Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu của luận án nhằm xác định các đặc điểm bệnh lý chủ yếu ở lợn Mán và lợn Rừng mắc PED. Để làm căn cứ trong chẩn đoán lâm sàng và chẩn đoán phân biệt với các nguyên nhân gây tiêu chảy khác.
HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ THƠM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC TIÊU CHẢY THÀNH DỊCH DO VIRUS (PORCIN EPIDEMIC DIAREEHEA - PED) GÂY RA TRÊN LỢN MÁN VÀ LỢN RỪNG TẠI TỈNH HÀ GIANG Chuyên ngành: Bệnh lý học chữa bệnh vật ni Mã số: 9.64.01.02 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÀ NỘI, NĂM 2019 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS NGUYỄN HỮU NAM PGS.TS PHẠM HỒNG NGÂN Phản biện 1: GS.TS Nguyễn Thị Kim Lan Trƣờng Đại học Nông lâm, Đại học Thái Nguyên Phản biện 2: PGS.TS Chu Đức Thắng Học viện Nông Nghiệp Việt Nam Phản biện 3: PGS.TS Cù Hữu Phú Hội Thú y Luận án đƣợc bảo vệ trƣớc Hội đồng đánh giá luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi giờ, ngày tháng năm 2019 Có thể tìm hiểu luận án thƣ viện: - Thƣ viện Quốc gia Việt Nam - Trung tâm Thông tin - Thƣ viện Lƣơng Định Của Học viện Nơng nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Ngành chăn nuôi lợn Hà Giang ngày chiếm vị trí quan trọng sản xuất nơng nghiệp tỉnh nhanh chóng chuyển đổi thành sản xuất hàng hoá Cùng với trào lưu đó, Hà Giang có xu phát triển chăn nuôi lợn Mán lợn Rừng theo mơ hình trang trại bước đầu cho kết khả quan Ở Hà Giang, thông tin hiểu biết PED người quản lý người chăn ni hạn chế, chưa có cơng bố thức tình hình nhiễm PEDV tỉnh Trước thực trạng đó, nhằm hiểu rõ đặc điểm bệnh lý bệnh tiêu chảy thành dịch (PED) gây cho đàn lợn Mán, lợn Rừng tỉnh Hà Giang Đồng thời có thêm sở khoa học cho việc chủ động xây dựng biện pháp cơng t c phòng ngừa x m nh p virus ED lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang, c c tỉnh miền núi phía BắcViệt Nam Chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.2.1 Mục tiêu chung Mục tiêu lu n án nhằm x c định c c đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn Mán lợn Rừng mắc PED Để làm chẩn đo n l m sàng chẩn đo n ph n biệt với nguyên nhân gây tiêu chảy khác 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - X c định tỷ lệ lợn Mán, lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) trang trại ni lợn Mán lợn Rừng điển hình tỉnh Hà Giang; - X c định rõ biểu lâm sàng bệnh tích (đại thể vi thể) chủ yếu (PED); - X c định thay đổi số tiêu huyết học lợn mắc (PED) 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy mắc tiêu chảy thành dịch (PED) trang trại gia trại điển hình tỉnh Hà Giang 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu - Phòng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học - Phòng thí nghiệm Bộ mơn Bệnh lý Thú y (làm tiêu bệnh lý), Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Địa điểm theo dõi lấy mẫu: Tại trang trại gia trại nuôi lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang - Thời gian nghiên cứu: Thời gian nghiên cứu số liệu đề tài thu th p từ th ng 12/2014 đến tháng 8/2017 1.4 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI - X c định c c đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn Mán lợn Rừng mắc PED tỉnh Hà Giang; - hương ph p hóa mơ miễn dịch x c định diện virus porcine epidemic diarrhea mô lợn Rừng mắc PED; - Cung cấp thông tin tiêu huyết học lợn Rừng chăn nuôi trang trại 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Ý nghĩa khoa học đề tài Đ y nghiên cứu PED lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang Việt Nam Cùng với việc phát triển nuôi lợn Mán lợn Rừng nay, thiết phải có nhiều nghiên cứu dịch bệnh để có biện pháp phòng ngừa phát triển bền vững đối tượng nuôi Do v y, kết nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng cho nhà quản lý chăn nuôi, c c nhà thú y người nuôi việc sàng lọc nhân giống lợn Mán, lợn Rừng Bảo vệ đàn lợn Mán, lợn Rừng đề chiến lược phát triển phù hợp giúp người nuôi an tâm sản xuất phát triển kinh tế, đặc biệt tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam - Kết lu n án đặc điểm bệnh lý lợn Mán lợn Rừng mắc PED, c c thông tin có ý nghĩa quan trọng cơng tác chẩn đo n lâm sàng chẩn đo n ph n biệt bệnh tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng - Lu n án làm tài liệu tốt cho việc tham khảo giảng dạy nghiên cứu PED lợn Mán lợn Rừng c c trường, viện chuyên ngành 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài - ết nghiên cứu khẳng định lợn Mán lợn Rừng ni tỉnh Hà Giang mắc PED làm rõ đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn Mán lợn Rừng mắc PED Là tài liệu tham khảo hữu ích cho cán thú y, người chăn ni bước đầu chẩn đo n x c định bệnh để có biện pháp can thiệp kịp thời giảm thiểu thiệt hại kinh tế - ết nghiên cứu s dụng làm tiền đề để tiếp tục nghiên cứu virus PED, tiền đề cho việc nghiên cứu PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TÌNH HÌNH CHĂN NI LỢN Ở HÀ GIANG Ngành chăn nuôi lợn Hà Giang ngày chiếm vị trí quan trọng, sản xuất nơng nghiệp tỉnh nhanh chóng chuyển đổi thành sản xuất hàng hố Cùng với trào lưu đó, Hà Giang có xu phát triển chăn ni lợn Mán lợn Rừng theo mơ hình trang trại bước đầu cho kết khả quan 2.1.1 Giống lợn Mán (hay gọi lợn địa phƣơng, địa) Lợn Mán thuộc lớp động v t có vú (Mammalia), guốc chẵn (Articodactyla), họ Suidae, chủng Sus, loài Sus domesticus Lợn Mán giống lợn nuôi phổ biến làng đồng bào dân tộc Dao, Nùng, Tày, Mơng,… Hà Giang Số lượng ước tính khoảng 50.000 lợn trưởng thành nuôi rải rác làng vùng sâu, vùng xa Lợn Mán có hình dáng gần với lợn Rừng, tầm vóc nhỏ, mõm dài, nhọn chắc, thích hợp cho việc đào bới tìm kiếm thức ăn Da dày, mốc, lơng đen dài, có bờm dài dựng đứng, chân nhỏ, móng nhanh nhẹn, thích nghi với việc thả rơng, tự tìm kiếm thức ăn Tốc độ sinh trưởng ch m phụ thuộc vào nguồn thức ăn Lợn có màu lơng đen, hung, n u Trong phạm vi Dự n Biodiva đ nh gi đa dạng 1053 mẫu quần thể lợn tỉnh Hà Giang Nguyễn Thiện (2006), Nhà xuất Lao động - Xã hội 2.1.2 Giống lợn Rừng Lợn Rừng lồi v t ni phổ biến nhiều tỉnh nước, phẩm chất thịt thơm ngon, gần khơng có mỡ, cholesteron đặc biệt có da dày, giòn ng y Phong trào nuôi lợn Rừng ngày lan rộng gi thịt kh hấp dẫn (ln giữ giá 100.000 đ/kg) nhu cầu tiêu dùng ngày tăng mạnh Lợn Rừng (wild pig) vốn thủy tổ giống lợn Theo phân loại động v t lợn Rừng thuộc giới động v t (Amimalia), ngành dây sống (Chordata), ph n ngành có xương sống (Vertebarata), nhóm động v t có hàm (Gnathosomata), lớp có vú (Mamalia), phân lớp thú cao hay thú có (Eutheria), guốc chẵn (Artiodactyla), họ lợn (Sus), loài lợn Rừng (Sus Serofa) (Võ Văn Sự, 2009; Đào Lệ Hằng, 2008) 2.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ TIÊU CHẢY Tiêu chảy biểu lâm sàng trình bệnh lý đặc thù đường tiêu hóa Tùy theo yếu tố xem nguyên nh n mà gọi với nhiều tên khác nhau: Bệnh lợn ỉa phân trắng, bệnh tiêu chảy sau cai sữa, chứng khó tiêu, chứng rối loạn tiêu hóa hay Colibacillosis, Salmonellosis,… tiêu chảy triệu chứng thường gặp nhiều bệnh ký sinh trùng, bệnh virus, bệnh vi khuẩn 2.2.1 Nghiên cứu tiêu chảy thành dịch lợn (PED) giới Bệnh tiêu chảy thành dịch hay gọi dịch tiêu chảy cấp lợn (Porcine Epidemic Diarrhea - PED) bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm loại virus thuộc giống Alphacoronavirus, họ Coronaviridae gây Dịch ED thường xảy lợn ngày tuổi với tỷ lệ ốm tỷ lệ chết lên đến 100% Dịch ED g y thiệt hại kinh tế nghiêm trọng ngành chăn nuôi lợn nhiều quốc gia giới (Lee, 2015) Dịch PED lần phát Anh vào năm 1971, sau c c ổ dịch liên tục phát xảy phổ biến quốc gia ch u Âu kh c Bỉ, Đức, Pháp, Hà Lan, Thụy Sỹ, ch u Á Trung Quốc, Hàn Quốc, Nh t Bản, Thái Lan (Chen et al., 2013) Ở Việt Nam, dịch PED lần phát vào năm 2008 từ đến dịch bệnh thường xuyên xảy gây ảnh hưởng nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi Hiện nay, PED ngày xuất phổ biến quốc gia ch u Á, đặc biệt PED ngày trở nên cấp tính nghiêm trọng (Song and ark, 2012) Ở Trung Quốc, trường hợp nhiễm EDV phát năm 1973, sau hai th p kỷ s dụng vaccine vô hoạt nhũ dầu, xuất trở lại EDV tương đối Tuy nhiên đến năm 2010, bệnh xuất trở lại bùng phát ngày trầm trọng tỉnh có phát triển ngành chăn ni lợn Từ th ng năm 2010 đến th ng 11 năm 2011, tỷ lệ lợn chết từ 90 tới 100% (tương ứng 50.000 con), chủ yếu lợn ngày tuổi (Chen et al., 2013) Ở Nh t, dịch PED xuất lần năm 1993, g y chết 14.000 con, tỉ lệ chết từ 30 tới 100% lợn con, dịch ED năm 1996 gây chết 39.509 Ở Hàn Quốc, dịch PED xuất năm 1992, sau đến năm 2007-2008, dịch liên tiếp xuất Quốc gia Ðông Nam Á Thái Lan, Philippines Việt Nam Trong thời gian cuối năm 2007 - 2008, Thái Lan, dịch phát tỉnh Nakornpathom trước lan rộng nước Dịch lan rộng g y thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi lợn Thái Lan Phân tích phát sinh lồi, thấy tất PEDV phân l p thời gian bùng phát dịch giống chủng Trung Quốc JS - 2004 - (Puranaveja et al., 2009) 2.2.2 Nghiên cứu tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Việt Nam Năm 2008, EDV phát số đàn lợn mắc tiêu chảy Việt Nam Trong năm 2008 - 2009, bệnh lan rộng nhanh chóng tỉnh miền Đông Nam Bộ gây ảnh hưởng lớn đến ngành chăn nuôi lợn nước ta Bệnh xảy nhanh, toàn đàn lợn gây chết gần 100% lợn theo mẹ Tỷ lệ t vong đàn lợn tỉnh dao động từ 65 - 91% Theo nh n định chuyên gia nguyên nhân tiêu chảy cấp bệnh tiêu chảy thành dịch lợn (PED) viêm dày ruột truyền nhiễm (TGE) g y Năm 2010, dịch tiếp tục xảy số trại, th m chí tái phát trại xảy dịch năm 2009 Theo thống kê phòng xét nghiệm nhanh cơng ty C.P Việt Nam th ng đầu năm 2010 nước có 31 trại bị nhiễm PED tỉnh có nhiều ca bệnh Đồng Nai với 15 ca bệnh Các trại bị nhiễm bệnh chủ yếu t p trung miền Nam (Đồng Nai, L m Đồng, Bà Rịa - Vũng Tàu, Bình hước, Củ Chi) Ở miền Bắc, theo báo cáo khơng thức cơng ty, trang trại Hải Dương, Th i Nguyên, Bắc Ninh, Bắc Giang, Hưng Yên, Th i Bình, Hà Nam, Nam Định, Hòa Bình,… dịch tiêu chảy EDV xảy nghiêm trọng từ đầu năm 2010 tình hình dịch bệnh tỉnh phía Bắc Việt Nam ngày trầm C c nghiên cứu trước Viện Thú y Quốc gia, Trung tâm chẩn đo n Thú y TW, hòng thí nghiệm trọng điểm CNSH Thú y - Học Viện Nông nghiệp Việt Nam x c định ca nhiễm PED lợn phía Bắc Việt Nam Ở Việt Nam, có nghiên cứu tiến hành tiêu chảy thành dịch lợn (PED) Theo Do Tien Duy et al (2011); Nguyễn Tất Toàn (2012), bệnh phát Việt Nam từ năm 2008 Sau đó, bệnh ngày lan rộng bùng phát nhiều khu vực Bệnh gây thiệt hại nặng nề cho trang trại tỉ lệ mắc toàn đàn cao (gần 100%) Theo thống kê khơng thức phòng xét nghiệm nhanh cơng ty CP Việt Nam năm th ng đầu năm 2010 nước có 31 trại bị nhiễm PED Các trại bị nhiễm bệnh chủ yếu t p trung tỉnh nam Đồng Nai, L m Đồng, Bình hước, Bà Rịa - Vũng Tàu Ở khu vực phía Bắc, nghiên cứu x c định bệnh tiêu chảy thành dịch lợn (Porcine epidemic diarrhea - viết tắt: PED) xảy 26 trại tỉnh, số trại cộng nhiễm virus TGE virus Rota Tại trại, ED thường bùng phát vào mùa lạnh (từ th ng 11 đến tháng 4), thời gian l y lan nhanh, thường xảy đàn lợn nái, tỷ lệ lợn biểu tiêu chảy cao (trung bình 76,8%) Lợn tất lứa tuổi bị tiêu chảy (có thể lên tới 100%), tỷ lệ chết cao lợn theo mẹ (68,6%) Có khác biệt lớn mức độ cảm nhiễm, tỷ lệ biểu tiêu chảy, tỷ lệ chết, thời gian tiêu chảy trại nhóm tuổi, giới tính Triệu chứng chủ yếu lợn mắc PED tiêu chảy, nôn m a, bỏ ăn, kèm theo c c rối loạn hô hấp, thần kinh, mức độ trầm trọng tăng dần theo tuổi Bệnh tích đại thể lợn thường gặp thành ruột non mỏng, căng phồng toàn đoạn (61,3 - 94%); dày sung huyết, xuất huyết (19,4 - 84%); hạch lympho màng treo ruột, gan sung huyết, ứ huyết; tĩnh mạch màng treo ruột sung huyết nặng, khó quan sát thấy mạch bạch huyết màng treo ruột Bệnh tích vi thể chủ yếu đường tiêu hóa: lông nhung đứt nát, ngắn lại; tế bào biểu mô hấp thu thối hóa khơng bào; biểu mơ phủ dày, ruột bong tróc; sung huyết, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm lớp đệm lớp hạ niêm mạc đường tiêu hóa (Nguyễn Văn Điệp cs., 2014) Kết xét nghiệm kỹ thu t RT- CR lợn có biểu triệu chứng lâm sàng, bệnh tích mắc PED (Nguyễn Văn Điệp cs., 2014) Mẫu bệnh phẩm lấy từ phân, ruột hạch ruột dùng để chẩn đo n ED kỹ thu t RT-PCR cho kết tốt Bệnh tiêu chảy virus ED g y có tính l y lan nhanh nhiên chưa có loại vacxin phòng bệnh nguy t i ph t, nguy biến chủng virus vấn đề đ ng lo ngại Trước tình hình đó, việc hiểu biết đặc điểm bệnh chẩn đo n nhanh cấp thiết phòng chống dịch bệnh, bảo vệ sức khỏe v t nuôi kinh tế cho người chăn nuôi PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 TRANG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU * Vật liệu Từ c c đàn lợn có triệu chứng tiêu chảy đặc trưng virus, mẫu bệnh phẩm lấy ph n, ruột, hạch ruột lợn nghi mắc tiêu chảy cấp ED, thu th p bảo quản c c ống chứa mẫu vô trùng C c mẫu bệnh phẩm sau dùng chẩn đo n ED test chẩn đo n nhanh phản ứng RT- CR với c c cặp mồi đặc hiệu để chẩn đo n bệnh ED Chỉ c c mẫu dương tính với EDV lựa chọn cho qu trình nghiên cứu Các mẫu máu 60 lợn chẩn đo n dương tính với virus PED kít PED-Ag test từ số trại lợn Hà Giang 60 lợn khỏe giống làm đối chứng Xác chết 26 lợn Rừng 27 lợn M n chẩn đo n dương tính với virus PED phương ph p RT-PCR Kháng thể kháng virus PED từ Viện Thú Y Nh t Bản, kháng kháng thể chứa enzyme bắt màu chất, số hóa chất khác s dụng HMMD, làm tiêu vi thể * Hóa chất Formol trung tính 10% Nước cất, cồn, xylen, parafin, thuốc nhuộm heamatoxylin, eosin Kit tách chiết QIAamp Viral RNA Minikit (Qiagen), Primers Hóa chất: Môi trường dùng để bảo quản mẫu bệnh phẩm: Formol 10% Hóa chất dùng để nhuộm tiêu bản: nước cất, cồn nồng độ, xylen, paraffin nấu với - Máy móc, thiết bị s dụng nghiên cứu: Tủ lạnh, tủ sấy, tủ ấm 37ºC, tủ ấm 56ºC, m y đúc Block, khuôn đúc, m y cắt mảnh Microtom, kính hiển vi quang học, máy li tâm - Dụng cụ: ipet (Eppendorf), đầu típ loại (Corning) ống ly tâm 15ml, 50ml (corning) đèn cồn, xi lanh, kim lấy m u, đũa thủy tinh, ống nghiệm - Dụng cụ mổ khám gia cầm gồm: kéo (kéo cắt da, cắt xương), kẹp vòng vớt, lam kính, la men, dao, pank, kẹp, cốc đựng hóa chất - Trang bị bảo hộ cho người mổ kh m: găng tay trang, áo blouse 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 3.2.1 Khảo sát tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang - X c định tỷ lệ mắc tiêu chảy lợn M n lợn Rừng tỉnh Hà Giang; - X c định tỷ lệ lợn chết mắc tiêu chảy lợn M n lợn Rừng tỉnh Hà Giang 3.2.2 Xác định tỷ lệ mắc PEDV lợn Mán lợn Rừng đàn lợn bị tiêu chảy tỉnh Hà Giang - X c định tỷ lệ lợn mắc ED kít chẩn đo n nhanh EDV -Ag test; - X c định tỷ lệ lợn mắc ED phản ứng RT – PCR 3.2.3 Xác định triệu chứng lâm sàng bệnh tích chủ yếu lợn Mán lợn Rừng mắc PED - X c định triệu chứng l m sàng chủ yếu lợn M n lợn Rừng mắc PED; - X c định bệnh tích chủ yếu lợn M n lợn Rừng mắc ED 3.2.4 Xác định biến đổi bệnh lý vi thể số quan lợn mắc PED áp dụng phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch để xác định có mặt virus mơ lợn bệnh - Nghiên cứu biến đổi bệnh lý vi thể dày, t tràng, không tràng, hồi tràng, kết tràng, hạch màng treo ruột, l ch, gan, th n, phổi, tim lợn mắc ED; - Áp dụng phương ph p hóa mơ miễn dịch để x c định có mặt virus c c mơ lợn bệnh 3.2.5 Xác định số tiêu huyết học lợn Mán lợn Rừng mắc PED - X c định c c số hồng cầu lợn M n lợn Rừng mắc ED; - X c định c c số bạch cầu lợn M n lợn Rừng mắc ED; - X c định c c số sinh hóa m u lợn M n lợn Rừng mắc ED 3.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.3.1 Phƣơng pháp điều tra dịch tễ học - Áp dụng c c phương ph p điều tra dịch tễ học thường quy: vấn trực tiếp, ph t phiếu điều tra, hồi cứu tài liệu lưu trữ, dịch tễ học mô tả; - Triệu chứng l m sàng lợn mắc tiêu chảy x c định phương ph p kh m l m sàng thường quy, theo dõi qua c c tiêu chí trạng th i ph n, thể trạng lợn 3.3.2 Phƣơng pháp chẩn đoán bệnh Kít PED-Ag test * Nguyên lý: Bộ kít dựa nguyên lý kỹ thu t sắc ký miễn dịch s dụng phương ph p Direct Sandwich Hai kh ng thể ( T) đơn dòng thiết bị kết hợp đặc thù với c c vùng định kh ng nguyên kh c kh ng nguyên cần chẩn đo n Sau cho bệnh phẩm thấm vào vị trí đệm cellulose thiết bị, c c kh ng nguyên virus ED di chuyển kết hợp với hợp chất thể keo màu vàng chứa kh ng thể đơn dòng kh ng virus ED, để tạo thành phức chất „ T- N‟ Sau đó, phức hợp kết hợp với kh ng thể đơn dòng kh ng virus ED kh c màng nitơ-cellulose thiết bị, để tạo thành phức chất kẹp hoàn chỉnh „ T-KN- T‟ (“Ab-Ag-Ab” direct sandwich) 3.3.3 Phƣơng pháp RT – PCR Sự có mặt virus ED lợn có biểu tiêu chảy, chưa tiêm vacxin phòng ED x c định kỹ thu t RT- CR RNA chiết t ch kit QIAamp Viral RNA Minikit (hãng Qiagen), cặp mồi đặc hiệu thiết kế để khuếch đại phần gen S, sản phẩm khuếch đại có độ dài 651bp (Park et al., 2008) 3.3.4 Phƣơng pháp mổ khám tiêu chuẩn S dụng phương ph p mổ khám theo tiêu chuẩn TCVN 8402: 2010 (Bộ khoa học & Công nghệ, 2010) để tiến hành nghiên cứu tổn thương đại thể lấy mẫu làm tiêu bệnh lý 3.3.5 Phƣơng pháp làm tiêu vi thể Chúng s dụng phương ph p làm tiêu vi thể tẩm đúc paraffin theo Robert (1969) Burn (1974), cắt dán mảnh Microtom Mỗi lợn bệnh tiến hành lấy mẫu quan hai miếng bệnh phẩm đúc thành block Mỗi block tiến hành cắt, nhuộm tiêu chọn bốn tiêu đẹp, sau tiến hành soi kính hiển vi để đọc kết bệnh tích vi thể 3.3.6 Phƣơng pháp nhuộm hố mơ miễn dịch hương ph p ho mơ miễn dịch s dụng phản ứng T- N đặc hiệu p dụng cho c c mảnh cắt chuyển đúc paraffin C c mảnh cắt sau kh paraffin phủ T lên bề mặt Nếu mô bệnh phẩm có N tương ứng với T, phức hợp N- T hình thành hức hợp nh n biết nhờ hệ thống khuếch đại tín hiệu bao gồm T bắt cầu (kháng KT) ho chất nhuộm màu DAB (3,3- Diaminobenzidin) 3.3.7 Phƣơng pháp xác định tiêu huyết học Các mẫu m u x c định số sinh lý máu m y đo huyết học 18 số - Cell Dyn-3700 hãng Abbott) X c định số số sinh hóa máu: Protein huyết tổng số (dùng khúc xạ kế Zena) Các tiểu phần protein huyết x c định theo kỹ thu t điện di phiến xelluloza axetat đọc kết Denssitomester junior-24 3.3.8 Phƣơng pháp xử lý số liệu Số liệu thô x lý tính to n Excel, số liệu tổng hợp x lý chương trình thống kê Minitab 16.0 hép th chi bình phương (χ2) s dụng để so s nh tỷ lệ dương tính gi trị < 0,05 coi có ý nghĩa PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 KHẢO SÁT TỶ LỆ MẮC, TỶ LỆ CHẾT DO TIÊU CHẢY TRÊN LỢN MÁN VÀ LỢN RỪNG NUÔI TẠI TỈNH HÀ GIANG 4.1.1 Kết điều tra tình hình ni Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang Để đ nh gi tình hình chăn ni mức độ mắc tiêu chảy đàn lợn Mán, lợn Rừng độ tuổi Chúng tiến hành phát phiếu điều tra trang trại chăn nuôi lợn huyện: Vị Xuyên, Bắc Quang, Hồng Su Phì thuộc tỉnh Hà Giang Nghiên cứu chia theo tuần tuổi từ 1-9 tuần tuổi khoảng thời gian từ năm 2014 – 2016 S dụng phương ph p điều tra cắt ngang, dựa tiêu chí đặc trưng tiêu chảy Chúng tơi ghi chép, tổng hợp x c định tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết theo đàn lợn theo số trại nghiên cứu Mỗi tuần tuổi, huyện 10 đàn (10 đàn lợn M n 10 đàn lợn Rừng) tổng hợp theo số tất c c đàn lợn nghiên cứu Lợn Mán; huyện Vị Xuyên là: 90 đàn với 766 con; Bắc Quang 90 với 746 con; Hồng Su Phì 90 với 707 con; tổng số là: 270 đàn với 2219 Lợn Rừng: huyện Vị Xuyên là: 90 đàn với 638 con; Bắc Quang: 90 đàn với 645 con; Hoàng Su hì: 90 đàn với 632 con; Tổng đàn là: 270 đàn; tổng số là: 1915 Kết điều tra trình bày bảng 4.1 < 0,05), sai khác tuần liên tiếp - - khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Như v y, kết nghiên cứu chúng tơi hồn tồn phù hợp với c c nghiên cứu công bố trước đ y Qua nghiên cứu cho thấy, tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết hội chứng tiêu chảy lợn M n lợn Rừng có xu hướng giảm dần qua c c tuần tuổi Ở thời kì này, lợn dần hoàn thiện đặc điểm chức c c quan thể đặc biệt m y tiêu hóa quan điều tiết th n nhiệt Vì v y lợn tuần thứ tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết thấp so với tuần tuổi thứ Đối với lợn tuần tuổi thứ 3: lợn bắt đầu biết ăn, hệ thần kinh hệ tiêu hóa ph t triển hơn, điều hòa th n nhiệt t c động c c yếu tố stress bất lợi từ mơi trường Vì v y, lợn mắc bệnh tuần tuổi đầu Chính v y, giai đoạn tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết thấp tuần tuổi thứ tuần tuổi thứ Tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy là; lợn M n 43,03%; 15,94% lợn Rừng 43,24%; 9,68% Sự sai kh c tỷ lệ mắc tiêu chảy lợn M n lợn Rừng tính địa bàn huyện nghiên cứu c c tuần tuổi liên tiếp - - - 4, - - có ý nghĩa thống kê ( < 0,05), sai kh c c c tuần liên tiếp - - khơng có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) Lợn từ tuần tuổi thứ – 9: giai đoạn tỷ lệ mắc giảm dần hệ miễn dịch thể hồn thiện nên v t có khả chống công virus, t c động xấu từ ngoại cảnh Ở độ tuổi mắc bệnh Tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết là: 9,33%; 0,44% lợn M n, 9,38%; 0,52% lợn Rừng Sự sai kh c tỷ lệ mắc tiêu chảy lợn M n lợn Rừng tính trung bình huyện nghiên cứu c c tuần tuổi liên tiếp - 2; - 4, - 6, - có ý nghĩa thống kê ( < 0,05), sai kh c c c tuần liên tiếp - 3, - - khơng có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) Sự sai kh c tỷ lệ chết mắc tiêu chảy lợn Rừng tính địa bàn huyện nghiên cứu c c tuần tuổi liên tiếp - - - - - 7, - có ý nghĩa thống kê ( < 0,05), sai kh c c c tuần liên tiếp - - khơng có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) ết nghiên cứu cho thấy, tỷ lệ chết lợn M n cao so với lợn Rừng Tuy nhiên, sai kh c tỷ lệ chết tiêu chảy lợn M n lợn Rừng tuần tuổi hay giai đoạn từ 1-9 tuần tuổi khơng có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) Sự chệnh lệch lợn Rừng có khả thích nghi với điều kiện thời tiết khí h u, mơi trường tốt so với lợn M n Chính yếu tố giúp cho thể hạn chế nhiều khả nhiễm mầm bệnh mơi trường bên ngồi, giúp cho lợn tăng sức đề kh ng thể chống đỡ bệnh t t nên tỷ lệ mắc tiêu chảy lợn M n cao hơn so với lợn Rừng Tuy nhiên, lợn Rừng đưa vào hóa ni nơng hộ sau lợn M n nên chúng mang t p tính hoang dã, điều dẫn đến việc theo dõi điều trị tiêu chảy cho lợn Rừng khó lợn M n dẫn đến tỷ lệ chết mắc tiêu chảy lợn Rừng cao so với lợn M n Ngoài ra, biến đổi tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết lợn M n lợn Rừng, mắc tiêu chảy c c địa 11 phương kh c c c độ tuổi lợn có xu hướng tỷ lệ thu n với biến đổi tỷ lệ mắc tiêu chảy Vì v y, để hạn chế t c hại tiêu chảy lợn giảm thiểu tỷ lệ mắc tiêu chảy v t nuôi việc p dụng nghiêm ngặt c c biện ph p phòng bệnh Nghiên cứu cho thấy, lợn lứa tuổi mắc bệnh, g y chết chủ yếu lợn tuần tuổi (Trương Văn Dung Nguyễn Viết Không, 2007) Qua nghiên cứu cho thấy, tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết lợn M n lợn Rừng có xu hướng giảm dần theo độ tuổi Như v y, kết nghiên cứu hoàn toàn phù hợp với c c nghiên cứu công bố trước đ y 4.2 XÁC ĐỊNH TỶ LỆ MẮC TIÊU CHẢY THÀNH DỊCH (PED) TRÊN LỢN MÁN VÀ LỢN RỪNG TẠI TỈNH HÀ GIANG 4.2.1 Kết xác định tỷ lệ mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng kít chẩn đốn nhanh (kít PED-AG test) tỉnh Hà Giang Từ kết nghiên cứu tỷ lệ mắc tiêu chảy lợn Rừng lợn M n tỉnh Hà Giang, lựa chọn c c đàn lợn theo mẹ có triệu chứng l m sàng đặc trưng ED để lấy mẫu dùng test th nhanh để chẩn đo n x c định tỷ lệ dương tính với test th , kết trình bày bảng 4.3 Bảng 4.3 Kết xác định tỷ lệ dƣơng tính với PEDV lợn Mán lợn Rừng kít chẩn đốn nhanh (Kít PED-Ag test) tỉnh Hà Giang 1- Nái nuôi Nái Tổng > tuẩn tuần (n khỏe hợp (n =10) (n =10) =10) (n =10) (n = 40) 16 Lợn Rừng Dương tính Vị n = 40 Tỷ lệ (%) 70 30 60 40f Xuyên 10 24 Lợn Mán Dương tính n = 80 n = 40 Tỷ lệ (%) 100 40 80 20 60d 17 Lợn Rừng Dương tính Bắc n = 40 Tỷ lệ (%) 80 20 70 42,5f Quang 20 Lợn Mán Dương tính n= 80 n = 40 Tỷ lệ (%) 90 30 80 50e 10 10 25 Hồng Lợn Rừng Dương tính n = 40 Tỷ lệ (%) 100 30 100 20 62,5d Su Phì 23 Lợn Mán Dương tính n = 80 n = 40 Tỷ lệ (%) 80 30 90 30 57,5d 25 23 58 Lợn Rừng Dương tính Tổng n = 40 Tỷ lệ (%) 83,3b 26,7g 76,7c 6,7i 48,3e hợp n= 27 10 25 67 Lợn Mán Dương tính 240 n = 40 Tỷ lệ (%) 96,7a 33,3f 86,7b 16,7h 77,8c Ghi chú: n + số mẫu dương tính với test th Địa điểm nghiên cứu Các giá trị có chữ khác sai kh c có ý nghĩa thống kê (P 005) Sự sai kh c tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) lợn Rừng huyện Vị Xun so với huyện Bắc Quang khơng có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) Tuy nhiên, sai kh c tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) lợn Rừng hai huyện Bắc Quang, Vị Xun so với huyện Hồng Su hì có ý nghĩa thống kê (P < 005) Đàn lợn ni huyện Hồng Su hì tỷ lệ nhiễm EDV cao so với c c huyện kh c hầu hết lợn nuôi c c hộ chăn nuôi nhỏ lẻ khu d n cư, thức ăn t n dụng, chuồng nuôi phương thức chăn nuôi, vệ sinh thú y không đảm bảo Thực tế cho thấy tình trạng chăn ni thấy rải r c c c huyện tỉnh nên tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) kh phổ biến Ở huyện Vị Xuyên hầu hết chăn nuôi với qui mô c c trang trại lớn, người d n biết p dụng khoa học kỹ thu t vào chăn nuôi, chuồng trại đại ý đến công t c vệ sinh thú y chăn nuôi lợn n i lợn Vì v y tỷ lệ mắc tiêu chảy thành dịch ( ED) thấp ết nghiên cứu cho thấy, bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) xảy lợn lứa tuổi mắc tỷ lệ mắc kh c Tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) c c trại kh cao Ở giai đoạn lợn từ 1-4 tuần tuổi, tỷ lệ dương tính với EDV lợn M n lợn Rừng chiếm cao (96,7% 83,3%) Ở giai đoạn lợn > tuần tuổi, tỷ lệ dương tính với EDV đàn lợn M n lợn Rừng 33,3% 26,7%, giảm thấp so với giai đoạn lợn từ 1-4 tuần tuổi Tuy nhiên, lợn n i nuôi con, tỷ lệ dương tính với EDV tương đối cao 86,7% lợn M n 76,7% lợn Rừng Chúng tiến hành th test nhanh lợn n i khỏe, kết cho thấy tỷ lệ mẫu dương tính với EDV lợn M n khỏe 16,7%; lợn Rừng khỏe 6,7% Sự sai kh c tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) tính chung huyện nghiên cứu c c nhóm lợn từ 1- tuần tuổi; lợn > tuần; lợn n i nuôi lợn n i khỏe có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) Sự sai kh c tỷ lệ mắc mắc tiêu chảy thành dịch ( ED) tính chung huyện nghiên cứu lợn Rừng so với lợn M n nhóm lợn (1-4 tuần tuổi; lợn > tuần; lợn n i nuôi hay lợn n i có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) 13 ết nghiên cứu cho thấy, tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) lợn, mức độ l y lan nghiêm trọng PEDV lưu hành đàn lợn Lợn lứa tuổi cảm nhiễm có nguy mắc cao dịch xảy Tình trạng mắc bệnh tiêu chảy thành dịch ( ED) xảy tồn đàn tất c c nhóm lợn thuộc nhiều độ tuổi kh c nhau, nhiên mức độ trầm trọng c c lứa tuổi kh c lại kh c Nghiên cứu rõ c c trại nuôi lợn M n lợn Rừng nhiễm EDV tỷ lệ mắc tiêu chảy kh cao, tất c c nhóm lợn Tỷ lệ mắc c c nhóm lợn có kh c biệt rõ rệt Như v y, kết nghiên cứu rõ lợn M n lợn Rừng - tuần tuổi, tỷ lệ nhiễm EDV cao so với c c nghiên cứu trước đ y Ngun nh n phương thức chăn ni, kỹ thu t chăn ni tình hình vệ sinh thú y, sức đề kh ng lợn Đ y lý lợn từ 1-4 tuần tuổi chiếm tỷ lệ nhiễm PEDV cao Trong qu trình nghiên cứu cho thấy, lợn n i nuôi phơi nhiễm EDV, nhiên dấu hiệu l m sàng thường nhẹ, thời gian tiêu chảy ngắn, lợn mẹ ăn uống bình thường khơng chết Nhóm lợn theo mẹ tuần tuổi thường mẫn cảm với EDV lứa tuổi chiếm tỷ lệ cao (96,3% đàn lợn M n, 95,8% đàn lợn Rừng) Qua kết nghiên cho thấy, tỷ lệ mắc ED xuất lợn từ 1-4 tuần tuổi (lợn M n, lợn Rừng) cao (tương ứng 96,7% 83,3%) Hai tỷ lệ giảm dần theo độ tuổi C c yếu tố liên quan đến việc lan truyền dịch bệnh c c trại phụ thuộc vào: phương thức chăn nuôi (trại t n dụng nguồn thức ăn có nguy mắc bệnh cao), vệ sinh s t trùng (thực tuần, lần có tỷ lệ nhiễm bệnh cao so với tuần, lần), quy mô chăn nuôi (tỷ lệ nhiễm bệnh cao trại có quy mơ chăn ni nhỏ), nguồn nước s dụng (tỷ lệ nhiễm bệnh cao trại có nguồn nước chưa qua x lý) Từ kết nghiên cứu cho thấy, nguyên nh n phần t p qu n, phương thức chăn ni lợn tỉnh Hà Giang nhỏ lẻ, chủ yếu nuôi chăn thả, chưa p dụng tốt quy trình vệ sinh, phòng bệnh cho đàn lợn ết kiểm tra kít test chẩn đo n nhanh cho thấy tỷ lệ lợn nhiễm EDV tổng số lợn M n, lợn Rừng có triệu chứng nhiễm EDV tỉnh Hà Giang kh cao (77,8%; 48,3%) Vì v y, việc khuyến c o c c trang trại nuôi lợn M n, lợn Rừng tỉnh Hà Giang cần có kế hoạch phòng chống bệnh cần thiết ết nghiên cứu chúng tơi hồn tồn phù hợp với c c nghiên cứu công bố trước đ y 4.2.2 Kết xác định tỷ lệ mắc bênh tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang phản ứng RT – PCR Trong khuôn khổ đề tài, để làm nguyên liệu cho ph t virus, tiến hành thu th p mẫu c c đàn lợn có triệu chứng bệnh ED huyện Vị Xuyên, Bắc Quang, Hồng Su phì làm đại cho đàn lợn M n lợn tỉnh Hà Giang Ngoài EDV, nước ta x c định có mặt lưu hành porcine deltacoronavirus (Le et al., 2017) loại virus chứng minh g y triệu chứng bệnh tích khó ph n biệt mặt l m sàng với bệnh EDV g y (Ma et al., 2015) Do đó, chúng tơi ứng dụng kỹ 14 thu t RT- CR để khẳng định chắn có mặt EDV mẫu ph n, ruột, hạch ruột lợn nghi mắc ED 4.2.2.1 Hồ sơ mẫu nghiên cứu Trong qu trình nghiên cứu thu th p 35 lợn Rừng dương tính với EDV (trong c c đàn th it chẩn đo n nhanh (Kít PEDAg test) c c trại chăn nuôi lợn huyện Vị Xuyên, Bắc Quang, Hồng Su Phì tỉnh Hà Giang có triệu chứng l m sàng điển hình nghi bệnh ED; Mẫu thu nh n lợn mắc bệnh điển hình lứa tuổi từ 1-4 tuần tuổi, thường hai đàn lợn, đàn lợn từ 1-3 con, kết thu nh n mẫu lợn M n, lợn Rừng (Trình bày phụ lục) 4.2.2.2 Kết chẩn đoán PED phương pháp RT – PCR Sản phẩm RNA virus thu sau chiết t ch từ bệnh phẩm (ph n, ruột, hạch ruột) kit t ch chiết QIAgen khuếch đại kĩ thu t RT – CR với tham gia enzym chép ngược (Reverse Transcriptase) s dụng cặp mồi khuếch đại phần gen S cho phép xác định đoạn gen virus ED có kích thước 651bp Sản phẩm sau khuếch đại điện di chụp ảnh ết phản ứng RT – CR x c định có mặt EDV thể c c bảng 4.4 Bảng 4.4 Kết xác định tỷ lệ mắc PED lợn Mán lợn Rừng Hà Giang kỹ thuật RT- PCR Lợn Mán Lợn Rừng Địa điểm (Huyện) n n (+) Tỷ lệ % n n (+) Tỷ lệ % Vị Xuyên 12 75,0b 12 10 83,3a a Mẫu Bắc Quang 11 10 90,9 12 66,7c b Ruột Hồng Su Phì 11 72,7 11 72,7b b Tổng hợp 34 27 79,4 35 26 74,3b b Vị Xuyên 12 66,7 12 58,3c c Mẫu Bắc Quang 11 54,5 12 50,0c c Phân Hồng Su Phì 11 54,5 11 54,5c c Tổng hợp 34 20 57,1 35 19 54,3c b Vị Xuyên 12 75,0 12 10 83,3a b Mẫu Bắc Quang 11 10 75,0 12 66,7c a Hạch Hồng Su Phì 11 90,9 11 72,7b b Tổng hợp 34 27 72,7 35 26 74,3b Ghi chú: n + số mẫu dương tính với phép th Ghi chú: Các giá trị mang chữ a,b,c khác cột cho biết khác biệt có ý nghĩa thống kê với p Các giá trị có chữ khác sai khác có ý nghĩa thống kê (P 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 22 Trong công thức bạch cầu, lợn mắc PEDV tỷ lệ bạch cầu tăng Tỷ lệ bạch cầu toan lợn Mán lợn Rừng mắc PED là: 5,70±1,09% 5,48±0,97 % Trong tỷ lệ lợn Mán lợn Rừng đối chứng 5,05±1,04 %; 5,20±0,95% (p < 0,05) Cùng với tăng bạch cầu trung tính bạch cầu i toan tăng tương ứng Tỷ lệ bạch cầu kiềm lợn Mán lợn Rừng mắc PED là: 0,75±0,49%; 0,65±0,53% (p < 0,05) Trong tỷ lệ lợn Mán lợn Rừng đối chứng 0,65±0,58 % 4.5.3 Kết khảo sát hàm lƣợng protein huyết lợn mắc PED Từ kết nghiên cứu bảng 4.12 cho thấy, tỷ lệ α1 globulin, α1 globulin, β globulin lợn mắc ED tăng so với lợn đối chứng, tỷ số A/G giảm so với lợn đối chưng Tuy nhiên, biến đổi tiêu lợn Mán lợn Rừng mắc PED so với lợn đối chứng khơng có ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Bảng 4.12 Hàm lƣợng protein huyết lợn Mán lợn Rừng mắc PED Chỉ tiêu Giống Lợn Mán Lợn Rừng Lợn M n Albumin (%) Lợn Rừng Lợn M n α1 globulin (%) Lợn Rừng Lợn M n α2 globulin (%) Lợn Rừng Lợn M n β globulin (%) Lợn Rừng Lợn Mán γ globulin (%) Lợn Rừng Lợn Mán Tỷ lệ A/G Lợn Rừng Protein tổng số (g/l) n Lợn mắc PED X mX 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 46,50±0,21 45,50±0,21 38,35±0,12 39,12±0,15 16,48±0,21 15,16±0,16 13,76±0,20 14,19±0,11 17,00±0,16 17,24±0,17 14,41±0,23 14,29±0,20 0,62 0,64 Lợn đối chứng X mX n 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 76,50±0,45 79,90±0,43 45,75±0,24 46,56±0,33 12,68±0,15 12,39±0,18 11,11±0,12 11,76±0,20 13,33±0,14 13,02±0,15 17,12±0,24 16,27±0,22 0,84 0,87 P < 0,05 < 0,05 < 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 1) Tỷ lệ mắc tiêu chảy lợn Rừng lợn M n tỉnh Hà Giang kh cao, chiếm 30,23 ± 0,82 % (lợn M n), 29,92 ± 0,68% (lợn Rừng) Tỷ lệ chết lợn M n cao hơn.so với lợn Rừng 2) Kết kiểm tra kít chẩn đo n nhanh EDV -Ag test tỷ lệ lợn nhiễm PEDV tỉnh Hà Giang kh cao chiếm tỷ lệ (77,8%; 48,3%) ết xét nghiệm tỷ lệ lợn mắc bệnh ED phản ứng RT – PCR cho thấy, diện EDV có tất c c địa phương lấy mẫu; 27/34 chiếm 23 72,7% mẫu bệnh phẩm lợn M n; 26/35 chiếm 74,3% mẫu bệnh phẩm lợn Rừng thu th p từ huyện tỉnh Hà Giang cho kết dương tính với phản ứng RT-PCR 3) Triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn Mán lợn Rừng lợn mắc ED điển hình như: ủ rũ, mệt mỏi, lười bú, giảm ăn bỏ ăn, ỉa chảy nhiều, nôn m a, lợn sút cân, gầy gò chiếm tỷ lệ cao (100%) Bệnh tích đại thể lợn M n lợn Rừng mắc ED chủ yếu t p trung ruột dày 4) ết xét nghiệm hóa mơ miễn dịch cho kết dương tính với EDV Chủ yếu ở: hơng tràng, hạch màng treo ruột, hồi tràng 100% T tràng 90%; l ch 80% Ở kết tràng, dày, gan, phổi, th n, tỷ lệ c c mẫu dương tính chiếm từ 20 – 60% số mẫu nghiên cứu Mức độ khu trú virus c c quan kh c nhau, có mặt EDV quan đàn lợn Rừng đàn lợn M n mắc ED tương đối giống Nghiên cứu đặc điểm bệnh tích vi thể lợn mắc ED chúng tơi nh n thấy bệnh tích chủ yếu lợn Rừng lợn M n mắc ED biến đổi dày ruột chủ yếu (ruột bị sung huyết, xuất huyết th m nhiễm tế bào viêm) 5) ết nghiên cứu c c số sinh hóa m u lợn M n lợn Rừng mắc ED cho thấy; tỷ lệ α1 globulin, α1 globulin, β globulin lợn mắc ED tăng so với lợn đối chứng, tỷ số A/G giảm so với lợn đối chứng Tuy nhiên, kh c biệt c c tiêu lợn M n lợn Rừng mắc ED khơng có ý nghĩa thống kê ( > 0,05) 5.2 KIẾN NGHỊ 1) Tiếp tục tiến hành c c điều tra, nghiên cứu dịch tễ học (đặc điểm vùng địa lý, mùa vụ, lứa tuổi, điều kiện vệ sinh ) nhằm nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố nguy PEDV 2) Áp dụng kết nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý lợn mắc tiêu chảy thành dịch virus (Porcine Epidemic Diarhea - PED) gây lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang vào thực tiễn xây dựng biện pháp x lý, giảm bớt thiệt hại dịch bệnh g y Đề biện pháp phòng bệnh phù hợp với địa phương 3) Nghiên cứu sâu c c đặc tính sinh học sinh học phân t virus ED lưu hành Việt Nam, để có thêm liệu hữu ích nghiên cứu có biện pháp phòng bệnh phù hợp 4) Có nhiều nghiên cứu PEDV lưu hành Việt Nam, nhằm quản lý, kiểm soát bệnh hiệu 24 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thị Thơm, Nguyễn Vũ Sơn, hạm Hồng Ngân, Nguyễn Thị Hương Giang Nguyễn Hữu Nam (2018) Một số đặc điểm bệnh lý lợn mán mắc dịch tiêu chảy cấp virus PED (Porcine epidemic diarrhea) Tạp chí Khoa học kỹ thu t Thú y 25 (2) tr 34 - 42 Nguyễn Thị Thơm, Nguyễn Vũ Sơn, hạm Hồng Ngân, Nguyễn Thị Hương Giang Nguyễn Hữu Nam (2018) Một số đặc điểm bệnh lý lợn Rừng mắc dịch tiêu chảy cấp virus PED (Porcine epidemic diarrhea) Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 16 (3) tr 223-231 ... Tổng số Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Số điều tra (con)... lệ mắc tiêu chảy lợn Rừng lợn Mán huyện tỉnh Hà Giang Địa điểm nghiên cứu Vị Xun Bắc Quang Hồng Su Phì Tính chung Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Lợn Rừng Lợn Mán Số điều tra... chảy lợn M n lợn Rừng tỉnh Hà Giang; - X c định tỷ lệ lợn chết mắc tiêu chảy lợn M n lợn Rừng tỉnh Hà Giang 3.2.2 Xác định tỷ lệ mắc PEDV lợn Mán lợn Rừng đàn lợn bị tiêu chảy tỉnh Hà Giang -