellab 1330 FX, cân phân tích Mettler Toledo AB265-S, loại dụng cụ thủy tinh xác, lò nung Heraeus D6450, máy đo ñiểm chảy Stuart smp3, máy ño phổ hồng ngoại FTIR NICOLET MAGNA 760, máy HPLC LC-20AD (SHIMADZU), đầu dò PDA SPD-M20AD, máy sắc ký lỏng cao áp ghép khối phổ AGILENT 1100 LC-MSD PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Khảo sát thực vật học: đặc điểm hình thái, vi phẫu, soi bột, hóa thực vật Bằng cảm quan mơ tả đặc ñiểm thực vật học dựa quan sát tươi Cắt ngang vi phẫu thân, nhuộm vi phẫu phương pháp nhuộm kép (dùng ñỏ carmin lục iod) quan sát kính hiển vi mơ tả Nhận xét cảm quan bột dược liệu quan sát kính hiển vi đặc điểm lơng che chở, mạch dẫn, sợi, tế bào mô cứng, hạt tinh bột, tinh thể dược liệu Xác ñịnh mẫu thực vật khảo sát hóa học dựa nguyên tắc chiết 50 g dược liệu ethanol thu ñược 50 ml dịch chiết, thực phản ứng hóa học với thuốc thử chuyên biệt nhằm xác ñịnh nhóm hoạt chất diterpenlacton, flavonoid Chiết xuất diterpen lacton tồn phần từ xuyên tâm liên Nguyên liệu phần mặt ñất Xuyên tâm liên ñược xay nhỏ, ngấm kiệt với dung môi ethanol Loại tạp than hoạt tính Cơ dịch chiết để thu cao lỏng dược liệu chứa diterpen lacton toàn phần Phân lập andrographolid, dehydroandrographolid Tiến hành tách andrographolid từ cao lỏng phương pháp kết tinh ethanol tái kết tinh nhiều lần MeOH Dehydroandrographolid có tỉ lệ thấp hơn, tách qua sắc ký cột cách thay ñổi ñộ phân cực dung mơi ly giải Sau chúng ñược tái kết tinh nhiều lần qua methanol Tiến hành khảo sát hệ dung môi chạy sắc ký sắc ký mỏng ñối với chất chuẩn chất cần khảo sát Trước tiên chọn hệ bắt ñầu chạy cột hệ đẩy tạp chất phía chất cần tách đến vị trí có Rf > 0,2 chất cần tách không di chuyển Tiếp theo hệ đẩy chất cần tách đến vị trí có Rf > 0,2 tạp chất phía chất cần tách khơng di chuyển Khảo sát chất chiết tách dùng làm chất chuẩn Khảo sát chất ñã chiết tách so với chất chuẩn andrographolid Dehydroandrographolid chuẩn theo tiêu sau: cảm quan, phản ứng hóa học, điểm nóng chảy, sắc ký lớp mỏng, phổ tử ngoại UV, phổ hồng ngoại IR, HPLC, phổ MS KẾT QUẢ Khảo sát thực vật học đặc điểm hình thái, vi phẫu, soi bột Xuyên tâm liên Thân: cỏ đứng, cao 0,5-1 m, phân nhánh nhiều Thân vng, nhẵn; thân già mấu thường phình to Lá: ñơn, nguyên, mọc ñối chéo chữ thập Phiến thuôn dài hình mũi mác có đáy hẹp hình xoan thon hẹp men dần xuống cuống, ñỉnh nhọn, dài 4-8 cm, rộng 1,5-2,5 cm, nhẵn Gân hình lơng chim, rõ mặt dưới, có 4-5 cặp gân phụ Cuống ngắn, khoảng 1-2 mm khơng có kèm Cụm hoa: chùm kép nách cành Nhánh mang hoa non cong lên ñỉnh Hoa: nhỏ, dài khoảng 1,2-1,3 cm, màu trắng, điểm đốm hồng tím, khơng đều, lưỡng tính, mẫu 5, cuống hoa dài khoảng 4-6 mm Lá bắc: dài khoảng mm, dạng dải hẹp, bắc dạng sợi màu xanh nhỏ bắc Lá ñài: 5, rời, ñều, dài khoảng mm, dạng tam giác hẹp màu xanh, có lơng thưa trắng Cánh hoa: hợp thành ống hình trụ dài mm, có lơng, phần loe chia thành môi 2/3 rõ, mơi có thùy cạn, màu trắng khơng có sọc tím; mơi xẻ thùy rộng có sọc hồng tím, đầu nhọn; tiền khai lợp Nhị: 2, đính họng tràng; nhị rời, dạng sợi màu trắng, bao phấn dính đáy, bao phấn hình hạt ñậu, màu tím, nứt dọc, hướng trong, hạt phấn rời, màu vàng nhạt, hình bầu dục có rãnh dọc Nhụy: vòi nhụy dạng sợi màu tím, khơng lơng, ñầu nhụy hình sợi Bầu dẹp dài khoảng 1,5 cm, nỗn vị trí trước sau tạo bầu trên, ơ, có nỗn, đính nỗn trung trụ, ñĩa mật to bao quanh ñáy bầu Quả: nang dẹp, buồng, hình bầu dục hai đầu nhọn, dài 15-16 mm, rộng 3-3,5 mm, có lơng mịn Nhận xét: kết mô tả thực vật phù hợp với tài liệu cơng bố 158 Vi phẫu Thân: Mặt cắt ngang vi phẫu có hình vng, góc lồi Tế bào biểu bì đều, số tế bào phình to mang bào thạch xù xì, khơng cuống Lơng che chở đa bào từ 3-5 tế bào lơng tiết đầu đa bào, chân ngắn Mơ dày góc nhiều góc, cạnh vi phẫu, đoạn khơng có mơ dày thường gặp lỗ khí Mơ mềm vỏ đạo, 3-8 lớp tế bào hình tròn, vách mỏng Nội bì đai Caspary, trụ bì gồm từ 2-3 lớp tế bào nhỏ nội bì, hóa mơ cứng rải rác Hệ thống dẫn tạo thành vòng liên tục, libe ngồi, gỗ Libe bị ép dẹp vào sát trụ bì Gỗ tập trung nhiều góc cạnh, cạnh lại thấy gỗ Mơ mềm tủy khuyết, tế bào lớn, vách cellulose hóa gỗ Mơ mềm tủy vỏ rải rác có tinh thể calci oxalat hình khối Vi phẫu Gân lá: Biểu bì lồi thành 2-3 thùy rõ, biểu bì lồi thành thùy nhọn hướng hai phía, đáy phẳng Tế bào biểu bì kích thước lớn, hình chữ nhật đa giác, mang lơng che chở đa bào lơng tiết đa bào chân ngắn, cutin mỏng Dưới biểu bì có từ 2-8 lớp mơ dày góc Mơ mềm gồm tế bào gần tròn, kích thước khơng ñều, vách mỏng Cung libe gỗ gần liên tục, gỗ libe Vi phẫu Thịt lá: Biểu bì tương tự gân giữa, mơ mềm giậu có lớp tế bào ngắn, tế bào biểu bì có 23 tế bào mơ giậu Mơ mềm có chứa khuyết to Đặc điểm bột dược liệu: Bột thân màu lục xám, không mùi, vị đắng Thành phần gồm: mảnh biểu bì mang lỗ khí, bào thạch khơng cuống có bề mặt sần sùi u lồi; mảnh mô mềm; mảnh mạch xoắn, mạch mạng, mạch vạch Khảo sát hóa học nhóm hoạt chất Bảng Kết khảo sát hóa học nhóm hoạt chất Hợp chất Thuốc thử Kết phản ứng hóa học Diterpenlacton TT Kedde +++ Flavonoid Mg/HCl đđ +++ Quy trình chiết chiết xuất phân lập Từ kg Xuyên tâm liên phơi khô, loại bỏ rễ thu 1,6 kg dược liệu, sau xay nhỏ thành bột Làm ẩm bột cho vào bình ngấm kiệt dung tích lít, ngâm 24 với lít Ethanol Tiến hành rút dịch chiết với tốc độ 10 ml/phút, bổ sung dung mơi đến thu lít dịch chiết ethanol màu xanh đậm (tỉ lệ dược liệu: dung môi) Loại tạp chất 250 g than hoạt, lọc qua phễu Buchner ñể loại than Cơ thu hồi lít dịch chiết máy quay, thu khoảng 500 ml dung dịch Để kết tinh lạnh, lọc qua phễu Buchner thu ñược khoảng 200 g hỗn hợp chất dịch lọc Hòa tan hỗn hợp chất Methanol nóng vừa ñủ, loại tạp than hoạt, kết tinh lạnh lọc qua phễu Buchner thu ñược khỏang 450 mg chất A1 dịch lọc Gom dịch lọc 50 g [1],[2],[3], [9] Mảnh biểu bì Lông tiết Bào thạch 159 Mảnh mạch xoắn Mảnh mạch mạng Mảnh mơ mềm Hình Đặc điểm bột dược liệu xun tâm liên Biểu bì Biểu bì Mơ dày Mô mềm giậu Mô mềm vỏ Gỗ Libe Mô mềm khuyết Lỗ khí Biểu bì Biểu bì Mơ dày Mơ mềm vỏ Libe Tồn vi phẫu thân Libe Gỗ Gỗ Lơng che chở đa bào Nội bì đai Caspary Sợi trụ bì Hình Vi phẫu thân Xuyên tâm liên 160 (1) (2) Sơ đồ Quy trình chiết xuất phân lập andrographolid (1) dehydroandrographolid (2) Chất A1 tiếp tục rửa kết tinh tái kết tinh MeOH ñể thu tinh thể hình phiến màu trắng, đạt độ tinh khiết cao Để phân lập dehydroandrographolid, chọn quy trình sử dụng sắc ký cột cổ ñiển Nghiền mịn 50 g cao D1, áp dụng phương pháp nhồi nhồi cột khô Lượng silicagel gấp khoảng 50 lần lượng mẫu Khảo sát dung môi cho sắc ký cột: Do dehydroandrographolid chất phân cực nên triển khai mỏng silica gel F 254 với hệ dung môi có độ phân cực tăng dần vết dehydroandrographolid có khuynh hướng di chuyển xa chất khác Vì ñể phân lập dehydroandrographolid cần phải sử dụng hỗn hợp dung mơi có độ phân cực tăng dần từ CHCl3 ñến CHCl3 – MeOH (99:2) CHCl3:MeOH (99:1) KHẢO SÁT ĐỘ TINH CHIẾT TÁCH Hình SKLM dịch chiết thu ñược từ SK cột KHIẾT CỦA CHẤT ĐÃ 161 Cảm quan A có tinh thể hình phiến, khơng màu, khơng mùi, vị đắng, tan MeOH, EtOH, tan CHCl3 CH2Cl2, tan nước D có tinh thể hình kim, màu trắng, khơng mùi, vị ñắng, tan MeOH, EtOH, CHCl3 CH2Cl2, tan nước Nhận xét: Tính chất A, D, phù hợp với tài liệu [5] Phản ứng hóa học Phản ứng tạo màu với thuốc thử Kedde, cho màu hồng tím đặc trưng vòng lacton cạnh Cho vào ống nghiệm khoảng mg tinh thể, thêm ml MeOH vào hòa tan, nhỏ thêm 250 µl thuốc thử Kedde A 250 µl thuốc thử Kedde B, lắc Nhận xét: A, D có phản ứng vòng lacton cạnh Sắc ký lớp mỏng - Thuốc thử, dụng cụ Bản mỏng Silicagel 60 F 254 Dung môi khai triển: chloroform – ethyl acetate -methanol (4:3:0,4) Đèn UV 254 nm dung dịch VS - Tiến hành Mẫu thử: cân khoảng 1mg tinh thể A 1mg tinh thể D hòa tan 10ml MeOH, dùng dung dịch ñể chấm sắc ký Mẫu chuẩn: Cân khoảng 1mg chất chuẩn andrographolid 1mg Dehydroandrographolid hòa tan 10ml MeOH Phát hiện: soi UV 254 nm, phun thuốc thử VS Sau phun, sấy mỏng 1050C vài phút ñể màu Kết quả: quan sát mơ tả sắc ký đồ, dung dịch mẫu thử phải cho vết có màu sắc vị trí Rf tương ứng với vết dung dịch đối chiếu Hình Sắc ký lớp mỏng chất A D so với chuẩn AD, DH Ghi chú: A D chất ñã chiết tách từ Xuyên tâm liên CA, DC chuẩn andrographolid Dehydroandrographolid Sắc ký lỏng hiệu cao Cân xác khoảng 10 mg tinh thể andrographolid, hòa tan bình định mức 10 ml với MeOH, thêm MeOH ñến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 µm, pha lỗng thành nồng độ thích hợp tiêm vào hệ thống HPLC với ñiều kiện Cân xác khỏang mg Dehydroandrographolid, hòa tan bình định mức 10 ml với MeOH, thêm MeOH đến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 µm, pha lỗng thành nồng độ thích hợp tiêm vào hệ thống HPLC với ñiều kiện 162 Phát bước sóng hấp thu cực đại andrographolid 225 nm dehydroandrographolid 250 nm Kết quả: Sắc ký ñồ chất A có pic có tR = 5,853 phút chiếm hàm lượng 100% so với tổng diện tích pic sắc ký ñồ Đỉnh hấp thu UV bước sóng 225 nm, độ tinh khiết pic đạt 100% Sắc ký đồ chất D có pic có tR = 16,787 phút chiếm hàm lượng 100% so với tổng diện tích pic sắc ký đồ Đỉnh hấp thu UV bước sóng 250 nm, độ tinh khiết pic đạt 99,91% Hình Sắc ký đồ hỗn hợp A D Hình Sắc ký đồ chất A D nhiều bước sóng Hình Sắc ký đồ khơng gian chiều hỗn hợp A D Thực thử nghiệm song song ñiều kiện với chất chuẩn ñối chiếu cho thấy thông số thời gian lưu so sánh HPLC khơng thấy có khác biệt chất A, chất D ñã chiết tách so với chuẩn làm việc andrographolid, dehydroandrographolid Trên phổ 3D chất A chất D thể ñộ tinh khiết pic 100% Điểm chảy Điểm nóng chảy chất A D phù hợp với tài liệu, chứng tỏ A D chất tinh khiết 163 Bảng Kết ño ñiểm nóng chảy A, DA Andrographolid [3],[8],[9] Điểm nóng 228 226-230 chảy (0C) D Dehydroandrographolid [3],[8],[9] Điểm nóng 204 203-204 chảy (0C) Phổ IR Phồ IR chất A D có đỉnh hấp thu C=O (1727.5 1738), C=C (1674 1637) phù hợp với tài liệu công bố andrographolid, dehydroandrographolid Phổ UV Không có khác biệt phổ UV mẫu thử, mẫu chuẩn mẫu thử thêm chuẩn A andrographolid A +andrographolid Hình Phổ UV chất A andrographolid chuẩn Chất D dehydroandrographolid D+dehydroandrographolid Hỉnh Phổ UV chất D dehydroandrographolid chuẩn MS chất chiết tách Điều kiện triển khai HPLC-MS: Pha ñộng: ACN-CH3COONH4 (40 : 60) Pha tĩnh: Cột Gemini NX – 18, kích thước cột: 250 x 4.6 cm, kích thước hạt µm với tiền cột RP - 18 Tốc độ dòng: 0,7 ml/phút Điện thế: 4500 volt Chế ñộ scan: 320 – 360 Kết quả: A có m/z = [M+H]+ = 351,3; D có m/z = [M+H]+ = 333,3 phù hợp với phân tử khối andrographolid dehydroandrographolid 164 KẾT LUẬN Đã khảo sát hình thái thực vật, đặc điểm vi học, đặc điểm bột dược liệu Xun tâm liên, góp phần hữu ích cho việc xây dựng chun luận dược liệu Xuyên tâm liên cho Dược ñiển Việt Nam Chiết xuất phân lập ñược chất ñối chiếu tinh khiết Andrographolid Dehydroandrographolid dùng để chuẩn hóa dược liệu chế phẩm có Xuyên tâm liên TÀI LIỆU THAM KHẢO Akowuah G.A., Zhari I., Norhayati I., Mariam A (2006), "HPLC and HPTLC densitometric determination of andrographolides and antioxidant potential of Andrographis paniculata", Journal of Food Composition and Analysis, 19, pp.118-126 Akowuah G.A , Zhari I., Norhayati I., Mariam A (2006) , “HPLC and HPTLC densitometric determination of andrographolides and antioxidant potential of Andrographis paniculata”, Journal of Food Composition and Analysis, 19, pp.118–126 Alpana Srivastava, Himanshu Misra, Ram K Verma, Madan M Gupta (2004), "Chemical Fingerprinting of Andrographis paniculata using HPLC, HPTLC and Densitometry", Phytochem Anal., 15, pp.280-285 Chaman Patarapanich, Suwana Laungcholatan, Nuntakan Mahaverawat, Chaiyo Chaichantipayuth and Sunibhond Pummangura (2007), "HPLC determination of active diterpene lactones from Andrographis paniculata Nees planted in various season and regions in Thailand", Thia J Pharm Sci., 31, pp.91-99 Koteswara Rao Y., Vimalamma G., Venkata Rao, Yew-Min Tzeng C., (2004), “Flavonoids and andrographolides from Andrographis paniculata”, Phytochemistry, pp 65, 2317–2321 Prajapati/Purohit/Sharma/Kumar, (2003), “Handbook of Medicinal plants”, 45, pp 123 Pharmacopoeia of Republic of China (2005), pp.121-122 Siddartha K Mishar, Neelam S Sangwan and Rajender S Sangwan.(2007), Pharmacognosy review Andragraphid paniculata, 1, pp 20-26 Trần Cơng Luận,Nguyễn Trọng Bằng (2008), “Nghiên cứu quy trình ñịnh lượng diterpenlacton Xuyên tâm liên”, Khóa luận tốt nghiệp Dược sỹ ñại học Tp HCM 10 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc ñộng vật làm thuốc Việt Nam, 3, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr.1138-1143 11 Võ Văn Chi (2007), Sách tra cứu tên cỏ Việt nam, NXB Giáo dục, tr.81-83 165 ... sát hình thái thực vật, đặc điểm vi học, đặc điểm bột dược liệu Xuyên tâm liên, góp phần hữu ích cho vi c xây dựng chuyên luận dược liệu Xuyên tâm liên cho Dược ñiển Vi t Nam Chiết xuất phân... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Khảo sát thực vật học: đặc điểm hình thái, vi phẫu, soi bột, hóa thực vật Bằng cảm quan mơ tả đặc điểm thực vật học dựa quan sát tươi Cắt ngang vi phẫu thân, nhuộm vi phẫu...Cây Xuyên tâm liên Trung tâm nghiên cứu sản xuất dược liệu miền trung cung cấp Chuẩn làm vi c andrographolid dehydroandrographolid Vi n cơng nghệ hóa học cung cấp, xác định cấu trúc Dung mơi, hóa