Bài viết mục đích tăng tốc độ sinh trưởng và nâng cao hàm lượng các axit béo không bão hòa, có mạch các bon dài như DHA và n-6 DPA trong các chủng Labyrinthula phân lập được tại Việt Nam.
28(3): 54-60 Tạp chí Sinh học 9-2006 Các điều kiện nuôi cấy Tối u chủng vi tảo biển Labyrinthula sp HL78 môi trờng rắn Hoàng Thị Minh Hiền, Hoàng Sỹ Nam, đặng diễm hồng Viện Công nghệ sinh học Labyrinthula, loại vi tảo biển đơn bào, sống theo kiểu dị dỡng Tế bào chúng có dạng hình thoi chuyển động liên tục dọc theo mạng lới ngo¹i chÊt M¹ng l−íi ngo¹i chÊt cđa nã cã thĨ tiêu hóa đợc vi khuẩn, nấm men thể vi sinh vật khác [4, 7] Trớc đây, Labyrinthula đợc biết đến nh loại gây bệnh tàn phá thảm cỏ Zostera marina [6, 9] Tuy nhiên, vài năm gần đây, Labyrinthula đợc tập trung nghiên cứu để sử dụng làm thực phẩm chức cho ngời động vật nhiều nớc nh Nhật Bản, Ô-xtrây-li-a khả sinh tổng hợp axít béo không bão hoà, có mạch bon dài C22 (long - chain polyunsaturated fatty acids - LCPUFAs) cña chúng [3, 4, 5] Đây axít béo không bão hòa, có vai trò quan trọng hoạt động não mắt [1, 8] Theo Kumon cs (2005), thành phần LCPUFAs loài Labyrinthula chiếm 50% tỉng sè axÝt bÐo VÝ dơ nh− mét sè chđng Labyrinthula, tû lƯ gi÷a axÝt docosahexaenoic (DHA; C22: 6n-3) và/hoặc n-6 docosapentaenoic (n-6 DPA; C22: 5n-6) tổng sè LCPUFA chiÕm tõ 25,4% ®Õn 48,1% [5] ë ViƯt Nam, Labyrinthula đợc phát phân lập ven bê biĨn cđa mét sè tØnh phÝa B¾c tõ năm 2005 Chúng có hàm lợng DHA n-6 DPA cao (gấp 5-10 lần so với tất vi sinh vật vi tảo biển biết Việt Nam) [2] Nhằm mục đích tăng tốc độ sinh trởng nâng cao hàm lợng axít béo không bão hòa, có mạch bon dài nh DHA n-6 DPA chủng Labyrinthula phân lập đợc Việt Nam, tiến hành nghiên cứu tối u hóa điều kiện nuôi cấy chúng môi trờng rắn I phơng pháp nghiên cứu Vật liệu - Mẫu vật trôi dạt vào bờ giai đoạn phân hủy (có màu vàng nâu) đợc thu thập vùng bờ biển Vịnh Hạ Long, tỉnh Quảng Ninh vào tháng 7/2002 Các mẫu vật đợc rửa sạch, cho vào túi ni-lông, ghi địa điểm thu mẫu đợc xử lý ngµy - Vi khuÈn Vibrio sp vµ Psychrobacter phenylpyruvicus đợc phân lập từ nớc biển đảo Iriomote, Nhật Bản Môi trờng dùng để nuôi cấy loại vi khuẩn đợc ký hiệu GPY, có thành phÇn nh− sau: g/l glucoza, g/l polypepton, 0,5 g/l cao nÊm men vµ 1,5% NaCl (sư dơng n−íc biển nhân tạo - ASW) - Môi trờng dùng để phân lập Labyrinthula đợc ký hiệu GPYA, có thành phÇn nh− sau: g/l glucoza, g/l polypepton, 0,5 g/l cao nấm men, 10 g/l thạch 1,5% NaCl (sử dụng nớc biển nhân tạo - ASW) - Môi trờng đợc sử dụng để nuôi cấy chuyển Labyrinthula đợc ký hiệu PYA-SBO, có thành phần giống với môi trờng GPYA nhng nguồn cácbon glucoza đợc thay dầu đậu tơng (SBO) có nồng độ 0,5% - Các hóa chất sử dụng cho việc phân lập nuôi cấy Labyrinthula hóa chất chuyên dụng phòng thí nghiệm nh: glucoza, polypepton, cao nấm men, thạch Ngoài ra, sử dụng nớc biển nhân tạo (ASW) hãng Tropic Marine Aqurientechnick, Wartenberg, Đức; dầu đậu tơng (SBO), dầu Công trình đợc hỗ trợ kinh phí đề tài cấp Viện Công nghệ sinh học Chơng trình nghiên cứu 54 lêxithin (SBL) cđa h·ng Wako Pure Chemical Industries, Tokyo, NhËt B¶n; Tween 80 hãng Nacalai Tesque Hàm lợng axít béo không bão hòa n-6 DPA DHA đợc tính theo hàm lợng chất chuẩn axít arachidonic (C20: 0) - Các thiết bị đợc sử dụng nghiên cứu bao gåm: kÝnh hiÓn vi quang häc (Olympus Model CHS; Nikon eclipse 50i, Nhật Bản), buồng đếm số lợng tế bào Burker - Turk (Đức), cân phân tích (Precisa XT2200A, Thụy Điển), tủ nuôi cấy nhiệt độ 28oC (Binder, Đức), máy lắc IKA KS 260 basic (Đức) Máy sắc ký khÝ láng ((GLC) - GC 17 - A - Shimazu Kyoto, NhËt B¶n) cã cét mao dÉn TC - 70 (GL Science, Tokyo, Nhật Bản) hoạt động với chơng trình nhiệt độ 180oC - 220oC, nhiệt độ tăng 4oC/1 phút Phơng pháp a Phân lập chủng Labyrinthula sp HL78 Chủng Labyrinthula sp HL78 (chủng HL78) đợc phân lập từ Vịnh Hạ Long, theo phơng pháp Yokochi cs (2001) [10] Trong trình phân lập, chúng t«i sư dơng kÝnh hiĨn vi quang häc (Olympus Model CHS; Nikon eclipse 50i, Nhật Bản) có độ phóng đại 1000 lần b Tối u hóa điều kiện nuôi cấy chủng HL78 Để tìm điều kiện nuôi cÊy tèi −u cho chđng HL78 sinh tr−ëng vµ cã hàm lợng axít béo không bão hòa (đặc biệt DHA n-6 DPA) cao, tiến hành nghiên cứu ảnh hởng số yếu tố nh: loại vi khuẩn đợc sử dụng làm yếu tố kích thích sinh trởng cho chủng HL78 trình nuôi cấy môi trờng rắn, nguồn cácbon nitơ, nhiệt độ, pH nồng độ muối lên chủng HL78 - Nghiên cứu ảnh hởng loại vi khuẩn khác (Vibrio sp Psychrobacter phenylpyruvicus) đến hàm lợng n-6 DPA, DHA thành phần axít béo khác Với đĩa môi trờng PYA-SBO, cấy trải 100 àl vi khuẩn Vibrio sp Psychrobacter phenylpyruvicus tơng ứng với 50 àg trọng lợng khô tế bào vi khuẩn đợc sử dụng nh yếu tố kÝch thÝch sinh tr−ëng cđa chđng HL78 - Nghiªn cøu ảnh hởng nguồn bon đến hàm lợng LCPUFA Để nghiên cứu ảnh hởng nguồn bon, môi trờng thí nghiệm đợc bổ sung polypepton (1 g/l), cao nấm men (0,5 g/l) nguồn nitơ Các nguån c¸c bon nh− glucoza (2 g/l), fructoza (2 g/l), glyxêrol (2 g/l), axít linolenic (2 g/l), dầu đậu tơng (5 g/l) đợc bổ sung vào môi trờng PYA Chủng HL78 đợc nuôi cấy nhiệt độ 28oC Phân tích hàm lợng LCPUFA sau ngày nuôi cấy - Nghiên cứu ảnh hởng loại dầu khác đến hàm lợng LCPUFA Chúng sử dụng nguồn dầu nh dầu dừa, dầu cọ, dầu đậu tơng, dầu lexithin dầu vừng bổ sung vào môi trờng PYA với hàm lợng g/l (sử dụng Tween 80 để tăng khả nhũ hóa cho dầu môi trờng với nồng độ 25% (w/w) so với dầu) glucoza (2 g/l) làm đối chứng - Nghiên cứu ảnh hởng nguồn nitơ đến hàm lợng LCPUFA Môi trờng thí nghiệm có chứa polypepton (1 g/l), cao nấm men (0,5 g/l) 10g SBO SBL/l Urea, KNO3, NH4Cl đợc bổ sung nồng độ 1,5 g/l thay polypepton cao nấm men vào môi trờng có chứa 10 g SBO SBL/l - Nghiên cứu ảnh h−ëng cđa mét sè u tè nh− nhiƯt ®é, pH, nồng độ muối hàm lợng dầu đến hàm lợng LCPUFA ảnh hởng số yếu tố đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc kiểm tra khoảng nhiƯt ®é tõ 15oC- 40oC, pH tõ 5,0 10, nång ®é muèi (NaCl) tõ - 4,5% vµ nång ®é dầu (SBO SBL) từ 0,5 - 1,5 g/l c Phân tích thành phần axit béo không bão hòa Thành phần axit béo không bão hoà có mạch cacbon dài đợc phân tích sắc ký khí lỏng (GLC) theo phơng pháp Kumon cs (2003) [5] máy GC-17-A (Shimadzu, Kyoto, Japan) víi cét TC-70 (GL Science, Tokyo, Japan), với chơng trình nhiệt độ 180oC - 220oC, nhiệt độ tăng 4oC/1 phút II Kết Quả Thảo luận Từ mẫu thu thập Vịnh Hạ Long, phân lập nuôi cấy ổn định 55 điều kiện phòng thí nghiệm chủng HL78 Thành phần axít béo chủng HL78 nh sau: C12: (chiÕm 15,3% tæng sè axÝt bÐo), C16: (12,8%), C18: (3,4%), C18: (12,2%), C20: 5n-3 (3,8%), C22: 5n-6 (7,3%) vµ C22: 6n-3 (11,5%) vµ hµm lợng LCPUFA axít béo tổng số 22,6% Để tìm điều kiện nuôi cấy tối u cho chủng HL78 sinh trởng có khả sinh hàm lợng axit béo không bão hoà, đặc biệt DHA n-6 DPA cao, tiến hành nghiên cứu ảnh hởng số yếu tố đến chủng HL78 nh trình bày phần phơng pháp nghiên cứu Do hàm lợng LCPUFA tổng số n-6 DPA DHA tỷ lệ tơng ứng với phát triển chủng HL78, nên đánh giá phát triển chủng HL78 gián tiếp thông qua tiêu ảnh hởng loài vi khuẩn Vibrio sp Psychrobacter phenylpyruvicus ảnh hởng loại vi khuẩn lên hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc thể bảng Bảng ảnh hởng loài vi khuẩn Vibrio sp Psychrobacter phenylpyruvicus lên hàm lợng n-6 DPA, DHA thành phần axit béo khác chủng HL78 Công thức thí nghiÖm PYA - SBO - Vibrio sp PYA - SBO - Psychrobacter PYA - SBO - chñng HL78 PYA - SBO - Vibrio sp - chñng HL78 PYA - SBO - Psychrobacter - chđng HL78 Tõ kÕt qu¶ ë b¶ng 1, thấy có khác hàm lợng (%) n-6 DPA DHA đợc tạo chủng HL78 có mặt mặt vi khuẩn Trên môi trờng đối chứng có PYA-SBO vi khuẩn Vibrio sp Psychrobacter phenylpyruvicus, thành phÇn axit bÐo nh− sau: C16: (11,1%); C18: (2,7%); C18: (21,8%); C18: 2n-6 (54,6%); C18: 3n-6 (4,2%) không phát thấy thành phần axit béo không bão hòa có n-6 DPA (%) 0,00 0,00 3,21 6,72 7,28 DHA (%) 0,00 0.00 6,21 8,16 11,53 Các thành phần axit béo khác (%) 100,00 100,00 90,58 86,12 81,17 mạch bon dài (C > C20) Khi có mặt vi khuẩn Vibrio sp., hàm lợng n-6 DPA, DHA chủng HL78 6,72% 8,16% tơng ứng; có mặt P phenylpyruvicus, hàm lợng chúng 7,28% 11,53%, tơng ứng Nh− vËy, cã thĨ sư dơng vi khn P phenylpyruvicus nh− lµ mét u tè kÝch thÝch sinh tr−ëng cđa chủng HL78 môi trờng rắn ảnh hởng nguồn bon Bảng ảnh hởng nguồn bon khác đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 Nguồn các-bon Glucoza Fructoza Glyxêrol Axit linolenic Dầu đậu tơng ảnh hởng nguồn bon đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc thể b¶ng KÕt qu¶ thÝ nghiƯm cho thÊy sư dụng loại đờng đơn nh glucoza, 56 LCPUFA (g/l) 0,04 0,08 0,06 0,09 0,23 fructoza, glyxêrol axít linolenic, hàm lợng LCPUFA chủng HL78 phát đợc song không cao Với nguồn bon dầu ®Ëu t−¬ng (SBO), chđng HL78 cã tèc ®é sinh tr−ëng hàm lợng LCPUFA cao (gấp 5,75 lần so với môi trờng có glucoza) ảnh hởng loại dầu Bảng cho thấy bổ sung dầu đậu tơng vào môi trờng nuôi cấy, hàm lợng LCPUFA đợc tạo chủng HL78 cao nhiều so với nguồn bon khác Do đó, tiến hành nghiên cứu ảnh hởng loại dầu khác lên hàm lợng axít béo không bão hòa chủng HL78 (bảng 3) Môi trờng PYA có bổ sung glucoza đợc xem nh đối chứng Bảng ảnh hởng loại dầu khác đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 sau ngày nuôi cấy Các loại dầu Glucoza Dầu dừa Dầu đậu tơng Dầu cọ Dầu lêxithin Dầu vừng LCPUFA (g/l) 0,04 0,19 0,23 0,21 0,28 0,12 Qua kÕt qu¶ thu đợc bảng 3, khẳng định việc bổ sung thêm dầu vào môi trờng nuôi làm tăng hàm lợng LCPUFA so với đối chứng Khi có mặt dầu dừa, dầu đậu tơng, dầu lêxithin, dầu cọ dầu vừng, hàm lợng LCPUFA tăng gấp từ đến lần so với có glucoza Vì thành phần axít béo loại dầu khác nhau, nên ảnh hởng chúng lên việc làm tăng hàm lợng LCPUFA chủng HL78 khác Khi có mặt LCPUFA (%) 19,21 22,10 23,10 21,20 27,91 15,21 dầu lêxithin dầu đậu tơng, hàm lợng axít béo không bão hòa có mạch dài cao 27,91% 23,1%, tơng ứng ảnh hởng nồng độ dầu ảnh hởng nồng độ dầu lêxithin dầu đậu tơng lên hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc tiến hành thử nghiệm với dải nồng độ từ 0,5 đến 1,5 g/l (bảng 4) Bảng ảnh hởng nồng độ dầu lêxithin dầu đậu tơng đến hàm lợng axít béo không bão hòa chủng HL78 sau ngày nuôi cấy Loại dầu Đậu tơng Lêxithin Nồng độ dầu (g/l) 0,5 1,5 0,5 1,5 Kết bảng rằng, hàm lợng dầu tăng hàm lợng LCPUFA chủng HL78 tăng lên nồng độ, dầu lêxithin cho hàm lợng LCPUFA cao so với dầu đậu tơng Điều đợc giải thích khác thành phần dầu lêxithin dầu đậu tơng Thành phần lipit dầu lêxithin cã chøa 40,8% phètpholipit (gåm 16,6% phètphatidylcholin, 9,8% phètphatidy- LCPUFA (g/l) 0,23 0,28 0,48 0,28 0,35 0,56 LCPUFA (%) 22,44 16,71 12,65 27,90 15,72 11,23 linositol, 8,1% phètphatidylethanolamin vµ 6,3% phốtphatidylaxit), 40,0% triaxylgryxêrol (TG) thành phần khác chiếm 19,2% Theo Kumon vµ cs (2005) [5], phètpholipit lµ yÕu tố đóng vai trò quan trọng phát triển Labyrinthula Bên cạnh đó, có mặt hàm lợng TG dầu lêxithin tác nhân thiết yếu cho sinh trởng theo không gian chiều (khi tế bào 57 Labyrinthula mọc bề mặt môi trờng lòng môi trờng) Trong thành phần dầu lêxithin, lipit ra, có chứa nhiều thành phần khác (ở dạng vết - tức có hàm lợng thấp), có carotenoit Một vài dạng carotenoit lại chất chống oxy hoá lipit (antioxydant) Các yếu tố trở thành tác nhân làm cho Labyrinthula có hàm lợng LCPUFA môi trờng cao môi trờng có dầu đậu tơng Ngoài ra, so với dầu đậu tơng, giọt dầu lêxithin môi trờng có kích thớc nhỏ Có thể khác tính chất vật lý nh tạo nên hiệu khác tốc độ sinh trởng hàm lợng LCPUFA cđa chđng HL78 nu«i m«i tr−êng cã dầu lêxithin dầu đậu tơng Tuy nhiên, sắc tố dầu lêxithin có màu vàng đỏ, nên tế bào Labyrinthula môi trờng PYA có bổ sung dầu khó quan sát thấy dới kính hiển vi quang học Do đó, để dễ dàng cho việc quan sát tế bào Labyrinthula dới kính hiển vi quang häc, chóng t«i sÏ sư dơng m«i tr−êng PYA có bổ sung dầu đậu tơng (PYA-SBO) cho thí nghiệm ảnh hởng nguồn nitơ ảnh hởng nguồn nitơ khác đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc thể bảng Bảng ảnh hởng nguồn nitơ đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 sau ngày nuôi cÊy Nguån nit¬ Polypepton Cao nÊm men Urea KNO3 NH4Cl LCPUFA (g/l) 0,23 0,13 0,002 (vÕt) 0,11 0,00 KÕt qu¶ bảng cho thấy polypepton cao nấm men cã thĨ dïng rÊt tèt cho nu«i cÊy chđng HL78 Thí nghiệm cho thấy chủng HL78 sử dụng nguồn nitơ dới dạng KNO3 sử dụng đợc NH4Cl Tuy nhiên, chủng HL78 sử dụng đợc nitơ dới dạng N-NO3 điều đợc tiếp tục tìm hiểu ảnh hởng nhiệt độ Dải nhiệt độ từ 15oC - 40oC đợc dùng để đánh giá ảnh hởng nhiệt độ đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 Kết đợc bảng Bảng ảnh hởng nhiệt độ đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 sau ngày nuôi cấy Nhiệt ®é (oC) 15 20 25 28 30 35 40 LCPUFA (g/l) 0,04 0,12 0,26 0,28 0,25 0,08 0,03 C¸c kÕt thu đợc bảng cho thấy nhiệt độ tối u cho hàm lợng LCPUFA chủng HL78 nằm khoảng từ 25oC đến 30oC Trong 58 LCPUFA (%) 4,27 6,12 27,91 26,62 25,1 18,2 15,56 đó, nhiệt độ 28oC hàm lợng LCPUFA đạt giá trị cao Do vậy, nhiệt độ 28oC đợc sử dụng để nuôi cấy chủng HL78 sau 7 ảnh hởng pH ảnh hởng pH khác đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc bảng Bảng ảnh hởng pH đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 sau ngày nuôi cấy pH ban ®Çu 5,0 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 10,0 LCPUFA (g/l) 0,06 0,09 0,15 0,19 0,21 0,23 0,24 0,22 0,19 Kết thu đợc bảng cho thấy hàm lợng LCPUFA phát đợc dải pH từ 5-10 Tuy nhiên, pH ban đầu nhỏ cho hàm lợng LCPUFA thấp (kết không đây) tất công thức thí nghiệm sau ngày, môi trờng nuôi cấy có dịch chuyển pH Nh vậy, pH ban đầu từ 7,5 đến 8,0 LCPUFA (%) 5,21 10,10 17,2 19,72 20,01 22,40 22,61 19,92 16,20 tèi −u cho sù phát triển chủng HL78 đợc chọn cho thí nghiệm ảnh hởng nồng độ muối ảnh hởng nồng độ muối từ 0% đến 4,5% đến hàm lợng LCPUFA chủng HL78 đợc bảng Bảng ảnh hởng nồng độ muối đến hàm lợng LCPUFA cđa chđng HL78 Nång ®é mi (%) 0,75 1,5 4,5 Kết bảng cho thấy nồng độ muối 0%, không thấy có mặt axít béo không bão hòa chủng HL78 nồng độ muối từ 1,5% đến 4,5%, hàm lợng LCPUFA chủng thay đổi không nhiều Do đó, chọn nồng độ muối 1,5% cho tất thí nghiệm III Kết luận - Khi nuôi cấy môi trờng rắn, vi khuẩn Psychrobacter phenylpyruvicus đợc sử dụng nh yếu tố kích thích sinh trởng để chủng Labyrinthula sp HL78 phát triển - Môi trờng rắn để nuôi cấy tối u LCPUFA (g/l) 0,00 0,14 0,28 0,30 0,26 LCPUFA (%) 0,00 16,72 27,91 29,21 26,20 chủng HL78 môi trờng PYA-SBO PYA-SBL có thành phần tơng tự nh môi trờng GPYA nhng thay glucoza SBO SBL nh sau: dầu đậu tơng dầu lêxithin với nồng độ từ 0,5% trë lªn, polypepton g/l, cao nÊm men 0,5 g/l, nồng độ muối 1,5% NaCl, thạch 10 g/l sư dơng vi khn Psychrobacter phenylpyruvicus lµm u tè kÝch thích sinh trởng chủng HL78; nhiệt độ nuôi cấy thích hợp 28oC; pH ban đầu nằm khoảng từ 7,5 đến 8,0 Tài liệu tham khảo Dyer J R and Carol C E., 1991: J Neurochem., 56: 1921- 1931 59 Hoµng Lan Anh vµ cs., 2005: Tạp chí Công nghệ sinh học, 3(3): 381-387 Honda D et al., 1999: J Eukaryot Microbiol., 46(6): 637- 647 Inouye I., 2004: Proceedings of the Tenth International Congress for culture Collections Tsukuba, Japan 10-15 October 2004: 179-186 Kumon Y et al., 2005: Appl Microbiol Biotechnol., 69: 253- 258 Muehlstein L K and Porter D., 1991: Mycologia, 83: 180-191 Porter D., 1990: Handbook of protoctista: 388-398 Jones and Bartlett, Boston Uauy R D et al., 1990: Pediatr Res., 28: 485-492 Vergeer L H T and Develi A., 1997: Aquatic Botany, 58: 65-72 10 Yokochi T et al., 2001: Mar Biotechnol., 3: 68-73 Lêi cảm ơn Chúng cảm ơn ThS Kumon Y., Viện nghiên cứu Khoa học Công nghệ công nghiệp tiên tiến, Tsukuba, Nhật Bản, giúp đỡ việc xác định axít béo không bão hoà DHA n6 DPA Optimum cultural conditions of the Labyrinthula sp Strain Hl78 in stiff media Hoang Thi Minh Hien, Hoang Sy Nam, Dang diem hong Summary In this paper, the Labyrinthula sp strain HL78 was isolated from leaves floating on the seawater at the coastal area of Halong bay, Quangninh province This strain has the high growth rate and long chain polyunsaturated fatty acid (LCPUFA) production The main fatty acid composition of this strain was: C12: (15.3%), C16: (12.8%), C18: (3.4%), C18: (12.2%), C20: 5n-3 (3.8%), C22: 5n-6 (7.3%) and C22: 6n-3 (11.5%) The ratio of LCPUFA to the total of fatty acids was 22.6% The effects of various cultural conditions such as bacteria, sources of cacbon and nitrogen, oil concentrations, temperature, pH, salt concentrations (NaCl) on the cell growth and the LCPUFA contents were tested As the previous report of Hoang Lan Anh et al., (2005), the basic medium for the isolation of isolated Labyrinthula sp., GPYA medium, contained glucose (2 g/l), polypepton (1 g/l), yeast extract (0.5 g/l) and agar (10 g/l) in a 50% salt concentration of ASW (50% ASW, approximately 1.5% NaCl) For the cultivation of the isolated Labyrinthula sp strain HL78, therefore, we used PYA-SBO or PYA-SBL medium which contained soybean oil (SBO) or soybean lecithine oil (SBL) (5 g/l) instead of the glucose in GPYA medium GPYA medium without agar was called GPY medium A bacterial suspension (100 µl, containing 50 µg of cell dry weight which have grown in the GPY medium) was spread on the PYA-SBO medium The obtained results in this present allowed us to conclude that the optimum conditions for the cultivation of the Labyrinthula sp strain HL78 were the PYA-SBO (or SBL) medium using the bacterial suspension of Psychrobacter phenylpyruvicus as a stimulating element for the growth of Labyrinthula, at pH from 7.5 to 8.0 and at temperature of 28oC Ngµy nhËn bµi: 15- 6- 2006 60 ... thích sinh trởng để chủng Labyrinthula sp HL78 phát triển - Môi trờng rắn để nuôi cấy tối u LCPUFA (g/l) 0,00 0,14 0,28 0,30 0,26 LCPUFA (%) 0,00 16,72 27,91 29,21 26,20 chủng HL78 môi trờng PYA-SBO... số yếu tố nh: loại vi khuẩn đợc sử dụng làm yếu tè kÝch thÝch sinh tr−ëng cho chđng HL78 qu¸ trình nuôi cấy môi trờng rắn, nguồn cácbon nitơ, nhiệt độ, pH nồng độ muối lên chủng HL78 - Nghiên... cứu ảnh hởng loại vi khuẩn khác (Vibrio sp Psychrobacter phenylpyruvicus) đến hàm lợng n-6 DPA, DHA thành phần axít béo khác Với đĩa môi trờng PYA-SBO, cấy trải 100 àl vi khuẩn Vibrio sp Psychrobacter