Khả năng kháng Enterococcus faecalis của dịch chiết cồn từ lá Neem khi bơm rửa ống tủy răng - nghiên cứu in vitro

Khả năng loại bỏ hệ vi khuẩn trong ống tủy là điều kiện tiên quyết cho kết quả điều trị nội nha thành công, vì vậy dung dịch bơm rửa ống tủy được sử dụng trong điều trị nội nha phải có đặc tính kháng khuẩn cao. Cây Azardirachta indica (Neem) là cây được sử dụng trong thuốc cổ truyền của Ấn Độ với khả năng kháng khuẩn, kháng viêm…tại Việt Nam có nhiều nghiên cứu về Neem nhưng hiệu quả kháng khuẩn của Neem trong nha khoa vẫn chưa được làm rõ.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 KHẢ NĂNG KHÁNG ENTEROCOCCUS FAECALIS CỦA DỊCH CHIẾT CỒN TỪ LÁ NEEM KHI BƠM RỬA ỐNG TỦY RĂNG- NGHIÊN CỨU IN VITRO Thiều Tú Trâm*, Huỳnh Thị Ngọc Lan**, Ngô Thị Quỳnh Lan*** TÓM TẮT Mở đầu: Khả loại bỏ hệ vi khuẩn ống tủy điều kiện tiên cho kết điều trị nội nha thành cơng, dung dịch bơm rửa ống tủy sử dụng điều trị nội nha phải có đặc tính kháng khuẩn cao Cây Azardirachta indica (Neem) sử dụng thuốc cổ truyền Ấn Độ với khả kháng khuẩn, kháng viêm…tại Việt Nam có nhiều nghiên cứu Neem hiệu kháng khuẩn Neem nha khoa chưa làm rõ Mục tiêu: Đánh giá hiệu làm giảm vi khuẩn Enterococcus faecalis ống tủy dịch chiết Neem Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu thử nghiệm in vitro 60 cối nhỏ (40 hàm 20 hàm trên) nhiễm khuẩn vi khuẩn Enterococcus faecalis (ATCC29212) Mẫu chia thành nhóm, bao gồm: Nhóm – A: Răng cối nhỏ hàm dưới+dung dịch NaCl 0,9 % Nhóm – D: Răng cối nhỏ hàm + dịch chiết Neem Nhóm – B: Răng cối nhỏ hàm dưới+dung dịch NaOCl 2,5 % Nhóm – E: Răng cối nhỏ hàm + dung dịch NaOCl 2,5% Nhóm – C: Răng cối nhỏ hàm dưới+dịch chiết Neem Số lượng vi khuẩn ống tủy ghi nhận sau bơm rửa sau ngày điều trị Kết quả: NaOCl 2,5 % dịch chiết Neem có khả làm giảm số lượng vi khuẩn ống tủy sau bơm rửa sau ngày điều trị, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết luận: NaOCl 2,5 % dịch chiết Neem có tác dụng kháng vi khuẩn Từ khóa: dịch chiết Neem, Sodium hypochlorite, Enterococcus faecalis, dung dịch bơm rửa ống tủy ABSTRACT THE ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF NEEM LEAF ALCOHOL EXTRACT IRRIGATION ON ENTEROCOCCUS FAECALIS- AN IN VITRO STUDY Prefer: Evaluation of Neem leaf extract in reducing Enterococcus faecalis within root canals in vitro Thieu Tu Tram, Huynh Thi Ngoc Lan, Ngo Thi Quynh Lan * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No - 2016: 90 - 96 Objectives: To evaluate the effectiveness of Neem leaf extract in reducing E.faecalis within root canals in vitro Methods: A total 60 extracted human premolar teeth (40 mandibular premolar teeth with a single root and 20 maxillary premolar teeth with two roots) were contaminated with Enterococcus faecalis (ATCC 29212) broth culture After an incubation period of 28 days, bacterial samples were collected and cultured on SF agar plate The sample was divided groups: * Học viên Cao học 2013 – 2015, Khoa Răng Hàm Mặt, ĐHYD, TP HCM **Bộ môn Vi sinh - Ký sinh, Khoa Dược, ĐHYD, TP HCM *** Bộ môn NKCS, Khoa Răng Hàm Mặt, ĐHYD, TP HCM Tác giả liên lạc: ThS Thiều Tú Trâm ĐT: 0978732777 Email: thieututram2505@gmail.com 90 Chuyên Đề Răng Hàm Mặt Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Group – A:mandibular premolar + NaCl 0.9 % Group – B:mandibular premolar + NaOCl 2.5 % Group – C:mandibular premolar + Neem leaf extract Nghiên cứu Y học Group – D:maxillary premolar + Neem leaf extract Group – E: maxillary premolar + NaOCl 2.5 % Bacterial samples were collected immediately and days after irrigation Statistical analysis was performed by One way-ANOVA, t - test and Mann – Whitney test Results: Compared with the samples before irrigation immediately and days after irrigation, the bacterial count was significantly reduced after irrigation in all groups There was no significant difference in bacterial count reduction among the NaOCl 2.5 % and Neem leaf extract Conclusion: NaOCl 2.5 % and Neem leaf extract showed the effectiveness of reducing bacterial count was similar Key word: Neem leaf extract, Sodium hypochlorite, Enterococcus faecalis, irrigation khoáng chất bao gồm thuốc thành phẩm dược ĐẶT VẤN ĐỀ liệu đạt tiêu chuẩn làm thuốc, kể dược liệu Trong nhiều năm qua, chủng Enterococcus chế biến theo phương pháp cổ truyền (còn gọi cho vơ hại người, chí thuốc phiến) Trong lĩnh vực nha khoa, gia chúng ứng dụng ngành công tăng liên tục chủng vi khuẩn kháng thuốc nghệ thực phẩm sản phẩm bổ sung vi tác dụng phụ dung dịch bơm rửa ống tủy sinh (Probiotic) Tuy nhiên năm thúc đẩy nhà nghiên cứu tìm giải pháp khắc gần đây, Enterococci tìm thấy phục khuyết điểm dung dịch bơm rửa nhiễm trùng bệnh viện nguyên nhân gây tử truyền thống từ dung dịch bơm rửa ống tủy vong cho bệnh nhân lên đến 61%, có nguồn gốc thảo dược đời(6) chủng Enterococcus faecalis chiếm tỉ lệ lên đến 80 – Cây Azardirachta indica (Neem) 90% E.faecalis quan tâm sử dụng thuốc cổ truyền Ấn Độ, điều trị y khoa(7) Bên cạnh đó, lĩnh vực nha dùng điều trị giảm đau, tẩy giun, kháng khoa, vi khuẩn E.faecalis tìm thấy khuẩn, chống nấm, chống loét, ngừa thai, kháng khoảng - 40% trường hợp nhiễm nấm, hạ đường huyết, kháng viêm, kháng virus, khuẩn nội nha ban đầu lên đến 30 - 90% chống sốt rét, thuốc lợi tiểu, hạ sốt, chống co thắt, trường hợp điều trị nội nha lại(12,15,16), kháng u, hạ cholesterol, hạ đường huyết, miễn chí tỉ lệ E.faecalis tìm thấy cao dịch(1) Trên giới, nhiều nghiên cứu nhiều bệnh lý viêm quanh chóp răng(13,17) thực để đánh giá khả kháng khuẩn E.faecalis có khả hình thành màng sinh học phận Neem(10), so sánh hiệu (biofilm) điều kiện dinh kháng khuẩn, kháng nấm dung dịch dưỡng, mơi trường có pH cao đề kháng bơm rửa nội nha (Sodium hypochlorite(NaOCl), calci hydroxid(17), E.faecalis có khả Biopure MTAD…) chiết xuất từ Neem công vào ống ngà tiêu diệt vi khuẩn gặp tươi(3,4,8)… Tại Việt Nam, từ năm 1981, tác giả nhiều khó khăn(2) Từ cho thấy việc loại bỏ hệ Lâm Cơng Định du nhập Neem nhân vi khuẩn ống tủy điều kiện tiên giống Bình Thuận với mục đích phủ xanh cho kết điều trị nội nha thành cơng, vùng đất cằn cỗi cải tạo đất hoang hóa dung dịch bơm rửa ống tủy sử dụng Những năm gần đây, tác giả Trần Kim Quy, điều trị nội nha phải có đặc tính kháng Vũ Văn Độ, Nguyễn Tiến Thắng nghiên cứu khuẩn cao(10) hiệu Neem sản phẩm bảo vệ thực Theo luật Dược 2005 định nghĩa: Thuốc từ vật(14,18,18) Tuy nhiên, hiệu dược liệu thuốc sản xuất từ nguyên liệu kháng khuẩn Neem ứng dụng vào điều trị có nguồn gốc tự nhiên từ động vật, thực vật nha khoa chưa làm rõ Vì vậy, nghiên Chuyên Đề Răng Hàm Mặt 91 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 cứu thực với mục tiêu:“Khảo sát khả kháng vi khuẩn Enterococcus faecalis dịch chiết Neem Sodium hypochlorite 2,5 % bơm rửa ống tủy răng” ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Mẫu nghiên cứu bao gồm 80 cối nhỏ (60 hàm 20 hàm trên) Cỡ mẫu dựa giới hạn thời gian thực đề tài Chọn mẫu thuận tiện không xác suất Tiêu chí chọn mẫu Răng cối nhỏ hàm hàm dưới, thân ngun, khơng có miếng trám, chóp chân trưởng thành ống tủy khơng bị calci hóa Tiêu chí loại trừ Những có chiều dài từ chóp chân đến đường nối men xi - măng ngắn 14,0 mm có ống tủy khơng phải loại theo Vertucci Chuẩn bị vi khuẩn Cho 50 µl chủng Enterococcus faecalis ATCC 29212 vào 50 µl mơi trường Brain - Heart Infusion (BHI) nuôi cấy nhiệt độ 37 oC 24 Sau vi khuẩn phân lập mơi trường Streptococcus Faecalis (SF), ủ 37 oC 24 Hoạt hóa vi khuẩn cách lấy khóm vi khuẩn cấy vào mơi trường BHI 37 oC cho độ đục khoảng McFarland No 0,5 (khoảng 1,5x108 CFU/ml) Chuẩn bị mẫu Tất chân đồng chiều dài 14,0 mm sửa soạn đến trâm F4 (Protaper Universal) Sau đó, chân đặt vào ống nhựa khối cao su Nhiễm khuẩn mẫu Huyền trọc vi khuẩn đem trộn đều, sử dụng đầu hút vi thể bán tự động bơm 20 µl vào ống tủy Nuôi cấy mẫu điều kiện nhiệt độ 37 oC 28 ngày (thêm môi trường BHI vô khuẩn sau 48 giờ) 92 Chuẩn bị dịch chiết Neem Lá Neem thu hái có nguồn gốc vườn Dược liệu, khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Lá loại bỏ loại sâu, rửa sạch, tiến hành chiết ngày Tiến hành chiết xuất phương pháp chiết nguội dung môi cồn tuyệt đối, tỉ lệ dược liệu: dung môi 1:10 Bơm rửa ống tủy Dung dịch bơm rửa ống tủy chứa ống bơm plastic, ống tủy bơm rửa 2ml dung dịch, Đặt kim bơm rửa nội nha vừa chặt ống tủy, lùi lại 1,0 mm Sau bơm rửa với vận tốc bơm ml/phút (nhóm hàm dưới), ml/phút (nhóm hàm trên) Số lượng vi khuẩn ống tủy xác định trước bơm rửa, sau bơm rửa sau ngày điều trị KẾT QUẢ Sự thay đổi số lượng vi khuẩn nhóm dung dịch bơm rửa Dung dịch NaCl 0,9% (nhóm chứng âm) có tác dụng làm giảm số lượng vi khuẩn sau bơm rửa, nhiên tái đánh giá sau 07 ngày so với ban đầu số lượng vi khuẩn giảm khơng có ý nghĩa thống kê (p = 0,132) Khi sử dụng bơm rửa ống tủy dung dịch NaOCl 2,5% dịch chiết Neem, hai dung dịch có tác dụng làm giảm số lượng vi khuẩn ống tủy sau bơm rửa sau 07 ngày (p