Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của dịch chiết tỏi đen Lý Sơn trên động vật thực nghiệm. Qua đó xác định tính an toàn của dịch chiết tỏi đen Lý Sơn.
Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Nghiên cứu tính an tồn dịch chiết tỏi đen lý sơn thực nghiệm Vũ Bình Dương*; Nguyễn Văn Long* Tóm tắt Mục tiêu: đánh giá độc tính cấp (ĐTC) độc tính bán trường diễn (ĐTBTD) dịch chiết tỏi đen Lý Sơn động vật thực nghiệm Đối tượng phương pháp: thử nghiệm đánh giá ĐTC dịch chiết tỏi đen Lý Sơn chuột nhắt dùng đường uống theo phương pháp Abrham WB, Turner A Đánh giá ĐTBTD thỏ Thỏ uống dịch chiết tỏi đen Lý Sơn hàng ngày liều g/kg/24 g/kg/24 42 ngày Kết quả: chưa tìm thấy LD50, với liều uống tối đa mà chuột uống (10 g/kg trọng lượng thể (TLCT)) Trên thỏ, dịch chiết tỏi đen Lý Sơn mức liều g g/kg/24 uống hàng ngày 42 ngày không ảnh hưởng đến phát triển TLCT, số điện tim, huyết học, sinh hóa mơ bệnh học gan, lách, thận thỏ Kết luận: dịch chiết tỏi đen Lý Sơn có tính an tồn cao động vật thực nghiệm * Từ khóa: Tỏi đen Lý Sơn; Độc tính Study on Safety of Lyson Black Garlic Extract in Experiment Summary Objectives: Study acute toxicity and sub-chronic toxicity of Lyson black garlic extract on experiment animals Subjects and methods: Use Abraham WB’s method to study the acute toxicity of Lyson black garlic extract administered orally on mice; study the sub-chronic toxicity on rabbits with Lyson black garlic extract administered orally and daily with the dose of 2.0 gr/kg/24 hours and 4.0 gr/kg/24 hours within 42 days Results: No observation of LD50 of Lyson black garlic extract on mice, did not result in experimented mice’s death with the maximum dose which they can take orally (10 gr/kg body weight) On rabbits, Lyson black garlic extract administered daily with the dose of 2.0 gr/kg/24 hours and 4.0 gr/kg/24 hours within 42 days did not affect body’s weight gain and some other parameters such as ECG, hematology, biochemical and histology of liver, kidney, spleen Conclusion: Lyson black garlic extract had a high safety level on experimented animals * Key words: Lyson black garlic; Toxicity Đặt vấn đề Tỏi đen sản phẩm lên men từ tỏi tươi điều kiện nhiệt độ độ ẩm thích hợp thời gian dài Sản phẩm thu có màu đen, vị trái cây, bảo quản lâu ngày để sử dụng [5] Nhiều nghiên cứu cho thấy, tỏi đen có nhiều tác dụng vượt trội so với tỏi tươi, như: chống oxy hóa, kích thích miễn dịch, ức chế tế bào ung thư [3, 4, 6] Vì vậy, sản phẩm tỏi đen sử dụng phổ biến Ngành Công nghệ thực phẩm Dược phẩm Nhật Bản, Hàn Quốc * Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Vũ Bình Dương (vbduong2978@gmail.com) Ngày nhận bài: 25/12/2014; Ngày phản biện đánh giá báo: 09/01/2015 Ngày báo đăng: 23/01/2015 68 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Học viện Quân y nghiên cứu thành công lên men tỏi đen từ nguồn tỏi Lý Sơn (Quảng Ngãi) Đề tài cấp Nhà nước mã số KC.10TN01/11-15 Sản phẩm thu có màu đen, vị ngọt, khơng mùi hăng tỏi tươi Để có sở khoa học sử dụng sản phẩm từ tỏi đen Lý Sơn phục vụ chăm sóc sức khỏe cộng đồng, chúng tơi đánh giá tính an tồn dịch chiết tỏi đen Lý Sơn với mục tiêu: Đánh giá ĐTC ĐTBTD dịch chiết tỏi đen Lý Sơn động vật thực nghiệm đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu - Chế phẩm nghiên cứu: tỏi đen Lý Sơn (lô sản xuất 03 - 2012), Học viện Quân y bào chế, đạt tiêu chuẩn sở (TCCS) Tỏi đen điều chế thành dịch chiết dạng cao đặc 3:1 - Động vật thí nghiệm: chuột nhắt trắng khoẻ mạnh, trọng lượng 20 - 22 g thỏ khỏe mạnh, trọng lượng 1,8 - 2,2 kg, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm Động vật ni dưỡng điều kiện phòng thí nghiệm ngày trước tiến hành nghiên cứu - Dụng cụ, thiết bị: máy xét nghiệm sinh hoá tự động; máy đếm hồng, bạch cầu tự động; dụng cụ mổ động vật cỡ nhỏ; cân xác 10-2 mg, bơm kim tiêm Phương pháp nghiên cứu * Nghiên cứu độc tính: - Theo phương pháp Abrham WB, Turner A theo quy định Tổ chức Y tế Thế giới Bộ Y tế Việt Nam nghiên cứu độc tính thuốc [1, 2] - Độc tính cấp: chia chuột nhắt trắng thành lơ, lô 12 con, cho uống dịch chiết tỏi đen (3:1) với mức liều tăng dần, đến liều gây chết 100% số chuột Sau dùng thuốc, chuột nuôi dưỡng theo dõi 72 Xác định số chuột chết theo nhóm thí nghiệm, tính tốn theo phương pháp cải tiến Livschitz P.Z - Độc tính bán trường diễn: chia thỏ thành lơ, lô 12 con: + Lô 1: uống nước muối sinh lý (2 ml/kg/ 24 giờ) + Lô 2: uống dịch chiết tỏi đen (2 g/kg/ 24 giờ) + Lô 3: uống dịch chiết tỏi đen (4 g/kg/ 24 giờ) * Các tiêu đánh giá: Hoạt động, ăn uống, TLCT, điện tim, huyết học, sinh hóa (thời điểm bắt đầu nghiên cứu, sau tuần nghiên cứu), mô bệnh học gan, lách, thận (khi kết thúc thử nghiệm) * Xử lý số liệu: theo chương trình Startview Kết nghiên cứu bàn luận Độc tính cấp dịch chiết tỏi đen Lý Sơn chuột thí nghiệm Với mức liều tăng dần (3, 4, 5, 6, 7, 8, 10 g/kg TLCT chuột), chuột chết 72 (kể mức liều tối đa đưa vào dày chuột 10 g/kg/24 giờ), cho thấy dịch chiết tỏi đen có độ an toàn cao động vật thực nghiệm 69 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Độc tính bán trường diễn dịch chiết tỏi đen Lý Sơn thỏ thí nghiệm Bảng 1: Ảnh hưởng dịch chiết tỏi đen Lý Sơn TLCT thỏ (n = 12) Tlct (kg, X ± SD) Thời điểm xét nghiệm Lô chứng (1) Lô dịch chiết liều (2) Lô dịch chiết liều (3) Trước thí nghiệm (a) 1,99 ± 0,12 1,98 ± 0,13 1,96 ± 0,10 Sau tuần (b) 2,06 ± 0,12 2,09 ± 0,12 2,10 ± 0,12 p3-2 > 0,05 Sau tuần (c) 2,21 ± 0,11 2,22 ± 0,11 2,22 ± 0,12 p3-1 > 0,05 p p p2-1 > 0,05 < 0,01 So sánh TLCT thỏ lô dùng dịch chiết tỏi đen với lô chứng thời điểm thấy thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) So sánh thời điểm sau so với trước thấy: TLCT thỏ lô tăng có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) Bảng 2: Ảnh hưởng dịch chiết tỏi đen Lý Sơn điện tim thỏ đạo trình DII (n = 12) Thời điểm xét nghiệm Lô chứng (1) Lô cao lỏng Liều (2) Lô cao lỏng Liều (3) p Tần số tim (CK/phút, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 238,17 ± 33,53 262,61 ± 42,64 256,39 ± 31,25 Sau tuần (b) 255,51 ± 34,81 245,20 ± 35,91 243,12 ± 30,37 Sau tuần (c) 241,33 ± 32,31 257,62 ± 41,81 255,39 ± 31,96 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 - pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 Biên độ (mV, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 0,376 ± 0,047 0,388 ± 0,062 0.379 ± 0,021 Sau tuần (b) 0,390 ± 0,069 0,379 ± 0,051 0,381 ± 0,084 Sau tuần (c) 0,374 ± 0,044 0,391 ± 0,073 0,382 ± 0,068 p Sóng bất thường Khơng p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 - pb-a > 0,05; pc-b > 0,05; pc-a > 0,05 Không p2-1 > 0,05 Không - So sánh lơ thời điểm thí nghiệm lô thời điểm thấy: tần số biên độ điện tim thỏ thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Khơng có sóng bất thường điện tim lơ thỏ thời điểm nghiên cứu 70 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Bảng 3: Ảnh hưởng dịch chiết tỏi đen Lý Sơn số tiêu huyết học thỏ (n = 12) Lô chứng (1) Thời điểm xét nghiệm Lô cao lỏng Liều (2) Lô cao lỏng Liều (3) p 12 Số lượng hồng cầu thỏ (x 10 /l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 5,47 ± 0,89 5,59 ± 0,75 5,89 ± 0,68 Sau tuần (b) 5,93 ± 1,19 5,81 ± 1,13 6,29 ± 1,35 Sau tuần (c) 5,72 ± 0,22 5,49 ± 0,58 6,11 ± 103 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 Số lượng HST thỏ (x g/l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 116,21 ± 20,75 129,21 ± 21,06 126,28 ± 18,62 Sau tuần (b) 131,57 ± 14,21 123,75 ± 15,89 129,63 ± 13,98 Sau tuần (c) 126,12 ± 10,31 135,94 ± 12,75 133,29 ± 17,12 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 Số lượng bạch cầu thỏ (x 10 /l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 5,33 ± 1,21 5,41 ± 1,24 5,28 ± 0,91 Sau tuần (b) 4,94 ± 1,18 5,52 ± 0,95 5,14 ± 1,03 Sau tuần (c) 4,87 ± 0,95 5,05 ± 1,06 5,01 ± 0,87 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 Số lượng tiểu cầu thỏ (x 10 /l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 288,97 ± 58,61 292,13 ± 45,14 296,91 ± 51,48 Sau tuần (b) 298,32 ± 67,26 308,54 ± 58,41 311,12 ± 62,52 Sau tuần (c) 303,84 ± 49,91 312,68 ± 60,73 301,57 ± 67,37 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 So sánh lơ thời điểm thí nghiệm lô thời điểm thấy: số huyết học thỏ (số lượng hồng cầu, HST, bạch cầu, tiểu cầu) thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 71 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Bảng 4: Ảnh hưởng dịch chiết tỏi đen Lý Sơn chức gan, thận thỏ (n = 12) Thời điểm xét nghiệm Lô chứng (1) Lô cao lỏng Liều (2) Lô cao lỏng liều (3) p Hoạt độ enzym AST thỏ (U/l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 59,03 ± 14,35 61,42 ± 11,18 58,59 ± 15,81 Sau tuần (b) 58,75 ± 17,62 59,48 ± 19,83 61,35 ± 23,46 Sau tuần (c) 59,47 ± 18,66 60,34 ± 20,09 61,59 ± 19,89 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 Hoạt độ enzym ALT thỏ (U/l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 99,61 ± 12,13 104,01 ± 15,41 102,54 ± 17,68 Sau tuần (b) 102,11 ± 15,37 107,95 ± 13,05 107,85 ± 18,24 Sau tuần (c) 102,69 ± 16,24 103,76 ± 17,68 105,27 ± 16,87 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 Nồng độ creatinin máu thỏ (μmol/l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 63,01 ± 9,03 62,36 ± 9,74 64,41 ± 11,70 Sau tuần (b) 59,37 ± 8,94 56,51 ± 8,91 54,37 ± 10,85 Sau tuần (c) 57,48 ± 8,73 57,32 ± 9,08 52,88 ± 9,93 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 Nồng độ ure máu thỏ (mmol/l, X ± SD) Trước thí nghiệm (a) 4,12 ± 0,91 4,08 ± 1,01 3,97 ± 0,89 Sau tuần (b) 4,09 ± 0,89 4,02 ± 1,10 3,96 ± 0,85 Sau tuần (c) 4,12 ± 1,01 3,97 ± 0,94 3,99 ± 0,91 p p2-1 > 0,05 p3-2 > 0,05 p3-1 > 0,05 pc-a > 0,05; pb-a > 0,05; pc-b > 0,05 So sánh lơ thời điểm thí nghiệm lô thời điểm thấy: hoạt độ enzym AST, ALT, hàm lượng creatinin máu, ure máu thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) 72 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Kết mô bệnh học tạng thỏ Quan sát đại thể mắt thường kính lúp có độ phóng đại 100 lần thấy: màu sắc, hình thái gan, lách thận lơ dùng dịch chiết tỏi đen bình thường khơng khác so với nhóm chứng a b c d e f g h i Hình 1: Hình ảnh mô bệnh học gan, thận lách thỏ nhóm nghiên cứu (Mơ bệnh học gan nhóm chứng (a), nhóm dùng liều g/kg (b), nhóm dùng liều g/kg (c) Mơ bệnh học thận nhóm chứng (d), nhóm dùng liều g/kg (e), nhóm dùng liều g/kg (f) Mơ bệnh học lách nhóm chứng (g), nhóm dùng liều g/kg (h), nhóm dùng liều g/kg (i)) Kết nghiên cứu mô bệnh học gan, lách, thận thỏ cho thấy: dịch chiết tỏi đen dùng đường uống với liều g/kg TLCT/24 liều g/kg TLCT/24 liên tục 42 ngày không gây tổn thương gan, thận, lách thỏ 73 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Kết luận - Chưa xác định LD50 dịch chiết tỏi đen Lý Sơn theo đường uống Liều tối đa chuột uống 10 g/kg TLCT không gây chết động vật thực nghiệm - Bằng đường uống, dịch chiết tỏi đen với liều 2,0 g 4,0 g/kg TLCT/24 42 ngày không ảnh hưởng đến điện tim phát triển TLCT, không độc với quan tạo máu, không ảnh hưởng đến chức mô bệnh học gan, thận, lách thỏ thực nghiệm - Kết nghiên cứu cho thấy, dịch chiết tỏi đen Lý Sơn có tính an tồn cao động vật thực nghiệm Chu QJ, Lee DTW, Tsao SW, Wang XH, Wong YC S-allylcysteine, a water-soluble garlic derivative, suppresses the growth of a human androgenindependent prostate cancer xenograft, CWR22R, under in vivo conditions BJU International 2007, 99, pp.925-932 Herrera-Mundo MN, Silva-Adaya D, Maldonado PD, Galvan-Arzate S, AndresMartinez L, Perez-De La Cruz V et al S-allylcysteine prevents the rat from 3-nitropropionic acid-induced hyperactivity, early markers of oxidative stress and mitochondrial dysfunction Neuroscience Research 2006, 56, pp.39-44 Montano A, Casado FJ, de Castro A, Sánchez AH, Rejano L Vitamin content and amino acid composition of pickled garlic Tài liệu tham khảo Bộ Y tế Nước Cộng hòa Xã hội chủ nghĩa Việt Nam Quy định nghiên cứu dược lý thuốc y học cổ truyền dân tộc 1996, QĐ 371/QĐ-YT Abrham WB Techniques of animal and clinical toxicology Med Pub Chicago 1978, pp.55-68 74 processed with and without fermentation Journal of Agricultural and Food Chemistry 2004, 52, pp.7324-7330 Shin JH, Choi DJ, Lee SJ, Cha JY, Kim JG, Sung NJ Changes of physicochemical components and antioxidant activity of garlic during its processing Journal of Life Science 2008, 18, pp.1123-1131 Tạp chí y - dc hc quõn s s 2-2015 Nghiên cứu định l-ợng BERBERIN CHLORID viên nén đại tràng 105 phương pháp 75 ... phẩm từ tỏi đen Lý Sơn phục vụ chăm sóc sức khỏe cộng đồng, chúng tơi đánh giá tính an tồn dịch chiết tỏi đen Lý Sơn với mục tiêu: Đánh giá ĐTC ĐTBTD dịch chiết tỏi đen Lý Sơn động vật thực nghiệm. .. đen có độ an tồn cao động vật thực nghiệm 69 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Độc tính bán trường diễn dịch chiết tỏi đen Lý Sơn thỏ thí nghiệm Bảng 1: Ảnh hưởng dịch chiết tỏi đen Lý Sơn TLCT... không độc với quan tạo máu, không ảnh hưởng đến chức mô bệnh học gan, thận, lách thỏ thực nghiệm - Kết nghiên cứu cho thấy, dịch chiết tỏi đen Lý Sơn có tính an tồn cao động vật thực nghiệm Chu QJ,