Phát hiện đột biến T790M thứ phát trên gen EGFR ở bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ kháng thuốc điều trị đích

Nghiên cứu này tiến hành nhằm mục tiêu xác định đột biến khảng thuoc thứ phát T790M trên gen EGFR ờ 'bệnh nhân ung thự phổi không tế bào nhỏ có dấu hiệu kháng thuốc điều trị đích.Kỹ [r]

estrogen ảnh hường đến điều hoà biểu gen MDM2 Việc nghiên cứu sâu chế bệnh sinh UTP mối liên quan tương tác kiểu gen với yếu tố nguy khốc đưa hieu biết toàn diện, giúp dự phịng, tiên lượng cải thiện chất lượng điều trị cho bệnh nhân UTP nói riêng ung thư nói chung

KẾT LUẬN

Kết nghiên cứu ghi nhận kiểu gen đòng hợp tử SNP 309GG gen MDM2 làm tăng nguy ung thư phổi nguyên phát 1,6 lần (OR = 1,6; 95%CI =1,1 - 2,41), ung ỉhư phổi không tế bào nhỏ 1,58 lần 1,6 lần nam giới theo mô hinh gen lặn (OR=1,6; 95%CI=1,01-2,61).Kiểu gen SNP 309GG gen MDM2 kết hợp hút thuốc ỉá làm tăng nguy mắc ung thư phổi 2,21 lần (OR = 2,21; 95%Ci = 1,31-2,73)

LƠI CÀM ƠN _

Nghiên cứu thực với hỗ trợ kinh phí từ nhiệm vụ Quỹ gen cấp Nhà nước “Đánh giả đặc điềm di truyền người Việt Nam" Nhóm nghiên cứu trân trọng cảm ơn Trung tâm Hô hấp, Trung tâm Y học hạt nhân Ung bướu - Bệnh viện Bạch Mai, Trung tâm Gen-Protein thuộc Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ trinh nghiên cứu

TÀI LIẾU THAM KHẢO

1 Jacques Ferlay, Isabelle Soerjomataram, Rajesh Dikshit et a! (2015) Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012 Int J Cancer, 136: E359-E386

2 Ryan K M , Phillips A.C., Vousden K.H (2001) Regulation and function of the p53 tumor suppressor protein, CurrOpin Ceil Biol, 13(3): 332-7

3 Zamzami N., Kroemer G (2005) p53 in apoptosis control: an introduction, Biochem Biophys Res Commun, 331(3), 685-7

4 Wu H, Leng RP (2011) UBE4B, a ubiquitin chain assembly factor, is required for MDM2-mediated p53 polyubiquitination and degradation Cel! Cycle, 10: 1912- 1915

5 iwkuma T., Lozano G (2003) MDM2, an introduction, Molecular Cancer Research, 1(14): 993- 1000

6 Moll U.M., Petrenko o (2003) The MDM2-p53 interaction, Molecular Cancer Research, (14): 1001-8

7 Gui X.H., Qiu L.X., Zhang H.F ei al (2009) MDM2 309 T/G polymorphism is associated with lung cancer risk among Asians, European journal of cancer, 45:2023-26

8 Ngô Quý Châu, Lê Hoàn, Nguyễn Thanh Phương (2012) “Nghiên cứu đặc điễm iâm sàng cận lâm sàng ung thư phổi nguyên phái di sọ não íại Trung tâm Hơ hấp- Bệnh viện Bạch Mai”, Tạp chí Y học Lâm sàng, 68: 30-34

9 Xu Wang, Lina Jin, Jiuwei Cui (2014).Mouse double minute-2 homoiog (MOM2)-rs2279744 polymorphism associated with lung cancer risk in a Northeastern Chinese population Thoracic Cancerô: 91-96

10 VVenwu He, Jianxiong Long, Lei Xian cs (2012).MDM2 SNP309 polymorphism is associated with iung cancer risk in women: A meta-analysis using METAGEN, Experimental and therapeutic medicine, 4: 569-576

11 Park S.H., Choi J.E., Kim E.J cs (2006) MDM2 309T>G polymorphism and risk of lung cancer in a Korean population, Lung cancer, 54,19-24

PHÁTHIỆN ĐỘT BIẾN T790M THỨ PHÁT TRÊN GEN EGFR Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHÔNG TÉ BÀO NHỎ

KHÁNG THUỐC ĐIẺU TR| ĐÍCH

Người thự c hiện: Trần Quốc Đạt

(Nghiên cứu viên - TT nghiên cứu Gen-Protein Trường ĐH Y Hà Nội)

Cán hướng đẫn: PG STS Trần Vân Khánh

(Bộ môn Bệnh học phân tử - Khoa K ỹ thuật Y học, Trường ĐH Y Hà Nội Trung tâm nghiên cứu Gen-Protein Trường ĐH Y Hà Nọi)

TÓM TÁT

Liệu pháp điều trị ung thư trúng đích (targeted cancer íherapy) đời trở thành bước tiến vượt bậc việc điều trị ung thư phổi khơng tế bào nhỏ Liệu pháp có hiệu rơ rệt nhóm bệnh nhẩn đuực xác định có đột biến đâp ứng với thuốc ức chế hoạt tỉnh tymsine kinase (TKI - tyrosine kinase inhibitor) EGFR (đột biển LREA exon 19 L858R exon 21) Tuy nhiên, sau khoảng 10-20 tháng điều trị, đa số bệnh nhân ung thư phổi xuất tình trạng kháng thuốc th ứ phát s ự phát sinh m ột sổ biển đ ổ i cấp độ phàn 'tử khối U, trong xuất đột biến T790M thuộc exon 20 gen ẼGFR chiếm đa số trường hợp Nghiên cứu tiến hành nhằm mục tiêu xác định đột biến khảng thuoc thứ phát T790M gen EGFR 'bệnh nhân ung thự phổi không tế bào nhỏ có dấu hiệu kháng thuốc điều trị đích.Kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp kỹ thuật Scorpions ARMS (Scorpions-Amplification Refractory Mutation System) với độ nhạy caođuực áp dụng đề xác định đột biến Kết cho thấy phát 5/11 (45%) bệnh nhân có đột biến khàng thụềc T790M exon

o n t r A r , s t A o U t u ể L ! Í L Ỉ - J n J ' í -

thiệu ca lâm sàng điển hình tượng kháng thuổc TKI.

SUMMARY

IDENTIFYING OF SECONDARY EGFR T790M MUTATION IN REBIOPSY OF NON-SMALL CELL LUNG CAtiCER PATIENTS WITH ACQUIRE RESISTANCE TO TYROSINE KINASE INHIBITOR

Dat Tran Quoc (Center for Gene-Protein Research - Hanoi Medical University) Targeted cancer therapy has opened new window to treat non-small cell lung cancer This therapy significantly effective for the patient group who has determined to be mutated in response EGFR tyrosine kinase inhibitors (LREA deletion in exon 19 o r L858R in exon 21) However, acquired resistance o f EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in non-small cell lung cancer patients prevails after 10-20 months o f treatment, in relation to several genetic alterations o f the tumors, in which the most frequent is the secondary mutation T790M in exon 20 o f the EGFR gene In this study, we investigated 11 EGFR-mutant patients who had poor response to target therapy and also reports a typical clinical case with TKI acquired resistance;using a standard sequencing based method followed by Scorpions ARMS (Scorpions-Amplification Refractory Mutation System) method with an analytical sensitivity The results showed thai, T790M mutation analysis o f the specimens from the 11 patients detected mutants (45%), including mutants can detect by both sequencing and Scorpions ARMS method and mutants only can detect by Scorpions ARMS.

Keyw ords: Non-small cell lung cancer, EGFR, TKI acquired resistance, Secondary T790M mutation.

ĐẶT VÁN ĐỀ

Liệu pháp điều trị ung thư trúng đích (targeted cancer therapy) sử dụng thuốc điều trị đích có khả tác động xác tới íhụ thể ỵếũ tố phát triển biểu mô (Epidermal Growth Factor Receptor - EGFR) ảp dụng phổ biến bước tiến vượt bậc điều trị ung thư phổi không tế bào nhỏ (UTPKTBN) [1] Những bệnh nhân UTPKTBN có đột biến gen EGFR đáp ứng tổí với thuốc ức chế hoạt tính tyrosine kinase cứa EGFR (EGFR TKI) Liệu pháp điều trị trúng đích có ưu điểm liều điều trị thấp, đặc hiệu, độc hại đặc biệt hiệu quà nâng cao cách rõ rệt, thể trạna bệnh nhẩn tăng cường kéo dài thời gian song cho bệnh nhân [2],[3] Nhiều nghiên cứu cho thấy bệnh nhán UTPKTBN giai đoạn muộn mang đột biến gen EGFR làm tăng tĩnh nhạy cảm vởi EGFR TKI có tỷ lệ đáp ứng với thuốc EGFR TKI cao 60% kéo dài thời gian sống bệnh không tiến triển (Progression-Free Survival, PFS) trung bình tháng [4][5] Tuy nhiên, nhà khoa học giới đâ quan sát thấy tượng kháng thuốc trị đích sau thời gian điều trị định

ở gần tầt bệnh nhân ung thư [6] Bằng nhiều

cơ chế khác nhau, biến đổi di tmyền tiếp tục phát sinh, tạo cốc dòng tế bào ung thứ mang đọt biến mới, thích ứng với tác động thuốc điều trị đích Nếu khơng có biện pháp đieu trị thích hợp, tế bào đơn lẻ nhanh chóng phát trlến thành tổ chức ung thư có khả tăng sinh, xâm lấn, di căn, chèn ép quan gây tử vong cho bệnh nhân Nhiều nghiên cứu giới ghi nhận số chế gây nên tình trạng kháhg thuổc EGFR TKi; đố cỏ xuầt số đột biến phân từ EGFR (đột biền T790M exon 20, đột biến L747S D 76ĨY exon 19, 'đột biển T854A exon 21 ), khuếch đại gen cMET (gen mã hóa thụ yếu tố phát triền tế bào gan), chuyển dạng biểu mô-trung mô chuyển từ dạng không t i bào nhỏ sang dạng iế bảo nho [7][8] Đột biến thứ phát T790M exon 20 gen EGFR nguyên nhân phổ biến nhất, chiếm khoảng 50% trường hợp [8] Trước thực tiễn đó, đề tài “Phát đột biến T790M thứ phát gen EGFR bệnh nhân ung thư phổi

không tế bào nhỏ kháng thuốc điều trị đích” ổược thực với mục tiêuxác định đột biến kháng thuốc tliứ phát T790M gen EGFR bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ có dếu hiệu khángTKI, góp phần làm rỗ chế kháng thuốc bien đổi gen tế bào ung thư phổi, từ hỗ trợbác sĩ lâm sàng íựa chọn thay đổi phác đồ đ ề u írị phù hợp

ĐĨI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c u 1 Đối tữợng nghiên cứu

Mâu mô sinh thiết lần lần 11 bệnh nhân UTPKTBN thu thập Bệnh viện K Trung ương, Bệnh viện Hữu nghị Bệnh viện Bạch Mai Các bệnh nhân chấn đốn xác định ung thư phổi biểu mơ tuyếngiai đoặn IIIB đến IV dựa vào đặc điểm iâm sàng kết mô bệnh học Bệnh nhân ổược xét nghiệm xác định có đột biến đáp ứng với thuốc ẼGFR TKItrên gen EGFR mẫu mô ung thư sinh thiết lần trước điều trị đỉch(6 bệnh nhân có đột biến đoạn điển hình LREA exon 19 bệnh nhân có đột biến L858R exon 21), ngồi khơng phát thêm bết đột biến khác gen EGFR Bệnh nhân sử dụng thuốc EGFR TKI, theo dõi đáp ứng thuốc theo tiêu chuẩn RECIST V1.1 đánh giá tỉnh trạng kháng thứ phát thuốc EGFR TKI theo tiêu chuẫn Jackman cộng [9]

Địa điềm nghiên cứu: Trung tám Nghiên cứu Gen- Protein, Trường Đại học Y Hà Nội

2 Phương phấp nghiên cứu

- Kỹ thuật tách chiết DNA: Mâu mô đúc parafin lần sinh thiết lựa chọn xác vùng tế bào ung thư, Parafin đữợc loại bỏ xylen DNA tách chiết theo qui trình phenol/chloroform (protein phân huỷ Proteinase K vởi nồng độ mg/mL) Nồng độ độ tinh DNA xác định bắng máy Nano-Drop, mẫu DNA đạt giá trị ÒD 260/ÕD2Ố0 > 1.8 sử dụng để phân tích

chiếu so sánh với trỉnh tự Genebank gen EGFR

- Kỹ thuật Scorpions ARMS:Ià kết hợp cùa kỹ thuật khuếch đại đặc hiệu aíen đột biến (ARMS) công nghệ Scorpions phản ứng real-time PCR để pháthỉện đột biến gen EGFR đột biến kháng thuốc T790M exon 20 Đây kỹ thuật có độ nhạy cao (khoảng 1% tế bào ung thư phát đột biến) Quy trình kỹ thuật theo Kit cùa hãng QIAGEN

3 Đạo đức tro n g nghiên cứu

Nghiên cứu tuân thu chặt chẽ đạo đức nghiên cứu y học Bệnh nhân hoàn íoàn tự nguyện tham gia vào nghiên cứu Bệnh nhân cỏ rút lui khỏi nghiên cứu không đồng ý tiếp tục tham gia vào nghiên cứu Các thông tin cá nhân đảm bảo bí mật

KẾT QUẢ

Sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen Scorpion ARMS để phát đột biến gen EGFR chó đối tượng nghiên cứu

Bang Kết phát đột biến gen EGFR trước vả sau điệu trị EGFR TKI

MS Chán đốn mơ bệnh học Giai đoạn Đột biến gen trước điều trị thuốc EGFR TKI

Đột biến gen sau điều trị EGFR TKỈ Kỹ thuật giải trình tựgen Kỹ thuật Scorpions ARMS Kbiếu mô tuyến

EiỉB LREA i-REA LREA,

T790M

Kbiếu mô tuyến

IV LREA LREA LREA

3

Kbiếu mô tuyến

IV L858R L858R L858R

4

Kbiéu mô tuyến

IV LREA LREA LREA,

T790M

Kbiếu mô tuyến

EIÍB L858R L858R,

T790M L858R, T790M Kbiểu mô tuyến

IV LREA LREA LREA

7

Kbiêu mô tuyến

iV L858R L858R L858R,

T790M

Kbiếu mô tuvến

IV L858R L858R L858R

9

Kbiếu mô tuyến

!HB LREA LREA,

T790M LREA, T790M 10 K biéu mô tuyến

IIỈB LREA LREA LREA

11

K biếu mơ tuyến

ÍV L858R L858R L858R

bệnh nhân có đột trường

quả phát 5/11 (45% biến kháng thuốc T790M exon 20, hợp xác định đột biến T790M

bằng kỹ thuật giải trình tự gen Scorpions ARMS (chữ bôi đậm) trường hợp phát đột biến ky thuật Scorpions ARMS

A)

L0S8R

ATTTTGGGcliGGCCAAA

#Ti

B ) L8SSA A T T T T G G G C Í Í G G C c A A A

h

A r !' ỶVỵ

.C hư n g n ộ i c h u n

N

18S8R

T790M ' I T790M

ị

iC T C A T C A $ G C Á G C T C A T

Ẽ ầ ằ Ẻ Ề Ế

Kết q uả giải trình tự g en Kết qua Scorpion ARMS Hình 1, Kết xác định đột biến gen EGFR cùa bệnh

nhân MS05 trước điều trị (A) sau điều trị (B) Nhận xét

Tại thời điểm trước điều trị thuốc EGFR TKI, mẫu DNA tách chiết từ mẫu mơ sinh thiết lần phân tích kỹ thuật giải trình tự gen Scorpion ARMS, phát có đột biến L858R exon 21, khơng có đột biến khác gen EGFR

Tại thời điềm sau 13 tháng điều trị thuốc EGFR TKI, mẫu DNA tách chiết từ mẫu mô smh thiết lần phân tích kỹ thuật giải trinh tự gen Scorpion ARMS xuất thêm đột biến T790M exon 20, đột biến L858R exon 21 phát trước điều tri

P t t b l l n l K E A Dclo lỉo in T ĨC O Q A Q A T G T C O C O T C T C T T A O T T C C

-O M blé n UREA Delations

ncggacatgtcgcgtctcttaCttCC' £

T790M ? ị-GCAGCTCATCACGCAGC?CATO

: l l c h ì Ị h g ^ ộ r õ b u r i

-Ị.Ị Ịị; :: ụ.;.v

ĩ ị ìmỆm

V • 1H • ’ •

'-H I

.

::: C h ^ n g -n ặt cHíiễri ' r ' : -■ ĩ f'-itf

K <|»Aniíii ựinlt [ự geiv Kcl q\iả Scorpion ARMS

tích kỹ thuật giải trinh tự gen Scorpion ARMS Kết qùả cho thấy bệnh nhân có đột biến LREA exon 19 làm tăng tính nhạy cảm với thuốc EGFR TKI, khơng có đột biến khác gen EGFR

Tại thời điểm bệnh tiến triển, mẫu DNA tách chiết từ mơ sinh thiết lần phân tích kỹ thuật giải trình tự gen thấy có tín hiệu nóhi naờ đột biến T790M exon 20 (tạỉ vị tri ba ACG mã hóa cho axit amin Threonine, bên đinh c cịn xuất tín hiệu nghi ngờ đinh T).Kiểm tra lại kỹ thuật Scorpion ARMSvới độ nhạy cao (có thể phát được'! %DNA đột biến), kết khẳng định có mặt đột biến T790M thứ phát, ổột biển LREA exon 19 phát trước điều trị

BÀN LUẬN

Trường hợp cùa bệnh nhân mã số 05 ià trường hợp điền hlnh cùa tượng kháng thuốc điều trĩ đích xuát đội biến thứ phát T790M exon 20 gen EGFR Tại thời điểm phát bệnh, bệnh nhân chẩn đoán UTPKTBN với triệu chứng đau ngực, khỏ thở nhiều Hình ảnh MSCT lồng ngực ổầu tiên cho thấy tổn thương đơng đặc lan tỏa thùy phổi írái, không xác định rõ giới hạn u, xâm lán màng phồỉ cừng bên, tràn địch máng phồi lượng nhiều, di phổi đối bên (Hình 3A) Các xét nghiệm chần đốn hình ảnhchưa phát tổn thương di xa Nồng độ CEA 27,7 ng/mL Sinh thiết khối U phỗi trái hướng dẫn CT xác định kết mô bệnh học ung thư thể biểu mô tuyến Xét nghiệm tim đột biến gen EGFR cho thầy bệnh nhân có đột biếnL858Rexon 21 làm tăng tính nhạy cảm vởi thuốc EGFR TKI.Trên sở đó, bệnh nhân chì định gefitinib bước đường uổng 250mg/ngày Đánh giá thời điểm sau tháng điều trị, triệu chứng ổau ngực hết hẳn, khơng cịn khó thờ, sinh hoạt íàm việc bình thường, bệnh đạt đáp ứng hồn tồn (khơng cịn tồn thương đơng đặc nhu mơ phỗi trái, khơng cịn tràn dịch màng phổi, cịn dày dính màng phổi trái) (Hình 3B) Bệnh nhân đáp ưng thuốc tốt, bị mụn da độ I, khơng có triệu chứng phụ khác Tuy nhiên, thời điểm tháng thử 13 điều trị liên tục getiíinib, bệnh nhằn xuất đau ngực tái phát, bệnh có dấu hiệu tiến triển trở íại Kết MSCT lồng ngực íúc cho thấy tái xuất tồn thương dạng đông đặc thùy phổi trái, tràn dịch màng phổi trai vả di hạch trung thất gần rốn phổi phải (Hình 3C) Nghi ngờ bệnh nhân có tình trạng kháng gỉtinib, tái smh thiết vị trí tổn thương phổi trái tiến hành Kết giải phẫu bệnh xác định ung thư thể biểu mô tuyến kết phân tích gen EGFR cho thấy bên cạnh đột biến L858R ban đầu, xuất thêm đột biến thứ phát T790M exon 20 gây kháng thuốc EGFR TKI

( C )

Hình Hình ảnh cắt lớp vi tính lồng ngực bệnh nhân Hiện tượng kháng thuốc điều trị đích UTPKTBN đề cập nhiều nghiên cứu Cơ chế kháng chứng minh xuất đột biến điểm T790M exon 20 gen EGFR Phát công bố hai nhóm nghiên cứu độc lập Kobayashi Pao năm 2005 sau khỉ phân tích bệnh nhân mang độí biến đoạn LREA, đột biến điểm L858R, vốn !à độí biến làm tăng tính nhạy cảm thuốc, xuất tính kháng sau khoang thời gian ban đầu đáp ứng tổt với thuốc điều trị đích [10], [11]

Hiện có chế nhà khoa học đề xuát nhằm giải thích mối liên quan đột biến T790M tính kháng tế bào ung thư phổi: i) mức độ cấu trúc, thay đổi Threonin thành Methionin gây biến đồi vị trí tương tác vùng kinase, ức chế hoàn toàn bám Eríotinib Gefitinib ii) góc độ tương tác phân tử sinh học, độỉ biến T790M khôi phục lại lực vùng kinase với ATP giảm lực với Ẻrlotinib Gefitinib [12] Tiến hành phân tích sổ lượng lớn bệnh nhân UTPKTBN, nhà khoa học phát thấy đột biến T790M chiếm 50% trường hợp khảng thuổc sau điều trị Gefitinib Erlotinib, dạng đột biến lại chiếm 5% [13][14] Trong nghiên cửu này, đột biến T790M phát 5/11 (45%) bệnh nhân UTPKTBN saù sử dụng thuốc ức chế TKI EGFR đánh giá tình trạng kháng thứ phát thuốc EGFR TKỈ theo tiêu chuấn Jackman cộng [9] Nghiên cứu có sử dụng kỹ thuật giải trinh tự gen Scorpion ARMS (kỹ thuật có độ nhạy cao 0,01%) tỷ lệ phổt đột biển T790M thấp so với so nghiên cứu trước cỡ mẫu hạn chế [10,15] Đặc biệt, có bệnh nhân khơng phát đột biển kháng thuổc T790M exon 20(hoặc có tín hiệu nghi ngờ)bằng kỹ thuật giải trình tự gen mà phát kỹ thuật Scorpion ARMS, điều lý giải lượng tế bào ung thư phổi mang đột biến T790M exon 20 thu thập từ mẫu mơ nghiên cứu hạn chế Chúng tơi can có nghiên cứu với cỡ mẫu íớrt để đưa kết nghiên cứu toàn diện

KẾT Lu â n

Sử dụng kỹ thuật giải trình tự gen Scorpions ARMS phát ổược 5/11 (45%) bệnh nhân ung thư phổi khơng tế bào nhỏ có đột biến kháng thuốc thứ phốt T790M exon 20 gen EGFR

TÀI LIỆU THAM KHẢO

through lung cancer genotyping J Thorac Oncol, 17, 1049-1052

9 Jackman D., Pao w , Riely G.J., (2010) Clinical definition of acquired resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors in non-smali-cel! iung cancer J Clin Oncol, 28(2), 357-360

10 Kobayashi s, Boggon TJ, Dayaram T (2005) EGFR mutation and resistance of non smail-cell lung cancer to gefitinib N Engl J Med, 352,786-792

11 Pao w , Miller VA, Politi KA (2005) Acquired resistance of lung adenocarcinomas to gefitinib or erlotinib is associated with a second muỉation in the EGFR kinase domain PLoS Med, 2, 73

12 Yun C.H., Mengwasser K.E., Toms A.v et al (2008).The T790Mmutation in EGFR kinase causes drug resistance by increasingthe affinity for ATP Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 105(6), 2070-2075

13 Kosaka T, Yatabe Y, Endoh H (2006).Anaiysis of epidermal growth factor receptor gene mutation inpatients with non-smail cell lung cancer and acquired resistance to gefitinib Clin Cancer Res, 12, 5764-5769

14 Avizienyte E, Ward RA, Garner AP (2008) Comparison of the EGFR resistance mutation profiles generated by EGFR targeted tyrosine kinase inhibitors and the impact of drug combinations Biochem J, 415,197-206

15 Baiak, M N et Novel D761Y and common secondary T790M mutations in epidermal growth factor receptor-mutant lung adenocarcinomas with acquired resistance to kinase inhibitors Clin Cancer Res 2006, 12,6494-6501

VAI TRỊ CÙA nhóm p r o t e in SLC6A6 VÀ SLC6A13 TRÊN s ự TÍCH TU PROTOPORPHYRIN IX VÀ TỔN THƯƠNG NHẠY CẢM ÁNH SÁNG THÔNG QUA THU NHẬN AMINOLEVULINIC ACID 'ờ TÉ BÀO UNG THƯ

Trần Tiến Tài*, Shigeru Taketani**

*BỘ môn Sinh lý ~ Sinh lý bệnh - Miễn dịch học, Trường Đại học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch **BỘ môn Sinh học ứng dụng - Học viện Công nghệ Kyoto

TĨM TẲT

Đặt vắn đề: Sự tích tụ protoporphyrin IX (PPIX) cảm ứng ALA sử dụng rộng rãi điều trị ung thư bằng liệu phâp ánh sáng động (PDT).

Mục tiêu: Xác định cắc protein vạn chuyển ALA biểu câc protein tế bào ung thư.

Đổi tượng phương phắp: Khảo sát tích tụ PPIX, thu nhận ALA hiệu ứng tổn thương nhạy cảm ánh sáng dòng tế bào ung thư ruột DLD-1 ung thư cổ tử cung HeLa.

Kết quả: Khi tế băo x lý với GABA, taurine vă p-alanine, nồng độ PPIX giăm, gợi ý cđc protein măng liín quan đến vận chuyền câc chất dẫn truyền thần kinh đóng góp vẳ việc thu nhận ALA Bằng câch biều hiện DNA quy định câc chất vận chuyển SLC6A6, SLC6A8 vă SLC6A12, tích tụ P P IX phụ thuộc ALA gia tăng rõ rệt câc tế băo HEK293T, ới với gia tăng thu nhận ALA Khi câc tế băo năy xư lý ALA tiếp xúc với ânh sâng trắng, tổn thương nhậy cảm ânh sống trở nín nặng nề với nhóm biểu SLC6A6 vă SLC6A13 Trâi lại, giảm biểu SLC6A6vă SLC6A13 siRNA tễ băo DLD-1 vă HeLa gđy suy giảm tích tụ nói trín S ự diện SLC6A6 vă SLC6A13 tìm thấy số dịng tế băo ủng thư Hoa mơ miễn dịch cho thấy có mặt protein vận chuyền tăng tế băo ung thư m ộ t

Kết luận: Những kết trến chứng tỏ protein vận chuyển chất dẫn truyền thần kinh SLC6A6 SLC6A13 góp phần vào thu nhận ALA làm tăng hiệu tích luỹ protoporphyrin (PP) cảm ứng ALA tế bào ung thư.

Từ khóa: Aminolevulinic acid, liệu pháp ánh sáng động, SLS-PDT, SLC6A6, SLC6A13, ungthư.

correlation with clinical response to gefiiinib therapy Science 2004,304(5676), 1497-1500

2 Mitsudomi T, Kosaka T, e t, Mutations of the epidermal growth factor receptor gene predict proionged survival after gefitinib treatment in patients with non-small- cell lung cancer with postoperative recurrence J Clin Oncol 2005, 23(11), 2513-2520

3 C oudert B, Ciuieanu T, Park K, et Survival benefit with erlotinib maintenance therapy in patients with advanced non-small-cell lung cancer (NSCLC) according to response to first-line chemotherapy Ann Oncoi 2012, 23(2), 388-3894

4 Sharma s v , Bell DW, Settleman J and Haber DA Epidermal growth factor receptor mutations in iung cancer Nat Rev Cancer 2007, 7(3), 169-181

5 Riely GJ, Pao w et., Clinical course of patients with non-small cell lung cancer and epidermal growth factor receptor exon 19 and exon 21 mutations treated with gefitiniboreriotinib.Clin Cancer Res 2006,12, 839-844

6 Costa DB, Schumer ST, Tenen DG, et Differential responses to erlotinib in epidermal growth factor receptor (EGFR)-mutated lung cancers with acquired resistance to gefitinib carrying the L747S or T790M secondary mutations J Clin Oncoi 2008, 26, 1182-1184

7 Bean J, Brennan c, Shih JY, et al MET amplification occurs with or without T790M mutations in EGFR mutant lung tumors with acquired resistance to gefitinib or erlotinib Proc Nati Acad Sci USA 2007, 104,

20932-20937 _