Mục tiêu đề tài: Xác định tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae trên mẫu phân lập. Xác định tính nhạy cảm kháng sinh của các chủng Vibrio cholerae bằng kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh và MIC. Xác định type phổ biến có trên các loại mẫu có thể gây bệnh cho người. Mời các bạn tham khảo!
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH KHOA NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG TỈ LỆ NHIỄM VÀ SỰ NHẠY CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN VIBRIO CHOLERAE TRÊN HUYẾT HEO, NGHÊU VÀ TRÊN NGƯỜI TIÊU CHẢY TẠI TỈNH TRÀ VINH CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI: Ths NGUYỄN THỊ ĐẤU ĐƠN VỊ: BỘ MÔN CHĂN NUÔI THÚ Y Trà Vinh, tháng năm 2012 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH KHOA NÔNG NGHIỆP – THỦY SẢN BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG TỈ LỆ NHIỄM VÀ SỰ NHẠY CẢM KHÁNG SINH CỦA VI KHUẨN VIBRIO CHOLERAE TRÊN HUYẾT HEO, NGHÊU VÀ TRÊN NGƯỜI TIÊU CHẢY TẠI TỈNH TRÀ VINH Xác nhận quan chủ trì (ký tên đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (ký tên, họ tên) Ths Nguyễn Thị Đấu Trà Vinh, ngày tháng năm 2012 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày đề tài trung thực chưa công bố cơng trình trước Tác giả Nguyễn Thị Đấu LỜI CẢM TẠ Chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, Ban lãnh đạo khoa Nông nghiệp – Thủy Sản trường Đại học Trà Vinh đồng nghiệp môn Chăn Nuôi Thú y tạo điều kiện vật chất, tinh thần suốt trình tham gia đề tài Chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Chi cục Thú y tỉnh Trà Vinh tạo điều kiện cho tham gia lấy mẫu sở giết mổ địa bàn Tỉnh Chân thành cảm ơn anh chị em Bộ môn Vi sinh Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng trường Đại học Cần Thơ, anh chị em Bộ môn Vi sinh trường Đại học Y Dược Cần Thơ, anh chị khoa xét nghiệm bệnh viện Đa khoa Trung ương Cần Thơ tạo điều kiện, giúp đỡ tơi hồn thành nghiên cứu đề tài Cảm ơn em sinh viên Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng trường Đại học Cần Thơ, em sinh viên lớp DA09BTY Khoa Nông nghiệp – Thủy sản trường Đại học Trà Vinh hỗ trợ thời gian qua Nguyễn Thị Đấu TÓM LƯỢC Mục tiêu nghiên cứu xác định tỉ lệ nhiễm Vibrio choleae 100 mẫu huyết heo sở giết mổ, nghêu 160 mẫu huyện có ni nghêu phổ biến người tiêu chảy 40 mẫu, là: nghêu 10%, huyết heo có pha nước sở giết mổ (có nồng độ muối từ 2-3%) 4%, chưa có dấu hiệu dương tính người tiêu chảy tỉnh Trà Vinh Nghiên cứu đánh giá kháng kháng sinh 20 chủng vi khuẩn Vibrio choleae gây bệnh diện mẫu bệnh phẩm gồm 06 loại kháng sinh xác định giá trị nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) phương pháp dùng đĩa giấy kháng sinh (Kirby-Bauer) máy làm kháng sinh đồ tự động báo cáo kết xét nghiệm hoàn tất, cho kết kháng sinh đảm bảo có độ xác cao giá trị nồng độ ức chế tối thiểu riêng biệt cho 18 – 20 loại kháng sinh khác Kết kháng sinh đồ cho thấy đa số vi khuẩn Vibrio choleae nhạy với Norfloxacin (100%), với Chloramphenicol (70%), đề kháng với hoàn toàn với Amoxicillin (90%) Kết xác định giá trị MIC cho thấy vi khuẩn có với giá trị MIC Norfloxacin 0.25μg/ml, với Tetracycline < 1μg/ml, với Chloramphenicol < 1μg/ml Kết nghiên cứu xác định type huyết gồm 15% mẫu dương tính với kháng huyết đa giá (O139, Ogawa, Inaba),10% mẫu dương tính với kháng huyết đơn giá Ogawa kháng huyết đơn giá Inaba, phổ biến mẫu bệnh phẩm phân lập địa bàn nghiên cứu đề tài tỉnh Trà Vinh MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU Chương 1: TỒNG QUAN 1.1 Lịch sử bệnh vi khuẩn tả 1.2 Phân loại - Đặc điểm vi khuẩn Vibrio cholerae 1.2.1 Phân loại vi khuẩn Vibrio cholerae 1.2.2 Đặc điểm hình dạng Vibrio cholerae 1.2.3 Kháng nguyên 1.2.4 Độc tố 1.2.5 Sức đề kháng Vibrio cholerae 1.2.6 Đặc điểm nuôi cấy tăng trưởng Vibrio cholerae 1.3 Truyền nhiễm học 1.3.1 Sinh thái V.cholerae 1.3.2 Đường xâm nhập 10 1.3.3 Cơ chế gây bệnh 12 1.3.4 Sinh bệnh học 12 1.3.5 Cách lây lan 13 1.3.6.Triệu chứng bệnh 14 1.3.7.Chẩn đốn 15 1.3.8 Phòng trị bệnh 18 1.4 Ngộ độc thực phẩm Vibrio cholerae 19 1.5 Nguyên nhân đề kháng kháng sinh Vibrio cholerae 20 Chương 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1.Thời gian, địa điểm 21 2.2 Đối tượng nghiên cứu 21 2.3 Vật liệu nghiên cứu 21 2.4 Phương pháp nghiên cứu 22 2.5 Nội dung nghiên cứu 23 2.5.1 Xác định tỷ lệ phân lập chủng Vibrio cholerae 23 2.5.2 Xác định tính đề kháng kháng sinh chủng Vibrio cholerae 31 kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh MIC 2.5.3 Các tiêu theo dõi - Xử lý số liệu 34 Chương 3: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 35 3.1 Đánh giá tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae loại mẫu phân lập 35 3.1.1 Tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae huyết heo có pha nước muối 36 3.1.2 Tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae nghêu theo huyện 38 3.1.3 Tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae trên huyết heo theo huyện 37 3.2 Kết tính nhạy cảm đề kháng kháng sinh 40 3.2.1 Xác định phương pháp dùng đĩa giấy kháng sinh 40 3.2.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 43 3.3 Kết xác định type huyết phổ biến gây bệnh Trà Vinh 44 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 4.1 Kết luận 46 4.2 Đề nghị 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Cấu tạo vi khuẩn V cholerae 1.2 Trình tự di truyền V.cholerae 1.3 Sự hình thành chủng V.cholerae có độc tố 1.4 Sự chuyển giao gen theo chiều ngang 1.5 Đường lây truyền V.cholerae 12 1.6 Các phương thức truyền lây 14 2.1 Khuẩn lạc môi trường TCBS 25 2.2 Kết thử oxydase 26 2.3 Kết thử sinh hóa 26 2.4 Xác định type huyết V cholerae 28 2.5 Kết kháng sinh đồ 32 2.6 Huyền dịch vi khuẩn 33 2.7 Thẻ (card) kháng sinh đồ 33 DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Phân biệt bệnh tả tiêu chảy cấp 16 1.2 Tính chất sinh hóa nhóm 17 1.3 Phân biệt V cholerae với V parahaemolyticus 17 2.1 Tóm tắt thử nghiệm kháng huyết V cholerae 29 2.2 Tiêu chuẩn đánh giá nhạy cảm kháng sinh 31 2.3 Kết nồng độ MIC kháng sinh 34 3.1 Tổng hợp tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae loại mẫu 35 3.2 Tỉ lệ nhiễm V cholerae huyết heo có pha nước muối 36 3.3 Tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae nghêu theo Huyện 37 3.4 Tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae huyết heo theo Huyện 39 3.5 Tỉ lệ nhạy cảm đề kháng kháng sinh Vibrio cholerae 40 3.6 Giá trị MIC Vibrio cholerae 43 3.7 Tỉ lệ nhiễm Vibrio cholerae theo type huyết 44 DANH MỤC SƠ ĐỒ - BIỂU ĐỒ Sơ đồ Tên sơ đồ Trang 2.1 Phân loại type V cholerae 2.1 Phân lập Vibrio cholerae 30 4.1 Sự nhạy cảm đề kháng kháng sinh 48 CHỮ VIẾT TẮT TT CHỮ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT ĐẦY ĐỦ KN Kháng nguyên KHT Kháng huyết TCP Toxicogenic phage CTXΦ Gen mang độc tố CT Toxicogenic tả Chr Chromosome CDC Centers for Disease Control and Prevention MIC Minimum Inhibitory Concentration 3.2 Kết tính nhạy cảm đề kháng kháng sinh vi khuẩn Vibrio cholerae 3.2.1 Xác định phương pháp dùng đĩa giấy kháng sinh Nghiên cứu tiến hành thử kháng sinh đồ để đánh giá tính nhạy cảm 20 chủng Vibrio cholerae định danh loại kháng sinh thường sử dụng để điều trị bệnh tả Kết kháng sinh đồ chủng Vibrio cholerae thể qua bảng 3.6 Bảng 3.5: Tỉ lệ nhạy cảm đề kháng kháng sinh Vibrio cholerae Kháng sinh Ký hiệu Số mẫu kiểm tra Nhạy cảm Trung gian Kháng Số mẫu (%) Số mẫu(%) Số mẫu (%) Amoxicillin Ax 20 0 10 18 90 Tetracycline Te 20 13 65 30 Norfloxacine Nr 20 20 100 0 0 Chloramphenicol Cl 20 14 70 10 20 Azithromycin Az 20 10 50 25 25 Kết cho thấy Vibrio cholerae nhạy cảm với norfloxacine (100%), với chloramphenicol (70%), tetracycline (65%), azithromycin (50%); đề kháng gần hoàn toàn với amoxicillin (90%), đề kháng tương tetracycline (30%), với azithromycin (25%) Kết phù hợp với kết nghiên cứu Nguyễn Thị Xuân Trang, Nguyễn Ngọc Tuân [5] Khả đề kháng vi khuẩn Vibrio cholerae đa dạng, tùy thuộc vào thời gian địa điểm nghiên cứu: Nguyên cộng có báo cáo khả kháng nhạy cảm với tetracycline chloramphenicol vi khuẩn V cholerae O1 phân lập Việt Nam Năm 1995 vi khuẩn V cholerae O1 nhạy với tetracycline 40 chloramphenicol, đến năm 2000 vi khuẩn V cholerae O1 lại đề kháng với tetracycline chloramphenicol [37] Ở nước ta, chủng V cholerae phân lập Thừa Thiên Huế năm 2003 đề kháng với amoxicillin [12] Ở miền Bắc Việt Nam từ năm 2007 đến 2010, tất chủng V cholerae phân lập nhạy với chloramphenicol (100%), đề kháng với tetracycline 29% sấp xỉ so với kết nghiên cứu (30%) [29] Đối với nghiên cứu nước, năm 1995 đến 1996 Hồng Kông chủng V cholerae phân lập nhạy cảm với chloramphenicol với tetracycline Nhưng đến năm 1998, V cholerae phân lập giảm nhạy cảm với kháng sinh chloramphenicol tetracycline (31% 27,6%) [45] Điều cho thấy việc sử dụng kháng sinh khơng có thay đổi đề kháng kháng sinh vi khuẩn V Cholerae Tuy nhiên, mức độ kháng kháng sinh chloramphenicol từ (3,7- 6,5%) tetracycline (4,3 -15,3%) [11,41,42], nhà nghiên cứu cho đáng kể cần giám sát [31] Năm 1997, nghiên cứu Pondicherry Ấn Độ tất chủng Vibrio cholerae phân lập nhạy với kháng sinh tetracycline norfloxacine 97,5% [38], so với nghiên cứu với tỉ lệ nhạy cảm 65% 100% Ở Afghanistan Pakistan, Rahbar cộng nghiên cứu năm 2005, tất chủng V cholerae phân lập nhạy cảm với tetracycline, ciprofloxacin, erythromycin ampicillin nhóm kháng sinh có kết nghiên cứu [9] Trong nghiên cứu Keramat cộng năm 2005, độ nhạy hai loại thuốc tetracycline doxycycline type huyết Ogawa nhấn mạnh [41] Năm 2000 Afzali cộng , Kashan (Iran) ông chứng minh tính nhạy cảm kháng sinh vi khuẩn Vibrio cholerae với ciprofloxacin, tetracycline [9] 41 V cholerae phân lập miền Bắc Ấn Độ cho thấy đề kháng với amoxicillin vào năm 1999 20%, đến năm 2002 đề kháng hồn tồn 100% sau giảm đến 14,2% năm 2006 [31], kết nghiên cứu 90% vi khuẩn V cholerae đề kháng với amoxicillin Cũng theo Nishibori năm 2011, Indonesia Vibrio cholerae phân lập nhạy cảm với nhiều loại kháng sinh ampicillin, chloramphenicol, tetracycline, norfloxacine Kết hoàn toàn phù hợp với kết nghiên cứu [44] Tỷ lệ % Nhạy Trung gian Kháng 120 100 80 60 40 20 Ax Te Cl Nr Az Kháng sinh Biểu đồ 3.1: Sự nhạy cảm đề kháng kháng sinh 42 3.2.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) Bảng 3.6: Giá trị MIC Vibrio cholerae Kháng sinh Ký hiệu Lượng kháng sinh Nồng độ MIC (μg) (μg/μl) Amoxillin Ax 10 Tetracycline Te 30