Mục đích cơ bản của luận án này là nghiên cứu ảnh hưởng của một số giống rau cải, nhiệt độ lên sự phát triển của ngài H. undalis và khả năng nhân nuôi phạm vi hẹp của đối tượng này. Nghiên cứu cấu trúc hóa học pheromone giới tính của H. undalis. Nghiên cứu quy trình tổng hợp hợp chất chính, E11,E13-16:Ald. Đánh giá khả năng hấp dẫn của mồi pheromone giới tính tổng hợp đối với ngài H. undalis ở điều kiện ngoài đồng
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: Bảo Vệ Thực Vật Mã ngành: 62 01 12 TRẦN THANH THY KHẢO SÁT TÌNH HÌNH GÂY HẠI, ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ HĨA CHẤT TÍN HIỆU TRONG QUẢN LÝ SÂU KÉO MÀNG, Hellula undalis (Lepidoptera: Crambidae) HẠI CẢI TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Cần Thơ, 2019 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp trường Họp tại: Vào lúc … … ngày … tháng … năm … Phản biện 1: Phản biện 2: Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Ảnh hưởng giống cải nhiệt độ đến đặc điểm sinh học sâu kéo màng, Hellula undalis Fabricius (Lepidoptera: Crambidae) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (Tập 3): 193-199 Nghiên cứu ứng dụng hóa chất tín hiệu để quản lý ngài Hellula undalis Fabricius (Lepidoptera: Crambidae) hại rau cải Đồng sơng Cửu Long Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (Tập 3): 200-209 Nghiên cứu nhân nuôi sâu kéo màng (Hellula undalis Fabricius) hại rau cải xanh Tạp chí khoa học cơng nghệ nơng nghiệp Việt Nam 4(77), 76-81 Khảo sát đa dạng di truyền sâu kéo màng (Hellula undalis) gây hại rau cải Đồng sông Cửu Long dấu phân tử ISSR Tạp chí khoa học cơng nghệ nơng nghiệp Việt Nam 2(87), 65-70 Tình hình gây hại sâu kéo màng, Hellula undalis Fabricius (Lepidoptera: Crambidae) hại rau cải Đồng sơng Cửu Long Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 54(3B): 115-124 DANH MỤC THAM DỰ VÀ BÁO CÁO TRONG HỘI THẢO CẤP QUỐC GIA Hội nghị Bảo vệ thực vật toàn quốc 2015: “Quản lý bền vững dịch hại Nông nghiệp”, tổ chức ngày 06/11/2015 trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Hội nghị quốc gia: “Nơng nghiệp xanh”, tổ chức ngày 18 – 19/11/2016 Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ Hội nghị Côn trùng học quốc gia lần thứ 9: “Côn trùng học với sinh kế sức khỏe cộng đồng”, tổ chức ngày 10-11/4/2017 Viện sốt rét – Ký sinh trùng – Côn trùng Trung ương Hội nghị Quốc tế Việt Nam – Hungarian: “Research for Developing Sustainable Agriculture”, tổ chức từ ngày 21-22/9/2016 trường Đại học Trà Vinh Chương 1: GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết luận án Rau xanh nói chung rau cải nói riêng có vai trò quan trọng sức khỏe người Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) cảnh báo năm tồn giới có khoảng 2,7 triệu ca tử vong ăn thiếu rau xanh (Lê Hồng Phúc, 2010) Việt Nam có lịch sử trồng rau cải lâu đời (Lê Thị Khánh, 2009), rau họ Cải (Brassicaceae) gồm bắp cải, súp lơ, su hào, củ cải, loại cải khơng cuốn… lồi rau trồng nhiều Tuy nhiên, sản xuất rau cải gặp nhiều khó khăn sâu gây hại sâu kéo màng, sâu tơ, bọ nhảy, sâu ăn tạp, (Hồ Thị Thu Giang, 2005; Trần Đăng Hòa ctv., 2013) Sâu kéo màng (SKM) thuộc Cánh Vảy (Lepidoptera), tổng họ Pyraloidea, họ Crambidae, tên khoa học Hellula undalis Fabricius (H undalis), trước H undalis thuộc họ Pyralidae, dịch hại quan trọng họ cải, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới (Waterhouse and Norris, 1989), ra, ghi nhận nước ôn đới (Kalbfleisch, 2006) Ngài H undalis đẻ trứng đọt cải non, sâu non nở công vào gần đỉnh sinh trưởng làm hư chồi (Veenakumari et al., 1995; Sivarpagasam and Chua, 1997), bùng phát thành dịch gây thiệt hại lên đến 100% suất Hawaii, Ấn Độ, Malaysia, Philippines, Đài Loan, Ai Cập, Iraq Nhật Bản (Kalbfleisch, 2006) Tại Việt Nam rau cải không vụ, H undalis làm giảm thấp suất phẩm chất vụ Thu Đông (Dương Thị Vân, 2012) Để quản lý H undalis, người canh tác rau cải sử dụng lượng thuốc hóa học với liều lượng tần suất cao, loại thuốc thường sử dụng Permethrin, Abamectin, Teflu benzuronm, Mephosfolan, Terbufos, Carbofuran theo hướng dẫn tuần phun lần sau ngày gieo trồng có hiệu Tại Malaysia, theo nơng dân xử lý thuốc vào lúc đâm chồi cho hiệu lúc trưởng thành (Parker et al., 1995) Kết điều tra Tạ Thị Huỳnh Đào Nguyễn Văn Huỳnh (2008) cho thấy 95% nông dân trồng cải huyện Mỹ Xuyên Kế Sách (Tỉnh Sóc Trăng) sử dụng thuốc trừ sâu hóa học để phòng trị H undalis, nhiên, có 45% nơng dân vấn cho biện pháp phun thuốc hóa học có hiệu quả, sâu ẩn bên ổ tơ khó thấm nước Hiện nay, để hướng tới nông nghiệp bền vững, thân thiện với môi trường sinh thái đáp ứng yêu cầu chất lượng sản phẩm ngày cao thị trường, đặc biệt nhu cầu sử dụng nông sản sạch, việc nghiên cứu ứng dụng biện pháp quản lý sâu hại theo hướng phòng trừ sinh học cần quan tâm, đó, sử dụng hóa chất tín hiệu biện pháp thiếu chương trình quản lý tổng hợp (Srinivasan, 2008) Hóa chất tín hiệu (semiochemical) hợp chất hóa học (thông thường hợp chất hữu cơ) mang tín hiệu đảm nhận vai trò thơng tin liên lạc sinh vật tự nhiên Nghiên cứu ứng dụng hóa chất tín hiệu để điều chỉnh hành vi côn trùng mối tương tác quan hệ trồng – loài gây hại – loài thiên địch – trồng từ bảo vệ trồng chống lại loài gây hại phát triển mạnh mẽ xem công cụ hiệu để thay cho thuốc bảo vệ thực vật hóa học (Gibb et al., 2005) Trên sở đó, đề tài “Khảo sát tình hình gây hại, đặc điểm sinh học hóa chất tín hiệu quản lý sâu kéo màng, Hellula undalis (Lepidoptera: Crambidae) hại cải Đồng sông Cửu Long” thực nhằm giới thiệu biện pháp an toàn, thân thiện với môi trường để quản lý gây hại H undalis đồng phù hợp với vùng ĐBSCL, góp phần giảm thiểu thay dần thuốc trừ sâu hóa học 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu chung Quản lý hiệu H undalis gây hại rau cải ĐBSCL hóa chất tín hiệu 1.2.2 Mục tiêu cụ thể Đánh giá khả gây hại H undalis hại rau cải tỉnh Vĩnh Long, Cần Thơ Hậu Giang Đánh giá đa dạng di truyền quần thể ngài H undalis thu thập ĐBSCL Nghiên cứu ảnh hưởng số giống rau cải, nhiệt độ lên phát triển ngài H undalis khả nhân nuôi phạm vi hẹp đối tượng Nghiên cứu cấu trúc hóa học pheromone giới tính H undalis Nghiên cứu quy trình tổng hợp hợp chất chính, E11,E13-16:Ald Đánh giá khả hấp dẫn mồi pheromone giới tính tổng hợp ngài H undalis điều kiện đồng Đánh giá hiệu tinh dầu sả tỏi việc quấy rối bắt cặp đẻ trứng ngài H undalis điều kiện nhà lưới ngồi đồng Ứng dụng hóa chất tín hiệu quản lý gây hại H undalis hại rau cải 1.3 Những điểm luận án Xác định thành phần pheromone giới tính mới, hợp chất (Z)-11-tetradecenyl acetate, ngài H undalis, đồng thời xác định vai trò hydrocarbon chưa no (hợp chất (Z,Z,Z)tricosatriene) hấp dẫn ngồi đồng pheromone giới tính ngài H undalis Kết mở triển vọng ứng dụng cho pheromone giới tính ngài H undalis Xác định đặc điểm sinh học, tính đa dạng di truyền, ảnh hưởng điều kiện nhân nuôi (thức ăn nhiệt độ) lên khả phát triển, tỷ lệ gia tăng hệ số nhân ngài H undalis qua ba hệ nuôi nhân Tổng hợp hợp chất (E,E)-11,13-hexadecadienal (E11,E13-16:Ald), thành phần pheromone giới tính ngài H undalis đường tổng hợp thông qua phản ứng Wittig Đánh giá hiệu pheromone giới tính tổng hợp, tinh dầu sả tinh dầu tỏi H undalis Chương 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian thực hiện: từ tháng 11/2014 đến tháng 2/2018 Địa điểm thực hiện: Thực thí nghiệm phòng thí nghiệm Bộ mơn Bảo vệ Thực vật phòng thí nghiệm Di truyền, Bộ mơn Di truyền chọn giống trồng, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ; phòng thí nghiệm Khoa học nơng nghiệp, Trường Đại học Cửu Long; Phòng thí nghiệm Sinh thái học Hóa chất, Trường Đại học Nông nghiệp Công nghệ Tokyo - Nhật Bản Các thí nghiệm ngồi đồng số ruộng rau cải nơng dân huyện Long Hồ, Trà Ơn Bình Minh (Vĩnh Long), Quận Cái Răng (Thành phố Cần Thơ), Châu Thành A (Hậu Giang) 3.2 Phương pháp 3.2.1 Điều tra khảo sát tình hình gây hại SKM gây hại rau cải tỉnh Vĩnh Long, Cần Thơ Hậu Giang 3.2.1.1 Điều tra nông dân tình hình gây hại SKM tỉnh Vĩnh Long, Cần Thơ Hậu Giang Hình thức điều tra: điều tra thực hình thức vấn nông hộ theo phiếu câu hỏi soạn sẳn Phỏng vấn 180 nông hộ (1 phiếu/hộ), yêu cầu nông hộ vấn canh tác rau cải với diện tích tối thiểu 500 m2 Tại nơng hộ, vấn người trực tiếp chăm sóc ruộng cải Địa điểm điều tra: thực quận/huyện gồm Bình Minh (20 hộ), Bình Tân (20 hộ) Long Hồ (20 hộ) thuộc tỉnh Vĩnh Long; huyện Phong Điền (20 hộ), quận Bình Thủy (20 hộ) quận Cái Răng (20 hộ) thuộc thành phố Cần Thơ; huyện Long Mỹ (30 hộ) Vị Thủy (30 hộ) thuộc tỉnh Hậu Giang Tại huyện/quận, số nông hộ điều tra phân bố tối thiểu 02 xã/khu vực 3.2.1.2 Khảo sát tình hình gây hại đồng ruộng SKM lồi trùng gây hại cải khác Từ kết điều tra nông dân chọn 25 ruộng cải (mỗi huyện chọn ruộng, trừ huyện Long Hồ chọn ruộng) huyện địa bàn điều tra nông dân Cách tiến hành: ruộng cải khảo sát, chọn 10 điểm cố định theo đường chéo góc, điểm tương đương m2 cải Chỉ tiêu ghi nhận: thành phần côn trùng gây hại gây hại SKM ngày/lần suốt vụ cải (tổng cộng gồm lần ghi nhận tiêu) Những lồi trùng gây hại khơng nhận diện trực tiếp ruộng thu mẫu cho vào hộp nhỏ riêng biệt chuyển phòng thí nghiệm xác định Tỷ lệ (%) gây hại SKM Mức độ phổ biến lồi tính theo tần suất xuất lồi ruộng rau cải khảo sát 3.2.2 Khảo sát đa dạng di truyền quần thể SKM Đồng sông Cửu Long dấu phân tử ISSR 3.2.2.1 Thu thập SKM Đồng sông Cửu Long Thu 260 ấu trùng SKM tỉnh/thành ĐBSCL, tỉnh/thành thu 20 ấu trùng giống cải trồng phổ biến Mẫu thu thập trữ cồn 70oC đựng ống Eppendoft (thể tích 10 ml) có nắp đậy chuyển Bộ môn Di Truyền Chọn Giống Cây Trồng, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ để ly trích DNA xác định đa dạng di truyền dấu phân tử ISSR 3.2.2.2 Quy trình ly trích DNA theo phương pháp CTAB a Ly trích tinh DNA: DNA 13 mẫu H undalis ly trích theo quy trình Taylor Powell (1982) b Phản ứng PCR – ISSR Mười ISSR sử dụng để phân tích, trình tự mồi tổng hợp theo Mostafa et al (2011), Latif et al (2013) Nirmaladevi et al (2016) công ty Phusa Biochem Phản ứng PCR tiến hành 20 µl gồm: 2,0 µl buffer (10X), 0,4 µl dNTPs (10 mM), 0,5µl primer ISSR (10 pM), 0,2 µl Taq ADN Polymerase (5U/ µl), 1,0µl ADN (100 ng/ µl ) 15,9µl H 2O Phản ứng PCR thực qua 40 chu kỳ gia nhiệt máy PCR GenAmp PCR system 2007 sau: phút 940C, 40 chu kỳ gồm 30 giây 940C, 30 giây nhiệt độ bắt mồi, 720C 40 giây, sau phút 720C trữ 100C Sản phẩm PCR điện di 70 phút với cường độ dòng điện 24V gel polyacrylamide 8% dung dịch TBE 0,5X điện di CompactPAGE-twin AE-7341 Nhuộm gel với ethidium bromide 15 phút (1mg/l), rửa lại với nước đem chụp hình gel máy chụp ảnh máy chiếu tia UV Ghi nhận diện băng khuyếch đại gel polyacrylamide để đánh giá đa dạng mẫu H undalis c Phân tích số liệu đa dạng di truyền Dựa vào phổ điện di, băng đa hình nhận diện Gel Analyzer 8% kết mã hóa dạng nhị phân, theo nguyên tắc: có băng khuyếch đại khơng có băng khuyếch đại Kết mã hóa dạng nhị phân sử dụng để phân tích hệ số tương đồng theo phương pháp UPGMA phần mềm NTSYSpc 2.0 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng ký chủ phát triển SKM Thí nghiệm (TN) bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên (HTNN) với nghiệm thức (NT) thức ăn giống cải gồm cải Ngọt (Brassica integrifolia), cải Xanh (Brassica juncea), cải Tùa xại (Brassica campetrus), cải Thìa (Brassica rapachinensis) cải Bó xơi (Spinacia oleracea) 30 lần lặp lại Mỗi lần lặp lại NT hộp nhựa nuôi ấu trùng H undalis vừa nở giống cải TN vũ hóa Chỉ tiêu ghi nhận: kích thước thời gian phát triển tất giai đoạn phát triển H undalis, số lượng trứng đẻ trưởng thành ngày 3.2.4 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển H undalis TN bố trí theo thể thức HTNN với NT ba điều kiện nhiệt độ gồm 16oC, 20oC, 25oC nhiệt độ phòng với 30 lần lặp lại Mỗi lần lặp lại hộp nuôi thức ăn giống cải chọn từ kết TN khảo sát ảnh hưởng ký chủ (Mục 3.2.3) Chỉ tiêu ghi nhận: thời gian phát triển giai đoạn vòng đời H undalis điều kiện nhiệt độ khảo sát 3.2.5 Khảo sát khả nhân nuôi phạm vi hẹp H undalis từ giai đoạn thành trùng Khảo sát tiến hành theo phương pháp Wilson (1971) điều chỉnh cho phù hợp với điều kiện Phòng thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi: số trứng, thời gian ủ trứng, tỷ lệ trứng nở, tổng số ấu trùng, tỷ lệ sống ấu trùng, tổng số nhộng, tỷ lệ sống giai đoạn, số lượng thành trùng, tỷ lệ sống ngài số lượng thành trùng sau hệ nhân nuôi, hệ số nhân hệ, số gia tăng tự nhiên 3.2.6 Nghiên cứu pheromone giới tính SKM 3.2.6.1 Xác định thành phần hóa học a Ly trích pheromone giới tính Pheromone giới tính ngài H undalis ly trích theo phương pháp mô tả Vang et al (2013) b Phân tích Sắc ký khí - Điện râu đầu Biểu đồ sắc ký khí - điện râu đầu (electroantennogram, EAG) mẫu ly trích pheromone tự nhiên chất chuẩn tổng hợp ghi nhận máy phân tích liên hợp GC-EAD sử dụng lúc hai đầu dò (detector) gồm đầu dò Ion hóa lửa (Flame Ionization Detector, FID) máy sắc ký đầu dò sinh học Điện râu đầu (Elecreoantennogram Detector, EAD) chế tạo từ râu đầu ngài đực sống (Hình 3.1) Tín hiệu đáp ứng pheromone từ râu đầu thành trùng đực khuếch đại lọc trước in dạng biểu đồ (EAG) (Lê Văn Vàng, 2016) Hình 3.1: Sơ đồ biểu diễn hệ thống sắc ký khí điện râu đầu c Phân tích Sắc ký khí - Khối phổ Phổ khối lượng (Mass spectrum) thành phần hoạt động EAG (electroantennogram active component) mẫu pheromone ly trích chất chuẩn tổng hợp ghi nhận máy liên hợp Sắc ký khí - Khối lượng với GC HP 6890 series đầu dò MS (Mass Selective Detector) HP 5973 Sự ion hóa (Ionization) thực theo kiểu va chạm ion (Electron Impact Mode) điện 70 eV nhiệt độ 2300C Phổ khối lượng đặt khoảng m/z từ 40-500 Cột sắc ký dùng phân tích cột mao dẫn DB-23 Chương trình nhiệt độ dùng cho phân tích mẫu pheromone ly trích chất chuẩn tổng hợp thiết lập tương tự phân tích GC-EAD Chương trình nhiệt độ dùng cho phân tích mẫu qua dẫn xuất DMDS thành phần Pheromone 800C (trong phút), tăng lên 2100C tốc độ 80C/phút giữ 2200C 20 phút Mẫu pheromone ly trích qua dẫn xuất với dimethyl disulfide (DMDS) Vị trí nối đơi phân tử thành phần pheromone xác định phân tích GCMS mẫu pheromone ly trích sau dẫn xuất với DMDS theo phương pháp mô tả Vang et al.(2005) 3.2.6.2 Tổng hợp thành phần pheromone giới tính SKM Hợp chất E11,E13-16:Ald, thành phần pheromone H undalis, tổng hợp theo phương pháp điều chỉnh từ công bố Lê Văn Vàng Nguyễn Thị Tiện (2015) 3.2.6.3 Đánh giá hiệu hấp dẫn pheromone tổng hợp trưởng thành SKM * Khảo sát ảnh hưởng thành phần Z3,Z6,Z9-23:H (T23); E11,E13-16:Ald; Z11-16:Ald Z11-14:OAC đến khả hấp dẫn trưởng thành H undalis, 28/3/2017 đến ngày 30/4/2017, Vĩnh Long: thí nghiệm bố trí theo thể thức khối hoàn toàn ngẫu nhiên (KHTNN) với nghiệm thức kiểu phối trộn khác thành phần nêu Mỗi nghiệm thức lặp lại lần tương ứng với bẫy pheromone Trong đó, nghiệm thức có mồi tuýp cao su trống nhồi 10 µl n-hexane nghiệm thức đặt với mồi ngài chưa giao phối sử dụng làm đối chứng 3.2.7 Khảo sát ảnh hưởng số hóa chất tín hiệu lên khả bắt cặp đẻ trứng SKM 3.2.7.1 Điều kiện nhà lưới * Thí nghiệm 1: Quấy rối tín hiệu bắt cặp, 08-15/11/2015, Đại học Cửu Long Thí nghiệm bố trí theo thể thức HTNN, lựa chọn với NT (Tinh dầu sả, tinh dầu tỏi, hợp chất (E)-10-pentadecenal, ngài H undalis chưa bắt cặp 10 µl n-hexane) lần lặp lại Mỗi lần lặp lại NT mùng lưới bên đặt bẫy dính với mồi hai ngài chưa bắt cặp, loại chất quấy rối (treo bẫy, bên rỗ lưới nhốt ngài cái) thả vào 15 ngài đực vừa vũ hóa Chỉ tiêu theo dõi: số lượng ngài đực bị hấp dẫn vào bẫy sau ngày sau thả ngài đực * Thí nghiệm 2: Quấy rối đẻ trứng, 20 – 27/11/2015, Đại học Cửu Long TN bố trí tương tự quấy rối tín hiệu bắt cặp, khác bên mùng lưới đặt chậu cải mùng, loại chất quấy rối (treo bên chậu cải) thả vào cặp trưởng thành (đực/cái =1) vừa vũ hóa ngài H undalis cho bắt cặp túi giấy Chỉ tiêu theo dõi: số lượng trứng đẻ chậu cải sau ngày sau thả ngài 3.2.7.2 Điều kiện ngồi đồng * Thí nghiệm 3: Quấy rối tín hiệu bắt cặp, 02-30/1/2016, thành phố Cần Thơ TN bố trí tương tự điều kiện nhà lưới, khác bố trí theo thể thức KHTNN với NT lần lặp lại Mỗi lần lặp lại NT bẫy dính có mồi hai ngài chưa bắt cặp treo NT xử lý bẫy (treo bẫy, bên rỗ lưới nhốt ngài cái) Chỉ tiêu theo dõi: số lượng ngài đực bị hấp dẫn vào bẫy sau ngày sau treo bẫy * Thí nghiệm 4: Quấy rối đẻ trứng, 02/01 – 30/1/2016, thành phố Cần Thơ TN bố trí tương tự điều kiện nhà lưới, khác bố trí theo thể thức KHTNN với NT lần lặp lại Mỗi lần lặp lại NT m2 cải bên có treo NT xử lý độ cao khoảng 30 cm bên mặt ruộng che lại mái che Tinh dầu sả tinh dầu tỏi thay tuần/lần Chỉ tiêu theo dõi: lô TN ghi nhận số trứng ngài H undalis vào thời điểm 7, 14, 21 28 ngày (7 ngày/lần khảo sát) Đánh giá hiệu lực tinh dầu sả, tinh dầu tỏi hợp chất E10-15:Ald theo công thức Abbott (1925) 3.2.8 Nghiên cứu ứng dụng hóa chất tín hiệu để quản lý gây hại sâu kéo màng TN bố trí theo thể thức HTNN, độc lập, lựa chọn với NT (Tinh dầu sả, tinh dầu tỏi, thuốc BVTV, khơng phòng trị) ruộng riêng biệt thời gian 01-30/3/2016 Vĩnh Long Mỗi NT bố trí riêng biệt ruộng khác để tránh ảnh hưởng Chỉ tiêu theo dõi: số trứng ngài H undalis trước sau bố trí thí nghiệm vị trí: Cách trái theo hướng Tây m, cách phải theo hướng Đông m, cách theo hướng Bắc m, cách theo hướng Bắc m, cách theo hướng Bắc m, cách theo hướng Nam m, cách theo hướng Nam m cách theo hướng Nam m so với túi treo dầu sả/tỏi vị trí khảo sát m2 cải Trên ruộng thuốc BVTV ruộng khơng phòng trị ghi nhận số trứng ngài H undalis vị trí tương tự ruộng quản lý dầu sả tỏi 3.3 Phương pháp xử lý số liệu Số liệu điều tra tổng hợp dạng bảng đồ thị phần mềm Microsoft Excel 2010 phân tích thống kê phần mềm SPSS 21.0 Số liệu khảo sát đồng 25 ruộng rau cải xác định mức độ phổ biến, tần suất xuất tỷ lệ gây hại SKM ruộng khảo sát Kết khảo sát ảnh hưởng thức ăn, nhiệt độ, hiệu lực pheromone, hóa chất tín hiệu SKM phân tích thống kê qua kiểm định Duncan mức ý nghĩa 5% phần mềm SPSS 21.0 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết điều tra khảo sát tình hình gây hại SKM cải tỉnh Vĩnh Long, Cần Thơ Hậu Giang 4.1.1 Tình hình xuất hiện, khả gây hại biện pháp phòng trị 4.1.1.1 Tình hình xuất khả gây hại SKM Theo mô tả nông dân, SKM chủ yếu gây hại đọt cải (chiếm 71,88% hộ nơng dân), có 100% nơng hộ huyện Bình tân - Vĩnh Long quận Cái Răng - thành phố Cần Thơ Chỉ có 18,96% nơng hộ cho SKM gây hại đọt và 9,16% gây hại Hầu hết nông hộ (82,70%) cho SKM gây hại nặng vào mùa nắng từ tháng 11 đến tháng sang năm Về thời điểm gây hại, 63,13% hộ ghi nhận SKM gây hại mạnh vào giai đoạn cải 1015 NSKG, lúc cải khoảng 3-5 thật thích hợp cho ngài tìm đến đẻ trứng ấu trùng nở công vào đọt Tồn nơng hộ vấn cho SKM không gây hại cải thời điểm gần thu hoạch (25-30 NSKG) (Bảng 4.1) Kết ghi nhận từ nông hộ trồng cải điều tra cho thấy nông dân trồng cải có hiểu biết tốt quan tâm nhiều gây hại SKM 4.1.1.2 Biện pháp phòng trị sâu kéo màng Sự gây hại SKM mức độ nặng chiếm 39,38% nơng hộ, trung bình chiếm 38,75% nơng hộ Để đối phó với SKM, có đến 99,37% nơng hộ sử dụng thuốc BVTV hóa học gồm thuốc nhóm cúc tổng hợp (Cyperan 10EC, Bulldock 25EC, Serpa 10EC, Cyper-alpha 5ND, Peran 50EC, Sumialpha 5SC); lân hữu (Selecron 500EC); Carbamate (Padan 95SP) nhóm sinh học (NeemNim, Phesoltin 5.5EC, Bihopper 270EC, Vertimec 1,8EC, Atapron 5SC, BT, Biobit 32B.FC) để phòng trị, đa số phun theo định kỳ (65,43%) với nồng độ khuyến cáo ghi nhãn (87,93%) Chỉ có 20,84% nơng hộ cho hiệu sử dụng thuốc hóa học tốt, nơng hộ lại cho SKM khó phòng trị thuốc hóa học sâu bao bọc bên ổ dệt tơ khó thấm nước 91,46% nơng hộ biết thuốc đặc trị SKM từ người bán thuốc (Bảng 4.1) Kết điều tra cho thấy SKM đối tượng gây hại nặng hiệu thấp phòng trị thuốc hóa học 4.1.2 Khảo sát đồng ruộng tình hình gây hại SKM 4.1.2.1 Thành phần mức độ phổ biến loài sâu hại rau cải Kết khảo sát đồng ruộng ghi nhận loài sâu hại cải gồm Bọ nhảy sọc cong, Sâu tơ, Sâu ăn tạp, Sâu đo xanh, Sâu xanh bướm trắng, Ruồi đục cải, Rầy mềm, Sâu xanh Sâu kéo màng với mức độ phổ biến tần suất xuất lồi có khác (Bảng 4.2) Trong đó, Bọ nhảy sọc cong, Sâu tơ, Sâu xanh xuất mức độ phổ biến (>50%) tần suất xuất 100% (5/5 lần khảo sát); SKM, sâu ăn tạp xuất mức độ phổ biến (>25-50%) tần suất xuất 100% (5/5 lần khảo sát) Các loài sâu hại khác Sâu đo xanh, sâu xanh bướm trắng, ruồi đục cải xuất mức độ phổ biến (5-25%) tần suất xuất thấp 4.1.2.2 Diễn biến tỷ lệ gây hại SKM Khảo sát đồng ruộng loại rau cải gồm Cải ngọt, cải xanh, xà lách xoong, cải bẹ dún, cải tùa xại, cải thìa cải củ vào thời điểm suốt giai đoạn sinh trưởng huyện/ quận thuộc tỉnh/Thành phố Vĩnh Long, Cần Thơ Hậu Giang cho thấy, nơng dân xử lý thuốc hóa học (Vertimec 1,8EC; Biotit 32B.FC; Match 50ND; Cyperan 10EC; Karate 2,5EC; Reasgant 3,6EC Rockest 55EC) để phòng trị định kỳ, SKM xuất gây hại với tỷ lệ gây hại loại rau cải giai đoạn khảo sát địa bàn không giống Trong cải xà lách xoong, cải tùa xại cải bẹ dún có tỷ lệ bị gây hại cao, trung bình thời điểm khảo sát 8,34%; 11,34% 7,40%, tương ứng huyện Bình Minh, Bình Tân Long Hồ (Vĩnh Long) loại cải cải cải xanh có tỷ lệ bị gây hại cao huyện Phong Điền, quận Bình Thủy quận Cái Răng (thành phố Cần Thơ) huyện Long Mỹ Vị thủy (Hậu Giang) (Hình 4.1) Về diễn biến tỷ lệ gây hại (%), bảy loại cải khảo sát loại gồm cải ngọt, cải xanh, cải bẹ dún, cải tùa xại, cải thìa cải củ có diễn biến tỷ lệ gây hại SKM gần tương tự nhau, bắt đầu diện thời điểm NSKG, gia tăng mạnh đến thời điểm 12 NSKG, sau giảm nhẹ đến thời điểm 18 NSKG (trừ cải tùa xại, cải cải bẹ dún tăng nhẹ), giảm mạnh thời điểm 30 NSKG Trong đó, gây hại SKM cải xà lách xoong tăng liên tục thời điểm 30 NSKG Kết khảo sát đồng ruộng cho thấy tỷ lệ gây hại SKM ruộng cải xanh, cải cải tùa xại (ở thời điểm từ 12-18 NSKG) cao so với ruộng cải lại Mặt khác, trừ cải xà lách xoong, giống cải khảo sát lại bị SKM công 30 NSKG không đáng kể (Hình 4.2) 4.2 Sự đa dạng di truyền quần thể SKM thu thập ĐBSCL dấu phân tử ISSR 4.2.1 Đặc điểm hình thái SKM thu thập ĐBSCL Kết thu mẫu SKM 13 tỉnh thuộc ĐBSCL 05 ký chủ (cải ngọt, cải xanh, cải tùa xại, cải thìa cải bắp), quan sát hình thái cho thấy thể kiểu sau: - Giai đoạn ấu trùng: Ấu trùng giống hình thái từ tuổi đến tuổi 4, khác kích thước, màu sắc, u lơng mảng lưng ngực thể Ấu trùng thon dài hình thoi, đầu mảng lưng ngực màu đen; có sọc, đường sọc lưng đường sọc xung quanh màu hồng chạy dọc theo thân mình; thể chia thành 13 đốt, đốt có u lơng phân bố bên (Hình 4.3: A) - Giai đoạn thành trùng: Thành trùng đực lồi bướm nhỏ có râu hình sợi chỉ, mắt kép mắt đơn, đơi cánh trước có màu vàng xám Cánh trước có vết xám gợn sóng, cách gốc cánh 1/3 chiều dài có đốm hình thận màu xám nhạt, phía cuối rìa cánh có hàng điểm đen nhỏ Cánh sau có màu nhạt Phần bụng đực thon dài (Hình 4.3: B) Thành trùng cái, giống thành trùng đực, khác đơi cánh có màu xám đậm có vết xám đen, đậm màu gợn sóng, phần bụng to tròn đốt bụng cuối nhọn, có kim đẻ trứng đặc điểm quan trọng để phân biệt thành trùng đực thành trùng (Hình 4.3: C) 4.2.2 Sự đa dạng di truyền sâu kéo màng thu thập ĐBSCL Sản phẩm khuyếch đại 10 mồi ISSR sử dụng phản ứng PCR cho 13 mẫu SKM thể Bảng 4.3 Các đoạn mồi sử dụng cho tỷ lệ băng đa hình cao Kết cho thấy tất 10 primer cho băng đa hình, nhiên có mẫu khơng cho sản phẩm khuyếch đại DNA Hai mồi ISSR-Bn2 ISSR-Bn6 cho số băng khuếch đại cao (16-18 băng/ mồi) hai mồi ISSR-Bn1 ISSR-Bn7 số băng khuếch đại (7 băng) Có tổng cộng 109/110 băng đa hình chiếm tỷ lệ 98,89%, trung bình 10,9 ± 3,81 băng đa hình cho thị Ngoại trừ mồi ISSR-Bb9 với tỉ lệ đa hình 88,89% mồi lại cho tỷ lệ đa hình 100% Kết cho thấy sử dụng 10 mồi ISSR đủ để đánh giá tính đa dạng di truyền 13 mẫu ấu trùng SKM hại cải thu thập ĐBSCL 10 4.3 Đặc điểm sinh học khả nhân nuôi phạm vi hẹp SKM 4.3.1 Ảnh hưởng thức ăn lên số đặc điểm sinh học SKM 4.3.1.1 Ảnh hưởng thức ăn lên thời gian phát triển Trong điều kiện phòng TN, ni loại thức ăn gồm cải ngọt, cải xanh, cải tùa xại cải thìa, thời gian vòng đời SKM trung bình 20,22 ngày Trong đó, thời gian phát triển trứng dài 2,22 ngày; Giai đoạn ấu trùng gồm tuổi dài 10,92 ngày (tuổi 1: 3,26 ngày; tuổi 2: 2,34 ngày; tuổi 3: 2,56 ngày; tuổi 4: 2,76 ngày); Giai đoạn nhộng dài 4,95 ngày giai đoạn từ vũ hóa đến thành trùng đẻ trứng dài 1,23 ngày (Bảng 4.5) Giữa loại thức ăn dùng để nhân ni, vòng đời SKM ngắn nuôi cải xanh (17,54 ngày) dài nuôi cải tùa xại (23,03 ngày) Vòng đời SKM ni cải cải thìa dài tương đương nhau, khơng khác biệt thống kê nhau, 19,64 ngày 20,64 ngày (Bảng 4.5) Kết chứng tỏ loại thức ăn có ảnh hưởng đến thời gian phát triển SKM Mặt khác, điều kiện phòng thí nghiệm SKM khơng hồn thành vòng đời ni cải bó xơi (họ Dền, Amaranthaceae) (Bảng 4.5) cho thấy H undalis lồi cơng chun tính họ cải (Brassicaceae) Bảng 4.5: Ảnh hưởng thức ăn khác vào thời kỳ ấu trùng đến vòng đời thời gian phát triển qua giai đoạn H undalis nhiệt độ phòng thí nghiệm (T0C= 30,20; H%= 68,10), ĐH Cửu Long Giai đoạn phát triển sinh trưởng Trứng Ấu trùng: - Tuổi - Tuổi - Tuổi - Tuổi Tiền nhộng Nhộng Thành trùng: - Trước đẻ - Đẻ kéo dài - Tuổi thọ TT - Tuổi thọ TT đực Vòng đời Thời gian phát triển (ngày) số giống cải Cải Cải xanh Cải tùa xại Cải thìa Cải bó xơi 2,33 a 1,83 b 2,22 a 2,50 a - CV (%) 22,41** 2,13 bc 2,37 2,73 a 4,00 a 1,00 b 4,80 b 2,03 c 2,17 2,43 ab 2,50 b 1,13 b 4,40 b 6,18 a 2,31 2,28 b 2,18 b 1,25 b 6,11 a 2,71 b 2,50 2,79 a 2,36 b 2,21 a 4,50 b 2,56bc - 25,53** 21,51ns 25,26** 25,52** 26,60** 18,84** 1,00 b 3,20 a 6,20 a 6,27 a 19,64 b 1,38 a 3,62 a 6,08 a 4,76 b 17,54 c 1,46 a 2,92 a 5,07 b 4,38 bc 23,03 a 1,07 b 2,14 b 4,43 b 4,00 c 20,64 b - 32,08** 25,15** 19,43** 11,21** 8,55** - Ghi chú: Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan (**): khác biệt %; (ns): không khác biệt CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê 4.3.1.2 Ảnh hưởng thức ăn lên tỷ lệ sống ấu trùng, tỷ lệ hóa nhộng khả đẻ trứng ngài SKM Bảng 4.6: Ảnh hưởng thức ăn khác đến tỷ lệ sống ấu trùng nhộng H undalis nhiệt độ phòng thí nghiệm (T0C= 30,2; H%= 68,10), ĐH Cửu Long Giai đoạn phát triển Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi Tiền nhộng Nhộng Cải 86,00 a 86,39 a 79,21 ab 74,17 a 80,79 ab 82,22 ab Tỷ lệ sống (%) số giống cải Cải xanh Cải tùa xại Cải thìa 88,33 a 80,50 a 74,17 a 92,61 a 77,19 ab 68,92 b 89,07 a 69,32 bc 60,63 c 76,98 a 57,37 ab 45,87 b 91,70 a 71,27 b 67,14 b 90,72 a 72,04 bc 62,50 c Cải bó xơi 7,62 b - - CV (%) 16,52** 12,49* 15,74* 22,42* 14,60* 14,61* Ghi chú: Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan (**): khác biệt %; (*): khác biệt 5% CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê 16 Kết trình bày Bảng 4.6 cho thấy tỷ lệ sống qua tuổi giai đoạn ấu trùng, tiền nhộng nhộng nuôi giống cải có khác Tỷ lệ sống ấu trùng tuổi nuôi từ loại thức ăn gồm cải xanh (88,33%), cải (86,0%), cải tùa xại (80,5%) cải thìa (74,17%) tương đương Chỉ có 7,62% ấu trùng tuổi sống sót ni cải bó xơi Ảnh hưởng thức ăn lên tỷ lệ sống sót ấu trùng bắt đầu thể tuổi 2, tỷ lệ sống ấu trùng tuổi nuôi cải xanh (92,61%), cải (86,39%) giống cải tùa xại (77,19%) không khác biệt nhau, tỷ lệ sống NT cải xanh cải cao khác biệt có ý nghĩa so với cải thìa (68,92%) Kết tương tự ghi nhận cho ấu trùng tuổi 3, tuổi tỷ lệ ấu trùng hóa nhộng chứng tỏ nguồn thức ăn có ảnh hưởng đến phát triển SKM Kết trình bày Bảng 4.7 cho thấy ngài H undalis vũ hóa từ ấu trùng ni cải xanh có số lượng trứng đẻ (247,33 trứng/con cái) cao khác biệt có ý nghĩa so với ngài vũ hóa từ ấu trùng ni cải (159,89 trứng/con cái), cải tùa xại (115,67 trứng/con cái) cải thìa (90,8 trứng/con cái) Số lượng trứng nghiệm thức cải cao khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức cải tùa xại cải thìa Kết cho thấy bên cạnh việc ảnh hưởng lên tỷ lệ sống ấu trùng tỷ lệ hóa nhộng, nguồn thức ăn cung cấp cho ấu trùng ảnh hưởng lên khả sinh sản ngài H undalis Giữa loại thức ăn khảo sát cải xanh phù hợp nhất, cải sau cải tùa xại cải thìa Bảng 4.7: Ảnh hưởng thức ăn khác vào thời kỳ ấu trùng đến khả đẻ trứng H undalis nhiệt độ phòng thí nghiệm (T0C= 30,20; H%= 68,10), ĐH Cửu Long Số trứng đẻ/ ngài Trung bình Độ lệch chuẩn (SD) Dao động Khả đẻ trứng (trứng/con cái) số giống cải Cải Cải xanh Cải tùa xại Cải thìa Cải bó xơi 159,87 b 247,33 a 115,67 c 90,80 c 38,06 35,13 38,35 42,49 102-234 176-314 76-201 34-167 CV (%) 23,21** Ghi chú: Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan (**): khác biệt % CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê 4.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến đặc điểm sinh học sâu kéo màng 4.3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến thời gian phát triển Bảng 4.8: Ảnh hưởng nhiệt độ khác đến vòng đời thời gian phát triển qua giai đoạn H undalis giống cải xanh Giai đoạn phát triển Trứng Ấu trùng: - Tuổi - T2 - T3 - T4 Tiền nhộng Nhộng Thành trùng: - Trước đẻ - Đẻ kéo dài - Tuổi thọ TT - Tuổi thọ TT đực Vòng đời Thời gian phát triển (ngày) điều kiện nhiệt độ khác 160C 200C 250C Nhiệt độ phòng (30,2 0C) 6,17 a 4,00 b 3,57 b 1,83 b CV (%) 45,44** 7,50 a 11,20 a 7,97 a 9,87 a 4,33 a 9,33 a 5,25 b 5,63 b 3,50 b 4,63 b 1,63 b 5,88 c 3,23 c 3,17 c 2,80 bc 4,30 b 1,03 c 6,60 b 2,03 d 2,17 d 2,43 c 2,50 c 1,13 c 4,40 d 24,39** 21,87** 29,86** 26,29** 28,76** 12,69** 5,29 a 2,80 b 10,29 a 9,63 a 61,64 a 1,83 b 2,67 b 6,50 b 6,00 b 32,17 b 1,50 b 2,93 b 6,57 b 6,65 b 25,14 c 1,38 b 3,62 a 6,08 b 4,67 c 17,54 d 24,69** 23,12** 10,85** 8,70** 7,30** Ghi chú: Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan (**): khác biệt % CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê Bảng 4.8 trình bày kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến thời gian phát triển SKM Mặc dù hồn thành vòng đời điều kiện nhiệt độ ni, nhiệt độ có ảnh 17 hưởng lớn đến thời gian phát triển H undalis Trong khoảng nhiệt độ từ 16oC - 30,2oC, nhiệt độ cao vòng đời H undalis ngắn khác biệt ý nghĩa điều kiện nhiệt độ nhân nuôi với Ở nhiệt độ 16oC tất giai đoạn phát triển SKM dài so với điều kiện nhiệt độ 20oC, 25oC 30,2oC 4.3.2.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến tỷ lệ sống ấu trùng nhộng SKM Kết trình bày Bảng 4.9 cho thấy tỷ lệ sống ấu trùng nhộng điều kiện nhiệt độ 25oC 30,2oC không khác biệt nhau, cao khác biệt có ý nghĩa so với điều kiện nhiệt độ 16oC 20oC (trừ ấu trùng tuổi nhộng) Tỷ lệ sống nhộng giảm nhiệt độ nuôi bị hạ xuống 16oC cho thấy nhộng đáp ứng với khoảng thay đổi nhiệt độ rộng so với ấu trùng Kết khảo sát cho thấy tỷ lệ sống ấu trùng (ở tất tuổi) nhộng điều kiện nhiệt độ 25oC 30,2oC không khác biệt Sự khác biệt kết ghi nhận ảnh hưởng yếu tố nhân nuôi khác thức ăn điều kiện tự nhiên phòng thí nghiệm Bảng 4.9: Ảnh hưởng nhiệt độ khác đến tỷ lệ sống sót ấu trùng nhộng cải xanh Giai đoạn phát triển Ấu trùng: - Tuổi - Tuổi - Tuổi - Tuổi Tiền nhộng Nhộng Tỷ lệ sống (%) điều kiện nhiệt độ khác 16 C 200C 250C Nhiệt độ phòng (30,2 0C) 59,52 b 63,05 c 65,79 b 46,11 c 69,65 52,38 b 68,67 b 75,83 b 73,50 ab 58,45 b 81,81 71,04 a 81,33 a 87,70 a 81,32 ab 74,48 a 92,38 78,33 a 88,33 a 92,61 a 89,07 a 76,97 a 91,70 90,72 a CV (%) 11,83** 10,94** 14,50* 12,51** 10,41ns 15,58** Ghi chú: Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan (**): khác biệt %; (*): khác biệt 5%; (ns): không khác biệt CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê 4.3.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến số lượng trứng đẻ tỷ lệ trứng nở SKM Sự thay đổi điều kiện nhiệt độ ni có ảnh hưởng lên thời gian đẻ trứng số lượng trứng đẻ thành trùng SKM (Bảng 4.10) Ở nhiệt độ 16oC, thành trùng SKM đẻ ngày với số lượng trứng đẻ 97,33 trứng/con cái, thấp điều kiện nhiệt độ khảo sát lại Mặc dù có thời gian đẻ trứng ngày, số lượng trứng đẻ thành trùng SKM nuôi điều kiện nhiệt độ 20oC (144,29 trứng/con cái) thấp có ý nghĩa so với số lượng trứng đẻ thành trùng SKM nuôi điều kiện nhiệt độ 25oC (203,08 trứng/con cái) Thành trùng SKM nuôi điều kiện nhiệt độ 30,2oC có thời gian đẻ trứng kéo dài ngày với số lượng trứng đẻ cao (247,33 trứng/con cái) so với điều kiện nhiệt độ khảo sát lại Bảng 4.10: Ảnh hưởng nhiệt độ khác đến nhịp điệu đẻ trứng ngài H undalis Ngày đẻ trứng Tổng (trứng/con cái) Số trứng (trứng/ngày) điều kiện nhiệt độ khác 160C 200C 250C Nhiệt độ phòng (30,2 0C) 38,00 b 49,36 b 92,85 a 88,47 a 45,67 56,14 52,77 59,33 17,57 c 44,91 ab 38,75 b 55,33 a 0,00 b 24,50 a 25,64 a 35,46 a 0,00 b 0,00 b 0,00 b 18,36 a 97,33 d 144,29 c 203,08 b 247,33 a CV (%) 39,01** 42,54ns 37,36** 53,16** 13,05** 26,39** Ghi chú: Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống không khác biệt qua kiểm định Duncan (**): khác biệt %;(ns): không khác biệt CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê Tương tự số lượng trứng đẻ, nhiệt độ ảnh hưởng lên tỷ lệ trứng nở Kết Bảng 4.11 cho thấy tỷ lệ trứng nở mức nhiệt độ khảo sát khác khác Nhiệt độ ủ trứng giảm tỷ lệ trứng nở thấp ngược lại Cụ thể, ủ trứng nhiệt 18 độ phòng (30,20C) cho tỷ lệ trứng nở cao (92,08%), 250C 74,16%, 200C 51,00% thấp 160C 33,66% Bảng 4.11: Ảnh hưởng nhiệt độ khác đến tỷ lệ nở trứng H undalis Tỷ lệ trứng nở Trung bình Độ lệch chuẩn (SD) Dao động 16 33,66 d 12,98 21,67-55,0 Tỷ lệ trứng nở (%) nhiệt độ khác 20 25 Nhiệt độ phòng (30,2 0C) 51,00 c 74,16 b 92,08 a 8,62 8,87 5,33 40,0-63,33 65,0-83,33 86,67-96,67 CV (%) 15,89** Ghi chú: (**): khác biệt % Trong hàng trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan CV (%): giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê Kết khảo sát thí nghiệm cho thấy nhiệt độ ảnh hưởng lên thời gian phát triển, tỷ lệ chết ấu trùng nhộng, số lượng trứng đẻ trưởng thành tỷ lệ nở trứng Giữa điều kiện nhiệt độ khảo sát 30,20C thích hợp cho phát triển để nhân nuôi mật số H undalis phục vụ cho công tác nghiên cứu khoa học 4.3.3 Khả nhân nuôi phạm vi hẹp SKM từ giai đoạn thành trùng 4.3.3.1 Khả sinh sản ngài sâu kéo màng qua hệ nhân nuôi Bảng 4.12 cho thấy số lượng trứng ngài lồi H undalis ni cá thể điều kiện phòng thí nghiệm qua hệ thu không Điều cho thấy qua nhân nuôi hệ liên tục số lượng trứng hệ F1 cao hệ lại, nhiên giống mặt thống kê Cụ thể hệ F1 thu số trứng 247,93 trứng, hệ F2 thấp hơn, tương ứng 234,33 trứng hệ F3 tương ứng 221,47 trứng Bảng 4.12: Khả sinh sản trưởng thành H undalis qua hệ nhân ni điều kiện phòng thí nghiệm Thế hệ (F) F1 F2 F3 Ý nghĩa thống kê CV% Khả sinh sản trưởng thành H undalis Trứng (trứng/trưởng thành cái) 247,93 234,33 221,47 ns 13,82 Ghi chú: Trong cột trung bình có chữ theo sau giống khác biệt khơng có ý nghĩa qua kiểm định Duncan (ns): khác biệt khơng có ý nghĩa CV%: giá trị độ biến động mức ý nghĩa thống kê 4.3.3.4 Khả phát triển quần thể loài SKM Kết theo dõi khả phát triển quần thể ngài H undalis điều kiện phòng thí nghiệm thức ăn cải xanh thể cho thấy khả sống sức sinh sản loài cao Tỷ lệ sống sót ngài H undalis 16 ngày tuổi đạt 100%, 80%, 86%, tương ứng với hệ F1, F2 F3 sau giảm dần Ngài H undalis bắt đầu đẻ trứng sau 12 - 13 ngày tuổi, đẻ kéo dài đạt đỉnh cao vào ngày thứ 13, 14 12, tương ứng với hệ F1, F2 F3 Tổng số ngài H undalis sinh từ ngài H undalis mẹ lớn, biến động khoảng 33,07 - 42,13 (Bảng 4.13) Bảng 4.14 cho thấy với điều kiện thức ăn phù hợp, H undalis ni đọt non cải xanh có hệ số nhân hệ cao dao động khoảng 31,12 - 38,73 (trung bình 33,80) Hệ số nhân loài qua hệ ni có khác nhau, theo hệ thứ (T0C = 31,02; H% = 70,67) đạt 31,12, hệ thứ (T0C = 30,67; H% = 68,95) đạt 38,73 Kết số tăng tự nhiên H undalis qua hệ nhân nuôi thu cao, dao động 0,56 – 0,57 (trung bình 0,563) Kết đánh giá cho thấy lồi H undalis có số tăng tự nhiên cao có khả phát triển nhanh mật số quần thể gặp điều kiện mơi trường thích hợp 19 Bảng 4.13: Khả phát triển quần thể H undalis qua hệ nhân nuôi phòng thí nghiệm Ngày tuổi x - 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Tổng T0C trung bình H% trung bình lx 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 0,66 0,40 0,13 Thế hệ F1 mx 10,40 9,50 7,80 6,30 5,70 2,43 0 42,13 30,67 68,95 R0 10,40 9,50 7,80 6,30 3,76 0,97 0 38,73 Thế hệ F2 lx mx R0 1,00 0 1,00 7,50 7,50 1,00 8,10 8,10 1,00 7,80 7,80 0,8 6,10 4,88 0,66 3,40 2,24 0,46 1,70 0,78 0,26 1,0 0,26 0,067 0 0 35,60 31,56 30,46 69,50 lx 1,00 1,00 1,00 1,00 0,86 0,66 0,33 0,13 Thế hệ F3 mx 9,10 6,30 6,90 4,20 3,30 2,10 1,17 0 33,07 31,02 70,67 R0 9,10 6,30 6,90 4,20 2,84 1,39 0,39 0 31,12 Bảng 4.14: Một số tiêu sinh học quần thể ngài H undalis qua hệ nhân ni phòng thí nghiệm Chỉ tiêu Hệ số nhân hệ (R0) Chỉ số tăng tự nhiên (r) Trung bình ngày tuổi (x) T0C trung bình H% trung bình Thế hệ F1 38,73 0,56 6,47 ± 0,74 30,67 68,95 Thế hệ F2 31,56 0,57 6,07 ± 0,96 30,46 69,50 Thế hệ F3 31,12 0,56 6,13 ± 0,83 31,02 70,67 Trung bình 33,80 0,563 4.4 Pheromone giới tính SKM 4.4.1 Xác định thành phần hóa học 4.4.1.1 Phân tích GC-EAD Phân tích GC-EAD mẫu pheromone ly trích từ 1,0 tuyến pheromone (1,0 FE) ngài H undalis chưa giao phối (virgin female) cho thấy đáp ứng ghi nhận từ đầu dò điện râu (EAD) thời gian lưu (tR) 15,50 phút (thành phần 1; 1) với cường độ đáp ứng 105 µV,16,05 phút (thành phần 2; 2) với cường độ đáp ứng 192 µV, 17,65 phút (thành phần 3; 3) với cường độ đáp ứng 320 µV 18,78 phút (thành phần 4; 4) với cường độ đáp ứng 99 µV (Hình 4.5) Điều chứng tỏ râu đầu ngài H undalis đực đáp ứng với thành phần pheromone mẫu ly trích Hay nói cách khác pheromone giới tính ngài H undalis bao gồm thành phần 4.4.1.2 Phân tích sắc ký khí – Khối phổ (GC – MS) mẫu pheromone ly trích Kết phân tích GC-MS mẫu pheromone ly trích (20 FE) ngài H undalis trình bày Hình 4.6 Bốn thành phần cho đáp ứng EAG phân tích GC-EAD diện biểu đồ sắc ký tổng ion (Total Ion Chromatogram) phân tích GC-MS thời gian lưu gồm 13,49 phút, 14,36 phút, 15,99 phút 16,98 phút với tỷ lệ tương ứng 3:10:0,5:1 4.4.1.3 Mẫu ly trích qua dẫn xuất với DMDS Hình 4.7 trình bày kết phân tích GC-MS mẫu pheromone ly trích (20 tuyến pheromone) qua dẫn xuất với DMDS Thành phần qua dẫn xuất DMDS diện biểu đồ sắc ký tổng ion thời gian lưu 30,68 phút, thời gian lưu thành phần qua dẫn xuất DMDS 29,79 phút 20 - Phổ khối lượng thành phần qua dẫn xuất DMDS với ion phân tử M+ m/z 332 ion phân rã m/z 117 215 chứng tỏ vị trí nối đơi phân tử thành phần nằm carbon thứ 11 mạch (C11) hợp chất hexadecenal - Phổ khối lượng thành phần qua dẫn xuất DMDS với ion phân tử M+ m/z 348 ion phân rã m/z 199 259 chứng tỏ vị trí nối đơi phân tử thành phần nằm C11 hợp chất tetradecenyl acetate Các thành phần thành phần phân tử có chứa liên hợp hai nối đơi nên dẫn xuất DMDS cho phổ khối lượng với ion phân rã khơng đặc trưng, vị trí nối đơi phân tử thành phần xác định thơng qua giải đốn phổ khối lượng thành phần pheromone không qua dẫn xuất để làm sở cho việc định chọn chất chuẩn tổng hợp Hình 4.5: Biểu đồ Sắc ký khí - Điện râu đầu mẫu ly trích từ tuyến pheromone ngài H undalis chưa giao phối Hình 4.6: Kết phân tích GC-MS mẫu pheromone ly trích ngài H.undalis (20FE) 21 Hình 4.7: Biểu đồ sắc ký tổng ion (trên) phổ khối lượng thành phần pheromone ngài H undalis qua dẫn xuất với DMDS 4.4.2 Phân tích mẫu chuẩn tổng hợp Từ kết giải đoán phổ khối lượng thành phần pheromone ghi nhận phân tích mẫu pheromone ly trích thơ qua dẫn xuất với DMDS, hợp chất Z11-14:OAc, Z11-16:Ald, E11,E13-16:Ald E11,E13-16:OH chọn làm chất chuẩn để kiểm định lại kết giải đốn 4.4.2.1 Phân tích Sắc ký khí – Điện râu đầu (GC-EAD) Kết phân tích mẫu chuẩn tổng hợp (10 ng thành phần) cho thấy hợp chất Z11-14:OAc, Z11-16:Ald, E11,E13-16:Ald E11,E13-16:OH cho đáp ứng điện râu có thời gian lưu trùng khớp với thành phần 1, 2, 4, tương ứng (Hình 4.8) Điều chứng tỏ thành phần 1, 2, hợp chất Z11-14:OAc, Z11-16:Ald, E11,E1316:Ald E11,E13-16:OH Hình 4.8: Phân tích GC-EAD mẫu chất chuẩn tổng hợp Z11-14:OAc, Z11-16:Ald, E11,E13-16:Ald E11,E13-16:OH ngài H undalis 22 4.4.2.2 Phân tích sắc ký khí – Khối phổ (GC – MS) Tương tự phân tích GC-EAD, phân tích GC-MS mẫu chất chuẩn tổng hợp cho kết thời gian lưu phổ khối lượng hợp chất Z11-14:OAc, Z1116:Ald, E11,E13-16:Ald E11,E13-16:OH (Hình 4.9) trùng khớp với thời gian lưu phổ khối lượng thành phần pheromone 1, 2, Kết lần khẳng định thành phần 1, 2, hợp chất Z11-14:OAc, Z11-16:Ald, E11,E13-16:Ald E11,E13-16:OH thành phần pheromone giới tính SKM Hình 4.9: Kết phân tích GC-MS mẫu chuẩn tổng hơp 4.5 Tổng hợp hợp chất (11E,13E)-11,13-hexadecadienal Hợp chất (11E,13E)-11,13-hexadecadienal (E11,E13-16:Ald) tổng hợp thành công đường tổng hợp sử dụng phản ứng Wittig với hợp chất 11-bromo-1-undecanol thương mại làm chất phản ứng ban đầu (Hình 4.10) Nhóm chức OH 11-bromo-1undecanol bảo vệ cách chuyển thành MOM-ether (năng suất phản ứng 82,6%) MOM-ether đun với PPh3 90oC 72 giờ, sau kết hợp với hợp chất (E)-2-hexenal phản ứng Wittig, dung môi THF tác động ba zơ n-butyl Lithium, thu hỗn hợp hợp chất MOM-ether (11E,13Z)-11,13hexadecadien-1-ol (11E,13E)-11,13-hexadecadien-1-ol (năng suất phản ứng 41,2%) Hỗn hợp hợp MOM-ether khấy dung dịch 0,5N HCl methanol để loại bỏ bảo vệ nhóm chức OH MOM-ether (năng suất phản ứng 86,4%) Sau phân tách tinh lọc cột sắc ký mở, sử dụng hỗn hợp 15% nitrat bạc silica gel làm pha tĩnh, hợp chất (11E,13E)-11,13-hexadecadien-1-ol thu oxy hóa phản ứng với chất oxy hóa PCC, thu hợp chất (11E,13E)-11,13hexadecadienal với suất phản ứng 70,3% a HO Br MOMO MOMO b 4a c MOMO Br PPh3Br MOMO 4b O d e f HO H E11,E13-16:Ald Hình 4.10: Quy trình tổng hợp hợp chất E11,E13-16: Ald a, DMM/LiBr/p-TsOH/24 (85,7%); b, PPh3/90oC/72 giờ; c, (E)-2-hexenal/n-BuLi/THF; d, 0,5N HCl/methanol/24 giờ; e, 15% AgNO3; f, PCC/CH2Cl2 23 4.6 Đánh giá khả hấp dẫn mồi pheromone giới tính tổng hợp SKM điều kiện đồng Một cách mong đợi, kết trình bày Bảng 4.15 cho thấy số lượng ngài H undalis đực vào bẫy nghiệm thức có mồi hỗn hợp Z11-14:OAc (0,15 mg), Z11-16:Ald (0,15 mg), E11,E13-16:Ald (0,35 mg) T23 (0,05 mg) (nghiệm thức E-4, 56,33 con/bẫy/tuần) khác biệt thống kê với đối chứng dương (nghiệm thức E-6, 42,89 con/bẫy/tuần) đối chứng âm Mặt khác, nghiệm thức đặt với mồi gồm thành phần có số lượng ngài đực vào bẫy không khác biệt so với đối chứng âm cho thấy pheromone H undalis hỗn hợp Bảng 4.15: Số lượng thành trùng H undalis đực bị hấp dẫn thí nghiệm ruộng cải xanh huyện Long Hồ, Vĩnh Long, từ 28/3/2017 đến ngày 30/4/2017, T0C = 29,56; H% = 80,3 Nghiệm thức E-1 E-2 E-3 E-4 E-5 E-6 CV (%) Mức ý nghĩa Z11-14: OAc 0,15 0,15 0,15 Thành phần (mg/tuýp) E11 E13-16: Z11-16:Ald Ald 0,35 0,15 0,35 0,15 0,35 0,15 0,35 10 µl n-hexane ngài H.undalis chưa bắt cặp T23 0,05 0,05 0,05 Ngài/bẫy/ tuần (Tổng số con/3 tuần) 0,22 c (0,67) 0,11 c (0,33) 2,56 c (7,67) 56,33 a (169) 0,00 c (0) 42,89 b (128,67) 16,07 ** Ghi chú: (**) khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua thống kê mức ý nghĩa 5% kiểm định Duncan thành phần gồm Z11-14:OAc, Z11-16:Ald, E11,E13-16:Ald T23 giữ vai trò thành phần hoạt động Kết nghiên cứu cho thấy bên cạnh hợp chất E11,E13-16:Ald, ngài H undalis tiết hợp chất Z11-14:OAc Z11-16:Ald với hydrocarbon biểu bì (hợp chất T23) thành phần pheromone giới tính 4.7 Ảnh hưởng số hóa chất tín hiệu đến khả bắt cặp đẻ trứng SKM 4.7.1 Ảnh hưởng số hóa chất tín hiệu đến khả bắt cặp ngài SKM Một số hóa chất tín hiệu khảo sát, tinh dầu sả; tinh dầu tỏi hợp chất E10-15 có hiệu quấy rối bắt cặp ngài đực H undalis, khác biệt ý nghĩa thống kê với nghiệm thức sử dụng ngài H undalis chưa bắt cặp dung môi n-hexane điều kiện nhà lưới đồng (Bảng 4.16) Bảng 4.16: Tổng số ngài đực H.undalis vào bẫy hiệu quấy rối bắt cặp số hóa chất tín hiệu (T0C = 28,7, H% = 78,25) Nghiệm thức 2♀ + E10-15 2♀ + Tinh dầu sả 2♀ + Tinh dầu tỏi 2♀ + n-hexane Ngài chưa bắt cặp (2♀) CV (%) Ý nghĩa thống kê Nhà lưới Tổng TT đực Hiệu vào bẫy quấy rối (con/bẫy/tuần) (%) 1,00 b 92,86 a 0,67 b 95,05 a 0,33 b 97,62 a 13,00 a 7,33 b 13,67 a 0,00 b 17,45 8,96 ** ** Ngoài đồng Tổng TT đực Hiệu quấy rối vào bẫy (%) (con/bẫy/tuần) 5,33 b 87,89 a 4,67 b 92,16 a 5,67 b 91,29 a 55,33 a 6,15 b 54,33 a 0,00 b 30,88 15,10 ** ** Ghi chú: (**): khác biệt mức ý nghĩa 1% Trong cột trung bình theo sau có chữ giống khơng khác biệt qua kiểm định Duncan 24 Trong điều kiện nhà lưới: số lượng ngài H.undalis đực vào bẫy nghiệm thức E1015:Ald (1,00 con/bẫy/tuần), tinh dầu sả (0,67 con/bẫy/tuần) tinh dầu tỏi (0,33 con/bẫy/tuần) thấp khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng dương sử dụng ngài H undalis chưa bắt cặp (13,67 con/bẫy/tuần) Số lượng ngài đực vào bẫy nghiệm thức đối chứng dương nghiệm thức n-hexane (13,00 con/bẫy/tuần) không khác biệt ý nghĩa với nhau, chứng tỏ n-hexane không ảnh hưởng đến hiệu hấp dẫn Kết cho thấy, E10-15:Ald, tinh dầu sả tinh dầu tỏi quấy rối làm ảnh hưởng đến khả tìm ngài H undalis để bắt cặp ngài đực với hiệu quấy rối 92,86%, 95,05% 97,62% (Bảng 4.16) Điều kiện đồng: kết tương tự thí nghiệm nhà lưới, hợp chất E10-15:Ald, tinh dầu sả tinh dầu tỏi có hiệu tốt quấy rối tín hiệu bắt cặp ngài đực cao Số lượng ngài H undalis đực vào bẫy E10-15:Ald (5,33 con/bẫy/tuần), tinh dầu sả (4,67 con/bẫy/tuần) tinh dầu tỏi (5,67 con/bẫy/tuần) thấp khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức đối chứng âm n-hexane (55,33 con/bẫy/tuần) nghiệm thức đối chứng dương đặt ngài chưa giao phối (54,33 con/bẫy/tuần) (Bảng 4.16) Hiệu quấy rối E10-15:Ald, tinh dầu sả tinh dầu tỏi đạt 87,89%, 92,16% 91,29% Hiệu quấy rối điều kiện ngồi đồng có giảm so với nhà lưới, nhiên không đáng kể 4.7.2 Ảnh hưởng số hóa chất tín hiệu đến khả đẻ trứng ngài SKM Trong điều kiện nhà lưới: kết trình bày Bảng 4.17, số trứng ngài H undalis đẻ cải nghiệm thức có thành phần E10-15:Ald (14,33 trứng), tinh dầu sả (5,00 trứng) tinh dầu tỏi (1,00 trứng) khác biệt có ý nghĩa so với hai nghiệm thức n-hexane (220,67 trứng) nghiệm thức cặp ngài H.undalis đực/cái = (222,67 trứng) Điều cho thấy thành phần E10-15:Ald, tinh dầu sả tinh dầu tỏi có ảnh hưởng đến khả tìm đến ký chủ để đẻ trứng ngài H undalis Hiệu quấy rối đẻ trứng E1015:Ald, tinh dầu sả tinh dầu tỏi tương ứng 93,40%; 97,66% 99,58% Mặt khác, số trứng ngài đẻ cải nghiệm thức có n-hexane và nghiệm thức đối chứng (3 ngài đực + ngài khơng có chất quấy rối) khơng có khác biệt ý nghĩa nhau, chứng tỏ n-hexane không ảnh hưởng đến khả quấy rối đẻ trứng ngài H undalis Bảng 4.17: Tổng số trứng ngài H undalis đẻ hiệu quấy rối đẻ trứng số hóa chất tín hiệu A Nhà lưới Ngoài đồng(1) C Nghiệm thức (3♀ + 3♂) + E10-15 (3♀ + 3♂) + Tinh dầu sả (3♀ + 3♂) + Tinh dầu tỏi ( 3♀ + 3♂) + n-hexane cặp ngài đực (3♀ + 3♂) CV (%) Ý nghĩa thống kê Tổng số trứng (trứng/5 chậu cải) 14,33 b 5,00 b 1,00 b 220,67 a 222,67 a 12,68 ** Hiệu quấy rối (%) Tổng số trứng (trứng/2 m2 cải) Hiệu quấy rối (%) 93,40 b 97,66 a 99,58 a 0,92 c 0,00 c 2,81 ** 1,00 b 1,33 b 1,33 b 39,33 a 38,67 a 25,25 ** 97,62 a 96,83 a 96,33 a - 0,84 b 0,00 b 8,38 ** Ghi chú: (**): khác biệt mức ý nghĩa 1% Trong cột trung bình theo sau có chữ giống khơng khác biệt qua kiểm định Ducan (1)Ngồi đồng: Các nghiệm thức khảo sát khơng sử dụng 3♀ + 3♂ Điều kiện đồng: cho hiệu quấy rối đẻ trứng E10-15:Ald, tinh dầu sả tinh dầu tỏi cao, 97,62%; 96,83% 96,33%; khác biệt có ý nghĩa thống kê so với hai nghiệm thức sử dụng dung môi n-hexane đối chứng (để trống không xử lý) Kết Bảng 4.17 cho thấy số trứng ngài đẻ tổng điểm khảo sát (tướng ứng với 6,0 m2 cải) nghiệm thức E10-15:Ald (1,00 trứng/2,0 m2 cải), tinh dầu sả (1,33 trứng/2,0 m2 cải ) tinh dầu tỏi (1,33 trứng/2,0 m2 cải) khác biệt có ý nghĩa thống kê so 25 với nghiệm thức n-hexane (39,33 trứng/2,0 m2 cải) nghiệm thức đối chứng (38,67 trứng/2,0 m2 cải) Mặc dù E10-15 có hiệu quấy rối tín hiệu bắt cặp đẻ trứng ngài H undalis giống mặt thống kê với tinh dầu sả tỏi, việc tổng hợp E10-15:Ald khó khăn nguyên liệu khan so với sả tỏi 4.8 Nghiên cứu ứng dụng hóa chất tín hiệu để quản lý gây hại SKM 4.8.1 Hiệu tinh dầu sả tinh dầu tỏi việc quản lý gây hại SKM 4.8.2.1 Ảnh hưởng tinh dầu sả đến đẻ trứng ngài SKM điều kiện đồng Bảng 4.18 cho thấy thời điểm ghi nhận số lượng trứng đẻ SKM cải khoảng cách m m tính từ vị trí đặt túi tinh dầu sả khơng khác biệt nhau, thấp có ý nghĩa so với khoảng cách m Kết chứng tỏ khoảng cách hiệu túi tinh dầu sả (2 ml) SKM m diện tích áp dụng hiệu túi tinh dầu sả khoảng 64 m2 4.8.2.2 Ảnh hưởng tinh dầu tỏi đến đẻ trứng ngài SKM điều kiện đồng Kết tương tự tinh dầu sả, sau tuần thí nghiệm cho thấy, khoảng cách khảo sát để đánh giá ảnh hưởng dầu tỏi đến việc quấy rối đẻ trứng ngài H undalis cho kết khác biệt ý nghĩa thống kê Khoảng cách m m có số trứng cao từ tuần đến tuần 3, tương ứng 10,67; 15,00; 6,67 trứng/2 m2 cải cho khoảng cách m 10,67; 13,67; 7,00 trứng/2 m2 cải cho khoảng cách m, khác biệt thống kê với khoảng cách lại (< 6,00 trứng/ 2m2 cải) Kết cho thấy, túi Plastic quay kéo chứa ml tinh dầu tỏi tuần thay lần có hiệu quấy rối đẻ trứng ngài H undalis khoảng cách trái m, phải m, m, m, m, m chưa có khả quấy rối khoảng cách m m so với vị trí nói Số trứng ngài H undalis đẻ nhiều vào tuần 2, tương đương 15-20 NSKG cải giai đoạn ưa thích ngài tìm ký chủ để đẻ Thời điểm trước thí nghiệm, số trứng khảo sát khoảng cách giống mặt thống kê, số trứng dao động 2,00-4,67 trứng/2m2 cải (Bảng 4.19) Bảng 4.18: Ảnh hưởng tinh dầu sả đến đẻ trứng ngài H.undalis điều kiện đồng Khoảng cách khảo sát so với túi plastic dầu sả Cách trái theo hướng Tây 2m Cách phải theo hướng Đông 2m Cách theo hướng Bắc 2m Cách theo hướng Bắc 4m Cách theo hướng Bắc 6m Cách theo hướng Nam 2m Cách theo hướng Nam 4m Cách theo hướng Nam 6m CV (%) Mức ý nghĩa Số trứng ngài H undalis tuần sau treo Trước thí nghiệm túi Plastic dầu sả (Trứng/ 2m2 cải) (Trứng/ m2 cải) Tuần Tuần Tuần Tổng 3,00 1,67 2,33 0,67 1,67 2,00 5,00 4,33 84,44 ns 1,67c 2,67bc 2,00c 1,67c 9,00a 2,67bc 3,33bc 7,67ab 42,55 * 4,00b 3,33b 5,00b 4,00b 14,33a 4,33b 5,00b 12,67a 36,05 * 2,00b 1,33b 1,67b 2,33b 6,33a 1,33b 2,33b 6,67a 37,52 ** 7,67b 7,33b 8,67b 8,00b 29,67a 8,33b 10,67b 27,00a 15,76 ** Ghi chú: Trong cột trung bình theo sau có chữ giống không khác biệt qua kiểm định Ducan Số liệu chuyển đổi sang Log(X+1) trước phân tích thống kê (*): Khác biệt mức ý nghĩa 5%; (**): Khác biệt mức ý nghĩa 1%; (ns): không khác biệt Bảng 4.19: Ảnh hưởng tinh dầu tỏi đến đẻ trứng ngài H.undalis điều kiện đồng 26 Khoảng cách khảo sát so với túi plastic dầu tỏi Trước thí nghiệm (Trứng/ 2m2 cải) Cách trái theo hướng Tây 2m Cách phải theo hướng Đông 2m Cách theo hướng Bắc 2m Cách theo hướng Bắc 4m Cách theo hướng Bắc 6m Cách theo hướng Nam 2m Cách theo hướng Nam 4m Cách theo hướng Nam 6m CV (%) Mức ý nghĩa 2,00 4,00 3,67 2,33 2,67 3,67 3,33 4,67 57,72 ns Số trứng ngài H undalis tuần sau treo túi Plastic dầu tỏi (Trứng/ m2 cải) Tuần Tuần Tuần Tổng 2,00b 3,00b 2,00b 7,00b 3,00b 1,67b 2,00b 6,67b 3,00b 6,00b 2,33b 11,33b 2,67b 4,33b 2,33b 9,33b 10,67a 15,00a 6,67a 32,33a 3,33b 4,67b 1,67b 9,67b 4,00b 5,33b 3,00b 12,33b 10,67a 13,67a 7,00a 31,33a 16,59 34,64 29,83 11,62 * ** ** ** Ghi chú: Trong cột trung bình theo sau có chữ giống khơng khác biệt qua kiểm định Ducan Số liệu chuyển đổi sang Log(X+1) trước phân tích thống kê (*): Khác biệt mức ý nghĩa 5%; (**): Khác biệt mức ý nghĩa 1%; (ns): không khác biệt Tóm lại, kết xác định khoảng cách treo tinh dầu sả tỏi việc quấy rối đẻ trứng H undalis cho thấy khoảng cách cách trái m, phải m, m, m, m, m tinh dầu sả tỏi cho hiệu quấy rối cao, khoảng cách cách m cách m so với túi treo dầu sả hay tỏi cho hiệu quấy rối thấp, khác biệt thống kê với khoảng cách nói 4.8.2 Số trứng ngài SKM ruộng canh tác theo nông hộ (quản lý SKM thuốc bảo vệ thực vật) Bảng 4.20: Số lượng trứng ngài H undalis ruộng canh tác theo nông hộ (phòng trị H undalis thuốc hóa học) điều kiện đồng Khoảng cách khảo sát Cách trái theo hướng Tây 2m Cách phải theo hướng Đông 2m Cách theo hướng Bắc 2m Cách theo hướng Bắc 4m Cách theo hướng Bắc 6m Cách theo hướng Nam 2m Cách theo hướng Nam 4m Cách theo hướng Nam 6m CV(%) Mức ý nghĩa Số trứng ngài H undalis tuần (Trứng/ 2m2 cải) Tuần 18,00 15,50 12,00 10,00 17,50 12,50 16,50 17,50 39,06 ns Tuần 133,50 29,50 24,00 14,50 20,00 6,50 23,50 19,50 27,06 ns Tuần 2,00 2,50 1,50 1,50 3,50 2,00 4,00 2,00 10,75 ns Tổng 153,50 47,50 37,50 26,00 41,00 21,00 44,00 39,00 17,85 ns Ghi chú: (ns): khác biệt khơng có ý nghĩa qua kiểm định Ducan Số liệu tuần chuyển đổi sang Log(X+1) trước phân tích thống kê Sau tuần khảo sát ruộng canh tác nông hộ suốt vụ cải (4 tuần), nông hộ phun thuốc trừ sâu bọ nhảy gây hại lần, phun số loại thuốc Selecron 500EC, Đại bàng đỏ 700EC, Rockest 555EC, Karate 2.5EC, Cyperan 10EC, Reasgant 3.6EC, Reasgant 5EC, Acimetin 1.8EC, Rholam super 50SG, Math 50EC, Regent 800WG, Atapron 5SC Như nông hộ canh tác cải phun thuốc trung bình lần/tuần nhóm rau ăn đến thời điểm thu hoạch phun thêm thuốc dưỡng Các khoảng cách khảo sát khác biệt ý nghĩa thống kê, dao động từ 1,50- 133,50 trứng/2 m2 cải, nơng dân phun thuốc 27 lên liếp Mặc dù nông dân phun thuốc phòng trị H undalis số trứng xuất ruộng nơng dân phun thuốc BVTV thấy ấu trùng H undalis xuất Trong tuần khảo sát tuần thứ có số trứng cao thấp tuần thứ Vì tuần thứ giai đoạn phát triển cải (15-20 ngày tuổi) nên ngài ưa thích đẻ trứng; tuần thứ giai đoạn cải lớn gần thu hoạch nên ngài khơng thích đẻ trứng (Bảng 4.20) 4.8.3 Số trứng ngài SKM ruộng canh tác theo nông hộ không phun thuốc bảo vệ thực vật Sau tuần khảo sát ruộng không phun thuốc BVTV, khoảng cách khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê khơng phun thuốc phòng trị nên H undalis có nhiều lựa chọn để công gây hại ruộng cải, mật số H undalis cao làm chết cải, suất hoàn toàn, hàng tuần số trứng ghi nhận cắt cải mang khỏi ruộng thí nghiệm Số lượng trứng giảm tuần ngài ưa thích đẻ trứng giai đoạn non giảm dần cải lớn gần thu hoạch Trong đó, khoảng cách theo hướng Nam m có tổng số trứng cao (329,67 trứng/2 m2) thấp cách trái theo hướng Tây m (198,33 trứng/2 m2) (Bảng 4.21) 4.8.4 Hiệu tinh dầu sả, tinh dầu tỏi việc quản lý ngài SKM điều kiện đồng Kết Bảng 4.22 cho thấy, khoảng cách khảo sát số trứng ruộng thí nghiệm ruộng quản lý tinh dầu sả tỏi cho hiệu cao khác biệt thống kê với ruộng canh tác theo nông hộ ruộng không phun thuốc BVTV Theo đó, hiệu quản lý trung bình tinh dầu sả, tỏi ruộng canh tác theo nông hộ tương ứng 92,39%; 87,56% 66,52% so với ruộng không phun thuốc BVTV Kết cho thấy hiệu hóa chất tín hiệu, tinh dầu sả tinh dầu tỏi có hiệu cao việc quản lý gây hại H undalis gây hại quan trọng rau cải Bảng 4.21: Số lượng trứng ngài H undalis ruộng khơng phòng trị H undalis (không phun thuốc BVTV) điều kiện đồng Khoảng cách khảo sát Số trứng ngài H undalis tuần (Trứng/ 2m2 cải) Cách trái theo hướng Tây 2m Cách phải theo hướng Đông 2m Cách theo hướng Bắc 2m Cách theo hướng Bắc 4m Cách theo hướng Bắc 6m Cách theo hướng Nam 2m Cách theo hướng Nam 4m Cách theo hướng Nam 6m CV(%) Mức ý nghĩa Tuần 63,33 83,33 112,00 97,00 99,67 161,33 102,33 107,00 66,10 ns Tuần 92,67 128,67 86,33 68,33 114,33 147,00 84,00 24,67 71,04 ns Tuần 42,33 42,67 50,33 56,00 20,67 21,33 62,67 116,33 18,55 ns Tổng 198,33 254,67 248,67 221,33 234,67 329,67 249,00 248,00 54,23 ns Ghi chú: (ns): khác biệt khơng có ý nghĩa qua kiểm định Ducan Kết đánh giá hiệu quản lý gây hại H undalis tinh dầu sả tỏi so với quản lý thuốc BVTV không phun thuốc BVTV cho thấy, quản lý tinh dầu sả cho hiệu quản lý đạt cao (92,39%), dầu tỏi (87,56%), quản lý thuốc BVTV đạt 66,52% so với ruộng không phun thuốc BVTV Kết sử dụng tinh dầu sả hay tỏi hoàn toàn thay thể thuốc BVTV để quản lý gây hại H undalis gây hại quan trọng rau cải ĐBSCL 28 Bảng 4.22: Hiệu ruộng thí nghiệm đến đẻ trứng ngài H undalis điều kiện đồng Ruộng quản lý H undalis Ruộng sử dụng dầu sả Ruộng sử dụng dầu tỏi Ruộng canh tác theo nơng hộ Ruộng khơng phòng trị CV(%) Mức ý nghĩa Cách trái theo hướng Tây 2m 93,73 a 81,99 a 55,12 b 0,00 c 28,45 ** Cách phải theo hướng Đông 2m 96,99 a 94,6 a 46,02 b 0,00 c 4,64 ** Cách theo hướng Bắc 2m 96,36 a 93,87 a 79,73 b 0,00 c 6,31 ** Hiệu (%) quản lý H undalis Cách Cách Cách theo theo theo hướng hướng hướng Bắc 6m Bắc 4m Nam 2m 93,88 a 83,04 a 97,43 a 92,23 a 76,40 a 96,86 a 45,83 b 70,07 a 93,18 b 0,00 c 0,00 b 0,00 c 15,74 16,47 0,81 ** ** ** Cách theo hướng Nam 4m 95,67 a 94,41 a 80,09 b 0,00 c 3,00 ** Cách theo hướng Nam 6m Trung bình 82,04 a 69,58 a 62,14 b 0,00 c 19,09 ** 92,39 87,56 66,52 0,00 Ghi chú: Trong cột trung bình theo sau có chữ giống không khác biệt qua kiểm định Duncan Số liệu chuyển đổi sang arcsin (sqrt(x)) trước phân tích thống kê (**): Khác biệt mức ý nghĩa 1% 29 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 Kết luận Kết điều tra tình hình gây hại SKM ghi nhận, SKM công đọt chủ yếu (71,88%), gây hại nặng mùa nắng hầu hết nơng hộ sử dụng thuốc BVTV để phòng trị Khảo sát đồng ruộng cho thấy, SKM gây hại mức độ phổ biến (++, 25-50%) với tần suất xuất 5/5 lần khảo sát suốt vụ rau cải SKM gây hại cải ngày tuổi lúc gần thu hoạch (30 ngày tuổi) Sự đa dạng di truyền SKM dựa thị phân tử ISSR cho thấy quần thể SKM thu thập từ 13 tỉnh thuộc ĐBSCL chia thành nhóm dựa theo sơ đồ phả hệ Đặc điểm sinh học SKM chịu ảnh hưởng giống cải nhiệt độ môi trường Thời gian phát triển, tỷ lệ (%) sống, thời gian sống, khả đẻ trứng, tỷ lệ (%) trứng nở SKM phụ thuộc vào thức ăn giống rau cải Mặt khác, khoảng nhiệt độ từ 16oC – 30,2oC, thời gian tất giai đoạn phát triển SKM giống cải xanh dài điều kiện nhiệt độ mơi trường giảm (vòng đời dài 61,64 ngày 16oC, 32,17 ngày 20oC, 25,14 ngày 25oC 17,54 ngày 30,2oC) Khả phát triển quần thể SKM qua hệ cho thấy hệ số nhân số gia tăng tự nhiên cao Xác định thành phần hóa học, pheromone giới tính SKM, kết nghiên cứu cho thấy kỹ thuật phân tích GC-EAD GC-MS từ ngài SKM chưa bắt cặp cho thành phần hóa học pheromone giới tính bao gồm thành phần hợp chất E11,E13-16:Ald, Z11-14:OAc, Z11-16:Ald E11,E13-16:OH Xây dựng qui trình tổng hợp hợp chất E11,E13-16:Ald pheromone giới tính thơng qua phản ứng Wittig có khả hấp dẫn SKM cao phù hợp với điều kiện PTN Đánh giá khả hấp dẫn mồi pheromone giới tính tổng hợp SKM điều kiện đồng cho thấy hỗn hợp Z11-14:OAc; Z11-16:Ald; E11,E13-16:Ald T23 với tỷ lệ 0,15; 0,15; 0,35 0,05 mg/tuýp cho hiệu hấp dẫn cao quần thể ngài SKM gây hại vùng ĐBSCL Các hóa chất tín hiệu, tinh dầu sả, tỏi hợp chất E10-15 cho hiệu quấy rối bắt cặp đẻ trứng ngài SKM điều kiện nhà lưới đồng Khoảng cách treo túi tinh dầu sả tỏi (2 ml) SKM m diện tích áp dụng hiệu túi tinh dầu sả tỏi khoảng 64 m2 Hiệu quản lý gây hại SKM tinh dầu sả đạt cao (92,39%), dầu tỏi (87,56%), quản lý thuốc BVTV đạt 66,52% so với ruộng không phun thuốc BVTV Kết sử dụng tinh dầu sả hay tỏi hoàn toàn thay thể thuốc BVTV để quản lý ngài H undalis gây hại quan trọng rau cải ĐBSCL 5.2 Đề xuất Tập huấn chuyển giao kỹ thuật cho nông dân trồng rau cải hiểu biết cách áp dụng tinh dầu sả tinh dầu tỏi để quản lý SKM diện rộng Ứng dụng quy trình tổng hợp thơng qua phản ứng Wittig chọn lọc cấu hình để tổng hợp pheromne giới tính (E11,E13-16:Ald) ngài SKM Sử dụng pheromone tổng hợp để dự tính, dự báo xác định thời điểm phòng trị phù hợp điều kiện ngồi đồng SKM Tiếp tục nghiên cứu, ứng dụng pheromone giới tính SKM, tinh dầu sả tỏi loại trồng khác để đưa quy trình ứng dụng cụ thể loại trồng 30 ... gây hại phát triển mạnh mẽ xem công cụ hiệu để thay cho thuốc bảo vệ thực vật hóa học (Gibb et al., 2005) Trên sở đó, đề tài Khảo sát tình hình gây hại, đặc điểm sinh học hóa chất tín hiệu quản. .. thuốc trừ sâu hóa học 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu chung Quản lý hiệu H undalis gây hại rau cải ĐBSCL hóa chất tín hiệu 1.2.2 Mục tiêu cụ thể Đánh giá khả gây hại H undalis hại rau cải tỉnh... Hình 4.1: Tỷ lệ (%) gây hại H undalis loại rau cải thuộc địa bàn khảo sát, vụ Đông Xuân 2017 13 Cải tùa xại Cải bẹ dún Cải Cải củ Cải Cải xanh Cải tùa xại Cải bẹ dún Cải Cải củ Cải Cải xanh Cải