Xác định đột biến EGFR ở bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ

Nghiên cứu này nhằm mô tả phổ đột biến của gen EGFR trên bệnh nhân Việt Nam, giúp tiên đoán đáp ứng lâm sàng với nhóm thuốc phân tử nhỏ TKIs.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN EGFR Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHÔNG TẾ BÀO NHỎ Lê Kiều Minh*, Trần Văn Ngọc**, Russell Ronald Braeuer*** TÓMTẮT Đặt vấn đề: Đột biến gen EGFR xảy giai đoạn sớm có tỷ lệ cao ung thư phổi khơng tế bào nhỏ (UTPKTBN) Liệu pháp điều trị trúng đích mang lại nhiều hiệu tốt việc điều trị cho bệnh nhân UTPKTBN Xác định đột biến gen có ý nghĩa quan trọng giúp bác sĩ việc lựa chọn phác đồ điều trị thích hợp để nâng cao hiệu điều trị cho bệnh nhân Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu nhằm mô tả phổ đột biến gen EGFR bệnh nhân Việt Nam, giúp tiên đốn đáp ứng lâm sàng với nhóm thuốc phân tử nhỏ TKIs Đối tượng, phương pháp nghiên cứu: Từ tháng 06/2015 đến tháng 12/2015, 64 bệnh nhân UTPKTBN khảo sát đột biến gen EGFR Kỹ thuật PCR (polymerase chain reaction) sử dụng để khuếch đại vùng chứa exon 18 – 21 EGFR từ bệnh phẩm mơ vùi nến Sau đột biến EGFR xác định kỹ thuật pyrosequencing Kết quả: 43/64 (67,2%) bệnh nhân UTPKTBN có đột biến gen EGFR, có trường hợp đột biến G719S exon 18 (2.3%), 25 đột biến đoạn exon 19 (58,1%), đột biến T790M exon 20 (18,6%), 13 đột biến L858R (30,2%) đột biến L861Q (2,3%) exon 21 Có trường hợp tồn đột biến Kết luận: Bệnh nhân Việt Nam bị UTPKTBN có tần suất đột biến EGFR cao với tỷ lệ 67,2% (43/64) Kỹ thuật pyrosequencing kỹ thuật bổ trợ tốt việc xác định đột biến gen EGFR từ mẫu mô UTPKTBN Từ khóa: Ung thư phổi tế bào khơng nhỏ; đột biến gen EGFR; liệu pháp điều trị trúng đích; pyrosequencing ABSTRACT DETECTION OF EGFR MUTATIONS IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER Le Kieu Minh, Tran Van Ngoc, Russell Ronald Braeuer * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 20 - No - 2016: 104 - 111 Background: EGFR gene mutations occur in the early stage and have high frequency in non-small cell lung cancer (NSCLC) Targeted therapy has emerged to be an important strategy in the treatment of NSCLC Detection of genetic mutation has great significance to help physicians choose the appropriate regimens to improve the effectiveness of treatment for patients Objectives: This study was performed to determine the EGFR mutation rate in Vietnamese NSCLC patients, predicting clinical response to small-molecule tyrosine kinase inhibitors for the treatment of lung cancer * Đại học Quốc tế - Đại học Quốc Gia TP.HCM Bộ môn Nội Tổng Quát, Khoa Y, Đại học Y Dược TP.HCM Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Quốc tế - Đại học Quốc Gia TP.HCM Tác giả liên lạc: BS Lê Kiều Minh ĐT: 01223992345 Email: minhle90@gmail.com ** *** 104 Chuyên Đề Nội Khoa I Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Methods: From June to December 2015, 64 patients were detected for EGFR gene mutations Polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify the region containing exons 18-21 of EGFR from formalin-fixed, paraffin-embedded lung carcinoma tissues Then EGFR mutations were analyzed by using pyrosequencing Results: 43/64 (67.2%) patients with EGFR mutations, including case with G719S mutations exon 18 (2.3%), 25 deletions in exon 19 (58.1%), cases with T790M mutation in exon 20 (18.6%), 13 cases with L858R mutation (30.2%) and with L861Q mutation (2.3%) in exon 21 There were cases occurred mutations Conclusion: High EGFR mutation rate occurs Vietnamese NSCLC patients with 67,2% (43/64) Pyrosequencing is a good complementary technique in determining EGFR mutations in NSCLC patients Keywords: Non-small cell lung cancer; EGFR mutation; Targeted therapy; Pyrosequencing gen kích hoạt ung thư tế bào ĐẶTVẤNĐỀ ung thư mục tiêu Ung thư phổi năm loại ung nghiên cứu tương lai khuyến thư phổ biến nam nữ giới cáo điều trị phòng ngừa bệnh ung thư phổi Một giới có Việt Nam(16) Tỷ lệ vài nghiên cứu cho thấy việc áp dụng sống bệnh nhân ung thư phổi thấp, kỹ thuật sinh học phân tử tầm soát, khoảng 15,7% Mỹ có khoảng 1,2 triệu chẩn đốn điều trị mang lại nhiều lợi ích bệnh nhân tử vong năm giới (16, 19) cho bệnh nhân ung thư Theo dự báo, số có xu hướng tăng Những nghiên cứu biến đổi gen làm năm tạo nên mối đe dọa thay đổi cân hoạt động sống tế không nhỏ cho sức khỏe cộng đồng, tăng áp bào làm cho tế bào trở nên nhạy lực lên kinh tế chi phí đắt đỏ để điều cảm tăng khả kháng tác trị ung thư, ảnh hưởng đến nhân ngoại bào sở khoa học để nhà suất lao động Tại Mỹ, số bệnh nhân tử vong khoa học nghiên cứu ứng dụng loại ung thư phổi năm khoảng 160.000 thuốc tác động trực tiếp lên thụ thể tế người, số Việt Nam 8.100 bào nhằm ức chế phát triển tế bào ung người (5, 11) Ở Việt Nam, ung thư phổi thư Mặc dù có nhiều nghiên cứu chuyên sâu năm loại ung thư phổ biến bên thực tiên lượng bệnh cạnh ung thư gan, dày, đại trực tràng nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ vòm họng nam giới ung thư cổ tử cung, (UTPKTBN) nhiều hạn chế, vú, dày, đại trực tràng nữ giới (11) Ung đặc biệt bệnh nhân có di xa Tuy thư phổi nguyên phát có xuất độ cao, đặc biệt nhiên, liệu pháp điều trị trúng đích nam giới với tỷ lệ 29,6 bệnh nhân/ 100.000 (LPĐTTĐ), chẳng hạn chất ức chế hoạt dân, nữ giới 7,2 bệnh nhân/ 100.000 tính tyrosine kinase thụ thể yếu tố tăng dân(11) trưởng biểu bì (EGFR – epidermal growth Khoảng 80 - 90% trường hợp ung thư factor receptor) gồm gefitinib erlotinib, phổi thể khơng tế bào nhỏ, lại thể tế bào có hiệu bật bệnh nhân nhỏ (17) Hiện nay, ung thư phổi thường UTPKTBN xác định có đột biến chẩn đốn giai đoạn muộn bệnh EGFR Các đột biến gen EGFR bệnh nhân không cho thấy triệu chứng cụ thể, hầu hết UTPKTBN thường thấy có liên quan với đột trường hợp phát rơi vào giai đoạn biến bốn exon 18, 19, 20, 21 mã hóa vùng tiến triển di Nhiều nghiên cứu gần tyrosine kinase, nhiều nghiên cứu cho di truyền học phân tử phát tồn Hô Hấp 105 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 thấy bệnh nhân thường đáp ứng tốt với thuốc điều trị đích (15) Việc xác định đột biến gen EGFR bệnh nhân UTPKTBN cung cấp thông tin quan trọng cho bác sĩ lâm sàng để định LPĐTTĐ Hiện có nhiều kỹ thuật sử dụng để phát đột biến gen EGFR độ nhạy kỹ thuật phụ thuộc vào mật độ tế bào ung thư mẫu mô Giải trình tự DNA kỹ thuật sử dụng phổ biến Việt Nam Tuy nhiên, kỹ thuật giải trình tự DNA đòi hỏi phải có 25% số tế bào ung thư mẫu ly trích DNA phát đột biến(21,22) Kỹ thuật chẩn đoán đột biến gen pyrosequencing cho phép đọc tất kiểu đột biến vùng khảo sát có độ nhạy cao kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA Phương pháp phát triển Thụy Điển phát đột biến mẫu có chứa ≤ 10% số tế bào ung thư mẫu ly trích, phù hợp cho việc phân tích đoạn DNA ngắn so với kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA(1) Với mục đích áp dụng kết xét nghiệm đột biến gen EGFR để định hướng điều trị cho bệnh nhân UTPKTBN Việt Nam, đề tài nghiên cứu thực với mục tiêu mô tả phổ đột biến gen EGFR bệnh nhân UTPKTBN kỹ thuật pyrosequencing giúp tiên đoán đáp ứng lâm sàng với nhóm thuốc phân tử nhỏ TKIs ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu 64 mẫu mô sinh thiết bệnh nhân UTPKTBN thu thập Bệnh viện 115, Bệnh viện Thống Nhất, Bệnh viện Chợ Rẫy Bệnh viện quốc tế City Các mẫu bệnh phẩm thu nhận từ khối u qua phương pháp phẫu thuật, sinh thiết phế quản (nội soi phế quản ống mềm, sinh thiết mù xuyên phế quản, sinh thiết xuyên phế quản hướng dẫn màu huỳnh quang) sinh thiết phổi từ Mẫu bệnh phẩm tiến hành xét nghiệm chẩn đốn giải 106 phẫu bệnh qua mơ bệnh học xét nghiệm hóa mơ miễn dịch Các mẫu mơ ung thư phổi đúc paraffin (sáp nến) tìm đột biến gen EGFR Phòng xét nghiệm Nam Khoa-Biotek, Thành phố Hồ Chí Minh Phương pháp nghiên cứu - Kỹ thuật tách chiết DNA Mẫu mô vùng tế bào ung thư đúc thành mô vùi nến dùng để chẩn đoán giải phẫu bệnh Xylene (Merck, Đức) sử dụng để khử nến, sau rửa lại ethanol tuyệt đối để khô trước ủ với proteinase K (Qiagen, Đức) dung dịch đệm 56oC 90oC DNA sau tách chiết tinh sử dụng QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (Qiagen, Đức) DNA kết tủa ethanol tuyệt đối dung dịch đệm AL (Qiagen, Đức) Nồng độ độ tinh DNA xác định máy Nano-Drop, mẫu DNA đạt giá trị OD 260/OD280 ≥ 1.7 sử dụng để phân tích - Kỹ thuật PCR khuếch đại exon 18, 19, 20 exon 21 gen EGFR Các đoạn mồi đặc hiệu khuếch đại exon 18, 19, 20 21 gene EGFR thiết kế phần mềm Primer Premier dựa trình tự chuẩn EGFR có số accession NC_000007 GPC_000000031 GenBank (National center for biotechnology information, NCBI) Những mồi chọn thỏa yêu cầu sau: phải chứa vị trí codon đột biến khảo sát: 719 exon 18, deletions exon 19, 768 790 exon 20, 858 861 exon 21 gene EGFR; khuếch đại sản phẩm có kích thước khơng vượt q 250 bp; nhiệt độ bắt cặp 53oC; không tạo cấu trúc thứ cấp “hairpin”, “primerdimer” hay “crossdimer” bền vững với hay mồi khác; nhiệt độ mồi xuôi mồi ngược không lệch 4oC Mồi đạt yêu cầu kiểm tra tính đặc hiệu trang NCBI với cơng cụ Primer BLAST Trong tube PCR có tổng thể tích 25 μL, thành phần gồm có PCR buffer, 3mM MgCl2, dNTP (250 μM cho Chuyên Đề Nội Khoa I Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 loại), loại mồi xuôi ngược (0,5 μM cho loại), 1,25 unit HotStart Taq Polymerase (Qiagen, Đức) 50 ng genomic DNA Chu kỳ luân nhiệt thực máy ³Prime Thermal Cycler (Techne, Anh) bao gồm giai đoạn biến tính ban đầu 95oC 15 phút, theo sau 42 chu kỳ gồm biến tính 95oC 20 giây, gắn mồi 53oC 30 giây, tổng hợp chuỗi DNA 72oC 20 giây kết thúc giai đoạn kéo dài sản phẩm 72oC 10 phút Sản phẩm PCR phát điện di thạch agarose 2% có nhuộm ethidium bromide quan sát soi gel Kết đạt yêu cầu kết điện di exon cho band DNA khuếch đại dương, kích thước sản phẩm exon là: exon 18 (171 bp), exon 19 (163bp), exon 20 (291 bp) exon 21 (97 bp) Nghiên cứu Y học kết thúc chuỗi dideoxynucleotide Kết phân tích phần mềm PyroMark Q24 máy tính Các số liệu xử lý thống kê phần mềm SPSS 16.0 KẾT QUẢ Đặc điểm lâm sàng - giải phẫu bệnh Trong thời gian từ tháng 06/2015 – 12/2015, tiến hành phân tích đột biến gen EGFR cho 64 trường hợp UTPKTBN, bao gồm 38 bệnh nhân nam 26 nữ, tỷ lệ nam/nữ 1,5/1 Tuổi trung bình bệnh nhân 63 tuổi (khoảng tuổi 38 - 85) Tất bệnh nhân chẩn đốn carcinơm tuyến, với giai đoạn xâm lấn di Tiền hút thuốc ghi nhận đầy đủ hồ sơ bệnh án Đột biến gen EGFR - Kỹ thuật pyrosequencing Bảng 1: Tỷ lệ dạng đột biến gen EGFR bệnh Phản ứng pyrosequencing thực nhân UTPKTBN máy PyroMark Q24 (Qiagen, Đức) sử Tổng số Dạng đột biến Số mẫu Tỷ lệ mẫu dụng kit therascreen EGFR Pyro (Qiagen, Không đột biến EGFR 21 32.8% Đức) Kỹ thuật dựa nguyên lý “giải 64 Đột biến EGFR 43 67.2% trình tự tổng hợp” bao gồm khởi động G719S exon 18 2.3% sợi DNA giải trình tự, giải trình Deletions exon 19 25 58.1% sợi DNA bổ sung phản ứng enzyme T790M exon 20 18.6% 43 L858R exon 21 13 30.2% Giải trình tự việc tổng hợp dựa L861Q exon 21 2.3% nhận biết pyrophosphate (PPi) giải đột biến trở lên 11.6% phóng trình gắn nucleotide, tạo tín hiệu ánh sáng, hiệu kỹ thuật Bảng 2: Tương quan đột biến gen với đặc điểm lâm sàng - giải phẫu bệnh Giới tính Độ tuổi Tiền hút thuốc Nam Nữ ≤ 65 > 65 a Không hút thuốc b Đã hút thuốc c Đang hút thuốc Số mẫu (n = 64) 38 26 40 24 22 17 25 Hút 100 điếu thuốc đến thời điểm chẩn đoán a Đột biến EGFR (n = 43) 24 19 26 17 18 12 13 Tỷ lệ % 63,2% 73,1% 65% 70,8% 81.8% 70.5% 52% p 0,41 0,73 0,09 Còn hút thuốc bỏ hút thuốc năm trước chẩn đoán c Bỏ hút thuốc năm trước chẩn đốn b Hơ Hấp 107 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Hình Kết giải trình tự gen EGFR pyrosequencing (A) Hình ảnh đột biến xóa đoạn ELREA exon 19 (bệnh nhân MS39); (B) Hình ảnh đột biến L858R exon 21 (bệnh nhân MS41); (C) Hình ảnh đột biến T790M exon 20 (bệnh nhân MS33) codon 746 đến 750 bị mất, đột Nhận xét: Bệnh nhân MS39 xuất hiện biến có tên đột biến ΔE746-A750 hay tượng xóa đoạn 15 nucleotid exon 19 làm ELREA (Hình 1A) So sánh với trình tự DNA cho acid amin acid glutamic (E) - leucine lành tính, vị trí nucleotid 2537 exon 21 (L) – arginine (R) – glutamic (E) –alanine (A) 108 Chuyên Đề Nội Khoa I Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 xuất thêm đỉnh T bị biến đổi thành G, làm cho acid amin Leucine (L) codon 858 biến đổi thành Arginine (R), gây nên đột biến L858R bệnh nhân MS41 (Hình 1B) Tại vị trí nucleotid 2369 exon 20 xuất thêm đỉnh C bị biến đổi thành T, làm cho acid amin Threonine (T) codon 790 bị biến đổi thành Methionine (M), gây nên đột biến T790M bệnh nhân MS33 (Hình 1C) BÀN LUẬN Nhiều nghiên cứu giới cho thấy khoảng 5% - 60% bệnh nhân UTPKTBN mang đột biến EGFR xuất exon gen, từ exons 18 đến 21 (12, 2, 23) Tỷ lệ đột biến EGFR dao động khoảng 5% - 15% người da trắng (2, 4) khoảng 38% - 58% bệnh nhân Đông Á (8, 23) Trong nghiên cứu này, kỹ thuật pyrosequencing sử dụng để khảo sát exon cho 64 bệnh nhân, phát 43 trường hợp có đột biến EGFR (67,2%) (Bảng 1) Kết tương đồng với ghi nhận PIONEER năm 2012 tỷ lệ đột biến gen EGFR bệnh nhân ung thư phổi carcinôm tuyến Việt Nam Nghiên cứu PIONEER tiến hành 1450 mẫu ung thư phổi carcinôm tuyến nước Châu Á: Việt Nam, Đài Loan, Thái Lan, Philippin, Trung Quốc, Hồng Kong, Ấn Độ phương pháp Scorpion ARMS (Therascreen EGFR RGQ kit) Kết từ nghiên cứu cho thấy Việt Nam nước có tỷ lệ đột biến EGFR cao nước với 64,2% (77/120 ca) tỷ lệ đột biến EGFR trung bình 51,4% (746/1450 ca)(21) Tỷ lệ đột biến gen EGFR bệnh nhân UTPKTBN nghiên cứu phát cao so với ghi nhận Hoàng Anh Vũ (2011) 42% Nguyễn Minh Hà (2013) 35.71% (7, 13) Sở dĩ có khác biệt tác giả dùng kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA kỹ thuật ScorpionsAmplification Refractory Mutation System (Scorpions ARMS) để xác định đột biến EGFR Kỹ thuật giải trình tự chuỗi DNA phát đột biến có tỷ lệ tế bào ung thư cao 30% kỹ thuật Scorpions ARMS cho phép phát Hô Hấp Nghiên cứu Y học đột biến gen mơ phân tích có tỷ lệ tế bào ung thư thấp 30% dẫn đến bỏ sót số mẫu có đột biến tỷ lệ thấp (7, 13) Trong nghiên cứu này, sử dụng kỹ thuật pyrosequencing xác định đột biến EGFR Với kỹ thuật 5% tỷ lệ tế bào ung thư phát được, mẫu có tỷ lệ đột biến EGFR thấp xác định đột biến (14) Điều có ý nghĩa đặc biệt bệnh nhân UTPKTBN, tạo điều kiện cho bệnh nhân nhanh chóng áp dụng phác đồ điều trị hiệu Chúng tơi khơng thấy có mối liên quan đột biến EGFR với giới tính (p = 0,41), độ tuổi (p = 0,73) tiền sử hút thuốc (p = 0,09) (Bảng 2) Theo nghiên cứu Sun PL cộng ghi nhận năm 2012 tỷ lệ đột biến nữ nam 65.7% 34.3% Các tác giả ghi nhận đột biến EGFR nhóm khơng hút thuốc cao nhóm hút thuốc (lần lượt 63,4% 32%)(24) Mối liên quan đột biến EGFR tiền sử hút thuốc ghi nhận nghiên cứu tác giả Phạm Duy Khánh cộng vào năm 2006 Nghiên cứu tác giả Phạm Duy Khánh thực 265 bệnh nhân ung thư phổi Mỹ với tỷ lệ đột biến gen EGFR 25% Trong đó, đột biến EGFR xác định người không hút thuốc 51%, người hút thuốc 19% người hút thuốc 4%(18) Tác giả Yoon Hee Choi cộng ghi nhận nghiên cứu có 39% bệnh nhân trẻ 57 có đột biến EGFR, số bệnh nhân 65 tuổi 69%, tuổi cao tỷ lệ đột biến gen EGFR tăng theo(3) Trong đột biến phát hiện, đột biến đoạn exon 19 chiếm tỷ lệ cao (25/43 trường hợp, 58,1%) (Bảng 1) Đây đột biến xóa đoạn điển hình xảy chuỗi ELREA exon 19 gen EGFR (Hình 1A) Kế đến đột biến L858R exon 21 (13/43 trường hợp, 30,2%) (Bảng 1) Đây đột biến thay nucleotid xảy codon 858 thuộc exon 21 gen EGFR (Hình 1B) Điều cho thấy nhóm đột biến xóa đoạn exon 19 đột biến L858R 109 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 exon 21 chiếm tỷ lệ lớn loại đột biến gen EGFR nhóm bệnh nhân UTPKTBN Việt Nam Hai kiểu đột biến tác giả Hoàng Anh Vũ (2011) ghi nhận cho đáp ứng tốt với gefitinib elortinib Hoàng Anh Vũ kết luận chẩn đốn đột biến EGFR giải trình tự chuỗi DNA giúp ích cho việc lựa chọn bệnh nhân UTPKTBN định điều trị thuốc nhắm trúng đích phân tử(7) Bên cạnh đó, chúng tơi xác định nghiên cứu có 8/43 bệnh nhân dương tính với đột biến T790M chiếm tỷ lệ 18,6% (Bảng 1) Đây đột biến thay nucleotid xảy codon 790 thuộc exon 20 (Hình 1C) Loại đột biến cho kháng lại thuốc TKIs hệ đầu (gefitinib erlotinib)(25) Đột biến T790M làm giảm lực thuốc TKIs hệ đầu với vùng kinase EGFR, từ đối kháng lại chế ức chế kinase giảm tính cạnh tranh thuốc với ATP (25) Một số nghiên cứu giới cho thấy việc sử dụng thuốc EGFR TKIs hệ thứ (như AZD9291 CO1686) cho kết khả quan việc làm giảm tính kháng thuốc đột biến T790M (10, 20) Thêm vào đó, phối hợp thuốc afatinib (một EGFR-TKI hệ 2) cetuximab (kháng thể kháng EGFR) cho thấy tín hiệu tốt việc ức chế thể EGFR có đột biến T790M (6, 9) Tuy nhiên, phương pháp kiểm soát bệnh cụ thể cho trường hợp kháng TKIs bệnh nhân UTPKTBN có đột biến EGFR chưa khuyến cáo thức chưa có kết đầy đủ chuyên sâu từ nghiên cứu lâm sàng tiến hành Trong đột biến phát hiện, hai dạng đột biến G719S exon 18 L861Q exon 21 chiếm tỷ lệ nhỏ 2,3% (1/43 ca cho loại) (Bảng 1) Tại vị trí nucleotid 2155 exon 21, G bị biến đổi thành A, làm cho acid amin Glycine (G) codon 718 biến đổi thành Serine (S), gây nên đột biến G719S Ở đột biến L861Q, T bị biến đổi thành A vị trí nucleotid 2582 exon 21, làm cho acid amin Leucine (L) codon 861 biến đổi thành Glutamine (Q) Ngồi ra, chúng tơi ghi nhận có ca tồn đột biến lúc, bao 110 gồm ca chứa đột biến T790M - L858R, ca chứa đột biến T790M - Deletions, ca đột biến Deletions - L858R ca đột biến Deletions T790M (Bảng 1) KẾT LUẬN Đột biến EGFR phát với tỷ lệ cao (67,2%) bệnh nhân Việt Nam bị UTPKTBN Trong đột biến phát hiện, đột biến đoạn exon 19 chiếm tỷ lệ cao với 58,1% (25/43 ca), đột biến L858R exon 21 với 30,2% (13/43 ca), đột biến T790M exon 20 chiếm tỷ lệ 18,6% (8/43 ca), đột biến G719S exon 18 L861Q exon 21 chiếm tỷ lệ nhỏ 2,3% (1/43 ca cho loại) có trường hợp tồn đột biến lúc Kết nghiên cứu cho thấy pyrosequencing kỹ thuật bổ trợ tốt việc xác định đột biến gen EGFR từ mẫu mô UTPKTBN giúp phát đột biến có tỷ lệ tế bào ung thư thấp cần phát triển Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Ahmadian A, Ehn M and Hober S (2006) Pyrosequencing: history, biochemistry and future Clinica Chimica Acta 363(12):83-94 Boch C, Kollmeier J, Roth A et al (2013) The frequency of EGFR and KRAS mutations in non-small cell lung cancer (NSCLC): routine screening data for central Europe from a cohort study BMJ Open 3:e002560 Choi YH et al (2010) Association between age at diagnosis and the presence of EGFR mutations in female patients with resected non-small cell lung cancer J Thorac Oncol 5(12):19491952 Ebert W, Dienemann H, Fatech-Moghadam A et al (1994) Cytokeratin 19 fragment CYFRA 21-1 compared with carcinoembryonic antigen, squamous cell carcinoma antigen and neuro specific enolase in lung cancer Results of an international multicenter study Eur J Clin Chem Clin Biochem 32(3):189-99 Ferlay J, Shin HR, Bray F, Forman D, Mathers C, Parkin DM (2010) Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008 Int J Cancer 127(12):2893-917 Gomes JR, Cruz MR (2015) Combination of afatinib with cetuximab in patients with EGFR-mutant non-small-cell lung cancer resistant to EGFR inhibitors Onco Targets Ther 8: 1137– 1142 Hoàng Anh Vũ, et al (2011) Đột biến gen EGFR KRAS bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ Y học TP Hồ Chí Minh Chuyên đề Điều dưỡng Kỹ thuật Y học, PB Tập 17(4):165-171 Huang SF, Liu HP, Li LH et al (2004) High frequency of epidermal growth factor receptor mutations with complex Chuyên Đề Nội Khoa I Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 10 11 12 13 14 15 16 17 18 patterns in non-small cell lung cancers related to gefitinib responsiveness in Taiwan Clin Cancer Res 10(24):8195-203 Janjigian YY, Smit EF, Groen HJ (2014) Dual inhibition of EGFR with afatinib and cetuximab in kinase inhibitorresistant EGFR-mutant lung cancer with and without T790M mutations Cancer Discov 4(9):1036-45 Janne PA, Yang JC, Kim DW et al (2015) AZD9291 in EGFR inhibitor-resistant non-small-cell lung cancer N Engl J Med 372(18):1689-99 McDonald M, Hertz RP, Lowenthal SWP (2008) The burden of cancer in Asia Pfixer Inc Mok TS, Wu YL, Thongprasert S et al (2009) Gefitinib or carboplatin-paclitaxel in pulmonary adenocarcinoma N Eng J Med 361(10), 947-958 Nguyễn Minh Hà (2013) Xác định đột biến gen EGFR bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ Y học TP Hồ Chí Minh, Tập 17, Số 1, pp 34-37 Ogino S, Kawasaki T, Brahmandam M, et al (2005) Sensitive sequencing method for KRAS mutation detection by pyrosequencing Journal of Molecular Diagnostics 7(3):413421 Pao W, Miller VA (2005) Epidermal growth factor receptor mutations, small-molecule kinase inhibitors, and non-smallcell lung cancer: current knowledge and future directions J Clin Oncol 23(11),.2556-2568 Parkin DM, Bray F, Ferlay J, Pisani P (2005) Global cancer statistic CA Cancer J Clin 55(2): 74-108 Peto R, Doll R (1978) Cigarette smoking and bronchial carcinoma: dose and time relationships among regular smokers and lifelong non-smoker J Epidemiol Community Health 32(4):303-13 Pham DK, Kris MG, Riely GJ et al (2006) Use of cigarettesmoking history to estimate the likelihood of mutations in Hô Hấp 19 20 21 22 23 24 25 Nghiên cứu Y học epidermal growth factor receptor gene exons 19 and 21 in lung adenocarcinomas J Clin Oncol 24:1700-1704 Reis LAG, Eisner M, Kosary C et al (2005) Cancer statistic review 1995-2002 National Cancer Institute, Bethesda, MD Sequist LV, Soria J, Gadgeel SM (2014) First-in-human evaluation of CO-1686, an irreversible, highly selective tyrosine kinase inhibitor of mutations of EGFR (activating and T790M) J Clin Oncol 32:5s Shi Y, Au JS et al (2014) A Prospective, molecular epidemiology study of EGFR mutations in Asian patients with advanced non-small cell lung cancer of adenocarcinoma histology (PIONEER) J Thoracic Oncology 9(2): 154–162 Shigematsu H, Lin L, Takahashi T et al (2005) Clinical and biological features associated with epidermal growth factor receptor gene mutations in lung cancers J Natl Cancer Inst 97(5):339-46 Sriuranpong V, Chantranuwat C, Huapai N et al (2006) High frequency of mutation of epidermal growth factor receptor in lung adenocarcinoma in Thailand Cancer Lett 239(2):292-7 Sun PL, Seol H, Lee HJ et al (2012) High incidence of EGFR mutations in Korean men smokers with no intratumoral heterogeneity of lung adenocarcinomas Journal of Thoracic Oncology 7(2):324-330 Wu K, House L, Liu W, Cho WC (2012) Personalized targeted therapy for lung cancer Int J Mol Sci 13(9):11471–11496 Ngày nhận báo: 20/11/2015 Ngày phản biện nhận xét báo: 30/11/2015 Ngày báo đăng: 15/02/2016 111 ... khơng tế bào nhỏ, lại thể tế bào có hiệu bật bệnh nhân nhỏ (17) Hiện nay, ung thư phổi thư ng UTPKTBN xác định có đột biến chẩn đốn giai đoạn muộn bệnh EGFR Các đột biến gen EGFR bệnh nhân không. .. cứu chuyên sâu năm loại ung thư phổ biến bên thực tiên lượng bệnh cạnh ung thư gan, dày, đại trực tràng nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ vòm họng nam giới ung thư cổ tử cung, (UTPKTBN) nhiều hạn... biến tỷ lệ thấp (7, 13) Trong nghiên cứu này, sử dụng kỹ thuật pyrosequencing xác định đột biến EGFR Với kỹ thuật 5% tỷ lệ tế bào ung thư phát được, mẫu có tỷ lệ đột biến EGFR thấp xác định đột