Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của lợn mắc bệnh tiêu chảy thành dịch do virus (Porcine epidemic diarrhea PED) gây ra trên lợn Mán và lợn Rừng tại tỉnh Hà Giang

Là công trình nghiên cứu về một số các đặc điểm bệnh lý của lợn Mán và lợn Rừng nuôi mắc PED ở Việt Nam, cung cấp những thông tin khoa học về triệu chứng lâm sàng, biến đổi bệnh lý đại thể, vi thể, một số chỉ tiêu huyết học cơ bản khi lợn mắc PED. Cung cấp các thông tin về chỉ tiêu huyết học của lợn Rừng trong chăn nuôi trang trại. Từ đó, giúp cho việc chẩn đoán phân biệt lợn Mán và lợn Rừng bị tiêu chảy do mắc PED với các bệnh khác gây ra tiêu chảy ở lợn để có thể đưa ra phác đồ điều trị hợp lý, hiệu quả.

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ THƠM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC TIÊU CHẢY THÀNH DỊCH DO VIRUS (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA - PED) GÂY RA TRÊN LỢN MÁN VÀ LỢN RỪNG TẠI TỈNH HÀ GIANG LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ THƠM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC TIÊU CHẢY THÀNH DỊCH DO VIRUS (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA - PED) GÂY RA TRÊN LỢN MÁN VÀ LỢN RỪNG TẠI TỈNH HÀ GIANG Chuyên ngành : Bệnh lý học chữa bệnh vật nuôi Mã số : 64 01 02 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Nguyễn Hữu Nam PGS.TS Phạm Hồng Ngân HÀ NỘI - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày luận án trung thực, khách quan chƣa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án đƣợc cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận án đƣợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2019 Tác giả luận án Nguyễn Thị Thơm i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận án, tơi nhận đƣợc hƣớng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Trƣớc hết, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Hữu Nam PGS.TS Phạm Hồng Ngân, ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận án Nhờ có hƣớng dẫn miệt mài ý kiến đóng góp quý báu thầy mà luận án đƣợc hồn thành, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam tận tình hƣớng dẫn, dành nhiều cơng sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý thú y, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trƣờng Cao đẳng Kỹ thuật - Công nghệ Hà Giang giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn đến đồng nghiệp công tác khoa Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, Trƣờng Cao đẳng Kỹ thuật & Công nghệ - Hà Giang hỗ trợ, tạo điều kiện để thực nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn gia đình, ngƣời thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận án Hà Nội, ngày 18 tháng năm 2019 Nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Thơm ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Trích yếu luận án x Thesis abstract xii PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Những đóng góp đề tài 1.5 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tình hình chăn ni lợn Hà Giang 2.1.1 Tình hình chăn ni lợn tỉnh Hà Giang giai đoạn 2014 - 2016 2.1.2 Giống lợn Mán (hay gọi lợn địa phƣơng, địa) 2.1.3 Giống lợn Rừng 2.2 Hiểu biết tiêu chảy 13 2.2.1 Nguyên nhân gây tiêu chảy lợn 14 2.2.2 Cơ chế sinh bệnh tiêu chảy 19 2.2.3 Bệnh lý lâm sàng tiêu chảy 19 2.2.4 Hậu viêm ruột tiêu chảy 20 2.3 Lịch sử tình hình nghiên cứu mắc tiêu chảy lợn (PED) 20 2.3.1 Nghiên cứu tiêu chảy thành dịch (PED) lợn giới 21 2.3.2 Nghiên cứu tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Việt Nam 22 2.4 24 Nghiên cứu bệnh nguyên (PEDV) 2.4.1 Một số đặc điểm PEDV 24 2.4.2 Dịch tễ học phân tử 30 iii 2.5 Triệu chứng lâm sàng lợn mắc tiêu chảy thành dịch (PED) 31 2.5.1 Triệu chứng lâm sàng 31 2.5.2 Bệnh tích 32 2.6 Các phƣơng pháp chẩn đốn PEDV 33 2.6.1 Phát virus 33 2.6.2 Chẩn đoán phân biệt 35 2.6.3 Phân lập virus 37 2.7 Biện pháp phòng trị tiêu chảy thành dịch (PED) lợn 37 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 3.1 Trang thiết bị, dụng cụ vật liệu nghiên cứu 39 3.2 Nội dung nghiên cứu 40 3.2.1 Khảo sát tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 40 3.2.2 Xác định tỷ lệ mắc PEDV lợn Mán lợn Rừng đàn lợn bị tiêu chảy tỉnh Hà Giang 40 3.2.3 Xác định triệu chứng lâm sàng bệnh tích chủ yếu lợn Mán lợn Rừng mắc PED 40 3.2.4 Xác định biến đổi bệnh lý vi thể số quan lợn mắc PED áp dụng phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch để xác định có mặt virus mô lợn bệnh 40 3.2.5 Xác định số tiêu huyết học lợn Mán lợn Rừng mắc PED 40 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 40 3.3.1 Phƣơng pháp điều tra dịch tễ học 40 3.3.2 Phƣơng pháp chẩn đoán bệnh Kít PED-Ag test 41 3.3.3 Phƣơng pháp RT – PCR 44 3.3.4 Phƣơng pháp mổ khám tiêu chuẩn 45 3.3.5 Phƣơng pháp làm tiêu vi thể 46 3.3.6 Phƣơng pháp nhuộm hố mơ miễn dịch 46 3.3.7 Phƣơng pháp xác định tiêu huyết học 50 3.3.8 Phƣơng pháp xử lý số liệu 51 iv PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 52 Kết khảo sát tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 52 4.1.1 Kết điều tra tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 4.1.2 52 Kết khảo sát tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy theo tuổi lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 4.2 57 Kết xác định tỷ lệ mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 61 4.2.1 Kết xác định tỷ lệ mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng kít chẩn đốn nhanh (kít PED-AG test) tỉnh Hà Giang 61 4.2.2 Kết xác định tỷ lệ mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang phản ứng RT – PCR 4.3 66 Kết xác định triệu chứng lâm sàng bệnh tích chủ yếu lợn Mán đàn lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) tỉnh Hà Giang 69 4.3.1 Xác định triệu chứng lâm sàng lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dich (PED) tỉnh Hà Giang 69 4.3.2 Xác định bệnh tích chủ yếu lợn mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 4.4 72 Xác định biến đổi bệnh lý vi thể số quan lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) áp dụng phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch để xác định có mặt virus mô lợn bệnh 76 4.4.1 Kết xác định bệnh tích vi thể chủ yếu lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) 76 4.4.2 Áp dụng phƣơng pháp hóa mơ miễn dịch xác định tồn virus mô lợn bệnh 4.5 90 Xác định tiêu huyết học lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) tỉnh Hà Giang 92 4.5.1 Xác định số hồng cầu lợn Mán lợn Rừng mắc PED tỉnh Hà Giang 92 4.5.2 Kết khảo sát số tiêu bạch cầu lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) tỉnh Hà Giang v 99 4.5.3 Kết khảo sát hàm lƣợng protein huyết lợn mắc PED 102 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 105 5.1 Kết luận 105 5.2 Kiến nghị 106 Danh mục cơng trình công bố liên quan đến luận án 107 Tài liệu tham khảo 108 Phụ lục 118 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay EM Electron microscope EVD Epidemic viral diarhea IgA Immunoglobulin A IgG Immunoglobulin G IgM Immunoglobulin M IgY Yolk Immunoglobulin IHC Immunohistochemistry ISH In situ hybridization PED Porcine epidemic diarrhea PEDV Porcine epidemic diarrhea virus RNA Axit ribonucleic RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction TGE Transmissible gastroenteritis TGEV Transmissible gastroenteritis virus UTR Untranslated region vii DANH MỤC BẢNG Tên bảng TT Trang 2.1 Tình hình chăn nuôi lợn tỉnh Hà Giang giai đoạn 2014 - 2016 2.2 Một số sinh trƣởng lợn Rừng 10 2.3 Các đặc điểm khả sinh sản lợn Rừng 11 3.1 Trình tự mồi đặc hiệu phát PEDV 44 3.2 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 44 4.1 Kết khảo sát tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng đƣợc điều tra tỉnh Hà Giang 4.2 53 Kết khảo sát tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết tiêu chảy lợn Mán lợn Rừng theo tuần tuổi tỉnh Hà Giang giai đoạn 2014 - 2016 4.3 73 Kết xác định bệnh tích vi thể lợn Mán lợn Rừng theo mẹ mắc PED tỉnh Hà Giang 4.8 4.9 70 Kết xác định bệnh tích đại thể chủ yếu lợn Mán, lợn Rừng mắc PED tỉnh Hà Giang 4.7 67 Triệu chứng lâm sàng lợn Mán đàn lợn Rừng (1 – tuần tuổi) mắc tiêu chảy thành dịch (PED) tỉnh Hà Giang 4.6 62 Kết xác định tỷ lệ dƣơng tính với PEDV lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang kỹ thuật RT- PCR 4.5 58 Kết xác định tỷ lệ mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng kít chẩn đốn nhanh (Kít PED-Ag test) Hà Giang 4.4 77 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể số quan lợn theo mẹ ( 1- tuần tuổi) mắc PED 85 Kết nhuộm IHC số quan lợn mắc PED 91 4.10 Các số hồng cầu lợn Mán lợn Rừng mắc PED (2 tuần tuổi) 93 4.11 Các số bạch cầu lợn Mán lợn Rừng mắc PED (2 tuần tuổi) 100 4.12 Hàm lƣợng protein huyết lợn Mán lợn Rừng mắc PED 102 4.13 Tổng số lợn Mán lợn Rừng đƣợc điều tra tỉnh Hà Giang giai đoạn 2014 - 2016 125 viii ... THƠM NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC TIÊU CHẢY THÀNH DỊCH DO VIRUS (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA - PED) GÂY RA TRÊN LỢN MÁN VÀ LỢN RỪNG TẠI TỈNH HÀ GIANG Chuyên ngành : Bệnh lý học... án: Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý lợn mắc tiêu chảy thành dịch virus (Porcine epidemic diarrhea - PED) gây đàn lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang Chuyên ngành: Bệnh lý học chữa bệnh vật nuôi Mã số: ... Xác định bệnh tích chủ yếu lợn mắc tiêu chảy thành dịch (PED) lợn Mán lợn Rừng tỉnh Hà Giang 4.4 72 Xác định biến đổi bệnh lý vi thể số quan lợn Mán lợn Rừng mắc tiêu chảy thành dịch (PED) áp