Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá được tác dụng dự phòng và điều trị viêm khớp của viên nang kiện khớp tiêu thống (KKTT) collagen trên mô hình viêm khớp thực nghiệm. Đối tượng và phương pháp: sử dụng mô hình gây viêm khớp bằng tá chất freund trên chuột cống trắng.
Tạp chí y - dợc học quân số 9-2016 TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM KHỚP THỰC NGHIỆM CỦA VIÊN NANG KIỆN KHỚP TIÊU THỐNG COLLAGEN Vũ Mạnh Hà*; Nguyễn Hoàng Ngân*; Đào Thị Vui**; Lê Văn Đơng* TĨM TẮT Mục tiêu: đánh giá tác dụng dự phòng điều trị viêm khớp viên nang kiện khớp tiêu thống (KKTT) collagen mơ hình viêm khớp thực nghiệm Đối tượng phương pháp: sử dụng mơ hình gây viêm khớp tá chất freund chuột cống trắng Trên mơ hình dự phòng viêm khớp, chuột uống KKTT collagen (275 mg/kg) ngày trước tiêm CFA Trên mơ hình điều trị viêm khớp, sau tiêm CFA, chuột cho uống KKTT collagen (550 mg/kg), nguyên liệu collagen (150 mg/kg), nguyên liệu cao khô KKTT (400 mg/kg), thuốc chống viêm giảm đau diclofenac sodium (12,5 mg/kg) Xác định khả chống viêm hạn chế tổn thương khớp cách đo đường kính khớp cổ chân chuột trước sau ngày sau gây viêm đánh giá tổn thương mô bệnh học khớp viêm Kết quả: chế phẩm KKTT collagen làm giảm đáng kể đường kính khớp cổ chân chuột gây viêm khớp thực nghiệm từ tuần thứ hai hai mơ hình dự phòng điều trị, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm chứng bệnh (p < 0,01) Sự kết hợp cao khô KKTT collagen thể tác dụng vượt trội so với sử dụng nguyên liệu riêng rẽ Kết luận: viên nang KKTT collagen có tác dụng chống viêm khớp mơ hình động vật thực nghiệm tương đương với thuốc tham chiếu diclofenac tốt việc sử dụng riêng lẻ hai nguyên liệu cao khô KKTT collagen * Từ khóa: Collagen; Kiện khớp tiêu thống; Chống viêm; Viêm khớp thực nghiệm Anti-Inflammatory Activity of Kien Khop Tieu Thong Collagen Capsule in Experiment Arthritis Summary Objectives: To investigate the anti-inflammatory effects of Kien khop tieu thong collagen capsule in experimental arthritis Subjects and method: Complete Freund's adjuvant (CFA) induced-arthritis in rat model was used In prophylaxis experiment, kien khop tieu thong collagen (275 mg/kg) was daily administered by oral gavages seven days before CFA injection In treatment experiment, after CFA injection, rats were daily administered by oral gavages with Kien khop tieu thong collagen (550 mg/kg) or collagen (150 mg/kg) or Kien khop tieu thong (400 mg/kg) or diclofenac sodium (12.5 mg/kg) The anti-inflammation effects and join protection were assessed by monitoring the diameter of the knee joint before and each seven days post arthritis induction and histological assessment of the affected joins Results: Kien khop tieu thong collagen significantly reduced knee diameter in the CFA-induced arthritic rats from second week of both prophylaxis and treatment experiments, compared with CFA-induced arthritic control group (p < 0.01) * Học viện Quân y ** Trường Đại học Dược Hà Nội Người phản hồi (Corresponding): Lê Văn Đông (levandong@vmmu.edu.vn) Ngày nhận bài: 07/09/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 17/11/2016 Ngày báo đăng: 28/11/2016 12 T¹p chÝ y - dợc học quân số 9-2016 The final Kien khop tieu thong collagen preparation exhibited activity superior to either dried extract or collagen used separately Conclusion: Kien khop tieu thong collagen capsule has anti-inflammatory arthritis effects experimentally The activities of Kien khop tieu thong collagen are equivalent to those of diclofenac and superior to dried extract or collagen used separately * Key words: Collagen; Kien khop tieu thong; CFA-induced arthritis; Anti-inflammation effects ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm khớp bệnh lý phổ biến, ảnh hưởng lớn đến chức sinh hoạt lao động người bệnh Các thuốc nguồn gốc hóa dược điều trị viêm khớp thường phải sử dụng lâu dài gây nhiều tác dụng không mong muốn cho người bệnh Trên giới nói chung Việt Nam nói riêng, thuốc cổ truyền thuốc có nguồn gốc tự nhiên điều trị viêm khớp có đóng góp khơng nhỏ việc điều trị cho bệnh nhân có xu hướng phát triển Những năm qua, Học viện Quân y nghiên cứu sản xuất chế phẩm cao lỏng KKTT có tác dụng hỗ trợ điều trị viêm khớp hiệu tốt, nhiều bệnh nhân tín nhiệm Nhằm mục đích nâng cao hiệu điều trị thuận tiện cho sử dụng, chế phẩm bào chế thành dạng cao khô bổ sung thêm thành phần collagen bào chế thành dạng viên nang KKTT collagen Nghiên cứu thực nhằm: Đánh giá tác dụng dự phòng điều trị viêm khớp viên nang KKTT collagen mơ hình gây viêm khớp thực nghiệm ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nguyên liệu đối tượng - Chế phẩm nghiên cứu: + Viên nang KKTT collagen đạt tiêu chuẩn sở Trung tâm Nghiên cứu Ứng dụng sản xuất thuốc, Học viện Quân y cung cấp + Cao khô KKTT điều chế phương pháp phun sấy đạt tiêu chuẩn sở, Trung tâm Nghiên cứu Ứng dụng sản xuất thuốc, Học viện Quân y cung cấp + Bột collgen phân lập từ da cá tra Công ty Vĩnh Hoàn (Đồng Tháp) cung cấp + Thuốc tham chiếu diclofenac sodium, dạng bột (Hãng Sigma, Hoa Kỳ) - Động vật thí nghiệm: chuột cống trắng chủng Wistar, giống đực, tuần tuổi, cân nặng 140 ± 20 g, đạt tiêu thí nghiệm Ban Cung cấp Động vật thí nghiệm, Học viện Quân y cung cấp Phương pháp nghiên cứu * Đánh giá tác dụng dự phòng viêm khớp chế phẩm KKTT collagen: Sử dụng mơ hình gây viêm khớp thực nghiệm chuột cống tá chất freund hoàn chỉnh (Completed Freund Adjuvant CFA) [2, 6] Chuột cống trắng, trọng lượng 140 ± 20 g, chia thành lô, lô 10 - Lô chứng sinh học: cho chuột uống nước muối sinh lý, không gây viêm tá chất - Lô chứng bệnh: cho chuột uống nước muối sinh lý, gây viêm tá chất freund vào chân sau bên trái chuột vào ngày thứ sau bắt đầu thí nghiệm 13 Tạp chí y - dợc học quân số 9-2016 - Lô KKTT collagen: cho chuột uống chế phẩm KKTT collagen với liều 275 mg/kg cân nặng, gây viêm tá chất freund vào chân sau bên trái chuột vào ngày thứ sau thí nghiệm - Lơ chứng bệnh: gây viêm tá chất, cho chuột uống nước muối sinh lý Tiến hành đo đường kính khớp cổ chân sau trái chuột trước gây viêm tá chất ngày, 14 ngày sau gây viêm Sau đó, lấy chân chuột làm tiêu giải phẫu bệnh lý để đánh giá mức độ viêm khớp tổn thương sụn khớp chuột - Lô KKTT collagen: gây viêm tá chất, cho chuột uống dịch thuốc KKTT collagen liều 550 mg/kg cân nặng * Đánh giá tác dụng điều trị viêm khớp chế phẩm KKTT collagen: Sử dụng mơ hình gây viêm khớp CFA [3, 4, 5] Chuột cống trắng trọng lượng 140 ± 20 g, chia thành lô, lô 10 - Lô chứng sinh học: không gây viêm tá chất, cho chuột uống nước muối sinh lý - Lô đối chiếu: gây viêm tá chất, cho chuột uống diclofenac sodium liều 15 mg/kg cân nặng - Lô KKTT: gây viêm tá chất, cho chuột uống dịch cao khô KKTT liều 400 mg/kg cân nặng - Lô collagen: gây viêm tá chất, cho chuột uống dung dịch collagen liều 150 mg/kg cân nặng Tiến hành đo đường kính khớp cổ chân sau trái chuột trước gây viêm tá chất ngày, 14 ngày, 21 ngày, 28 ngày sau bắt đầu thí nghiệm Sau đó, lấy chân chuột làm tiêu giải phẫu bệnh lý để đánh giá mức độ viêm khớp tổn thương sụn khớp chuột KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Tác dụng dự phòng viêm khớp viên nang KKTT collagen * Đường kính khớp cổ chân chuột dự phòng viêm khớp: Sau gây viêm CFA, chân sau bên trái chuột lô chứng bệnh lô nghiên cứu xuất hiện tượng sưng viêm sau ngày đạt cực đại sau khoảng tuần Đo đường kính khớp cổ chân chuột thước kẹp Bảng 1: Đường kính khớp cổ chân chuột nghiên cứu tác dụng dự phòng viêm khớp Đường kính khớp cổ chân tiêm tá chất gây viêm (mm, Lô chuột Chứng sinh học (1) Chứng bệnh (2) 14 X ± SD) p Trước gây viêm (a) Sau ngày (b) Sau 14 ngày (c) 0,406 ± 0,044 0,405 ± 0,040 0,411 ± 0,042 pb-a > 0,05 pc-a > 0,05 pc-b > 0,05 0,527 ± 0,021 pb-a < 0,01 pc-a < 0,01 pc-b < 0,05 0,399 ± 0,013 0,503 ± 0,026 T¹p chÝ y - dợc học quân số 9-2016 pb-a < 0,01 KKTT collagen (3) 0,410 ± 0,043 0,526 ± 0,026 0,465 ± 0,046 pc-a < 0,01 pc-b < 0,05 p p3-1 > 0,05 p3-1 < 0,01 p3-1 < 0,01 p2-1 > 0,05 p2-1 < 0,01 p2-1 < 0,01 p3-2 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-2 < 0,01 - Tại thời điểm ban đầu trước gây viêm, đường kính chân chuột lơ khơng có khác biệt (p > 0,05) - Tại thời điểm ngày sau gây viêm, độ phù chân chuột lô chứng bệnh lô nghiên cứu tăng so với lô chứng sinh học (p < 0,01) Tuy nhiên, độ phù chân chuột lô chứng bệnh lô nghiên cứu khác biệt ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Tại thời điểm 14 ngày sau gây viêm, đường kính chân chuột lô dùng thuốc - giảm rõ rệt so với lơ chứng bệnh, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Kết cho thấy: chế phẩm KKTT collagen có tác dụng rõ rệt sử dụng dự phòng trước q trình phơi nhiễm với tác nhân gây viêm khớp Mặc dù tác dụng chế phẩm xuất chậm (ở tuần thứ sau tiêm tá chất gây viêm), chế phẩm thể tác dụng làm giảm rõ rệt tình trạng phù viêm chân chuột so với lô chứng gây bệnh khơng dùng thuốc * Hình ảnh giải phẫu bệnh khớp chân chuột thử nghiệm dự phòng viêm khớp: (a) (b) (c) Hình 1: Hình ảnh tiêu giải phẫu bệnh khớp chân chuột thử nghiệm dự phòng (a) lơ chứng sinh học; (b) lô chứng bệnh; (c) lô nghiên cứu Ở lô chứng sinh học lô sử dụng thuốc nghiên cứu, tế bào sụn có số lượng ít, khơng thấy xơ hóa, khơng có tế bào viêm Ở lô chứng bệnh, tế bào sụn thưa thớt, sợi collagen gãy đứt nhiều chỗ, cấu trúc lộn xộn, xơ hóa nhẹ, chất sụn dần thành phần chondromuco protein, xuất vài lympho bào, mạch mỏu xung huyt 15 Tạp chí y - dợc học qu©n sù sè 9-2016 Tác dụng điều trị viêm khớp chế phẩm KKTT collagen * Đường kính khớp cổ chân chuột điều trị viêm khớp: Sau gây viêm CFA, chân sau bên trái chuột lơ chứng bệnh lơ thí nghiệm xuất hiện tượng sưng viêm sau ngày, rõ sau khoảng tuần Bảng 2: Đường kính khớp cổ chân chuột nghiên cứu tác dụng điều trị viêm khớp Lơ chuột Đường kính khớp cổ chân tiêm tá chất gây viêm (mm, X ± SD) Trước gây viêm (a) Sau ngày (b) Sau 14 ngày (c) Sau 21 ngày (d) Sau 28 ngày (e) p Chứng sinh 0,406 ± 0,052 0,408 ± 0,048 0,414 ± 0,048 0,423 ± 0,039 0,411 ± 0,040 học (1) > 0,05 Chứng bệnh 0,399 ± 0,016 0,502 ± 0,032 0,529 ± 0,025 0,491 ± 0,026 0,503 ± 0,017 lý (2) p-a < 0,01 Tham chiếu 0,405 ± 0,009 0,528 ± 0,027 0,479 ± 0,020 0,429 ± 0,022 0,425 ± 0,034 (3) pb,c-a < 0,01 pd,e-a > 0,05 Collagen (4) 0,394 ± 0,019 0,524 ± 0,031 0,486 ± 0,056 0,466 ± 0,041 0,444 ± 0,029 KKTT (5) 0,394 ± 0,022 0,487 ± 0,048 0,505 ± 0,068 0,468 ± 0,046 0,440 ± 0,031 KKTT 0,397 ± 0,047 0,495 ± 0,027 0,471 ± 0,045 0,414 ± 0,025 0,413 ± 0,029 collagen (6) p > 0,05 p1 < 0,01 p3,4,5,6-2 > 0,05 p1 < 0,01 p4,5-2 > 0,05 p3,6-2 < 0,05 p3-6 > 0,05 p6-1 > 0,05 p4,5-1 < 0,05 p3,6-2 < 0,01 p3-6 > 0,05 p6-1 > 0,05 p4,5-1< 0,05 p3,4,5,6-2 < 0,01 p3-6 > 0,05 pb,c-a < 0,01 pd,e-a < 0,05 pb,c-a < 0,01 pd,e-a > 0,05 - - Tại thời điểm ban đầu trước gây viêm, đường kính chân chuột lơ khơng có khác biệt (p > 0,05) Tại thời điểm sau gây viêm, độ phù chân chuột lô chứng bệnh lý lô dùng thuốc tăng có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng sinh học (p < 0,01) Tá chất gây viêm gây sưng viêm rõ chuột thí nghiệm tiêm gây viêm chân chuột lô dùng thuốc tham chiếu lơ dùng KKTT collagen giảm có ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý đánh giá thời điểm 14 ngày (p < 0,05), 21 ngày 28 ngày (p < 0,01) Đường kính chân chuột lô dùng collagen lô dùng KKTT thấy giảm có ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bệnh lý đánh giá thời điểm 28 ngày sau gây viêm (p < 0,01) - So với lô chứng bệnh lý, thời điểm ngày sau gây viêm, đường kính chân chuột lơ dùng thuốc giảm chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Đường kính - So sánh lơ dùng thuốc tham chiếu với lơ dùng KKTT collagen, đường kính chân chuột lô thời điểm đo tương đương (p > 0,05) 16 T¹p chÝ y - dợc học quân số 9-2016 Kt qu trờn cho thấy chế phẩm KKTT collagen có tác dụng tốt sử dụng điều trị viêm khớp Tác dụng điều trị viêm khớp KKTT collagen mức liều 550 mg/kg cân nặng tương đương với thuốc tham chiếu diclofenac sodium liều 15 mg/kg cân nặng, tác dụng nhanh mạnh so với dùng collagen dùng KKTT riêng lẻ (d) * Hình ảnh giải phẫu bệnh khớp chân chuột thử nghiệm điều trị viêm khớp: (e) (a) (f) (b) (c) Hình 2: Hình ảnh tiêu giải phẫu bệnh khớp chân chuột thử nghiệm điều trị (a) chứng sinh học; (b) chứng bệnh; (c) đối chiếu; (d) collagen; (e) KKTT; (f) KKTT collagen Từ hình ảnh thu kính hiển vi, thấy: lơ chứng bệnh, sợi collagen gãy đứt nhiều chỗ, cấu trúc lộn xộn, xơ hóa nhẹ, chất sụn dần thành phần chondromuco protein, xuất vài lympho bào, mạch máu xung huyết, thể mức độ viêm nặng rõ ràng Ở lơ chứng sinh 17 T¹p chí y - dợc học quân số 9-2016 hc, lô đối chứng lô điều trị, tượng viêm tiến triển rõ rệt, tế bào sụn có số lượng ít, khơng thấy xơ hóa, khơng có tế bào viêm Ở lô điều trị collagen cao khô KKTT, tương mạch máu xung huyết Ở lơ đối chứng, có tượng xơ hóa nhẹ BÀN LUẬN Tác dụng dự phòng chống viêm viên nang collagen KKTT đánh giá mơ hình viêm khớp thực nghiệm gây tá chất freund hoàn chỉnh Tá chất freund hồn chỉnh gây tình trạng viêm mạn tính khớp tiêm Đây mơ hình sử dụng rộng rãi để đánh giá tình trạng viêm khớp Trên hai mơ hình dự phòng điều trị, viên nang collagen KKTT có tác dụng làm giảm tình trạng phù vị trí khớp cổ chân chuột viêm rõ rệt so với chuột khơng sử dụng viên nang Trên hình ảnh giải phẫu bệnh khớp cổ chân, tình trạng xơ hóa xung huyết nhóm sử dụng viên nang giảm đáng kể so với nhóm chứng bệnh Các số độ phù viêm hình ảnh giải phẫu nhóm điều trị cao khơ KKTT nhóm sử dụng collagen riêng lẻ cho thấy việc sử dụng riêng lẻ thành phần có tác dụng khơng mạnh việc phối hợp chúng với Điều cho thấy, việc kết hợp thành phần collagen cao khơ KKTT vào viên nang KKTT collagen hồn tồn hợp lý KẾT LUẬN Viên nang KKTT collagen có tác dụng dự phòng điều trị viêm khớp mơ 18 hình động vật thực nghiệm Tác dụng tương đương với thuốc tham chiếu diclofenac tốt việc sử dụng cao khô KKTT bột collagen riêng lẻ TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế Quyết định số 371/BYT-QĐ việc ban hành “Quy chế đánh giá tính an tồn hiệu lực thuốc cổ truyền” 1996 Lewis A, Levy A Anti-inflammatory activities of Cassia alata leaf extract in complete freund's adjuvant arthritis in rats West Indian Med J 2011, 60 (6), pp.615-621 Ajay D Kshirsagar, Prashant V, Panchal, Uday N Harle, Rabindra K Nanda.Antiinflammatory and antiarthritic activity of anthraquinone derivatives in Rodents International Journal of Inflammation 2014, Article ID 690596 G Mariappan, BP Sahaa, L Sutharsonb, Ankit Singhb, S Gargb, L Pandeya, Deepak Kumar Analgesic, anti-inflammatory, antipyretic and toxicological evaluation of some newer 3-methyl pyrazolone derivatives Saudi Pharmaceutical Journal 2011, 19 (2), pp.115-122 Lijuan Chen, Bin Bao, Nanping Wang, Jing Xie, Wenhui Wu Oral administration of shark type II Collagen suppresses complete freund’s adjuvant-induced rheumatoid arthritis in rats Pharmaceuticals (Basel) 2012, (4), pp.339-352 T Bonezzi, O Sasso, S Pontis, N Realini, E Romeo, S Ponzano, A Nuzzi, A Fiasella, F Bertozzi, D Piomelli An important role for N-acylethanolamine acid amidase in the complete freund’s adjuvant rat model of arthritis Journal of Pharmacology and Experimental.Therapeutics 2016, March, 356 (3), pp.656-663 ... thí nghiệm Sau đó, lấy chân chuột làm tiêu giải phẫu bệnh lý để đánh giá mức độ viêm khớp tổn thương sụn khớp chuột KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Tác dụng dự phòng viêm khớp viên nang KKTT collagen. .. KKTT collagen có tác dụng rõ rệt sử dụng dự phòng trước trình phơi nhiễm với tác nhân gây viêm khớp Mặc dù tác dụng chế phẩm xuất chậm (ở tuần thứ sau tiêm tá chất gây viêm) , chế phẩm thể tác dụng. .. sử dụng, chế phẩm bào chế thành dạng cao khô bổ sung thêm thành phần collagen bào chế thành dạng viên nang KKTT collagen Nghiên cứu thực nhằm: Đánh giá tác dụng dự phòng điều trị viêm khớp viên