Glimepirid sulfonamid (tạp B) và glimepirid urethan (tạp C) là tạp chất liên quan của glimepirid, có nguồn gốc từ quá trình tổng hợp và bảo quản glimepirid. Các tạp này gây ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị và tính an toàn của thuốc. Do đó, trong chuyên luận glimepirid của dược điển một số nước như BP 2017 và USP 40 đều quy định phải kiểm tra giới hạn hàm lượng tạp B và tạp C cả trong nguyên liệu và thành phẩm chứa glimepirid.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU VÀ KIỂM NGHIỆM TẠP B VÀ TẠP C CỦA GLIMEPIRID TRONG NGUYÊN LIỆU VÀ CHẾ PHẨM GLIMEPIRID Võ Thị Hằng Nga*, Trương Ngọc Tuyền*, Nguyễn Đức Tuấn* TÓMTẮT Mở đầu – Mục tiêu: Glimepirid sulfonamid (tạp B) glimepirid urethan (tạp C) tạp chất liên quan glimepirid, có nguồn gốc từ q trình tổng hợp bảo quản glimepirid Các tạp gây ảnh hưởng đến hiệu điều trị tính an tồn thuốc Do đó, chun luận glimepirid dược điển số nước BP 2017 USP 40 quy định phải kiểm tra giới hạn hàm lượng tạp B tạp C nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid Hiện nay, nhóm nghiên cứu tổng hợp thành công tạp B tạp C với độ tinh khiết sắc ký 99% tính nguyên trạng, sử dụng phương pháp HPLC qui 100% diện tích pic Cho đến nay, chưa có cơng trình cơng bố thiết lập chất đối chiếu tạp B tạp C glimepirid Xuất phát từ lý trên, nghiên cứu thực với mục tiêu thiết lập chất đối chiếu kiểm nghiệm tạp B tạp C glimepirid nguyên liệu chế phẩm glimepirid Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: 3-ethyl-4-methyl-2-oxo-N-[2-(4sulfamoylphenyl)ethyl]-2,3-dihydro-1H-pyrrol-1-carboxamid (tạp chất liên quan B glimepirid, glimepirid sulfonamid) methyl [[4-[2-[[(3-ethyl-4-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-pyrrol-l-yl) carbonyl] amino] ethyl]phenyl]sulfonyl] carbamat (tạp chất liên quan C glimepirid, glimepirid urethan, glimepirid carbamat) Phương pháp nghiên cứu: Thiết lập chất đối chiếu tạp B tạp C glimepirid theo ISO guide 34:2009 ISO 13528:2005; Kiểm tra tạp B tạp C glimepirid nguyên liệu chế phẩm chứa glimepirid thị trường, sử dụng tạp thiết lập chất đối chiếu Kết quả: Kết đánh giá thiết lập chất đối chiếu tạp B C cho thấy chất đủ điều kiện để đăng ký chuẩn quốc gia với độ tinh khiết sắc ký xác định 99,43% 99,87% tính nguyên trạng Kết kiểm tra tạp B tạp C số nguyên liệu chế phẩm chứa glimepirid lưu hành Việt Nam cho thấy hàm lượng tạp B tạp C nằm giới hạn cho phép theo qui định USP 40 Kết luận: Tạp B tạp C glimepirid thiết lập chất đối chiếu với độ tinh khiết 99% tính nguyên trạng Đã kiểm tra tạp chất liên quan số mẫu nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid, sử dụng tạp thiết lập chất đối chiếu Từ khóa: glimepirid sulfonamid, glimepirid urethan, glimepirid carbamat, tạp B glimepirid, tạp C glimepirid ABSTRACT ESTABLISHEMENT OF REFERENCE STANDARD AND QUALITY CONTROL OF IMPURITY B AND IMPURITY C OF GLIMEPIRIDE IN MATERIAL GLIMEPIRIDE AND ITS PREPARATIONS Vo Thi Hang Nga, Truong Ngoc Tuyen, Nguyen Duc Tuan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 161 – 169 Background – Objectives: Glimepiride sulfonamide (impurity B) and glimepiride urethane (impurity C) are impurities of glimepiride which arise from synthesis and during storage of glimepiride The presence * Khoa Dược, Đại Học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Đức Tuấn ĐT: 0913799068 Chuyên Đề Dược Email: ductuan@ump.edu.vn 161 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 of these impurities may influence on treatment efficacy and safety of glimepiride The BP 2017 and USP 40 require conducting the impurity test in material glimepiride and its preparations Glimepiride impurity B and C were successfully synthesized with their HPLC purity over 99% on the basis, using peak area normalization method There has been no publication for establishment of reference standard of impurities B and C so far Therefore, this study was carried out with the aim of establishment of reference standard and quality control of impurities B and C in material glimepiride and its preparations Method: The object of this study is 3-ethyl-4-methyl-2-oxo-N-[2-(4-sulfamoylphenyl)ethyl]-2,3dihydro-1H-pyrrol-1-carboxamid (glimepiride impurity B, glimepiride sulfonamide) and methyl [[4-[2-[[(3ethyl-4-methyl-2-oxo-2,3-dihydro-1H-pyrrol-l-yl) carbonyl] amino] ethyl]phenyl]sulfonyl] carbamat (glimepiride impurity C, glimepiride urethane, glimepiride carbamate) Method: Establishment of reference standard of glimepiride impurities B and C, basing on ISO guide 34:2009 and ISO 15328:2005 guide; Quality control of these impurities in material glimepiride and its preparations, using the established impurity B and C reference standards Results: The results of evaluation and establishment of impurity B and C reference standards showed that these substances can be applied for registration of national reference standards The HPLC purity of impurities B and C were 99.43% and 99.87% on the basis, respectively All the calculations concerning the quantitative analysis showed that several material glimepirides and its preparations in Vietnam market contained an amount of glimepiride impurities B and C that was within accepted limits according to USP 40 Conclusion: Glimepiride impurities B and C were established reference standards with their HPLC purity over 99% on the basis Quality control of these impurities in material glimepiride and its preparations was carried out, using the established impurity B and C reference standards Key words: Glimepiride sulfonamide, glimepiride urethane, glimepiride carbamate, glimepiride impurity B, glimepiride impurity C không khó khăn cho cơng tác kiểm nghiệm tạp ĐẶTVẤNĐỀ chất Hiện nay, nhóm nghiên cứu chúng Glimepirid sulfonamid (tạp B) glimepirid tổng hợp thành công tạp B tạp C với độ urethan (tạp C) tạp chất liên quan tinh khiết sắc ký 99% tính ngun glimepirid, có nguồn gốc từ trình tổng hợp trạng, sử dụng phương pháp HPLC qui 100% glimepirid(9,10,11) hay trình sản xuất, bảo diện tích pic Trong báo này, công quản lưu thông phân phối thành phẩm bố việc thiết lập chất đối chiếu tạp B tạp C, glimepirid, thủy phân nhóm amid(3,6) Theo kiểm nghiệm tạp B tạp C glimepirid Quy định (EC) số 1272/2008, tạp B gây nguy nguyên liệu chế phẩm glimepirid, sử dụng hiểm lâu dài cho sinh vật nước tạp C có chất đối chiếu tạp B tạp C thiết lập ảnh hưởng đến sức khỏe người, gây độc cấp ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU tính nuốt, hít phải, tiếp xúc với da tổn thương tạm thời xuất hiện(7,8) Do đó, Đối tượng nghiên cứu: chuyên luận glimepirid dược điển Tạp B tạp C glimepirid số nước BP 2017(2) USP 40(12) quy định Nguyên vật liệu phải kiểm tra giới hạn hàm lượng tạp B C Nguyên liệu: nguyên liệu thành phẩm Trong đó, Tạp B tạp C tổng hợp tạp B tạp C chuẩn USP bán với giá xác định độ tinh khiết 99% tính đắt phải mua từ nước nên gây nguyên trạng, sử dụng phương pháp HPLC 162 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 qui 100% diện tích pic Ngun liệu glimepirid cơng ty TNHH Davipharm cung cấp, số kiểm soát GM/171202, hàm lượng 98,63%, điều kiện bảo quản 2-8oC Trang thiết bị: Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao Shimadzu CTO-10AS, đầu dò PDA., cột sắc ký InertSustain RP C18 (250 x 4,6 mm; µm), cân phân tích HR – 250AZ, máy siêu âm S70H Elmasonic, máy đo pH Inolab WTW – pH 720 Nghiên cứu Y học gửi mẫu phải đạt GLP ISO/IEC 17025 Mỗi phòng thí nghiệm nhận sáu lọ mẫu ngẫu nhiên kèm theo qui trình phân tích tài liệu liên quan Trước phân tích, phòng thí nghiệm kiểm tra tính phù hợp hệ thống với yêu cầu hệ số bất đối pic tạp B C nằm khoảng 0,8 – 1,5 RSD lần đo lặp lại không 2% Nếu đạt yêu cầu, tiến hành Hóa chất dung mơi: Acetonitril (ACN) đạt tiêu chuẩn dùng cho sắc ký lỏng (Merck) Natri dihydrophosphat acid phosphoric đạt tiêu chuẩn phân tích (Merck) Phương pháp nghiên cứu xác định độ tinh khiết tạp B tạp C Đánh giá tạp B tạp C thuốc TP Hồ Chí Minh Việc đánh giá độ mẫu nhận, mẫu xác định lần Các phòng thí nghiệm lựa chọn để gửi mẫu Khoa Thiết lập chất chuẩn & chất đối chiếu (PTN1) Khoa Kiểm nghiệm mỹ phẩm (PTN2) thuộc Viện Kiểm nghiệm Tạp B tạp C đánh giá theo đồng lọ liên phòng thí nghiệm tiêu sau: cảm quan, độ tan (trong nước, thực phép phân tích phương sai methanol, ethanol số dung môi hữu yếu tố ANOVA(1,5) cơ) theo DĐVN V, điểm chảy, hàm ẩm, định Xác định giá trị ấn định độ không đảm bảo đo: danh phương pháp phổ nghiệm Việc xác định giá trị ấn định phiếu (UV, IR, MS, NMR) độ tinh khiết sắc ký kiểm nghiệm tạp B tạp C độ không Thiết lập chất đối chiếu tap B tạp C đảm bảo đo thực theo hướng dẫn Đánh giá độ đồng q trình đóng lọ ISO 13528:2005(4), dựa theo 12 kết Các mẫu lấy ngẫu nhiên theo công xác định độ tinh khiết tạp B tạp C N +1 N tổng số lọ Việc xác định độ tinh khiết tạp B tạp C lọ tiến hành theo phương pháp HPLC xây dựng thẩm định, lọ xác định lần Việc đánh giá độ đồng trình đóng lọ dựa hướng dẫn ISO guide 34:2009(5) phòng thí nghiệm Đánh giá độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm HPLC kiểm nghiệm tạp B C theo USP thức Kiểm tra tạp B tạp C nguyên liệu chế phẩm glimepirid Tạp B tạp C sau thiết lập chất đối chiếu sử dụng để kiểm tra hai tạp nguyên liệu glimepirid chế phẩm tương ứng Áp dụng quy trình Tạp B tạp C sau đóng gói 40(12) với điều kiện sắc ký sau: cột sắc ký đánh giá đồng lọ đạt yêu cầu RP C18 (250 x 4,6 mm; m), tốc độ dòng lấy mẫu ngẫu nhiên tiến hành xác định 1,0 ml/phút, bước sóng phát 228 nm, độ tinh khiết hai phòng thí nghiệm độc thể tích tiêm 10 l (với mẫu chế phẩm lập Các phòng thí nghiệm lựa chọn để glimepirid) 20 µl (với mẫu nguyên liệu Chuyên Đề Dược 163 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 glimepirid), pha động bao gồm 0,5 g natri chuẩn bị trước sử dụng thao tác nhanh, bảo dihydrophosphat 500 ml nước cất, quản dung dịch nhiệt độ không 12oC sử điều chỉnh đến pH 2,5 acid phosphoric dụng dung dịch vòng 15 đậm đặc, thêm 500 ml acetonitril, lắc đều; Kiểm nghiệm tạp B thành phẩm dung mơi pha mẫu nước acetonitril có Dung dịch đối chiếu (1) tỷ lệ 1:9 1:4 với mẫu chế phẩm nguyên liệu, thời gian sắc ký mẫu chế phẩm nguyên liệu 3,5 2,5 lần thời gian lưu gliempirid Chuẩn bị mẫu Kiểm nghiệm tạp B tạp C nguyên liệu Dung dịch thử tính tương thích hệ thống Chuẩn bị dung dịch bao gồm glimepirid µg/ml, tạp B µg/ml tạp C µg/ml Dung dịch đối chiếu (1): Pha dung dịch glimepirid có nồng độ 2000 µg/ml Dung dịch đối chiếu (2) Pha dung dịch tạp B glimepirid có nồng độ 2000 µg/ml Hút ml dung dịch cho vào bình định mức 100 ml, định mức đến vạch Dung dịch đối chiếu (3) Pha dung dịch tạp C glimepirid có nồng độ 2000 µg/ml Hút ml dung dịch cho vào bình định mức 100 ml, định mức đến vạch Dung dịch đối chiếu: Hút 10 ml dung dịch đối chiếu (1), ml dung dịch đối chiếu (2) ml dung dịch đối chiếu (3), cho vào bình định mức 100 ml, định mức đến vạch Dung dịch thu có nồng độ glimepirid 200 µg/ml, tạp B 0,8 µg/ml (tương ứng với giới hạn cho phép nguyên liệu 0,4%) tạp C 0,2 µg/ml (tương ứng với giới hạn cho phép nguyên liệu 0,1%) Dung dịch thử Cân xác 20,0 mg glimepirid, cho vào bình định mức 100 ml, hòa tan định mức đến vạch dung mơi pha mẫu, lắc Tất dung dịch lọc qua màng lọc 0,45 µm trước tiến hành sắc ký Các dung dịch 164 Cân 10 mg glimepirid, cho vào bình định mức 10 ml, pha lỗng dung mơi pha mẫu đến vạch Dung dịch đối chiếu (2) Cân 2,5 mg tạp B đối chiếu, cho vào bình định mức 100 ml, pha lỗng dung môi pha mẫu đến vạch Dung dịch đối chiếu Hút ml dung dịch đối chiếu (1), ml dung dịch đối chiếu (2), cho vào bình định mức 10 ml, pha lỗng dung mơi pha mẫu đến vạch Dung dịch thu có nồng độ glimepirid 100 µg/ml, tạp B 2,5 µg/ml (tương ứng với giới hạn cho phép chế phẩm 2,5%) Dung dịch thử Cân xác 20 viên, xác định khối lượng trung bình viên, nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột thuốc tương đương với khối lượng trung bình 10 viên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm dung môi pha mẫu, pha dung dịch có nồng độ glimepirid 0,1 mg/ml (dựa vào hàm lượng ghi nhãn), siêu âm nhiệt độ không 20oC khoảng 5-10 phút, ly tâm lấy dịch Tất dung dịch lọc qua màng lọc 0,45 µm trước tiến hành sắc ký Dung dịch sau pha sử dụng vòng 24 KẾTQUẢ Đánh giá tạp B tạp C Bảng bảng trình bày kết đánh giá tạp B tạp C Với độ tinh khiết 99% nên hai chất đủ điều kiện để thiết lập chất đối chiếu Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Bảng 1: Kết đánh giá tạp B Chỉ tiêu Phương pháp Cảm quan Kết Tinh thể trắng, khơng mùi Tính chất Hơi tan aceton, cloroform, methanol, Độ tan dicloromethan, khó tan nước ethanol -1 IR (KBr): max (cm ) 3363,9 (N-H), 2880 (CH 3 Phổ hồng ngoại sp ), 2938 (CHsp ), 1660,7 (N-C=O), 1537,3 (NH), 1438,9 (CH3) + ESI-MS (+) có m/z = 374,0966 [M+Na] Phổ khối ESI-MS (-) có m/z = 350,1077 [M-H] Cơng thức phân tử: C16H21N3O4S H-NMR (500 MHz, DMSO): δH (ppm) 8,36 (t, 1H, J=6,0 Hz, NH-CO), 7,75 (d, 2H, J = 8,0 Hz, H-2; H-6), 7,42 (d, 2H, J = 8,5 Hz, H-3; H-5), 7,29 (s, Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Định tính 2H, NH2), 4,17 (s, 2H, H-13), 3,49 (q, 2H, J = 6,5 Hz, H-8), 2,88 (t, 2H, J = 7,0 Hz, H-7), 2,18 (q, O O 2H, J = 7,5 Hz, H-14), 2,01 (s, 3H, H-16), 0,98 (t, S 3H, J = 7,5 Hz, H-15) O O NH2 13 14 C-NMR (125 MHz, DMSO): δC (ppm) 171,84 10 11 (C-9), 152,05 (C-10), 151,64 (C-12), 143,37 (C2 HC N N 15 11), 142,14 (C-1), 131,92 (C-4), 129,08 (C-2, C7 H 6), 125,73 (C-3, C-5), 51,88 (C-13), 40,02 (C-8), H3C 12 13 35,06 (C-7), 15,98 (C-14), 12,82 (C-16), 12,69 16 (C-15) o o Điểm chảy DSC 182 C – 183 C Hàm ẩm TGA ≤ 0,5% Tạp chất liên quan HPLC ≤ 2,0% Độ tinh khiết sắc ký HPLC ≥ 98,0% tính nguyên trạng Bảng 2: Kết đánh giá tạp C Chỉ tiêu Tính chất Phương pháp Cảm quan Độ tan Phổ hồng ngoại Phổ khối Định tính Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Hàm ẩm Tạp chất liên quan Độ tinh khiết sắc ký TGA HPLC HPLC Chuyên Đề Dược Yêu cầu Tinh thể vàng nhạt, không mùi Hơi tan aceton, cloroform, methanol, dicloromethan, khó tan nước ethanol -1 IR (KBr): max (cm ) 3242,3 (N-H), 2852 (CH 3 sp ), 2936 (CHsp ), 1755,2 (C=O), 1654,9 (NC=O), 1354,0 (SO2), 1161,2 (SO2) + ESI-MS (+) có m/z = 432,1184 [M+Na] ESI-MS (-) có m/z = 408,1212 [M-H] Cơng thức phân tử: C18H23N3O6S H-NMR (500 MHz, DMSO): δH (ppm) 8,38 (s, 1H, NH-SO2), 7,80 (d, 2H, J = 8,0 Hz, H-2; H-6), 7,47 (d, 2H, J = 8,5 Hz, H-3; H-5), 4,17 (s, 2H, H-13), 3,54 (s, 3H, CH3(ester)), 3,50 (q, 2H, J = 6,5 Hz, H-8), 2,91 (t, 2H, J = 7,5 Hz, H-7), 2,18 (q, 2H, J = 7,5 Hz, H-14), 2,01 (s, 3H, H-16), 0,97 (t, 3H, J = 7,5 Hz, H-15) 13 C-NMR (125 MHz, DMSO): δC (ppm) 171,82 (C-9), 152,19 (C-10), 152,01 (CO ester), 151,64 (C-12), 145,16 (C-11), 137,69 (C-1), 131,93 (C4), 129,26 (C-2, C-6), 127,41 (C-3, C-5), 52,64 (CH3 ester), 51,87 (C-13), 39,86 (C-8), 35,18 (C7), 15,98 (C-14), 12,81 (C-16), 12,68 (C-15) ≤ 4,0% ≤ 2,0% ≥ 98,0% tính nguyên trạng 165 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Thiết lập chất đối chiếu tạp B tạp C Một ngàn miligam tạp B đóng 50 lọ, lọ 20 mg lọ lấy ngẫu nhiên theo phần mềm Excel Năm trăm miligam tạp C đóng 50 lọ, lọ 10 mg lọ lấy ngẫu nhiên theo phần mềm Excel Kết xác định tính phù hợp hệ thống hai phòng thí nghiệm đạt yêu cầu hệ số bất đối pic tạp B, tạp C RSD diện tích pic tạp B, tạp C nên tiếp tục tiến hành xác định độ tinh khiết tạp B, tạp C Bảng bảng minh họa kết đánh giá độ đồng tinh khiết chất phân tích khơng phụ thuộc vào phòng thí nghiệm tham gia đánh giá Bảng 3: Kết đánh giá độ đồng q trình đóng lọ (n=2) Số thứ Độ tinh khiết tạp Số thứ Độ tinh khiết tạp tự lọ B (%) tự lọ C (%) 23 99,50 13 99,89 20 99,45 15 99,83 28 99,42 10 99,84 24 99,43 19 99,87 17 99,43 99,87 99,43 16 99,87 Bảng 4: Kết đánh giá độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm q trình đóng lọ độ đồng lọ Mẫu liên phòng thí nghiệm Dựa vào kết phân tích ANOVA cho thấy lọ đóng gói có hàm lượng đồng nhất, điều kiện đóng gói ổn định phù hợp, kết định lượng phòng thí nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống Độ tinh khiết tạp B (%) Độ tinh khiết tạp C (%) PTN1 PTN2 PTN1 PTN2 99,50 99,42 99,89 99,89 99,45 99,42 99,83 99,88 99,42 99,43 99,84 99,87 99,43 99,43 99,87 99,86 99,43 99,43 99,87 99,88 99,43 99,42 99,87 99,87 kê, quy trình phân tích có độ lặp lại cao, độ Bảng 5: Kết xác định giá trị ấn định tạp B tạp C (n=12) Số lần thay đổi = 1,5s* x* - δ x* + δ Trung bình Độ lệch s x* s* x* 99,43 0,0223 99,43 0,0445 Tạp B x* x* 0,067 0,038 99,36 99,40 99,50 99,47 99,43 99,43 0,0223 0,0223 99,43 99,43 0,0253 0,0253 Nhận xét: Với tạp B, sau ba lần thay đổi, s* = 0,0253 không thay đổi, x* chọn 99,43% Vậy giá trị ấn định tạp B 99,43% độ khơng đảm bảo đo: µ = 1,25s*/ p = 0,01 Với tạp C, sau ba lần thay đổi, s* = 0,0204 khơng thay đổi, x* chọn 99,87% Vậy giá trị ấn định tạp C 99,87% độ khơng đảm bảo đo: µ = 1,25s*/ p = 0,018 Như tạp B tạp C đủ điều kiện để đăng ký chuẩn quốc gia với hàm lượng xác định 99,43% 99,87% tính 166 x* 0,038 99,40 99,47 99,43 0,0223 99,43 0,0253 x* 99,87 0,0180 99,87 0,0445 Tạp C x* x* 0,067 0,031 99,80 99,84 99,94 99,90 99,87 99,87 0,018 0,0180 99,87 99,87 0,0204 0,0204 x* 0,031 99,84 99,90 99,87 0,0180 99,87 0,0204 nguyên trạng Tiến hành lập hồ sơ chất chuẩn, dán nhãn lọ chuẩn kèm theo phiếu kiểm nghiệm Bảo quản lọ chuẩn nhiệt độ 28oC, tránh ánh sáng Kiểm tra tạp B tạp C nguyên liệu chế phẩm glimepirid Tiến hành kiểm tra tạp B tạp C lô nguyên liệu lô chế phẩm mã hóa Kết định lượng trình bày bảng Sắc ký đồ mẫu kiểm tra minh họa hình Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Bảng 6: Kết kiểm tra tạp B tạp C số nguyên liệu chế phẩm chứa glimepirid thị trường (n=3) Hàm lượng tạp C (%) 01/11/2022 03/07/2021 Hàm lượng tạp B (%) 0,13 0,12 CP A 23/04/2020 0,55 - CP B 05/04/2020 0,24 CP C 12/09/2020 1,31 CP D 19/02/2020 0,29 Sản phẩm Mã hóa Hạn dùng Nguyên liệu glimepirid, mẫu Nguyên liệu glimepirid, mẫu Viên nén bao phim glimepirid mg (trong nước, công ty A) Viên nén bao phim glimepirid mg (trong nước, công ty B) Viên nén bao phim glimepirid mg (trong nước, công ty C) Viên nén bao phim glimepirid mg (trong nước, công ty D) NL NL Nhận xét: Tất mẫu nguyên liệu thành phẩm cho kết kiểm tra tạp B 0,01 0,01 - tạp C đạt giới hạn cho phép theo quy định USP 40 NL NL CP A CP B CP D CP C Hình 1: Sắc ký đồ mẫu nguyên liệu chế phẩm glimepirid kiểm tra tạp B tạp C Chuyên Đề Dược 167 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 BÀNLUẬN Việc kiểm soát tạp chất liên quan nguyên liệu đặc biệt thành phẩm tương ứng chưa quan tâm nhiều Việt Nam nhiều lý số tạp chất chuẩn chưa có có thường đắt tiền phải mua từ nước Tuy nhiên, phần lớn chuyên luận dược điển tham chiếu (USP, EP, BP) dược điển Việt Nam V bắt buộc phải kiểm soát tạp chất liên quan Gần đây, cục Quản lý Dược Việt Nam có yêu cầu phải kiểm tra tạp chất liên quan cách chặt chẽ nguyên liệu thành phẩm đăng ký cho sản xuất lưu hành Hiện hệ thống kiểm nghiệm thuốc quốc gia chưa cung cấp tạp chuẩn B C nên gây khó khăn cho cơng tác kiểm nghiệm tạp chất xí nghiệp dược nước có sản xuất thành phẩm glimepirid Việc đặt mua tạp chuẩn từ nước phải – tháng với giá thành đắt Kết đánh giá thiết lập chất đối chiếu tạp B C cho thấy chất đủ điều kiện để đăng ký chuẩn quốc gia với độ tinh khiết sắc ký xác định 99,43% 99,87% tính nguyên trạng Với hiệu suất tổng hợp tinh chế cao (khoảng 74% với tạp B 60% với tạp C), khối lượng tạp B tạp C thu khoảng 1,3 g 0,5 g cho lần tổng hợp, nên chất đối chiếu tạp B tạp C cung cấp đủ cho xí nghiệp dược nước có nhu cầu, góp phần làm tăng nguồn tạp chuẩn công tác kiểm tra chất lượng tạp chất liên quan Quy trình kiểm tra tạp B tạp C nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid sử dụng quy trình USP 40 có thay đổi kích thước cột sắc ký C18 (250 x 4,0 mm; m) cột C18 (250 x 4,6 mm; m) Tuy nhiên kết kiểm tra tính phù hợp hệ thống quy trình kiểm tra tạp chất B C nguyên liệu glimepirid theo USP 40 cho thấy quy trình đạt tính phù hợp hệ thống, thời 168 gian lưu pic tạp B, tạp C glimepirid thay đổi không đáng kể so với yêu cầu dược điển, pic tách tốt đạt thông số sắc ký Hơn nữa, cột C18 (250 x 4,6 mm; m) phổ biến phòng thí nghiệm Việt Nam Do sử dụng quy trình USP 40 cột để kiểm tra tạp B tạp C nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid Kết định lượng tạp B tạp C số nguyên liệu chế phẩm glimepirid thị trường cho thấy số nguyên liệu chế phẩm có hàm lượng tạp nằm giới hạn cho phép Đây kết khả quan glimepirid thuốc điều trị đái tháo đường type II kê toa phổ biến, sử dụng dài hàng ngày nên hàm lượng tạp vượt giới hạn cho phép gây ảnh hưởng không nhỏ đến sức khỏe người bệnh KẾTLUẬN Tạp B tạp C glimepirid thiết lập chất đối chiếu với độ tinh khiết 99% tính nguyên trạng Đã kiểm tra tạp chất liên quan số mẫu nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid theo qui định USP 40, sử dụng tạp thiết lập chất đối chiếu TÀILIỆUTHAMKHẢO Asean document guidelines (2007) Guideline for the establishment, handing, storage and use of Asean reference sustances British Pharmacopoeia (2017) CD-ROMs Monographs: glimepiride, glimepiride tablets Gulshan B, Manjeet S, Jindal KC, Saranjit S (2008) LC –UVPDA and LC-MS studies to characterize degradation products of glimepiride Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, pp.788-795 ISO 13528:2005 (2005) Statistical methods for use in proficiency testing by inter-laboratory comparisons, pp 64 ISO guide 34:2009 (2009) General requirements for the competence of reference material producers Lestari MLAD, Gunawan I (2011) Gimepiride Profiles of Drug Substances, Excipients, and Related Methodology, Vol 36, pp 169-204 Elsevier Inc., Indonesia LGC standards (2014) Safety Data Sheet Sheet according to 1907/2006/EC Article 31, Glimepiride Related Compound C, D, pp.1-6 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 LGC standards (2017) Safety Data Sheet Sheet according to 1907/2006/EC Article 31, Glimepiride Related Compound B, pp.1-6 Mubeen AK, Sukumar S, Santosh V, Atul B, Shanka K (2005) LC determination of glimepiride and its related impurities Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, pp.928-943 10 Rohit RS, Thennati R, Rajeev BR (2006) Process for the preparation of trans-3-ethyl-2,5-dihydro-4-methyl n-24-(4-methyl cyclohexyl) amino carbonyl amino sulfonyl.phenyl.ethyl.-2-oxo-1h-pyrrole-1 carboxamide United States Patent No 7, 132, 444 B2 Chuyên Đề Dược Nghiên cứu Y học 11 Suresh MK, Venkatasubramanian RT, Sanjay JN, Sachin BG (2007) Process for the preparation of substantially pure Glimepiride United States Patent No 0082943 12 USP 40 (2017) CD-ROMs Monographs: glimepiride, glimepiride tablets Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 169 ... phòng thí nghiệm Đánh giá độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm HPLC kiểm nghiệm tạp B C theo USP th c Kiểm tra tạp B tạp C nguyên liệu chế phẩm glimepirid Tạp B tạp C sau thiết lập chất đối chiếu sử... thành phẩm b vi c thiết lập chất đối chiếu tạp B tạp C, glimepirid, thủy phân nhóm amid(3,6) Theo kiểm nghiệm tạp B tạp C glimepirid Quy định (EC) số 1272/2008, tạp B gây nguy nguyên liệu chế phẩm. .. g cho lần tổng hợp, nên chất đối chiếu tạp B tạp C cung c p đủ cho xí nghiệp dư c nư c có nhu c u, góp phần làm tăng nguồn tạp chuẩn c ng t c kiểm tra chất lượng tạp chất liên quan Quy trình kiểm