Thiết lập chất đối chiếu PP. Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng hoạt chất PP và xác định giới hạn tạp chất PZA trong chế phẩm bột khô phun sấy.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU PALMITOYL PYRAZINAMID; XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PALMITOYL PYRAZINAMID VÀ XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN TẠP CHẤT PYRAZINAMID TRONG CHẾ PHẨM BỘT KHÔ PHUN SẤY Huỳnh Thị Thanh Hằng*, Phan Thị Hương Giang**, Lê Quang Hiển***, Nguyễn Trường Thịnh***, Võ Thị Quỳnh Như***, Phạm Đình Duy*, Phan Văn Hồ Nam* TÓMTẮT Mở đầu: Các tiểu phân xốp mang tiền chất thuốc kháng lao pyrazinamid (PZA), palmitoyl pyrazinamid (PP), khắc phục khuyết điểm PZA hệ thống trị liệu phổi Để góp phần kiểm sốt chất lượng ngun liệu chế phẩm, tiến hành nghiên cứu thiết lập chất đối chiếu PP, đồng thời xây dựng thẩm định quy trình định lượng hoạt chất PP xác định giới hạn tạp chất PZA chế phẩm bột khô phun sấy Mục tiêu: Thiết lập chất đối chiếu PP Xây dựng thẩm định quy trình định lượng hoạt chất PP xác định giới hạn tạp chất PZA chế phẩm bột khô phun sấy Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu: Thiết lập chất đối chiếu PP theo hướng dẫn ISO Guide 35 Giá trị ấn định, độ lệch chuẩn, độ không đảm bảo đo chuẩn tính tốn theo hướng dẫn ISO 13528 Xây dựng thẩm định quy trình phân tích theo hướng dẫn ASEAN Kết quả: PP thiết lập chất đối chiếu với độ tinh khiết 99,35% Đã xây dựng quy trình định lượng PP chế phẩm bột khô phun sấy HPLC: Cột sắc ký HiQ sil C18HS (250 x 4,6 mm; 5μm), pha động 100% ACN, bước sóng phát 268 nm, tốc độ dòng 1,0 ml/phút, thể tích tiêm 20 μl, nhiệt độ cột 30 °C Đã xây dựng quy trình định lượng tạp chất PZA chế phẩm bột khô phun sấy HPLC: cột sắc ký Phenomenex C18 (250 x 4,6 mm; 5μm), pha động ACN – Dung dịch acid acetic pH (5:95), tốc độ dòng 1,0 ml/phút, thể tích tiêm 20 μl, nhiệt độ cột 30 °C, giới hạn phát (LOD) PZA xác định 0,005 ppm Kết luận: PP đối chiếu đạt yêu cầu chất chuẩn sử dụng công tác kiểm tra đánh giá chất lượng nguyên liệu PP chế phẩm Đồng thời xây dựng quy trình định lượng PP quy trình xác định giới hạn tạp chất PZA chế phẩm bột khô phun sấy HPLC Từ khóa: Palmitoyl pyrazinamid, pyrazinamid, thiết lập chất đối chiếu ABSTRACT ESTABLISHMENT OF REFERENCE STANDARD SYNTHESIZED PALMITOYL PYRAZINAMIDE AS WELL AS QUANTITATIVE DETERMINATION OF PALMITATE PYRAZINAMIDE AND DETERMINATION OF PYRAZINAMIDE AS IMPURITY IN SPRAY-DRIED POWDER BY HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY Huynh Thi Thanh Hang, Phan Thị Huong Giang, Le Quang Hien, Nguyen Truong Thinh, Vo Thi Quynh Nhu, Pham Dinh Duy, Phan Van Ho Nam * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 489 – 498 * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Khoa Thiết lập Chất chuẩn Chất đối chiếu - Viện Kiểm nghiệm Thuốc Thành phố Hồ Chí Minh *** Khoa Hóa lý, Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc mỹ phẩm tỉnh Đồng Nai Tác giả liên lạc: TS Phan Văn Hồ Nam ĐT: 0909615007 Email: phanvanhonam@ump.edu.vn ** 490 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Introduction: The small particles carrying the precursor of pyrazinamide (PZA), palmitoyl pyrazinamide (PP), could overcome some PZA’s imperfection in lung-distributing system To monitor the quality of the new material and its products, the study on establishment of reference standard synthesized PP as well as quantitative determination of palmitate pyrazinamide and determination of PZA as impurity in spray-dried powder by high performance liquid chromatography was conducted Objectives: The aim of this study was establishment of reference standard synthesized PP as well as quantitative determination of palmitate pyrazinamide and determination of PZA as impurity in spray-dried powder by high performance liquid chromatography Materials and Methods: Establishment of PP reference standard was carried out basing on general guidelines of ISO 35 The standard uncertainty, assigned value, and standard deviation were calculated basing on ISO 13528 Development and validation of HPLC method for analysis of PZA and PP was carried out basing on ASEAN guidelines Results: The assigned value of PP reached the purity of 99.35% HPLC conditions for assay of PP in spray-dried powder were HiQ sil C18HS column (250 x 4.6 mm x μm); column temperature of 30 oC; wavelength of 268 nm; mobile phase containing ACN 100%; flow rate of 1mL/min; injection volume of 20 μL; this method met requirements of system suitability, repeatability, linearity and accuracy HPLC conditions for determination of PZA impurity, in spray-dried powder were Phenomenex C18 column (250 x 4.6 mm x μm); column temperature of 30 oC; wavelength of 268 nm; mobile phase containing ACN – acid acetic pH (5:95); flow rate of 1mL/min; injection volume of 20 μL This method met requirements of system suitability, selectivity and the limit of PZA detection was 0.005 ppm Conclusion: PP can be accepted as a reference standard for quality control of PP materials and products thereof The HPLC method for qualification of PP was successfully developed Key words: Palmitoyl pyrazinamide, pyrazinamide, establishment of reference standard ĐẶTVẤNĐỀ Palmitoyl pyrazinamid (PP) sử dụng ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu để bào chế dạng trị liệu phổi nhằm hạn PP tổng hợp xác định chế pyrazinamid (PZA) phóng thích phóng độ tinh khiết 99% tính chế phẩm vào hệ thống tuần hoàn, tăng nồng độ thuốc nguyên trạng theo nghiên cứu Nguyễn chỗ để trì hiệu điều trị lao phổi(5-7) Duy Phương cộng sự(5), mơn Để kiểm sốt chất lượng nguyên liệu Hóa hữu – Khoa Dược – Đại học Y Dược dạng bào chế từ hoạt chất này, TP Hồ Chí Minh Mẫu thuốc bột khô phun theo dõi nồng độ thuốc huyết tương sấy PP bào chế Khoa Dược, Đại học người nghiên cứu dược động học, Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Cơng thức: dược lực học tiếp theo, nghiên cứu Palmitoyl pyrazinamid 0,3 g; tá dược vừa đủ tiến hành với mục tiêu thiết lập chất đối chiếu 4,0 g PP đồng thời xây dựng quy trình định lượng Chất đối chiếu PP thử giới hạn tạp chất PZA chế Pyrazinamid có hàm lượng tính chế phẩm bột khơ phun sấy nhằm góp phần phẩm khan 99,94%, số lơ 0212154 Viện việc tiêu chuẩn hóa sản phẩm Kiểm nghiệm thuốc trung ương Chuyên Đề Dược 491 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Hóa chất – dung mơi 20 μl, nhiệt độ cột 30°C, pha động ACN 100%, Acetonitril, methanol đạt tiêu chuẩn sắc ký theo nghiên cứu Nguyễn Duy Phương lỏng (Merck), acid acetic băng đạt tiêu chuẩn cộng sự(6) Đồng thời dựa vào điều phân tích (Merck), ethanol đạt tiêu chuẩn kiện sắc ký để tiến hành thẩm định quy phân tích (Prolabo) trình định lượng PP bột khô phun sấy Trang thiết bị theo hướng dẫn ASEAN thẩm định Hệ thống HPLC Alliance 2695e-2996, thiết quy trình phân tích(4) Quy trình xác định tạp bị DSC Q20 TA Instrument, hệ thống LCMS chất PZA bột khô phun sấy tham Micro Multi-mode khảo từ USP41(8): Pha tĩnh: Cột C18 (250 mm x Ionization (Micromass), máy cộng hưởng từ 4,6 mm; μm), detector: PDA, bước sóng phát hạt nhân Bruker AM500 FTNMR Spectrometer hiện: 268 nm, tốc độ dòng: 1,0 ml/phút, thể (Viện hóa học Cơng nghệ Việt nam) Tủ tích tiêm: 20 μl, nhiệt độ cột: 30 °C, pha động: đóng ống Labconco Protector Glove Box (Viện ACN – Dung dịch acid acetic pH (5:95) KN thuốc TP Hồ Chí Minh) Hệ thống HPLC KẾTQUẢ Shimadzu 20 AD với đầu dò PDA SPD-M20A Thiết lập chất đối chiếu PP (Nhật Bản), cân phân tích Mettler Toledo AB PP đóng gói lọ thuỷ tinh nâu, nút có lớp đệm Teflon, mơi trường khí trơ N2 99,99%, độ ẩm tương đối 10%, bảo quản nhiệt độ 2-8 oC g PP đóng 100 lọ, lọ 50 mg lọ lấy ngẫu nhiên theo phần mềm excel Kết xác định tính tương thích hệ thống quy trình xác định độ tinh khiết PP HPLC phòng thí nghiệm đạt u cầu, thơng số sắc ký có RSD 2% (Bảng 1) Kết đánh giá độ đồng q trình đóng lọ trình bày Bảng cho thấy độ lặp lại tương đối độ tinh khiết PP lọ q trình đóng gói đạt yêu cầu (RSD