Thoái hóa khớp gối là bệnh thoái hóa tiến triển, liên quan đến hệ thống tự miễn và phản ứng viêm. Có 2 yếu tố được đưa ra và không thể tách rời nhau: yếu tố cơ học và yếu tố tế bào. Các yếu tố cơ học được coi là hiện tượng ban đầu của các vết nứt hình sợi và các vi gãy xương do suy yếu collagen. Từ những yếu tố tấn công cơ học đó gây ra sự hoạt hóa và giải phóng enzyme trong quá trình thoái biến chất cơ bản gây ra sự phá hủy sụn khớp và sự tạo khớp bị suy giảm.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ GHÉP TẾ BÀO GỐC TỪ MÔ MỠ VÀ PRP TRONG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP GỐI Nguyễn Đình Phú *, Trần Đặng Xn Tùng** TĨM TẮT Đặt vấn đề : Thối hóa khớp gối bệnh thối hóa tiến triển, liên quan đến hệ thống tự miễn phản ứng viêm Có yếu tố đưa tách rời nhau: yếu tố học yếu tố tế bào Các yếu tố học coi tượng ban đầu vết nứt hình sợi vi gãy xương suy yếu collagen Từ yếu tố công học gây hoạt hóa giải phóng enzyme q trình thối biến chất gây phá hủy sụn khớp tạo khớp bị suy giảm Hậu bề mặt sụn khớp bị mỏng dần, xơ hóa biểu sàng đau hạn chế vận động khớp Mục tiêu điều trị phương pháp cấy ghép tế bào gốc giảm hoạt hóa giải phóng enzyn gây hủy bề mặt sụn khớp giúp tái tạo lại bề mặt sụn khớp Mục tiêu: Chúng đánh giá kết điều trị sau tháng phương pháp ghép tế bào gốc bệnh nhân thoái hóa khớp gối độ 2-3 Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 16 bệnh nhân thối hóa khớp gối độ 2-3 điều trị phương pháp nội soi cắt lọc hoạt mạc viêm bơm tế bào gốc tự thân, xếp vào nhóm nghiên cứu theo dõi tháng, 12 tháng, 18 tháng 16 bệnh nhân thoái hóa khớp gối điều trị phương pháp nội soi cắt lọc hoạt mạc viêm xếp vào nhóm đối chứng, theo dõi tháng, 12 tháng, 18 tháng Nghiên cứu can thiệp, có đối chứng Kết quả: tuổi trung bình 59 ± 3,8 59 ± 4,3 nhóm nghiên cứu nhóm đối chứng, nữ/nam = 15/3 nhóm nghiên cứu 14/4 nhóm đối chứng, thang điểm Womac giảm trung bình 27,39 điểm, thang điểm Lyshom tăng trung bình 26,6 điểm, so với nhóm đối chứng tương ứng giảm 22,53 điểm tăng 15,6 điểm Kết luận: Sau tháng theo dõi, nhận định phương pháp sử dụng tế bào gốc từ mô mỡ huyết tương giàu tiểu cầu tự thân điều trị thối hóa khớp gối phương pháp an toàn, giúp bệnh nhân cải thiện triệu chứng đau, khả vận động Tuy nhiên cần làm nghiên cứu khác với thời gian theo dõi lâu Từ khóa: tế bào gốc trung mơ từ mơ mỡ, thối hóa khớp gối ABSTRACT AUTOLOGOUS ADIPOSE STEM CELLS AND PLATELET RICH PLASMA THERAPY FOR PATIENTS WITH KNEE OSTEOARTHRITIS Nguyen Dinh Phu, Tran Dang Xuan Tung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 19 - No - 2015: 230 - 234 Background: Osteo arthritis (OA) is a cartilage degenerative process, involving the immune system, producing local inflammatory reactions There are two inseparable theory: mechanical theory and cellular theory Mechanics theory is considered as very first injuries that trigger cellular reponses which damage articular cartilage of knee joint The purpose of stem cell treatment is to reduce the activation pro inflammatory cytokines and and the releasing of enzyme that destroy the articular cartilage Objectives: We are assessment of OA with grade 2-3 with autologous adipose stem cell after * Khoa Chấn thương chỉnh hình, Bệnh Viện Nhân Dân 115, TPHCM ** Bệnh viện Đa khoa Vạn Hạnh , TPHCM Tác giả liên lạc: BS Nguyễn Đình Phú ĐT: 0903866273 230 Email: nguyendinhphu115@yahoo.com Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Nghiên cứu Y học month follow-up Materials and methods: 16 OA patients with grade 2-3, treated by resecting inflamed synovialis and stem cell transplantation were classified in trial group with months, 12 months, and 18 months follow-up 16 OA patients with grade 2-3, treated by resecting inflamed synovialis were classified in control group with months, 12 months, and 18 months follow-up Experimental study with case-control Results: Mean age 59 ± 3.8 and 59 ± 4.3 in trial group and control group respectively, woman/man = 15/3 in trial group and 14/4 in control group, trial group decreased by 27.39 points in Womac index and increased 26.6 points in Lysholm scale averagely, compared with control group which decreased by 22.53 points and increased by 15.6 points respectively Conclusion: After months follow-up, we suggest that autologous Adipose tissue-Derived Stem Cell and Platelet Rich Plasma transplantation in Osteoarthritis treatment is a safe method, help patients improve pain symptoms, movability However, it is needed to further study with longer follow-up Keywords: Osteoarthritis, mesenchymal stem cell, adipose stem cell ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Thối hóa khớp gối bệnh lý thối hóa mơ liên kết, thường gặp dân số lớn tuổi theo sau chấn thương Đặc biệt, bề mặt sụn khớp bị tổn thương khả tái tạo thiếu cấu trúc mạch máu sụn Mặc dù phương pháp điều trị thuốc hay ngoại khoa làm giảm đau khả phục hồi lại chức bình thường bề mặt sụn khó đạt Bởi tế bào gốc trung mơ tế bào gốc mơ liên kết, có mơ sụn, nên việc sử dụng tế bào gốc trung mô phục hồi bề mặt sụn khớp xem hợp lý Ngoài việc biểu marker tế bào gốc đặc tính quan trọng điều biến miễn dịch khả biệt hóa thành tế bào sụn Hơn nữa, với chế nội tiết mình, tế bào gốc trung mơ bảo vệ sụn khớp khỏi việc phá hủy tái khởi động tế bào tiền thân chỗ Tế bào gốc trung mơ từ mơ mỡ với tính chất tế bào gốc trung mơ có ưu điểm thuận tiện việc thu nhận mô mỡ, gây xâm lấn, số lượng dồi so với vị trí thu nhận tế bào gốc trung mơ khác Từ tính chất có khả ứng dụng lâm sàng, triển khai nghiên cứu “Đánh giá tính an tồn hiệu ghép tự thân hỗn hợp tế bào gốc trung mô từ mô mỡ huyết tương giàu tiểu cầu thối hóa khớp gối” Đối tượng nghiên cứu Chun Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học 32 bệnh nhân (BN) chẩn đốn thối hóa khớp gối độ II, độ III theo phân độ Kellgren Lawrence điều trị Bệnh viện Nhân dân (BVND) 115 Bệnh viện Vạn Hạnh TPHCM chia thành nhóm: nhóm nghiên cứu (16 BN) nhóm đối chứng (16 BN) Nhóm nghiên cứu tiến hành phẫu thuật nội soi cắt lọc bơm tế bào gốc + huyết tương giàu tiểu cầu vào ổ khớp gối, nhóm đối chứng tiến hành phẫu thuật nội soi cắt lọc đơn Phương pháp nghiên cứu BN thăm khám, chụp X-quang khớp gối hai bình diện thẳng nghiêng, chẩn đốn xác định dựa kết X-quang MRI Những BN chẩn đốn thối hóa khớp gối độ II, độ III theo phân độ Kellgren Lawrence tuyển chọn cho nghiên cứu, chia ngẫu nhiên thành nhóm: nhóm nghiên cứu có 16 BN; nhóm đối chứng có 16 BN Các BN nhóm nghiên cứu điều trị phẫu thuật nội soi khớp gối cắt lọc hoạt mạc viêm bơm tế bào gốc trung mô từ mô mỡ + huyết tương giàu tiểu cầu vào vị trí khớp gối cần tái tạo Trong đó, nhóm đối chứng, BN điều trị phẫu thuật nội soi khớp gối cắt lọc hoạt mạc viêm 231 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 Kỹ thuật Bệnh nhân tiền mê, tê chỗ vùng bụng mà dự định hút mỡ BN tiến hành hút khoảng 70-100 ml mỡ xylanh 50 ml Sau đó, mỡ vận chuyển Phòng thí nghiệm NC&UD Tế bào gốc, Trường ĐHKHTN, ĐHQG Tp.HCM để tách chiết thu phân đoạn tạo mạch (Stromal vascular fraction – SVF) có chứa tế bào gốc Việc thu nhận SVF từ mô mỡ tiến hành theo kit tách chiết tế bào gốc mô mỡ (ADSC Extraction kit) Công ty TNHH Thế Giới Gen sản xuất Bên cạnh đó, bệnh nhân thu 20 ml máu ngoại vi để chế tạo huyết tương giàu tiểu cầu (Platelet rich plasma – PRP) Việc chế tạo PRP tiến hành theo hướng dẫn kit New-PRP Pro Kit Công ty TNHH Thế Giới Gen sản xuất để kiểm tra tồn tế bào gốc bên SVF kĩ thuật dòng chảy tế bào (Flow cytometry) với kháng thể đặc hiệu cho tế bào gốc Kết cho thấy, tỉ lệ trung bình tế bào gốc có SVF 8,21% (Hình 1) Bảng Đặc điểm tế bào sau tách Đặc điểm tế bào sau tách từ mô mỡ Số lượng tế bào/ml mỡ (tế bào) 1.3 x 10 Tỉ lệ tế bào sống (%) 98% Tỉ lệ tế bào gốc 8.21% Trong thời gian thu nhận SVF, bệnh nhân gây tê tủy sống, nội soi cắt lọc hoạt mạc viêm rửa ổ khớp Sau nhận, tồn SVF chứa tế bào gốc trung mơ, SVF hoạt hóa mL PRP Hỗn hợp tiêm vào khớp gối bệnh nhân sau khớp gối rửa cắt hoạt mạc viêm Sau điều trị, BN nằm bất động ngày đầu Hạn chế lại tuần Sau cho đứng dậy tập chống hai nạng khơng tì lên chân tiêm SVF PRP tuần sau bắt đầu tập lại tì đè lên chân làm thủ thuật tăng dần Tì đè chủ động chân đau sau tuần KẾT QUẢ Đặc điểm tế bào học Chúng thu nhận thành cơng SVF PRP 16 BN nhóm nghiên cứu Kết trung bình thu nhận 1.337.194 tế bào/ml mỡ, 98% tế bào sống Số lượng tế bào thu ml mỡ tỉ lệ tế bào sống tiêu chuẩn kit đưa (Bảng 1) Để chứng minh có tồn tế bào gốc bên SVF, mẫu SVF trích phần nhỏ 232 Hình Sự tồn tế bào gốc chế phẩm trước ghép Đặc điểm lâm sàng nghiên cứu Như ta thấy nghiên cứu có tương đồng nhóm nghiên cứu nhóm đối chứng đặc điểm dịch tễ lâm sàng Bảng Đặc điểm lâm sàng BN Đặc điểm Tuổi Giới: Nam Nữ Vị trí đau: Trái Phải Thời gian đau Phân độ: II III Nhóm nghiên cứu 59 ± 3,8 15 10 3,6 ± 1,2 năm 11 Nhóm đối chứng 59 ± 4,3 14 8 3,1 ± 0,9 năm 10 Kết theo dõi sau tháng Sau tháng theo dõi, hai nhóm có diễn tiến lâm sàng tốt, không xuất Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 biến chứng sau mổ có cải thiện mặt lâm sàng Bảng Kết điều trị sau tháng Bảng điểm Nhóm nghiên cứu Nhóm đối chứng WOMAC (giảm) 27,39 22,53 LYSHOM (tăng) 26,6 15,6 VAS Trước PT 1,6 1,4 Sau tháng 2,7 Tuy nhiên qua thống kê tăng giảm thang điểm đánh giá lâm sàng, ta thấy cải thiện tốt nhóm có bơm tế bào gốc sau phẫu thuật nội soi Với thang điểm Womac giảm trung bình 27, 39 điểm so cới mức giảm trung bình 22,53 điểm nhóm chứng Đồng thời thang điểm Lyshom có độ tăng tương ứng, trung bình 26,6 điểm nhóm nghiên cứu so với 15,6 điểm nhóm chứng Trong nghiên cứu chúng tơi trọng tính an tồn phương pháp có bơm tế bào gốc sau mổ so với phẫu thuật đơn Chúng theo dõi tai biến, biến chứng tồn q trình thực thủ thuật xảy cho bệnh nhân Chúng tơi theo dõi: tình trạng sốc, dấu hiệu nhiệm trùng khớp sau tiêm, vùng lấy mở dấu hiệu tồn thân khác Khơng có trường hợp báo có biến chứng cấp tính BÀN LUẬN Đây nghiên cứu can thiệp, có đối chứng nước ta ứng dụng công nghệ tế bào gốc điều trị thối hóa khớp gối Do đó, tiêu chí an tồn đề cập Với số mẫu 16 bệnh nhân lô nghiên cứu, chưa ghi nhận trường hợp xảy biến cố bất lợi hay biến cố bất lợi nghiêm trọng tính đến thời điểm tháng Đây phương pháp ghép tự thân, tế bào gốc tách từ bệnh nhân, hoạt hóa huyết tương giàu tiểu cầu bệnh nhân ghép lại cho bệnh nhân Thời gian thao tác in vitro tế bào khoảng vài tiếng với thao tác tối thiểu Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Nghiên cứu Y học Báo cáo đánh giá bước đầu hiệu phương pháp Các số liệu thang điểm WOMAC, LYSHOM thang điểm đau VAS cải thiện bệnh nhân tham gia nghiên cứu Và cải thiện nhóm có bơm tế bào gốc trội so với nhóm đối chứng Tuy nhiên, mặt hình ảnh học chưa ghi nhận tái tạo sụn hay phục hồi sụn khớp tương tự Điều báo cáo cắt ngang thời điểm tháng, bệnh nhân cần thêm thời gian để theo dõi Tác dụng giảm đau nhóm nghiên cứu liên quan trực tiếp đến vai trò SVF chứa tế bào gốc (adipose derived stem cells – ADSC) PRP Thật vậy, nghiên cứu trước PRP báo cáo ức chế đường NFκB, ngăn cản việc cảm ứng gen mục tiêu NFκB(9) Tác động giảm đau giảm viêm liên quan đến vai trò nhiều thành phần chất tăng trưởng có PRP PRP chứa nhiều loại cytokine HGF, PDGF, IGF, TGF-β, EGF FGF(1;4) HGF biết yếu tố kích thích chất ức chế NFκB(2); làm giảm yếu tố gây viêm IL-6; tăng yếu tố chống viêm IL-10(2) Tác động chống viêm giảm đau có vai trò từ chất sản xuất từ tế bào ADSC SVF ADSC chứng minh sản xuất nhiều yếu tố quan trọng giảm đau chống viêm HGF, VEGF, NGF, EGF, FGF, and TGF-β(6;8;10) Tác động có lợi việc ghép SVF PRP điều trị thoái hoá khớp ghi nhận nhiều nghiên cứu lâm sàng nhiều quốc gia Trong nghiên cứu gần đây, Jo cs(5) tiến hành quy trình tương tự 18 bệnh nhân; sau tháng, bệnh nhân cải thiện đáng kể điểm WOMAC(5) Trong nghiên cứu trước đó, Pak (2011) báo cáo có cải thiện đáng kể bệnh nhân thoái hoá khớp ghép SVF sau 12 tháng theo dõi(7) Kết nghiên cứu công bố gần nhóm tác giả Bùi Hồng Thiên Khanh, ĐHYD Tp.HCM cho thấy việc ghép SVF PRP có 233 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 19 * Số * 2015 cải thiện đáng kể điểm Lysholm sau tháng có dày lên sụn khớp KẾT LUẬN Sau tháng theo dõi, nhận định phương pháp sử dụng tế bào gốc từ mô mỡ huyết tương giàu tiểu cầu tự thân điều trị thối hóa khớp gối phương pháp an toàn, giúp bệnh nhân cải thiện triệu chứng đau, khả vận động Tuy nhiên cần làm nghiên cứu khác với thời gian theo dõi lâu TÀI LIỆU THAM KHẢO 234 Amable PR, Carias RB, Teixeira MV, et al (2013) Plateletrich plasma preparation for regenerative medicine: optimization and quantification of cytokines and growth factors Stem cell research & therapy 4, 67 Bendinelli P, Matteucci E, Dogliotti G, Corsi MM, Banfi G, Maroni P, and Desiderio MA (2010) Molecular basis of antiinflammatory action of platelet-rich plasma on human chondrocytes: mechanisms of NF-kappaB inhibition via HGF Journal of cellular physiology 225, 757–766 Coudriet GM, He J, Trucco M, Mars WM, and Piganelli JD (2010) Hepatocyte growth factor modulates interleukin-6 production in bone marrow derived macrophages: implications for inflammatory mediated diseases PloS one 5, e15384 Hamilton B, Tol JL, Knez W, and Chalabi H (2013) Exercise and the platelet activator calcium chloride both influence the growth factor content of platelet-rich plasma (PRP): overlooked biochemical factors that could influence PRP treatment British journal of sports medicine 10 Jo CH, Lee YG, Shin WH, Kim H, Chai JW, Jeong EC, Kim JE, Shim H, Shin JS, Shin IS, et al (2014) Intra-articular injection of mesenchymal stem cells for the treatment of osteoarthritis of the knee: A proof-of-concept clinical trial Stem cells (Dayton, Ohio) Kilroy GE, Foster SJ, Wu X, Ruiz J, Sherwood S, Heifetz A, Ludlow JW, Stricker DM, Potiny S, Green P, et al (2007) Cytokine profile of human adipose-derived stem cells: expression of angiogenic, hematopoietic, and proinflammatory factors Journal of cellular physiology 212, 702– 709 Pak J (2011) Regeneration of human bones in hip osteonecrosis and human cartilage in knee osteoarthritis with autologous adiposetissue- derived stem cells: a case series Journal of medical case Salgado AJ, Reis RL, Sousa NJ, and Gimble JM (2010) Adipose tissue derived stem cells secretome: soluble factors and their roles in regenerative medicine Current stem cell research & therapy 5, 103–110 Van Buul GM, Koevoet WL, Kops N, Bos PK, Verhaar JA, Weinans H, Bernsen MR, and van Osch GJ (2011) Platelet-rich plasma releasate inhibits inflammatory processes in osteoarthritic chondrocytes The American journal of sports medicine 39, 2362–2370 Pham VP, Bui KH, Ngo DQ, Vu NB, Truong NH, Phan NL, Le DM, Duong TD, Nguyen TD, Le VT, et al (2013) Activated platelet-rich plasma improves adipose-derived stem cell transplantation efficiency in injured articular cartilage Stem cell research & therapy 4, 91 Ngày nhận báo: Ngày phản biện nhận xét báo: Ngày báo đăng: 07/04/2015 24/04/2015 20/10/2015 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học ... cho tế bào gốc Kết cho thấy, tỉ lệ trung bình tế bào gốc có SVF 8,21% (Hình 1) Bảng Đặc điểm tế bào sau tách Đặc điểm tế bào sau tách từ mô mỡ Số lượng tế bào/ ml mỡ (tế bào) 1.3 x 10 Tỉ lệ tế bào. .. chứng có 16 BN Các BN nhóm nghiên cứu điều trị phẫu thuật nội soi khớp gối cắt lọc hoạt mạc viêm bơm tế bào gốc trung mô từ mô mỡ + huyết tương giàu tiểu cầu vào vị trí khớp gối cần tái tạo Trong. .. động tế bào tiền thân chỗ Tế bào gốc trung mô từ mô mỡ với tính chất tế bào gốc trung mơ có ưu điểm thuận tiện việc thu nhận mơ mỡ, gây xâm lấn, số lượng dồi so với vị trí thu nhận tế bào gốc