Bài viết trình bày tách chiết cũng như làm sáng tỏ cấu trúc của mỗi thành phần từ nọc của Conotoxin đã được bắt đầu từ đầu những năm 1980 và chúng không chỉ giúp ích cho con người trong việc khai thác nguồn dược liệu tự nhiên.
33(3): 74-80 Tạp chí Sinh học 9-2011 TáCH CHIếT Và XáC ĐịNH CONOTOXIN Từ MộT Số LOàI ốC CốI THU THậP VùNG BIểN NHA TRANG, Việt Nam Lê Thị Bích Thảo, Đoàn Việt Bình, Nguyễn Bích Nhi, Phan Văn Chi Viện Công nghệ sinh học Môi trờng biển nguồn cung cấp sản phẩm tự nhiên có hoạt tính sinh học lớn nhiều sản phẩm có đặc tính cấu trúc mà sản phẩm tự nhiên cạn Nghiên cứu đặc điểm dợc học sản phẩm đ kéo theo phát nhiều tác nhân có hoạt tính tiềm tàng ứng dụng y học lâm sàng [13] ốc cối (Conidae) họ động vật thân mềm lớn biển (đặc biệt vùng biển nhiệt đới) với khoảng 700 loài, có nọc độc, bao gồm loài ăn thịt động vật, ăn loài ốc khác, ăn sâu chí cá [12, 13] Chúng không đợc biết đến vẻ đẹp vỏ (có thể mua đợc nhiều hàng bán đồ lu niệm khắp nơi giới) mà chúng đợc quan tâm đặc tính sinh học chất có nọc độc chúng Việc tách chiết nh làm sáng tỏ cấu trúc thành phần từ nọc chúng đ đợc đầu năm 1980 chúng không gióp Ých cho ng−êi viƯc khai th¸c ngn dợc liệu tự nhiên mà đóng góp đáng kể cho ngành khoa học thần kinh [1] Conotoxin loại độc tố có nọc độc loài ốc cối Chúng hỗn hợp độc tố protein/peptide, enzyme phân tử có khối lợng thấp mà loài ốc dùng để bắt mồi, cạnh tranh tự vệ Đặc tính conotoxin chúng có tác dụng khóa chọn lọc điện áp phối tử kênh ion trình dẫn truyền tín hiệu tế bào thần kinh nh MVIIA từ Conus magus bao vây kênh Ca++ type N; àO-conotoxin, -PVIA ức chế bất hoạt kênh Na+, -PVIIA tơng tác với kênh K+ nên chúng vai trò quan trọng săn bắt mồi mà công cụ hữu ích khoa học thần kinh để xác định đợc thụ thể nhờ lực cao đặc hiệu 74 [1, 3, 9] Trong họ conotoxin, conotoxin nhóm đợc sử dụng nhiều ngành khoa học thần kinh lĩnh vực nghiên cứu chức dạng kênh Ca++ nh -conotoxin MVIIA từ Conus magus đ phát triển thành thuốc cho điều trị bệnh giảm đau [1, 4] Ngoài tác dụng giảm đau, conotoxin hữu ích cho định khác lâm sàng Thí dụ -conotoxin PVIIA đ đợc chứng minh làm giảm mức độ nhồi máu tim bệnh thiếu máu cục thử nghiệm mô hình chuột, thỏ chó in vivo Trong thành phần nọc độc loài ốc cối chứa đến 200 loại conopeptide ®ã −íc tÝnh sÏ cã kho¶ng tõ 50.000 ®Õn 100.000 conopeptide khác có hoạt tính dợc học đợc tìm thấy từ tất loài Conus [1] Chính mà conopeptide phải khác trình tự amino acid nh đặc tính dợc học Dựa vào trình tự amino acid, conotoxin đợc phân nhóm thành hai loại lớn protein/peptide giàu liên kết disulfide không giàu disulfide Trong nhóm peptide giàu disulfide đợc phân loại thành siêu họ phụ thuộc vào liên kết disulfide Hầu hết conopeptide cã cÊu tróc gåm tõ 12 ®Õn 30 amino acid có từ đến cầu disulfide Trong siêu họ đó, conotoxin khác có đích tác dụng khác mà ngời ta tiếp tục phân nhỏ thành họ phụ thuộc vào đặc tính sinh dợc Với phong phú đa dạng nh nh−ng cho ®Õn chØ mét Ýt sè ®ã đ xác định đợc đặc tính cụ thể Vì vậy, nghiên cứu conotoxin ngày đợc trọng quan tâm nhiều Tại Việt Nam, nghiên cứu nọc độc loài ốc cối đợc tiến hành hai năm qua nghiên cứu bớc đầu khảo sát xác định protein/pepdide độc có nọc loài ốc cối đợc thu thập vùng biển Nha Trang I PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU Vật liệu Tám loài ốc cối đ đợc thu thập vùng biển Nha Trang, Khánh Hòa, Việt Nam định loài Viện Hải dơng häc gåm: Conus betulinus, Conus caracteristicus, Conus litteratus, Conus marmoreus, Conus quericus, Conus striatus, Conus textile Conus vexillum Các hóa chất dùng giải phẫu, tách chiết phân tÝch protein: acetonitrile (ACN, J.T Baker), Tris-HCl, Trifluoro acetic acid (TFA, Fluka), formic acid (FA), methanol (Merck), cét s¾c ký Vydac C18 (4,6 ì 250 mm 75 àm ì 150 mm), hãa chÊt ®iƯn di SDS-PAGE (Bio-Rad), Trypsin (Sigma-Aldrich) Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng dòng Swiss, tất chuột đực, trọng lợng 2530 g mua từ Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ơng Các thức ăn, nớc uống dùng theo dẫn nơi cung cấp Phơng pháp a Thu nhận quan chứa nọc độc Đập vỡ vỏ ốc búa rửa phần thịt ốc Giải phẫu để bộc lộ phần bầu độc ống độc theo phơng pháp Cruz nnk (1976) [6] b Tách chiết protein từ nọc độc Bầu độc ống độc đợc cắt nhỏ, nghiền mịn nitơ lỏng chiết đệm 30% ACN vµ 0,1% TFA theo tØ lƯ 3: (đệm: mẫu), lắc 16 h 4oC Ly tâm 12000 vòng/phút 30 phút 4oC, thu dịch Mẫu đợc chiết lần Các protein từ phần dịch đợc đông khô chân không cất giữ -25oC cho thí nghiệm sau c Hoạt tính sinh học Xác định hoạt tính giảm đau dịch chiết từ nọc độc theo phơng pháp Zhang đợc thử nghiệm chuột nhắt trắng [16] Mỗi chuột đợc tiêm vào xoang bụng 30 àl dịch chiết protein dung dịch muối sinh lý Sau 15 phút tiêm dịch chiết protein, chuột đợc gây đau formalin (3,7%) với liều tiêm 15 àl vào chân sau Bắt đầu đếm số lần chuột liếm chân sau gây đau ghi theo chu kỳ phút/lần Giai đoạn sng tấy đợc xác định từ phút thứ 20 đến 30 Mỗi loại peptide đợc thử nghiệm chuột (n = 3) d Tinh protein sắc ký ngợc pha hệ HPLC phân tích SDS-PAGE Nọc độc dịch chiết thô đợc phân tách cột phân tích Vydac C18 (4,6 mm ì 250 mm) Dịch chiết sau thu đợc hòa đệm 30% CAN 0,1 % TFA 100 àl dịch chiết thô (khoảng mg) đợc đa lên cột đợc với tốc độ dòng 0,5 ml/phút, gradient tuyến tính từ 0-90% ACN/0,1% TFA 60 phút, thu phân đoạn protein 1ml giữ 4oC Kiểm tra SDS-PAGE phân đoạn protein theo phơng pháp Laemmli (1970) [10] e NhËn diƯn protein b»ng s¾c ký kÕt nèi khối phổ nanoLC/MS Dịch chiết sau đợc làm khô chân không phân tích phổ khối hệ thống sắc ký lỏng kết nối khối phổ nanoLC/MS LC/MS mẫu đợc tiến hành cột Vydac C18 (75 àm ì 150 mm) với dung môi A (0,1% FA) dung môi B (0,1% FA, 85% ACN), tốc độ dòng 30 (l/phút Mẫu đợc khỏi cột sắc ký sau đợc ion hóa nguồn ESI máy khối phổ QSTAR XL xác định phổ khối Phổ TOF-MS thu đợc đợc phân tích phần mềm Analyst QS Sau đó, giá trị phổ khối (Da) đợc tìm kiếm theo phơng pháp tiêu chuẩn mass fingerprinting Expasy Thuỵ Sĩ [http://www.expasy.org/ tools/tagident.html] với ứng dụng TagIdent để xác định peptide II KếT QUả Và THảO LUậN Tách chiết protein/peptide từ nọc độc loài ốc cối (Conus) Tám loài ốc cối sau loại bỏ vỏ phần thịt, bầu độc ống độc đợc tách riêng, nghiền nhỏ chiết với đệm chiết lần Phần dịch đợc cất giữ -25oC cho tinh xác định hoạt tính Các thành phần protein quan độc (bầu độc ống độc) loài ốc cối sau tách chiết thô đợc kiểm tra SDS-PAGE Cơ quan độc gồm bầu độc ống độc loài ốc cối C vexillium (hình 1A) nơi chứa nọc độc ốc cối với nhiều loại protein/peptide có hoạt tính sinh dợc học Hình 1B kết phân tích protein/peptide có dịch chiết nọc độc SDS-PAGE loài ốc cối: 75 kết cho thấy nọc từ loài ốc cối có tác dụng giảm đau chuột đợc gây viêm làm đau formalin Sau gây viêm formalin, chuột phản ứng với cảm giác đau rát cách liếm gan bàn chân, chỗ trực tiếp đâm mũi kim tiêm bơm formalin vào Thời gian chuột (đợc tiêm nọc loài ốc khác nhau, tiêm dung dịch muối sinh lý tiêm thuốc gây tê thông dụng) liếm chân đợc ghi lại theo chu kỳ phút lần (hình 2) C striatus, C textile, C quericus, C vexillum, C caracteristicus, C betulinus, C litteratus C marmoreus Thành phần protein nọc độc tất mẫu ốc đa dạng, khác số lợng, thành phần protein/peptide có khối lợng thấp 14 kDa chiếm chủ yếu Kết phù hợp độc tố nọc độc ốc độc tố thần kinh thờng có khối lợng phân tử nhỏ Hoạt tính giảm đau dịch chiết từ nọc độc đợc xác định theo phơng pháp Zhang đợc thử nghiệm chuột nhắt trắng A B kDa Bầu ®éc 45 èng ®éc 35 M 25 18 14,4 Hình Điện di ®å protein tõ näc ®éc cđa èc cèi Thêi gian chuột liếm chân (s) A Phần bầu độc ống độc loài ốc cối C vexillum; B SDS-PAGE protein/peptidee tách chiết từ quan độc loµi èc cèi C striatus, C textile, C quericus, C vexillum, C caracteristicus, C litteratus, C betulinus vµ C marmoreus theo thø tù tõ ®−êng 1-8 70 60 50 40 30 20 10 0 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Thêi gian sau tiªm formalin (phót) NaCl Lidocain C betulinus C litteratus C quericus C vexillum C caracteristicus C textile C striatus C marmoreus Hình Hoạt tính giảm đau nọc ốc cối Trong tất loài đ thử nghiệm (ngoại trừ nọc ốc cối C litteratus), chúng có tác dụng giảm đau nh lidocain (một loại thuốc gây tê đợc sử dụng rộng r i thị trờng) So sánh nọc độc loài tác dụng giảm đau loài C betulinus, C vexillum 76 C striatus xuất sớm loài lại đợc trì tơng đối tốt thời gian thí nghiệm Sự khác biệt đặc tính loài nọc độc loài có từ 50-200 loại protein/peptide độc khác hàm lợng loại khác [13] Vì vậy, việc phân tách xác định thành phần loại protein/peptide có nọc loài ốc cối cần thiết ®Ĩ cã thĨ khai th¸c chóng mét c¸ch cã hiƯu Tinh xác định độc tố Dịch chiết thô từ quan độc loài ốc cối đợc tiến hành sắc ký ngợc pha hệ HPLC qua cột Vydac C18 Các phân đoạn protein thu đợc đợc đông khô chân không đo khối hƯ thèng s¾c ký láng kÕt nèi khèi phỉ nanoLC/MS Phổ TOF-MS thu đợc đợc phân tích phần mềm Analyst QS Sau đó, giá trị phổ khối (Da) đợc tìm kiếm theo phơng pháp tiêu chuẩn mass fingerprinting Expasy (Thuỵ Sĩ) với ứng dụng TagIdent để xác định peptide Đây phơng pháp xác định peptide theo dấu hiệu khối lợng pI peptide đặc biệt dễ dàng nhận diện đợc protein từ riêng thông tin Một đặc điểm chúng thờng nhận diện đợc peptide có khối lợng nhỏ dới 3500 Da nên phù hợp với việc xác định conopeptide ốc cối Kết thu đợc phân tích hệ protein/peptide nọc độc loài ốc cối đ nhận diện đợc số conotoxin đ đợc công bố tác giả khác giới [17] Cụ thể nọc độc loài C litteratus đ xác định đợc omega-conotoxin MVIIA (khối lợng 2639 Da), omega-conotoxin MVIIC (khối lợng 2749 Da) conotoxin đặc hiệu với kệnh Ca++ type N, thuộc siêu họ O với cầu disulfide với 26 amino acid Một sản phẩm peptide đợc tổng hợp phiên CTX-MVIIA (ziconotide) đ đợc quan quản lý dợc phẩm thực phÈm (FDA) cđa Mü chÊp thn cho thư nghiƯm c¸c loại đau m n đau cấp Ngoài nọc C litteratus phát có delta-conotoxin TxVIA (3034.2 Da) thuộc siêu họ O, họ delta, conotoxin YPIIIE thuộc siêu họ M, họ cấu trúc peptide gồm liên kết disulfide Trong nọc độc loài ốc cối C textile đ phát có omega-conotoxin TxVII, deltaconotoxin TxVIA Loµi C marmoreus còng cã omega-conotoxin SVIA (SVIA), SVIB, deltaconotoxin SVIE (SVIE) tơng tự nh peptide đ phát đợc loài C striatus delta - CTxVIA giống nh loài C textile đồng thời phát độc tố àO-MrVIB (độc tố đ đợc tổng hợp hóa học có hoạt tính giảm đau kéo dài Lidocain 7-8 lần) Các loài lại nh C caracteristicus đ nhận diện đợc conotoxin Ca 1.1 thuộc siêu họ A với khối lợng phân tử 1875 Da có cầu disulfide Loài C quercinus cã ®éc tè Qc 1.1c (kÝch th−íc 2333 Da) Qc 1.2 thuộc siêu họ A loài C betulinus đ phát đợc Be 1.1 (2140 Da), Be 1.2 (1694 Da) còng thc siªu hä A víi liên kết disulfide Còn loài C vexillum đ phát đợc VxVIA (2778 Da) VxVIB (3821 Da) ®Ịu thc siªu hä O1 víi liªn kÕt disulfide [10] Riêng loài C striatus đ nhận diện đợc nhiều hình ảnh phân tách, nhận diện phổ khối số peptide đợc thể hình bảng Bảng Dữ liệu protein/peptide xác định đợc nọc ốc cối C striatus Đỉnh, Điện KLPT KLPT Cầu Dạng đợc Tên protein KL/ĐT (m/z) tích (z) đo đợc tính toán S-S cải biến 477,78 1431,3 1432 Alpha-conotoxin S1.1; -NH2 483,68 1448,1 1448 Alpha-conotoxin S1.1 -NH2; hyP 725,09 1448,2 1448 Alpha-conotoxin S1.1 -NH2; hyP 728,66 1457,3 1457 Alpha-conotoxin S1A -NH2 738,11 1475,2 1475 Alpha-conotoxin S1A -NH2; hyP 492,69 1475,1 1475 Alpha-conotoxin S1A -NH2; hyP 832,34 2495,01 2495 Omega-conotoxin SVIA -NH2; hyP 907,13 2718,4 2718 Omega-conotoxin SO-3 -NH2 912,78 2735,3 2735 Omega-conotoxin SO-3 -NH2; hyP 1105,6 3313,8 3314 Delta-conotoxin SVIE Ghi chú: KL/ĐT Khối lợng/điện tích; KLPT Khối lợng phân tử 77 B A214 (mAU) A %CH3CN 100% Thời gian protein (phút) C Hình Sắc ký đồ conotoxin từ Conus striatus Alpha-conotoxin S1.1 (S1.1); Omega-conotoxin (SVIA); Đơn vị khối (Da); A Sắc ký đồ HPLC dịch chiết thô từ nọc ốc cối C striatus qua cét Vydac C18 (4,6 mm × 250 mm, kích thớc hạt àm); B, C Phổ khối peptide Alpha-conotoxin S1.A S1.1 thu đợc sau phân tích phân đoạn có đỉnh với đơn vi khối 1475 1482 hình A qua cột Vydac C18 (75 àm ì 150 mm) đo phổ TOF-MS Hình bảng kết minh họa xác định đợc số protein/peptide có dịch chiết từ nọc độc loài ốc cối C striatus Bằng phơng pháp sắc ký ngợc pha hệ HPLC lần lần sắc ký ngợc pha hệ nanoLC kết hợp đo phổ TOF-MS, đ xác định đợc số conopeptide có khối lợng tơng tự nh protein/peptide đ đợc xác định conotoxin S1.1 (S1.1); µomega-conotoxin SO-3 (MrSO-3); delta-conotoxin SVIE (SVIE); alphaconotoxin S1A (S1A); µ-omega-conotoxin SVIA (MrSVIA) à-omega thuộc siêu họ O đợc biết đến nh à-conotoxin siêu họ M làm ức chế kênh Na+ Các conotoxin đợc nhận diện näc cđa loµi èc C striatus nµy còng chÝnh lµ protein/peptide đ đợc nhiều nhà khoa học giới công bố [5, 6] 78 Ngoài ra, số trình tự protein/peptide thu đợc phần ống độc nhận dạng đợc nhiều trình tự peptide giống với trình tự peptide độc từ nọc số loài khác nh rắn châu Phi, rắn hổ mang bành, bọ cạp, cấu trúc kênh Na, K, cÊu tróc cđa protein g¾n kÕt víi acetylcholine [9] Đây đa dạng phức tạp nọc độc ốc cối không số lợng mà thành phần độc tố Mặc dù số liệu thu đợc hạn chế nhng chúng chứng tỏ thành phần độc tố loài ốc cối đa dạng phong phú Hầu hết độc tố phát đợc đặc trng liên kết giàu cysteine Với protein có kích thớc nhỏ kDa đặc trng có cystein với cầu disulfide (alpha-conotoxin S1.1, alphaconotoxin S1A) protein lớn kDa cã thÓ cã (omega-conotoxin SVIA, deltaconotoxin SVIE) hay cầu disulfide Chức sinh học peptide giàu cysteine liên quan mật thiết đến cầu nối disulfide [6] Hơn nữa, cầu đại diện cho khung cấu trúc peptide chúng tơng đối ổn định Mặc dù vậy, để khẳng định xác trình tự cấu trúc conotoxin này, protein cần đợc phân tích phổ phơng pháp phổ khối MS/MS kết hợp với xác định trình tự cDNA, giải trình tự theo phơng pháp Edman kết hợp phơng pháp Ngoài conotoxin đ nhận diện đợc trên, nhiều protein khác có kích thớc nhỏ tơng tù nh− kÝch th−íc chung cđa conotoxin nh−ng vÉn ch−a nhận diện đợc phức tạp thành phận nọc độc, thiếu hụt liệu DNA Một trở ngại việc làm sáng tỏ cấu trúc độc tố peptide chúng có kích thớc nhỏ với khoảng từ 10 đến 80 amino acid, liên kết disulfide lên đến số loại có cải biến sau phiên m cao độ [15] Tuy nhiên, với kết thu đợc phơng pháp nghiên cứu mở hớng nghiên cứu khả quan đa dạng độc tố thần kinh có nguồn gốc từ tự nhiên nh chủ động tạo nguồn dợc liệu công nghệ DNA tái tổ hợp III KếT LUậN Đ thu thập tách chiết đợc quan độc (bầu độc ống độc) cđa loµi èc cèi cđa ViƯt Nam: Conus betulinus, Conus caracteristicus, Conus litteratus, Conus marmoreus, Conus quericus, Conus striatus, Conus textile, Conus vexillum xác định đợc loài có độc tính có tác dụng giảm đau chuột Đ tinh nhận dạng đợc số conotoxin đặc trng có nọc độc loài ốc cối protein/peptide có cấu trúc giàu cystein với liên kết disulfide nh− omega-conotoxin MVIIA, delta-Conotoxin TxVIA, omega-conotoxin SVIA, SVIB, Alphaconotoxin S1.1, (Omega-conotoxin SO-3, Deltaconotoxin SVIE Lời cảm ơn: Công trình đợc hỗ trợ kinh phí đề tài Nghiên cứu tạo conotoxin tái tổ hợp thử nghiệm hoạt tính giảm đau cấp Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, 2011-2012 TàI LIệU THAM KHảO Becker S and Terlau H., 2008: Toxins from cone snails: properties, applications and biotechnological production Appl Microbiol Biotechnol, 79: 1-9 Benjamin V J., 2005: Inferring the mode of speciation in Indo-West Pacific Conus (Gastropoda: Conidae) J Biogeogr, 32: 1429-1439 Bruce G L., David W S., David K., John D., Ken R G., Narmatha S., Zeinab K., 2006: Therapeutic applications of conotoxins that target the neuronal nicotinic acetylcholine receptor Toxicon, 48(7): 810-829 Bulaj G., Olivera B M., 2008: Folding of conotoxins: Formation of the native disulfide bridges during chemical synthesis and biosynthesis of Conus peptides Antioxid Redox Signal, 10(1): 141-156 Corpuz G P et al., 2005: Definition of the M-conotoxin superfamily: Characterization of novel peptides from molluscivorous Conus venoms Biochemistry, 44 (22): 8176-8186 Daly N L., Craik D J., 2009: Structural Studies of Conotoxins IUBMB Life, 61: 144150 Daly N L., Ekberg J A., Thomas L., Adams D J., Lewis R J and Craik D J., 2004: Structures of muO-conotoxins from Conus marmoreus I nhibitors of tetrodotoxin (TTX)-sensitive and TTXresistant sodium channels in mammalian sensory neurons J Biol Chem., 279(24): 25774-25782 Han Y H et al., 2006: Characterization of novel M-superfamily conotoxins with new disulfide linkage FEBS J., 273: 4972-4982 Heinemann S H and Leipold E., 2007: Conotoxins of the Osuperfamily affecting voltage-gated sodium channels Cell Mol Life Sci, 64: 1329-1340 10 Laemmli U K., 1970: Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 Nature, 227: 680-685 79 11 Loughnan M et al., 2006: Novel alpha Dconopeptides and their precursors identified by cDNA cloning define the D-conotoxin superfamily J Biol Chem., 281: 2474524755 12 Milne T J., 2008: PhD thesis (Australia) 13 Pi C et al., 2006: Diversity and evolution of conotoxins based on gene expression profiling of Conus litteratus Genomics, 88: 809-819 14 Saravanan R., Sambasivam S., Shanmugam A., Kumar D S., Vanan T T and Nazeer R A., 2009: Isolation, purification and biochemical characterization of conotoxin from Conus figulinus Linnaeus (1758) Indian J Biotechnol, 8: 266-271 15 Ueberheide B M., Fenyo D., Alewood P F and Chail B T., 2009: Rapid sensitive analysis of cysteine rich peptide venom components PNAS, 106(17): 6910-6915 16 Zhang M M et al., 2007: Structure/function characterization of microconotoxin KIIIA, an analgesic, nearly irreversible blocker of mammalian neuronal sodium channels J Biol Chem., 282(42): 30699-30706 17 http://www.conoserver.org 18 http://www.expasy.org/tools/tagident.html EXTRACTION AND IDENTIFICATION OF CONOTOXINS FROM SEVERAL CONUS COLLECTED IN NHA TRANG COAST, VIETNAM Le Thi Bich Thao, Doan Viet Binh, Nguyen Bich Nhi, Phan Van Chi SUMMARY Venoms of Conus contain a cocktail of peptides that mainly target different voltage- and ligand-gated ion channels (commonly known as conopeptides or conotoxins), therefore they are classified as neuropeptides Due to their extraordinary pharmacological properties, conopeptides gained increasing interest in recent years We extracted and identified some conotoxins from eight Cone snails collected in Nha Trang coast (Vietnam): C betulinus, C caracteristicus, C litteratus, C Marmoreus, C quericus, C striatus, C Textile and C vexillum Venoms from eight conus species were dissected and extracted The extracted crude venoms were tested for analgesic activity on mice On the hand, these crude venoms were initially separated on a Vydac C18 columm The fractions were then separated on nanoLC chromatography system combined with tandem mass spectrometry to identify conotoxins The results showed that venoms of eight Cone snails were found to produce analgesic activity in the formalin test and among them The extracted crude venoms were tested analgesic activity on mice The venoms of C betulinus, C vexillum, C caracteristicus, C textile and C quericus gained higher analgesic activity than that of remained species In each species, several toxic proteins/peptides were identified and the sequences of that are similar to toxic components of Conus species The identified conotoxins were disulfide- rich conopeptides containing or cysteines based on published data Keywords: Conotoxin, Conus, venoms Ngµy nhËn bµi: 27-4-2011 80 ...protein/pepdide độc có nọc loài ốc cối đợc thu thập vùng biển Nha Trang I PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU Vật liệu Tám loài ốc cối đ đợc thu thập vùng biển Nha Trang, Khánh Hòa, Việt Nam định loài Viện Hải dơng... Expasy Thu Sĩ [http://www.expasy.org/ tools/tagident.html] với ứng dụng TagIdent để xác định peptide II KếT QUả Và THảO LUậN Tách chiết protein/peptide từ nọc độc loài ốc cối (Conus) Tám loài ốc cối. .. việc phân tách xác định thành phần loại protein/peptide có nọc loài ốc cối cần thiết ®Ĩ cã thĨ khai th¸c chóng mét c¸ch cã hiƯu Tinh xác định độc tố Dịch chiết thô từ quan độc loài ốc cối đợc tiến