Đột biến vùng Basal Core Promoter ở bệnh nhân viêm gan virus B mạn hoạt tính có và không có ung thư gan

Bài viết trình bày xác định và so sánh tỉ lệ A1762T/ G1764A và T1753V ở bệnh nhân nhiễm HBV mạn giai đoạn viêm gan có hoạt tính có và không có HCC.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học ĐỘT BIẾN VÙNG BASAL CORE PROMOTER Ở BỆNH NHÂN VIÊM GAN VIRUS B MẠN HOẠT TÍNH CĨ VÀ KHƠNG CĨ UNG THƯ GAN Phạm Thị Lệ Hoa*, Nguyễn Thị Cẩm Hường*, Bùi Hữu Hồng** TĨM TẮT Cơ sở khoa học: Đột biến vùng Basal Core Promoter (BCP) gây giảm tổng hợp HBeAg cho liên quan với đợt viêm gan hoạt tính Khi đột biến có tỷ lệ cao A1762T, G1764A T1753V diện cho có liên quan đến ung thư tế bào gan (HCC) Tỉ lệ đột biến mối liên quan với HCC bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn Việt Nam chưa khảo sát đầy đủ Mục tiêu: Xác định so sánh tỉ lệ A1762T/ G1764A T1753V bệnh nhân nhiễm HBV mạn giai đoạn viêm gan có hoạt tính có khơng có HCC Phương pháp: Nghiên cứu cắt ngang thực Bệnh viện Đại học Y Dược TP.HCM từ tháng 06/2013 đến tháng 01/2016 Xác định đột biến kỹ thuật giải trình tự gen genotype HBV kỹ thuật nested PCR Trung tâm Y-Sinh học phân tử Đại học Y Dược TP.HCM Kết quả: Trong 295 ca viêm gan B mạn hoạt tính có 39 ca có HCC Nhóm HCC thuộc nhóm tuổi >40 nhiều hơn, genotype C nhiều hơn, nhiều bệnh nhân xơ gan hơn, HBV DNA thường nhóm thấp Ở nhóm HCC tỷ lệ có đột biến kép A1762T/G1G1764A (71,8% so với 45,3%), đột biến ba A1762T/G1G1764A/T1753V (43,6% so với 19,9%) cao nhóm khơng có HCC (p=0,002) Phân tích đa biến tìm yếu tố liên quan với HCC HBV DNA 40 (OR=2,63, KTC95% 1,1-6,24) diện đột biến ba A1762T/ G1764A/T1753V (OR=7,64, KTC 95% 2,86-20,37) Kết luận: Hiện diện kết hợp đột biến A1762T/ G1764A/T1753V tăng nguy HCC Cần khảo sát đột biến vùng BCP bệnh nhân viêm gan B mạn hoạt tính >40 tuổi Từ khố: đột biến Basal Core Promoter, nhiễm HBV mạn, HCC ABSTRACT CHARACTERISTICS OF HEPATITIS B VIRUS BASAL CORE PROMOTER MUTATIONS IN CHRONIC ACTIVE HEPATITIS B PATIENTS WITH AND WITHOUT HCC Pham Thi Le Hoa, Nguyen Thi Cam Huong, Bui Huu Hoang * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No - 2016: 185 - 191 Background: A1762T/G1764A and T1753V have been found to be the independent risk factors for hepatitis flares and HCC in Chronic Hepatitis B (CHB) patients Objectives: To determine and compare the rate of A1762T, G1764A, T1753V mutation among active CHB patients with and without HCC Methods: Observational study done from JUN 2013 to JAN 2016 at the liver clinic of UMC BCP/PC mutation was identified by sequencing analysis and HBV genotypes by nested PCR at the Center for Molecular BioMedicine of UMP, HCM city Results: 295 active CHB patients were recruited There were 39 patients with HCC The HCC group were older, lower HBVDNA level and had more cases with cirrhosis than the non HCC group The rate of double  Bộ môn Nhiễm, Khoa Y, Đại học Y Dược TP.HCM Bộ môn Nội Tổng quát, Khoa Y, Đại học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: BS Nguyễn Thị Cẩm Hường ĐT: 0983773915 Email: camhuong37@yahoo.com  Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh 2016 185 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 A1762T/G1764A and triple mutations A1762T/G1764A/T1753V were detected more frequent in the HCC group In multivariate regression analysis, HBVDNA 40 and triple mutation A1762T/G1764A/ T1753V were independent risk factors for HCC Conclusion: Triple mutations A1762T/G1764A and T1753V was the independent risk factor for HCC It is necessary to detect these mutations in patients older than 40 years old Key words: precore, basal core promoter, HCC, HBV ĐẶT VẤN ĐỀ Dân số chọn mẫu Đột biến basal core promoter (BCP) đột biến tự nhiên xảy suốt trình nhiễm HBV ảnh hưởng tổng hợp HBeAg Đột biến gây biểu lộ HBeAg làm thay đổi đáp ứng miễn dịch có tỉ lệ cao giai đoạn viêm gan có hoạt tính HBeAg dương hay HBeAg âm Đột biến A1762T thường kèm với G1764A, thường gặp bệnh nhân nhiễm HBV genotype C cho có liên quan với diễn biến ung thư tế bào gan nguyên phát (HCC) người nhiễm HBV mạn(7,10) Gần đây, đột biến T1753V thuộc vùng gen BCP cơng bố có liên quan đến HCC(4) Tỉ lệ đột biến mối liên quan với HCC bệnh nhân viêm gan siêu vi B mạn Việt Nam chưa khảo sát đầy đủ > 16 tuổi, nhiễm HBV mạn khám ngoại trú phòng khám viêm gan, BV Đại học Y Dược TP.HCM Mục tiêu Xác định tỉ lệ đột biến A1762T, G1764A đột biến T1753V bệnh nhân nhiễm HBV mạn giai đoạn viêm gan có hoạt tính So sánh tỷ lệ A1762T/ G1764A đột biến T1753V bệnh nhân viêm gan B mạn giai đoạn viêm gan có hoạt tính khơng có HCC Địa điểm thời gian thực hiện: BV Đại học Y Dược TP.HCM từ 06/2013 đến 01/2016 Tiêu chuẩn chọn Có đủ tiêu chí sau: Bệnh nhân > 16 tuổi HBsAg (+) > tháng, HBeAg dương hay âm Có HBV DNA (+) lúc vào nghiên cứu > 104 cps/ml Có ALT > ULN lâm sàng chẩn đoán Viêm gan B mạn có hoạt tính với HBeAg dương âm lần vòng tháng Tiêu chuẩn loại trừ Có đồng thời bệnh gan hoạt tính nguyên nhân khác: AntiHCV dương với HCV RNA (+) Gan nhiễm mỡ nặng rượu hay đái tháo đường Xác định liên quan đột biến A1762T/ G1764A, T1753V HCC Viêm gan tự miễn PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: Không xác định genotype HBV Bệnh gan nghi rối loạn chuyển hóa Thiết kế Biến số khảo sát Nghiên cứu mô tả cắt ngang phân tầng theo tình trạng có hay khơng có HCC Nhóm tuổi, giới, tình trạng xơ gan (có hay khơng) Cỡ mẫu Được tính dựa cơng thức xác định tỉ lệ, với p=0,4 (tỉ lệ A1762T/G1764A bệnh nhân nhiễm genotype B, theo Dunford 2012)(2), d=0,06, =0,05 Cỡ mẫu cần có 256 bệnh nhân 186 Đặc điểm nhiễm HBV (genotype, HBsAg định lượng, HBeAg định tính, HBV DNA định lượng) Tính chất đột biến vùng gen Precore, vùng Basal Core Promoter Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Bệnh Viện Đại Học Y Dược TP Hồ Chí Minh 2016 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Biến chứng ung thư gan (có hay khơng) Định nghĩa biến số Phân loại Viêm gan B mạn HBeAg dương hay âm Sử dụng thông số theo dõi tháng: Viêm gan B mạn HBeAg (+): HBeAg (+), HBV DNA >5 log cps/ml; ALT >2 ULN; Viêm gan B mạn HBeAg (-): HBeAg âm, HBV DNA >104 log cps/ml; ALT >2 ULN Tiêu chí xác định Xơ gan Có kiện sau: Siêu âm bụng: gan thô, lách to >12 cm hay ARFI: F3-F4 (theo phân độ Metavir) Có kiện phản ánh: Suy tế bào gan (lòng bàn tay son, mạch, albumin 300 copies/mL, hóa chất AccuPid HBV quantification hệ thống PCR MX 3005P Nghiên cứu Y học khoa Xét nghiệm BV Đại học Y Dược TP.HCM Genotype HBV Kỹ thuật Nested-PCR với đoạn mồi cho vùng PreS1 đến S nhằm xác định genotype từ A đến F, thực Trung tâm Y Sinh học phân tử ĐHYD TP.HCM Đột biến PC, BCP Kỹ thuật giải trình tự chuỗi đoạn gen từ nt1740 đến nt1915 phát đột biến điểm vùng precore, core basal core promoter, dùng kít Takara Taq BigDye V3.1, máy ABI 3130 (Applied Biosystem 3130xl Genetic Analyzer) Phân tích đột biến phần mềm CLC Main Workbench Thực Trung tâm Y Sinh học phân tử ĐHYD TP.HCM Khả phát đột biến chủng đột biến >10% dân số Phân tích số liệu Sử dụng phần mềm SPSS 20.0 Phép kiểm chi bình phương hay Fisher’s Exact Sử dụng phân tích đa biến với mơ hình cho vào yếu tố liên quan với HCC có p40 Có Khơng B C/ B+C âm dương 40 nhiều (76,9% so với 46,5%, p