Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Phân tích proteomic mô gan của người bị ung thư gan nguyên phát

Luận văn được thực hiện nhằm mục đích phân tích protein ty thể, microsome và phần còn lại của tế bào tách từ mô gan ung thư và mô gan bình thường của bệnh nhân ung thư gan; phân tích và so sánh sự biểu hiện của các protein ty thể, microsome và phần còn lại trong mô gan ung thư và mô gan bình thường của bệnh nhân ung thư gan nhằm tìm ra các protein đặc trưng có liên quan đến bệnh.

MỞ ĐẦU Ung thư  gan là một trong năm dạng ung thư  phổ  biến nhất trên thế  giới,   đứng hàng thứ ba về ngun nhân gây chết do ung thư trên tồn cầu. Cơ hội sống   sót của bệnh nhân mắc ung thư gan là rất thấp, tỷ lệ sống sót khoảng 36%, đặc   biệt   một số  nơi tỷ  lệ  này chỉ  là 17% sau 1 đến 3 năm được chẩn đốn mắc   bệnh []. Hàng năm có khoảng 600.000 người được chẩn đốn mắc ung thư  gan   và gần bằng con số đó là số lượng người đã chết vì nó mỗi năm   Từ những con  số trên cho thấy một thực tế rằng việc chẩn đốn và điều trị ung thư gan trên thế  giới hiện nay gặp rất nhiều khó khăn.  Proteomics là cơng cụ  số  một trong phân tích hệ  protein của cơ  thể  sinh  vật. Kỹ  thuật proteomics đã được áp dụng cho các nghiên cứu chỉ  thị  sinh học  của các bệnh ung thư như: ung thư vú, ung thư tuyến tiền liệt, ung thư phổi, ung   thư thanh quản, ung thư vòm họng, ung thư gan, ung thư máu  Việc nghiên cứu  bằng kỹ  thuật proteomics đang ngày càng được mở  rộng, đem lại kết quả  ngày  càng lớn ứng dụng trong sinh học, y học, dược học và nghiên cứu cơ chế của các  q trình sinh học  Ung thư gan ngun phát là dạng ung thư xuất phát từ các tế bào gan và nó  chiếm   đến     90%     trường   hợp   ung   thư   gan   Nhiễm   virus   viêm   gan   B   (HBV), viêm gan C (HCV) mạn tính và xơ gan được cho là các ngun nhân chính  dẫn đến ung thư  gan . Việt Nam là nước có tỷ  lệ  mắc ung thư  gan ngun phát   cao do nhiễm HBV và HCV. Do đó, việc phát hiện sớm ung thư  gan rất quan  trong đ ̣ ối với việc điều trị loại ung thư này Thực hiện luận văn này, chúng tơi đã tiến hành đề  tài nghiên cứu: “Phân   tích proteomic mơ gan của người bị ung thư gan ngun phát” với mục đích: -1-  Phân tích protein ty thể, microsome và phần còn lại của tế bào tách  từ mơ gan ung thư và mơ gan bình thường của bệnh nhân ung thư gan  Phân tích và so sánh sự biểu hiện của các protein ty thể, microsome   và phần còn lại trong mơ gan ung thư và mơ gan bình thường của bệnh nhân  ung thư gan nhằm tìm ra các protein đặc trưng có liên quan đên b ́ ệnh Đề  tài được thực hiện tại phòng Proteomics và Sinh học Cấu trúc thuộc  Phòng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ  Enzyme va Protein, Tr ̀ ường Đại học   Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội -2- Chương 1 – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU CHUNG VÊ UNG TH ̀ Ư GAN Ung thư  gan là một trong những bệnh lý ác tính phổ  biến nhất trên thế  giới. Bệnh này khó chẩn đốn, tiên lượng rất xấu, tỷ lệ tử vong cao và tử  vong  trong thời gian ngắn kể  từ  khi phát hiện. Trong năm 2008  ước tính có 12 triệu   trường hợp được chẩn đốn mắc ung thư, 7 triệu người chết và khoảng 25 triệu  người đang sống chung với ung thư trên thế giới. Tại My, năm 2009  ̃ ước tính có   22.620 trường hợp được chuẩn đốn mắc ung thư, 18.160 người chết. Ung thư  gan (UTG) gồm hai loại là ngun phát và thứ phát. Dạng ngun phát hình thành   từ  các mơ của gan, trong khi dạng thứ  phát tạo nên bởi các tế  bào từ  những cơ  quan khác trong cơ  thể  di căn thơng qua máu, hạch bạch huyết tới gan và tạo   khối u (nên còn gọi là ung thư  gan do di căn). Dưới kính hiển vi, các tế bào ung  thư  di căn gan nhìn giống như  các tế  bào ung thư  mà chúng xuất phát. Do đó,   trong phạm vi khố luận này, chúng tơi chỉ  xin đề  cập đến ung thư  gan ngun   phát   với   dạng   ung   thư   phổ   biến           ung   thư   biểu   mô   gan  (Hepatocellular Carcinoma ­ HCC) [] 1.1.1 Phân loại ung thư gan ngun phát Các khối u ác tính ngun phát của gan có thể phát sinh từ thành phần biểu  mơ hoặc khơng phải biểu mơ, trong đó ung thư  biểu mơ là loại hay gặp nhất,   chiếm vị  trí quan trọng nhất trong bệnh học UTG. Dựa vào các đặc điểm hình   thái và sinh hố tế bào, UTG ngun phát được phân loại thành các dạng sau []: -3- ­ Ung thư biểu mơ tế bào gan (Hepatocellular carcinoma – HCC) là dạng ung  thư ác tính xuất phát từ các tế bào gan, chiếm khoảng 90% các dạng UTG  ngun phát. Bệnh nhân mắc HCC có nguy cơ tử vong rất cao.  ­ Ung thư biểu mơ đường mật (Cholangio carcinoma) là dạng có những khối  u ác tính trong gan bao gồm các tế bào giống tế bào biểu mơ đường mật   Bệnh thường gặp ở lứa tuổi cao hơn so với ung thư tế bào gan, trung bình   khoảng 65 tuổi. Dạng này có thể  chia thành 2 thể  cơ  bản là thể  ngoại vi   và thể trung tâm.  ­ Ung thư  hỗn hợp tế  bào gan – đường mật (hepatocholangiocarcinoma) là  dạng mang đặc điểm mơ bệnh học của cả  hai loại nói trên, nói chung ít   gặp.  ­ Ung thư  ngun bào gan (hepatoblastoma) là dạng thường gặp   trẻ  em,   rất hiếm ở người trưởng thành ­ Ung thư  nội mạch máu dạng biểu bì (Epithelioid hemangioendothelioma)  là loại mới được mơ tả, thường gặp   tuổi 50, 2/3 số  trường hợp phát  hiện là ở phụ nữ 1.1.2 Các giai đoạn của ung thư gan Ung thư gan được chia làm 4 giai đoạn:  Trong giai đoạn I, có một khối u và khơng lây lan sang các mạch  máu gần đó Trong giai đoạn II, có một khối u đã lan ra các mạch máu gần đó;   hoặc nhiều hơn một khối u, khơng cái nào trong số  đó lớn hơn 5   cm Giai   đoạn   III     chia   thành     giai   đoạn   IIIA,   IIIB,     IIIC;   Trong giai đoạn IIIA, một trong những điều sau đây được tìm thấy:   -4- nhiều hơn một khối u lớn hơn 5 cm hoặc một khối u đã lan rộng   đến một chi nhánh chính của các mạch máu gần gan. Trong giai   đoạn IIIB, có một hay nhiều khối u của bất kỳ  kích thước mà có  một trong hai: lây lan đến các cơ quan lân cận khác với các túi mật,  hoặc bị hỏng thơng qua các màng của khoang phúc mạc. Trong giai   đoạn IIIC, ung thư đã lan đến hạch bạch huyết gần đó Trong giai đoạn IV, ung thư đã lan tràn vượt ra ngồi gan đến những   nơi khác trong cơ thể, chẳng hạn như xương hay phổi. Các khối u   có thể có kích thước bất kỳ và cũng có thể  đã lan ra các mạch máu  gần đó và các hạch bạch huyết [] 1.1.3 Ngun nhân ung thư gan Mỗi một tác động xấu đều làm tăng nguy cơ mắc một căn bệnh bất kì và  có thể  là ung thư. Các bệnh ung thư  khác nhau có các tác nhân gây bệnh khác   nhau. Ví dụ, để làn da tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời mạnh là tác nhân  dẫn đến ung thư  da. Hút thuốc là một tác nhân dẫn đến ung thư  phổi, miệng,   thanh quản, bàng quang, thận, và nhiều cơ quan khác. Nhưng việc có một, hay có  vài tác nhân khơng có nghĩa rằng một người sẽ mắc bệnh. Các nhà khoa học đã  tìm thấy một số tác nhân làm tăng khả năng dẫn đến ung thư biểu mơ tế bào gan UTG được xem là biến chứng phổ biến nhất của các bệnh mãn tính thường   gặp   gan. Chúng thường được gặp   nhiều độ  tuổi khác nhau, hàng năm có  khoảng   5,5–14,9/100.000   người   mắc   bệnh     ước   tính   khoảng   600.000   –  1.000.000 ca tử vong . Tuy nhiên, tỷ  lệ  mắc bệnh khác nhau nhiều tuỳ theo khu  vực địa lý trên thế giới, nhất là giữa phương Đơng và phương Tây. Khu vực có tỷ  lệ  phát bệnh cao nhất là Đơng Á, Đơng Nam Á và khu vực Nam sa mạc Sahara.  Nghiên cứu dịch tễ học đã xác định được các yếu tố nguy cơ chính của UTG bao   gồm: nhiễm virus viêm gan B (Hepatitis B virus – HBV), viêm gan C (Hepatitis C   -5- virus – HCV) dẫn đến viêm gan mãn tính; xơ gan; nhiễm độc aflatoxin (AF); các  loại hố chất gây ung thư  như  rượu, asen, dioxin (hình 1),… và các rối loạn  chuyển hố apocphirin, thiếu hụt α–1 antitrypsin, bệnh Wilson, chứng nhiễm sắc   tố sắt di truyền. Ngồi ra những yếu tố như độ  tuổi, giới tính, yếu tố  di truyền, … cũng ảnh hưởng đến nguy cơ mắc bệnh. Mặc dù các yếu tố nguy cơ gây UTG   tác động đến tế bào gan theo các con đường khác nhau nhưng cuối cùng đều dẫn   đến biến đổi di truyền và hình thành tế bào ung thư Hình 1: Các ngun nhân chính gây ung thư gan [] Nhiễm virus HBV là yếu tố nguy cơ hàng đầu của UTG trên tồn thế giới,    phân bố  địa lý giữa tỷ  lệ  nhiễm HBV mạn tính và tỷ  lệ  mắc bệnh có mối  tương quan chặt chẽ. Ví dụ như Trung Quốc, các nước thuộc khu vực Đơng Nam   Á, Nam sa mạc Sahara có những tỉ  lệ  này đều   mức cao. Theo Tổ  chức Y tế  Thế giới (World Health Organization ­ WHO), tiêm vaccine dự phòng HBV có thể  ngăn ngừa được khoảng 70% UTG  ở các vùng có tỷ lệ nhiễm HBV cao. HBV là  một retrovirus có vật chất di truyền dạng ADN sợi đơn. Những báo cáo từ  đầu  thập niên 80 cho thấy sự hiện diện của ADN của HBV trong hệ gen các tế  bào  gan của khoảng 90% trường hợp bệnh nhân ung thư gan []. Nhiều nghiên cứu đã  -6- chứng minh rằng khi ADN của HBV chèn vào hệ  gen của người làm biến đổi   ADN nhiễm sắc thể, hoạt hoá các gen ung thư như   c–Myc, c–Fos,… và bất hoạt  một số gen ức chế khối u như   TP53. Ngồi ra, các sản phẩm protein của hệ gen   HBV như  HBx, protein của gen  pre  S/S  cũng hoạt hố các gen ung thư  dẫn tới  thúc  đẩy nhanh  chu  trình  tế   bào    ức  chế  q  trình  chết  theo chương  trình   (apoptosis) Nhiễm virus HCV là yếu tố nguy cơ thứ 2 của UTG. Có khoảng 2–4% số  trường hợp nhiễm HCV mạn tính phát triển thành UTG. Ở những quốc gia, vùng  lãnh thổ  tỷ  lệ  nhiễm HBV mãn tính thấp thường cũng có tần suất UTG thấp   hoặc trung bình, trừ Nhật Bản (nơi mà virus HCV là yếu tố nguy cơ số 1). Số ca  tử  vong do UTG   Nhật tăng mạnh từ  năm 1975 trở  đi, cùng thời gian đó tỷ  lệ  nhiễm HBV là khơng đổi, chỉ có viêm gan HCV là tăng lên tương ứng với tỷ lệ tử  vong. Những nghiên cứu gần đây cho thấy sản phẩm protein của HCVcó thể  tương tác với các protein vật chủ  tham gia vào q trình phát triển, tăng sinh và   điều hòa hoạt động tế bào dẫn đến hình thành tế bào ác tính. Có ba protein được  xem là bằng chứng tham gia vào q trình này đó là protein lõi (core protein), NS3   va  NS5A ̀ Aflatoxin   (AF)       mycotoxin     tiết     từ     chủng   nấm   mốc   Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus, thường mọc trên lạc và các hạt ngũ  cốc  ẩm  ướt, đã được chứng minh là có thể  gây UTG thực nghiệm trên súc vật  (hình 2). AF là chất tương tác với virus HBV tăng đáng kể nguy cơ mắc UTG. AF  gây ra các đột biến gen, trong đó đột biến gen p53 được quan sát thấy nhiều nhất.  Hàng loạt nghiên cứu đã chỉ  ra đột biến gen này, đặc biệt là đột biến G/T  ở  codon 249 ln được tìm thấy ở bệnh nhân UTG tại những khu vực có sự   phơi   nhiễm AF cao  -7- Hình 2: Cơ chế gây ung thư của các tác nhân ung thư gan [] Ngồi các ngun nhân trên thì các yếu tố  khác như  tuổi, giới tính, chủng  tộc hay nhiễm vinyl chlorid, anabolic steroid, hoặc các rối loạn trao đổi chất như  nhiễm sắt   mơ, thiếu hụt  α1­antitrypsin cũng góp phần làm tăng nguy cơ  dẫn   đến ung thư gan [] 1.1.4. Chẩn đốn và điều trị ung thư gan 1.1.4.1.Chẩn đốn  Gan được cấu tạo chủ yếu bởi các tế bào biểu mơ gan, loại tế bào này có  khả  năng tái sinh mạnh, do đó ung thư  gan phát triển rất nhanh. Đồng thời, các   triệu chứng của ung thư  gan thường biểu lộ  khi bệnh đã nghiêm trọng, do đó,   việc điều trị ung thư gan gặp rất nhiều khó khăn. Đây chính là ngun nhân chính   dẫn đến tỷ lệ tử vong do ung thư gan rất cao -8- Việc chẩn đốn ung thư gan ở giai đoạn sớm là vơ cùng cần thiết. Có hai   phương pháp thơng dụng nhất hiện nay để  chẩn đốn ung thư  gan là các xet́  nghiêm chân đoan v ̣ ̉ ́ ật lý và xét nghiệm máu tìm alpha fetoprotein (AFP) trong   huyết thanh bệnh nhân bị ung thư.  Để  chẩn đốn khi có các triệu chứng của ung thư  gan, một số  phương   pháp chẩn đốn vật lý được áp dụng như: siêu âm, chụp cắt lớp (CT), chụp cộng   hưởng từ (MRI ­ Magnetic Resonance Imaging), chụp X­ quang. Tuy nhiên, những  phương pháp này tốn kém, phụ thuộc nhiều vào máy móc và khơng hiệu quả để  phát hiện khối u ở giai đoạn sớm Cách chẩn đốn thứ hai rất thơng dụng đó là việc xét nghiệm chỉ  thị AFP  trong huyết thanh. AFP là một glycoprotein có khối lượng 70kDa, được tổng hợp  ở gan và túi nỗn hồng trong giai đoạn thai nhi, và sau đó nó được tiết vào huyết  thanh   tuần thứ  13 của thai kỳ. Sau khi sinh, nồng độ  AFP trong huyết thanh   giảm và hầu như  khơng phát hiện được ở  người trưởng thành khỏe mạnh. AFP  có thể được dùng để sàng lọc người có nguy cơ bị  ung thư gan cao. AFP mất đi  ngay sau khi trẻ sinh ra, nếu hiện diện  ở máu người lớn có nghĩa là có biến đổi  về tế bào gan và có khả năng mắc ung thư gan cao [] Tuy vậy, AFP trong máu khơng đặc trưng cho ung thư  gan vì có thể  nó  cũng tăng ở những người bị viêm gan. Hơn nữa, độ  nhạy của phương pháp AFP  cũng khơng cao, có khoảng 20% bệnh nhân bị  ung thư  gan mà hàm lượng AFP   trong máu vẫn bình thường (đặc biệt ở những bệnh nhân có khối u nhỏ hơn 3cm)  [].  Hàm lượng AFP cao có thể  cho chúng ta nghi ngờ  chứ  khơng thể  chắc   chắn bệnh nhân đã mắc ung thư gan. Các xét nghiệm có thể giúp chẩn đốn ung   thư  gan, nhưng trong đa số  trường hợp cách duy nhất để  chắc chắn là lấy một  -9- mảnh của khối u và xem xét nó dưới kính hiển vi. Điều này được gọi là sinh  thiết. Có nhiều cách khác nhau để  có được những mẫu khối u. Trong một số  trường hợp, một mẫu sinh thiết có thể được thực hiện trong khi phẫu thuật. Nếu  khối u đã lớn hoặc đã lan rộng khắp gan, một kim rỗng có thể  được đặt qua da  trong bụng và vào trong gan. Sinh thiết mẫu cũng có thể  được thực hiện trong   thời gian phẫu thuật nội soi 1.1.4.2 Điều trị Có 2 nhóm điều trị  chính: phẫu thuật và khơng phẫu thuật. Nhóm phẫu  thuật là phương thức điều trị  triệt căn, có dự  hậu tốt hơn hẳn, và trong đó cắt   gan là điều trị chọn lựa, tuy nhiên chỉ có khoảng 10­20% bệnh nhân có khả  năng  cắt bỏ UTG. Ghép gan nhằm loại bỏ gan bị xơ hóa và UTG, tuy nhiên, vấn đề là   thiếu gan cho để ghép  Điều trị  khơng phẫu thuật có thể  dùng: Thun tắc mạch hóa trị, chích  cồn qua da, phá hủy u bằng nhiệt, phá hủy u bằng sóng tần số radio, hóa  trị tồn thân với Doxorubicin, xạ trị qui ước, điều trị nhắm đích.   Điều trị  phẫu tht: Phẫu thuật cắt gan, ghép gan, ngồi ra có thể  hủy u  bằng laser hay đơng lạnh cho các u bề mặt 1.2 CÁC CHỈ THỊ SINH HỌC 1.2.1 Khái qt  Như  chúng ta biết, việc chẩn đốn và phát hiện sớm ung thư  gặp rất nhiều  khó khăn. Những phương pháp áp dụng hiện thời hầu như khơng đủ khả năng để  có thể  tạo những bước đột phá trong việc chẩn đốn sớm ung thư, đặc biệt là   ung thư gan. Trong những năm gần đây có một hướng nghiên cứu trọng yếu đó là   việc nghiên cứu tìm kiếm các chỉ thị sinh học -10- Hình 21. Cây chung loai phát sinh c ̉ ̣ ủa protein p53 theo ClustalX2 Kết quả  phân tich chung loai phat sinh băng cac ph ́ ̉ ̣ ́ ̀ ́ ương phap Maximum ́   parsimony, Maximum likelihood va ClustalX đêu cho thây trinh t ̀ ̀ ́ ̀ ự  cua P53 cua ̉ ̉   ngươi cung nhom v ̀ ̀ ́ ơi  ́ Macaca mulatta (khi vang). Vi vây, kêt qua nay bao đam ̉ ̀ ̀ ̣ ́ ̉ ̀ ̉ ̉   đơ tin cây ̣ ̣ Ty thể là một bào quan quan trọng, nó được coi là nhà máy sản xuất năng  lượng của tế  bào. Tại đây xảy ra q trình hơ hấp tế  bào, chuyển ơxy và chất  dinh dưỡng thành adenosine triphosphate (ATP). ATP là “dòng” năng lượng hóa  học của tế bào để cung cấp năng lượng cho mọi hoạt động của mình. Khơng có  ty thể, động vật bậc cao đã có thể khơng tồn tại vì nếu vậy tế bào của chúng chỉ  có thể thu nhận năng lượng thơng qua hơ hấp yếm khí, một q trình kém hiệu    hơn nhiều. Trên thực tế, ty thể  giúp tế  bào có thể  sản xuất năng lượng   nhiều hơn gấp 15 lần so với khi tế bào khơng có bào quan này. Các động vật có  cấu trúc phức tạp, bao gồm cả con người, đều cần một lượng lớn năng lượng   mới có thể tồn tại được.  -61- ATP synthase là một protein nằm trên màng trong ty thể  có vai trò chính    việc   tổng   hợp   adenosine   triphosphate   (ATP)   từ   adenosine   diphosphate   (ADP) và phosphat vơ cơ ATP synthase được cấu tạo bởi hai phần chính là F0 và F1. Phần F1 bao  gồm các tiểu đơn vị: 3 alpha, 3 beta, 1 gamma, 1 epsilon, và 1 delta. Phần F0 bao  gồm 2 tiểu đơn vị  b2, và c từ  9 đến 12 được sắp xếp đối xứng. Phần F0 và F1   liên kết nhau bởi lõi trung tâm (dưới đơn vị gamma và epsilon) và nhánh bên (b và   delta). Dòng electron sẽ  kích hoạt đĩa trên màng và lõi trung tâm quay, sự  quay  này tiếp theo đó điều khiển ái lực của tiểu đơn vị  beta với nucleotide (ADP và   ATP) đẫn đến tạo năng lượng ATP (hinh 22) ̀ Hình 22. Mơ hình phân tử ATP synthase []  Trong nghiên cưu này, chúng tơi nh ́ ận thấy sự  biểu hiện tăng mạnh của   protein ATP synthase. Sự biểu hiện tăng của protein này trong mẫu protein ty thể  phù hợp với giả thiết rằng sự tăng sinh nhanh chóng của các tế  bào ung thư  đặc  biệt là ung thư  gan đòi hỏi mơt ngu ̣ ồn năng lượng lớn và sự  tăng cường của   enzyme ATP synthase sẽ giúp tổng hợp năng lượng nhanh chóng Trong nghiên cứu này, Hexokinase cung biêu hiên tăng. Hexokinase là m ̃ ̉ ̣ ột  enzyme phosphoryl hóa đường 6 cacbon thành hexose phosphate, có trong phần  lớn       sinh   vật,   glucose         chất   quan   trọng     hexokinase,     -62- glucose­6­phosphate là sản phẩm quan trọng nhất của chúng. Đây là một enzyme  tham gia vào q trình đường phân trong tế bào. Q trình đường phân là một q  trình khơng thể thiếu trong tế bào vì q trình này cung cấp năng lượng ATP cho   tế bào hoạt động [].  Ở động vật có vú, hexokinase gồm bốn dạng isozyme quan trọng, nằm  ở  các vị  trí khác nhau trong tế  bào và có động học khác nhau về cơ  chất, các điều   kiện và chức năng sinh lý. Chúng được kí hiệu lần lượt là hexokinase I, II, III và  IV hoặc A, B, C và D. Hexokinase I, II và III là isozyme có ái lực cao với glucose   trong đó hexokinase II/B là dạng chủ  yếu giữ  vai trò điều hòa trong các kiểu tế  bào của động vật có vú và hàm lượng được tăng lên ở  nhiều loại bệnh ung thư.  Hexokinase II/B co liên quan đ ́ ến năng lượng sinh học và q trình apoptosis của   tế  bào. Theo nghiên cứu của Kim và Cộng sự (2007), ho đa ch ̣ ̃ ỉ  ra mối liên quan   của HK II trong qua trinh lam  ́ ̀ ̀ ổn định ty thể trong tế bào HCC. Những phát hiện   chính trong nghiên cứu này liên quan đến sự tham gia của HK II trong trong điều   hòa sự ổn định của ti thể trong tế bào ung thư gan. Đặc biệt, nghiên cứu này cho   thấy tình trạng thiếu oxy sẽ làm tăng sự  ổn định của ty thể theo HK II, ngồi ra  HK II ức chế hoạt hóa các tín hiệu apoptosis qua ty thể. Hơn nữa hệ thống HK II   ức chế biểu hiện tính hiệu quả khang u gây ra apoptosis. Theo nghiên c ́ ứu này, họ  cũng thấy rằng sự thiếu hụt oxy gián tiếp tăng HK II gây ra ổn định ty thể và 3­ BrPA gây ra sự  thay đổi cấu trúc trong PTPC đưa đến hoạt hóa các tín hiệu   apoptosis ty thể. Các cơ chế hoạt hóa phụ  thuộc tín hiệu apoptosis của ty thể là   phức hệ  và nhiều cơ  chế  dẫn đến giải phóng Cytochrome C. Ví dụ, họ  protein   proapoptosis Bcl2, chẳng hạn như tBid, Bax/Bak và Bim điều hòa apoptosis bằng   tương tác với VDAC  ở màng ngồi ty thể  []. Nó cũng có thể  mở  lỗ  thay đổi  tính thấm của ty thể làm thủng màng ngồi và giải phóng các protein phía trong  màng như  Cytochrome C, AIF và Smac/DIABLO. Mặc dù cấu trúc lỗ  bán thấm   của ty thể khơng hồn tồn giải thích trọn vẹn, PTPC là một phức hợp của nhiều   loại protein gồm VDAC, ANT, CypD và HK II. Trong nghiên cứu này, ngươi ta ̀   -63- nhân th ̣ ấy HK II  ức chế  3­BrPA bằng sự  phân hủy HK II từ  PTPC và nó là   ngun nhân PTPC mở  và giải phóng Cytochrome C   trong bào tương. Do đó,   những quan sát chung cho thấy HK II gây ra một cơ chế chính của các tế bào còn  lại trong mơi trường thiếu oxy, cũng như   tăng tính thấm HCC và HK II  ức chế  có thể biểu hiện tính hiệu quả khang u b ́ ằng sự hoạt hóa các tín hiệu apoptosis ty   thể  trong sự  phát triển các khối u. Nghiên cứu nay cũng cho th ̀ ấy sự  biểu hiện   q mức của HK II ở mơ u so với mơ bình thường. Vì vậy, để ngăn sự phát triển  của các khối u cần giảm lượng HK II [].  Chúng ta đều biết, tế  bào gan có  tốc  độ  phân chia và phát triển  rất   nhanh, đặc biệt là khi chúng chuyển sang trạng thái ung thư. Điều này đòi hỏi các   protein tham gia điều hòa kiểm sốt việc sao chép, phiên mã và dịch mã trong các   tế bào phải tăng cường hoạt động. Trong nghiên cứu này, chúng tơi đã nhận dạng   được các protein tham gia vào các q trình phiên mã và dịch mã  NAD­dependent  deacetylase   sirtuin­6,   Rho   guanine   nucleotide   exchange   factor,   Neural   retina­ specific leucine zipper protein, Zinc finger protein 806 trong ty thể và các protein  Myelin transcription factor 1­like protein, Translin­associated factor X­interacting  protein 1 trong microsome. Tất cả các protein này đều có biểu hiện tăng ở mơ ung  thư Yếu tố  Rho là một protein gồm có 6 tiểu đơn vị  có ái lực cao với ARN   đơn, có hoạt tính helicaza và ATP­aza để  tháo xoắn sợi lai ADN­ARN. Khi bám   vào ARN, yếu tố  Rho sẽ  phân giải ATP. Năng lượng được giải phóng giúp nó   chuyển dọc sợi ARN mới sinh tới bong bóng phiên mã, sau đó yếu tố  Rho tách  đơi ADN­ARN và giải phóng ARN NAD­dependent deacetylase  có khả  năng tác động tới 'Lys­9' và 'Lys­56'   của histone H3. Sự  acetyl hóa của histone H3 trong dị  nhiễm sắc  ở giai đoạn S   của chu kỳ tế bào. Deacetylates 'Lys­9' của histone H3 tại đích NF­Kappa­B và có  thể  điều hòa giảm sự  biểu hiện của một tập hợp các gen đích NF­Kappa­B. Sự  -64- deacetyl hóa của  nucleosome ngăn cản RELA liên kết với ADN đích. Điều này  cần thiết cho liên kết giữa ADN với telomere trong giai đoạn­S và để  duy trì   telomere bình thường và giúp cho sự ổn định di truyền.  Họ  protein Zinc finger là những protein tham gia vào việc điều hòa phiên   mã. Zinc finger protein gắn với ADN tại vị trí liên kết với các yếu tố  phiên mã,  các protein điều hòa, do đó protein này biểu hiện tăng sẽ  ngăn cản hoạt động   phiên mã trong tế bào ung thư [] Trong q trình miễn dịch chống ung thư, dường như  vai trò của sự  đáp   ứng miễn dịch qua trung gian tế bào thường xun chiếm  ưu thế. Q trình này  có sự  tham gia của các phức hệ phù hợp tổ  chức mơ chủ  yếu  (MHC),  ở người   gọi là HLA. Trong phân tích proteomics microsome này, chúng tơi nhận dạng  được protein MHC class I (MHC I). Protein này biểu hiện giảm ở mơ gan ung thư  so với mơ gan bình thường. Protein MHC được tích lũy trong lưới nội chất và làm  nhiệm vụ  như  là nơi trung chuyển phân tử. Trong tế  bào mang virus hay tế  bào  ung thư, các kháng nguyên nội sinh nằm trong tế  bào chất, sẽ  được các vi thể  proteasome chế biến thành các peptide kháng nguyên. Các peptide này được TAP  vận chuyển vào khoang lưới nội chất để  liên kết với rãnh của MHC I. Sau đó,   phức hệ  MHC I­ peptide kháng nguyên được đóng gói bằng cách bọc màng và  được vận chuyển lên bề  mặt tế  bào để  trình diện cho tế  bào TCD8+, kích thích  tế bào T sản sinh ra Lymphokin để tiêu diệt tế bào mang kháng ngun nội sinh.  Khi tế  bào bị  nhiễm virus nội sinh, lượng MHC I ln được tổng hợp dư  thừa,  sẵn sàng làm nhiệm vụ  trình diện kháng ngun nội sinh. Trong nghiên cứu của   chúng tơi, protein MHC I giảm, điều này gợi ý rằng, q trình tiến triển thành ung  thư    tế  bào gan đã làm  ảnh hưởng tới sự  đáp  ứng miễn dịch qua trung gian tế  bào, tế  bào ung thư  không bị  tiêu diệt do thiếu hụt sự  nhận diện kháng nguyên   nội sinh [] -65- Beta­actin là những protein tham gia cấu trúc tế bào, có tính bảo thu cao, nó ̉   liên quan đến các dạng vận động tế  bào khác nhau và biểu hiện ở tất cả  các tế  bào nhân chuẩn. Sự polymer hóa actin hình cầu (G­actin) dẫn tới hình thành một   cấu trúc sợi (F­actin) trong cấu trúc xoắn kép. Mỗi actin có thể gắn với 4 phân tử  khác. Thiếu hụt actin gây rối loạn vận động liên quan đến thần kinh từ  đó dẫn   đến rối loạn trương cơ thể  hiện  ở sự kéo dài co cơ  trơn là ngun nhân của tư   cũng như  vận động bất bình thường. Trong nghiên cứu của chúng tơi, beta­ actin biểu hiện tăng rõ rệt trên bản gel mơ ung thư, đây có thể  là kết quả  của   việc tế bào gan ung thư tăng sinh nhanh chóng kéo theo các thành phần tham gia  cấu tạo tế bào cũng tăng [] Trong  nghiên cứu này,   chúng tơi  cũng nhận thấy  co s ́ ự   biểu  hiện    Major vault protein trên mơ ung thư. Major vault protein là một protein màng được  mã hóa bởi gene MVP. Vaults là một cấu trúc gồm nhiều tiểu đơn vị, có vai trò  tham gia kênh vận chuyển các chất giữa nhân và tế  bào chất. Protein này gián  tiếp tham gia kháng lại thuốc có thể  thơng các q trình vận chuyển. Nó được   phân bố  rộng rãi trong các mơ bình thường, và biểu hiện q mức trong các tế  bào ung thư đa kháng thuốc. Sự biểu hiện q mức của protein này là một chi thi ̉ ̣  đầy tiềm năng trong việc khám và điều trị bệnh [] Trong nghiên cứu này, chúng tơi thấy sự  biểu hiện đa dạng của những   protein khác biệt khơng chỉ là đặc trưng của riêng một bệnh. Những chỉ thị riêng   cho bệnh có thể được hình thành trong một chuỗi các tác động tổng hợp với các  bệnh khác, điều này góp phần bổ  sung cho ý kiến chỉ  thị  ung thư  có thể  khơng   đặc hiệu với riêng một loại ung thư  nào mà phản ánh mối liên quan chặt chẽ  giữa sự tiến triển của bệnh ung thư với các q trình viêm và bệnh lý khác trong  cơ thể KẾT LUẬN -66- Qua qua trinh phân tich proteomics cua mô gan t ́ ̀ ́ ̉ ừ bênh nhân ung th ̣  gan,   chung tôi rut ra môt sô kêt luân sau: ́ ́ ̣ ́ ́ ̣ 1. Bằng kỹ thuật điện di hai chiều kêt h ́ ợp vơi khôi phô MALDI­TOF MS, ́ ́ ̉   chúng     đã  xać   đinh ̣     sự   biêu ̉   hiên ̣   khać   biêṭ   cuả     protein   ty   thể   và  microsome tách từ mơ gan ung thư và mơ gan bình thường:  ­ Phân tích protein ty thể đã xác định được 43 spot protein biểu hiện khác   biệt giữa 2 bản gel và đã nhận dạng được 18 protein, trong đó có 13 protein đã  được định danh và 5 protein giả thiết ­ Phân tích protein microsome đã xác định được 27 spot protein biểu hiện   khác biệt giữa 2 bản gel và đã nhận dạng được 23 protein, trong đó có 16 protein   đã được định danh và 7 protein giả thiết 2. Các protein đã được nhận dạng trong ty thể  bao gồm các protein cấu  trúc tế bào, các protein tham gia vào q trình miễn dịch bảo vệ cơ thể, q trình   trao đổi chất, phiên mã, dịch mã. Đặc biệt trong đó có các protein: HSP 70, HSP  60, ATP synthase biểu hiện tăng, và các protein p53, MHC I có biểu hiện giảm rõ  rệt ở mơ ung thư 3. Cac protein đa đ ́ ̃ ược nhân dang trong ban gel microsome bao g ̣ ̣ ̉ ồm các  protein tham gia vào các q trình trao đổi chất, điều hòa phiên mã, miễn dịch và   protein cấu trúc tế  bào. Đặc biệt là các protein: HSP 70, MVP,   Zinc finger và  Beta­actin đều có biểu hiện tăng ở mơ ung thư 4. Trên cơ  sở phân tich ch ́ ủng loại phát sinh  ở  mưc phân t ́ ử  băng ch ̀ ương  trinh phylip đã cho th ̀ ấy Hsp70 cua ng ̉ ười thuôc cung nhom v ̣ ̀ ́ ơi Hsp70 cua môt sô ́ ̉ ̣ ́  động   vật   khác    Xenopus   laevis,   Bos   taurus,   Oryctolagus   cuniculus,   Megalobrana amblycephala, Mus musculus, Rattus norvegicus, con P53 cua ng ̀ ̉ ươì  gân gui h ̀ ̃ ơn vơi P53 cua khi vang ( ́ ̉ ̉ ̀ Macaca mulatta) -67- KIẾN NGHỊ Tư th ̀ ực tế nghiên cứu trên, chúng tơi đưa ra một số kiến nghị sau: 1. Tiếp tục thu thập mẫu và phân tích proteomics mơ gan của bệnh nhân   ung thư  gan do các ngun nhân khác nhau và các giai đoạn ung thư  khác nhau   nhằm phân tích sự biến đổi thành phần các protein liên quan đến bệnh 2. Thu thập mẫu huyết tương của bệnh nhân viêm gan B và C đang tiến  triển thành ung thư gan và bệnh nhân ung thư gan có tiền sử nhiễm HBV và HCV  nhằm tìm hiểu mối liên hệ giữa viêm gan B, C và ung thư gan 3. Kết hợp phân tích proteomics huyết tương và mơ gan để tìm ra mối liên  hệ  giữa hai hệ  protein này, nhằm tìm ra các chỉ  thị  ung thư  gan đặc hiệu và dễ  dàng nhận biết, phục vụ cho chẩn đốn sớm ung thư gan -68- TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Phan Văn Chi (2006), PROTEOMICS Khoa học về hệ gene , Viện Khoa  học và Công nghệ Việt Nam, Hà Nội Đỗ  Ngọc Liên (2004), Miễn dịch học cơ  sở, NXB Đại học Quốc gia  Hà Nội Hà   Văn   Mạo,   Hoàng  Kỷ,   Phạm   Hoàng   Phiệt   (2006),   Ung  thư   gan   nguyên phát, Nhà xuất bản y học Vũ Minh Thiết, Nguyễn Nam Long, Đặng Thành Nam (2004), “Ngiên  cứu hệ  proteomic huyết thanh người bằng kết nối sắc ký lỏng Nano  đa chiều và hệ  khối phổ  liên tục”,  Báo cáo khoa học hội nghị  toàn   quốc 2004,  [16] NCCB định hướng Y­Dược học, Học viện Quân Y,  Hà Nội, tr. 470­474 Tài liệu tiếng Anh Aderson, M.P,. A.N.L.(2006), "A List of Candidate Cancer Biomarker  for Targeted Proteomics", Bio Ins, 1, PP. 1–48 Amy J. Clippinger  and Michael J. Bouchard (2008), “Hepatitis B Virus  HBx Protein Localizes to Mitochondria in Primary Rat Hepatocytes and  Modulates Mitochondrial Membrane Potential”, J Virology, 82 (14), PP.  6798­6811 -69- Andries   K   V.,   Guillemont   J,   Winkler   H,   Van   Gestel   (2005),   “A  diaryquinolime   drug   active   on   the   ATP   synthase   of   Mycobacterium  tuberculosis”, Science, 307 (7), PP. 223­227 Brachmann R. K. , Vidal M. & Boeke J. D. (1996): “Dominant­negative  p53 mutations selected in yeast hit cancer hot spots”,  Proc Natl Acad   Sci. USA, 93, PP. 4091­5000 Bakos A.D, Hutson S.P, (2008), “BRCA mutation­negative women from  hereditary breast and overian cancer families: a qualitative study of  the  BRCA­negative experience”, NIH, 11(3), PP. 205­207 10 Deng­Fu   Yao,   Z.Z.D.A.M.Y   (2007),   “Specific   molecular   marker   in  hepatocellular carcinoma”, Science, 6(3), PP. 241­247 11 Shahid a Khan (2009), “Diagnosis of hepatocellular carcinoma” World J  Gastroenterol, 15(11), PP. 1301­1314 12 Nguyen   Minh   Đuc,   Nguyen   Thi   Ngoc   Ha,  Trinh   Hong   Thai,   (2009),  “Proteomic   analysis   of  bone   marrow   cells   from   leukemia   patients”,  Proceedings of the National Conference on Proteomics, April 01­02 , 2009 in  Do Son, p.65­78 13 Farazi   P.A.,   Depinho   R.A,   (2006),  “Hepatocelular   carcinoma  phathogenses: from genes to evironment”, Nat Rev Cancer, 6, PP. 674­ 687 14 Govekar R.B. And Zingde S.M, (2007), "Cancer Proteomics: How Far  are We from Clinics" Int J Hum Genet, 7(1), PP. 91­97 15 Harris C. C (1996), “Structure and function of the p53 tumor suppressor  gene:   clues   for   rational   cancer   therapeutic   strategies”  JNCI,   88,   PP.  1442­1455.  -70- 16 He M., Zhai R., Wei X., Wang Q., Jiang M. R. Z., Huang Y., and Zhang  Z,   (2008),   “Detection   and  identification   of   NAP­2  as   a   biomarker   in  hepatitis   B­related   hepatocellular   carcinoma   by   proteomic   approach”,  Pro Sci, 6, PP. 1­11 17 Huong T. T. T., Thai T. H. (2006), “Plasma proteomic analysis of acute  myeloid   leukemia”,   Program   &   Abstracts   Joint   Third   AOHUPO   and  Fourth   Structural   Biology   and   Functional   Genomics   Conference,   PP.  250 18 Jain K., M.D., Fracs, Ffpm, (2002, "Role of Proteomics in Diagnosis of  Cancer", Tech Cancer Res & Treatt, 1(4), PP.281­286 19 Jesus   M   Matos,     Frank   A   Witzmann,(2009),   “A   Pilot   Study   of  Proteomic Profiles of Human Hepatocellular Carcinoma in the United  States”, J Surg Res, 155(2), PP. 237–243 20 Jennifer   S  Carew   and  Peng  Huang   (2002),   “Mitochondrial   defects   in  cancer”, Mole Cancer,  9, PP. 1476­4598 21 Kim W., L.S.O., Kim J. S., Ryu Y. H., Byeon J., Kim H, Kim Y., Heo  J   S.,   Park   Y   M.,   and   Jung   G,   (2003),   “Comparison   of   Proteome  between   Hepatitis   B   Virus­   and   Hepatitis   C   Virus­Associated  Hepatocellular Carcinoma”, Clinl Cancer Res, 9, PP. 5493–5500 22 K   Nakamura,   X.Z.,   M   Fujimoto,   T   Tanaka,   J   Kimura­Akada,  H.Furumoto,   Y   Kuramitsu,   B   Jordan,     (2008),   “1D­SDS­PAGE   and  Nano­LC­MS/MS   for   Membrane   Proteomics   of   Mouse   Liver  Microsomes (MPI sample) and its Application to Human Proteomics of  ER from Jurkat Cells”, J Pro & Bio, S2, PP.114­115 -71- 23 Kondo T.(2008), “Tissue proteomics for cancer biomarker development  Laser micro dissection and 2D­DIGE”, PP. 5493­5500 24 Lane S., William, (2007), “Comparative Cytochrome P450 Proteomics  in   the   Livers   of   Immunodeficient     Mice   Using   18O   Stable   Isotope  Labeling”, Mole Cell Bio, 6, PP. 953­962 25 Le Naour F., B.F., Misek D. E., BresChot C., Hanash S. M., and Beretta  L,   (2002), “A Distinct Repertoire of Autoantibodies in Hepatocellular  Carcinoma   Identified   by   Proteomic   Analysis”,  Mole   &   Cell   Prot,   1,  PP.197–203 26 Liebler D.C (2002), “Introduction to Proteomics”,    Humana Press Inc,  New Jersey 27 Lupberger   J.,   H.E   (2007),   “Hepatitis   B   virus­induced   oncogenesis”,  World J  Gast, PP. 74­81 28 Mai.T.N,. Thai. T. H. (2009), “Proteomic analysis of liver tissue from  some animals in the region exposed to dioxin at Ma Da area, Dong Nai  province”, VNU Jounal of Science, Nat,Sci & Tech, 24, PP. 13­19 29 Maria Pleguezuelo, Laura M Lopez­Sanchez, Antonio Rodriguez­Ariza,  Jose L Montero, Javier Briceno, Rubenciria, and Jordi Muntane (2010),  “Proteomic   analysis   for   developing   new   biomarkers   of   hepatocellular  carcinoma”, World  J Hepatol, 2 (3), PP. 127­135 30 Mary A. C and Laura J. F, (2005), “GP73, a resident Golgi glycoprotein,  is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma”, J Hepat, 43 (6),  PP. 1007­1012 -72- 31 Mazzanti   R.,   L   Gramantieri,   and   L   Bolondi   (2008),   “Hepatocellular  carcinoma: Epidemiology and clinical aspects”,  Molec Asp Med, 29(1– 2), PP. 130–143 32 M   Hollstein,   B   Shomer,   M   Greenblatt,   T   Soussi,   E   Hovig,   R.  Montesano & C. C. Harris (1996), “Somatic point mutations in the p53  gene of human tumors and cell lines: updated compilation”  Nucl Aci   Res, 24, PP. 141­156  33 M. Hsiao,  J. Low,  E  Dorn, D. Ku,  P  Pattengale,  J. Yeargin (1994).  “Gain   of   function   mutations   of   the   p53   gene   induce  lymphohematopoietic metastatic potential and tissue invasiveness”  Am   J Pathol (145), PP. 402­414.  34 M. S. Greenblatt, W. P. Bennett, M. C. Hollstein & C. C. Harris (1994),  “Mutations in the p53 tumor suppressor gene: clues to cancer etiology  and molecular pathogenesis”, Cancer Res , 54, PP. 4855­4878 35 Mohammad   Hossein   Somi   Md   Assistant   Professor   (2005),  “Hepatocellular carcinoma”, Hepat Hepat,5(3),PP. 65­67 36 Nikolova M. S., D.O.M.G., Medical Faculty, Medical University Sofia,  (2007), “Molecular pathogenesis of Hepatocellular carcinoma ”,  Bal J  Med Genetics, 10 (1), PP. 15­22 37 Paradis   V.,  B.P   (2007),   “In  the   new   area   of   noninvasive   markers   of  hepatocellular   carcinoma   In   the   new   area   of   noninvasive   markers   of  hepatocellular carcinoma”, J  Hepat, 46, PP.11­49 38 Pastorino  JG,  Shulga  N, Hoek  JB  (2002),  “Mitochondrial binding of  hexokinase II inhibits Bax­induced cytochrome c release and apoptosis”,  J Biol Chem, 277, PP. 7610–7618 -73- 39 Polanski M., A.N.L. (2006), “A List of Candidate Cancer Biomarkers for  Targeted Proteomics”, Bio Ins, 1, PP.1­48 40 Qin   L.X.,   T.Z.Y   (2002),   "The   Prognotics   molecular   markers   in  hepatocellular carcinoma", World J Gast, 8(3), PP. 385­392 41 Sun W., X.B., Sun Y, Du X., Lu M., Hao C., Lu Z., Mi W., Wu S., Wei  H., Gao X., Zhu Y., Jiang Y., Qian X., and He F, (2007), “Proteome  Analysis of Hepatocellular Carcinoma by Two­dimensional Difference  Gel Electrophoresis”, Mole & Cell Pro, 6, PP.1798–1808 42 Thai T. H., Huong. T. T. T. (2005), “Plasma proteomic analysis of acute  myeloid   Leukemia   patients”,  VNU,   Journal   of   science,   Nat.,Sci.,   &   Tech, 4, PP. 54­60 43 William   Cs   Cho   (2007),   "Contribution   of   oncoproteomics   to   cancer  biomarker discovery", Mole Cancer, 10, PP. 6­25 44 Wong   C   H.,   C.S.K.P.,   Chan   H.L.Y.,   Tsui   S.K.W   (2006),   “The  Molecular   Diagnosis   of   Hepatitis   B   Virus­Associated   Hepatocellular  Carcinoma”, Clin Lab Sci, 43(41), PP.69­101 45  Rowan. S., Ludwig.R. L. , Haupt.Y. , Bates.S. , Lux.X. , Oren.M, 1996  “Specific loss of apoptotic but not cell cycle arrest function in human  tumour derived p53 mutant”, EMBO J, 15, PP. 827­838 Tài liệu tham khảo từ website 46  http://biol.lf1.cuni.cz/ucebnice/en/proteomics.htm  (13/11/2010) -74- 47   http://.cancer.org/docroot/CRI/CRI_2_1x.asp?dt=25Cancer.org2  (11/10/2010) 48  http://en.wikipedia.org/wiki/Hexokinase  (02/12/2010) 49  http://en.wikipedia.org/wiki/Major_vault_protein      (14/11/2010) 50  http://en.wikipedia.org/wiki/Heat_shock_protein#Cancer_vaccine_adjuvant   (23/11/2010) 51  http://www.uniprot.org/uniprot/?query  (08/10/2010) 52  http://www.medicinenet.com/script/main/art?articlekey=104954   (14/09/2010) 53  http://www.siteman.wustl.edu/PDQ.aspx?id=662&xml=CDR256491.xml   (27/11/2010) 54  http://www.antigenics.com/products/tech/hsp/  (24/10/2010) 55  http://www.bioscience.org/2005/v10/af/1736/figures.htm  (15/12/2010) 56  http://www.bioscience.org/1997/v2/d/soehnge/d538­551.htm  (29/10/2010) 57  http://www.hopkinsmedicine.org/liver_tumor_center/conditions/cancero  us_liver_tumors/hepatocellular_carcinoma.html (12/12/2010) 58  http://www.nature.com/nrm/journal/v9/n4/full/nrm2384.html   (12/12/2010) 59  http://mct.aacrjournals.org/content/6/9/2554.abstract  (26/09/2010) -75- ... Phân tích protein ty thể, microsome và phần còn lại của tế bào tách  từ mơ gan ung thư và mơ gan bình thư ng của bệnh nhân ung thư gan  Phân tích và so sánh sự biểu hiện của các protein ty thể, microsome... tương để phát hiện các chỉ thị sinh học của các bệnh về gan [] 1.3.3 Proteomics trong nghiên cưu ung th ́ ư gan Tác hại của ung thư gan đối với sức khỏe con người và xã hội là vơ cùng  lớn. Việc phân tích proteomics ung thư gan hứa hẹn sẽ cung cấp cho chúng ta sự ... ứng dụng phương pháp   phân tích proteomics mơ gan  bệnh nhân ung thư gan.  Do vậy, trong đề  tài này   chúng tơi đã sử dụng phương pháp proteomics để bước đầu phân tích hệ protein   mơ gan ung thư,  so sánh với mơ gan bình thư ng trên cùng một bệnh nhân nhằm