Mục đích nghiên cứu của luận án nhằm thu thập, phân lập và tuyển chọn được chủng virus NPV cho hiệu quả cao đối với sâu ăn tạp và sâu xanh da láng tại ĐBSCL. Xây dựng được quy trình sản xuất chế phẩm sinh học NPV dạng lỏng và dạng khô. Ứng dụng được chế phẩm sinh học NPV trong quản lý SAT và SXDL trên đồng ruộng.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chuyên ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Mã ngành: 62 62 01 12 ẠM TRỊNH THỊ XUÂN MƠN NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH VÀ HIỆU QUẢ PHÒNG TRỪ CỦA Nucleopolyhedrosis virus (NPV) TRÊN SÂU ĂN TẠP (Spodoptera litura Fabr.) VÀ SÂU XANH DA LÁNG (Spodoptera exigua Hubn.) TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Cần Thơ, 2018 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn chính: PGs.Ts Trần Văn Hai Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp trường Họp tại: …………………………………………… Vào lúc … … ngày … tháng … năm … Phản biện 1: Phản biện 2: Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CÓ LIÊN QUAN TỚI LUẬN ÁN Trịnh Thị Xuân, Trương Thanh Xuân Liên Trần Văn Hai, 2016 So sánh thức ăn nhân tạo hành lên sinh trưởng, phát triển khả sinh sản sâu xanh da láng Spodoptera exigua Hubner (Lepidoptera: Noctuidae) Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 3: 226-232 Trịnh Thị Xuân, Trương Thanh Xuân Liên, Dương Thu Nhi Trần Văn Hai, 2016 Phân lập vi rút SeNPV từ sâu xanh da láng (Spodoptera exigua Hubner) Đồng Bằng Sơng Cửu Long Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 3: 233-240 Trịnh Thị Xuân, Trương Thanh Xuân Liên, Dương Thu Nhi Trần Văn Hai, 2016 Tiềm virus SeNPV (Spodoptera exigua Nucleopolyhedrovirus) sâu keo da láng Spodoptera exigua Hubner (Lepidoptera: Noctuidae) Đồng Sơng Cửu Long Tạp chí chun ngành Bảo vệ Thực vật ISSN 2354-0710 (266): 26-35 Huỳnh Nguyễn Quang Tuấn, Trần Văn Hai, Trịnh Thị Xuân, 2014 Ảnh hưởng Tinopal UNDP-GX axit boric sản xuất chế phẩm Nucleopoluhedrovirus để phòng trừ sâu ăn tạp Spodoptera litura Fabricius (Lepidoptera: Noctuidae) Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn ISSN 1859-4581.(12): 44-49 Chương 1: GIỚI THIỆU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Trong năm gần diện tích rau màu ĐBSCL phát triển nhanh chóng ngày có tính chun biệt cao Năm 2007, ĐBSCL có 233.809 đất trồng rau (khoảng 20% diện tích trồng rau nước) tập trung nhiều tỉnh Tiền Giang 31.994 ha, An Giang 31.052 ha, Trà Vinh 25.894 ha, Sóc Trăng 24.427 Vĩnh Long 15.000 Trong đó, diện tích rau ăn 105.154 ha, rau ăn trái 77.068 ha, rau ăn củ 25.393 lại loại rau khác (Phạm Văn Dư ctv., 2008) Song song với diện tích sản lượng loại rau màu nâng cao vấn đề dịch hại đặc biệt côn trùng gây nguyên nhân làm giảm suất chất lượng sản phẩm Một loại côn trùng gây hại nghiêm trọng sâu ăn tạp (S litura) sâu xanh da láng (S exigua) Hai loại côn trùng thuộc họ ngài đêm (Noctuidae), cánh vẩy (Lepidoptera) loài đa thực gây hại nhiều loại trồng tập trung gây hại nhóm rau màu hành, thuộc họ đậu, họ bầu bí, họ thập tự, họ cà, bắp (Smagghe et al., 1998; Nguyễn Thị Thu Cúc ctv , 1999; Liu et al., 2002) Cho đến nay, thuốc BVTV luôn người dân sử dụng để quản lý hai loại sâu hại này, nhiều nơi nông dân phun từ 10 – 15 lần thuốc hóa học/vụ (Trần Văn Hai, 1997; Nguyễn Thị Chắt ctv., 1998) Thậm chí nhiều người dân dùng thuốc với liều cao mức khuyến cáo nhiều lần (Trần Văn Hai, 1997) Theo thống kê đầy đủ danh mục thuốc BVTV phép sử dụng đến năm 2014 Việt Nam 1.643 hoạt chất, cao gấp 2,5 - 4,1 lần so với nước khu vực Thái Lan, Malaysia khoảng 400 - 600 loại; Trung Quốc khoảng 630 loại (Nguyễn Kim Vân, 2014) Từ trước năm 1985, khối lượng hóa chất BVTV sử dụng hàng năm khoảng 6.500 - 7.000 đến năm 2014 Việt Nam nhập sử dụng từ 70.000-100.000 tấn, tăng gấp 10 lần (Trần Xuân Định, 2015) Việc sử dụng nhiều loại thuốc BVTV thách thức không nhỏ đặt cho ngành BVTV có nhiều báo cáo cho thấy việc lạm dụng nhiều thuốc hóa học sản xuất nơng nghiệp gây nhiều vấn đề như: cân sinh thái, gia tăng tính kháng thuốc sâu hại, dư lượng độc chất tồn lại ảnh hưởng xấu đến sức khỏe người Đặc biệt, vài năm trở lại với xu hội nhập quốc tế yêu cầu nông sản an toàn, đạt tiêu chuẩn GAP (VietGAP, EuroGAP GlobalGAP) rau màu phát triển mạnh ĐBSCL.Vì vậy, để giảm thiểu lượng hóa chất BVTV sản xuất nông nghiệp, hướng ngành BVTV Việt Nam cố gắng đẩy mạnh sử dụng chế phẩm sinh học nói chung tác nhân phòng trừ sinh học nói riêng Virus nhân đa diện Nucleopolyhedrovirus (NPV) gây bệnh côn trùng thuộc nhóm Baculovirus (họ Baculoviridae) nhà khoa học giới nghiên cứu phát triển thành thuốc trừ sâu sinh học phòng trị trùng thuộc Lepidopteran, Hymenopteran, Dipteran Coleopteran (Bonning and Hammock, 1996; Hammock et al., 1993; Martignoni and Iwai, 1986) Có 1.000 lồi trùng bị nhiễm virus này, tác nhân, cơng nhận có khả thay thuốc trừ sâu hóa học có hiệu quan trọng tính an tồn môi trường sinh vật khác (Hunter – Fujita et al., 1998, Dhandapani, 1994) Hiện nay, số nước tiên tiến giới sử dụng virus NPV phòng trừ loại sâu hại trồng phổ biến sâu ăn tạp (Spodoptera litura), sâu đo (Trichoplusia ni), sâu xanh da láng (Spodoptera exigua), sâu xanh (Heliothis armigera), sâu tơ (Plutella xylostella), sâu trà (Adoxophyes orana), sâu xếp trà (Honoma magnamima) (Kunimi, 2005; Kunimi, 2007; Hughes and Wood, 1981; Hughes et al., 1986; Takatsuka et al., 2005; Phạm Thị Thùy, 2004) có 20 loại virus loài sâu hại sản xuất theo phương pháp công nghiệp thành dạng thuốc trừ sâu thương mại Gemstar, Virin-HS, Spod-X, Ness-A, Ness-E, Spodopterin, Capex Xuất phát từ thực tế, đề tài “Nghiên cứu đặc tính hiệu phòng trừ Nucleopolyhedrosis virus (NPV) sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabr.) sâu xanh da láng (Spodoptera exigua Hubn.) Đồng Sông Cửu Long” thực nhằm phát nguồn virus địa có khả phòng trị sâu gây hại trồng 1.2 Mục tiêu yêu cầu nghiên cứu Thu thập, phân lập tuyển chọn chủng virus NPV cho hiệu cao sâu ăn tạp sâu xanh da láng ĐBSCL Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm sinh học NPV dạng lỏng dạng khô Ứng dụng chế phẩm sinh học NPV quản lý SAT SXDL đồng ruộng 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Đề tài có ý nghĩa khoa học cao nghiên cứu virus NPV có hệ thống hai đối tượng SAT SXDL ĐBSCL thu thập, định danh, thử nghiệm độc tính chủng virus Ngồi ra, đề tài hướng đến việc sản xuất thử nghiệm chế phẩm virus cho hiệu cao ngồi đồng để từ có sở khuyến cáo người nơng dân sử dụng nhằm thay dần cho thuốc BVTV Kết đề tài mở hướng quản lý số loài sâu hại khác thuộc cánh vẩy (Lepidoptera) theo IPM, thay luân phiên với thuốc hóa học kết sở liệu cho hướng nghiên cứu đấ u tranh sinh ho ̣c trùng 1.4 Những đóng góp luận án Luận án cung cấp thông tin quan trọng phương pháp thu thập, xác định virus NPV gây bệnh côn trùng dựa vào đặc điểm triệu chứng, hình thái thể vùi sử dụng cơng nghệ sinh học dò tìm gene polh polyhedrin (đặc trưng cho nhận biết virus NPV) để xác định loài virus gây bệnh SAT SXDL Về mặt lý luận, luận án khái quát số đặc tính virus NPV địa góp phần bổ sung vào sở liệu lĩnh vực phòng trừ sinh học trùng ĐBSCL Kết đạt sưu tập gồm 43 chủng virus SpltNPV (Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus) gây bệnh sâu ăn tạp 20 chủng virus SeNPV (Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus) gây bệnh sâu xanh da láng chín tỉnh thuộc ĐBSCL, đó, tỉnh chọn lựa chủng virus cho hiệu cao sâu hại Về mặt thực tế, luận án xác định nồng độ, thời gian gây chết sâu trung bình (LC50, LT50) chủng virus SpltNPV SeNPV giai đoạn tuổi khác để từ có sở hướng dẫn nơng dân ứng dụng virus NPV đồng ruộng Song song xác định suất thể vùi chủng virus SeNPV SpltNPV giai đoạn ấu trùng SAT SXDL nhằm phục vụ cho việc sản xuất chế phẩm virus NPV có hiệu Ngồi ra, luận án xác định chất phụ gia phối trộn sản xuất chế phẩm virus NPV acid boric nồng độ 1% làm tăng hiệu chế phẩm virus NPV Đã ứng dụng virus SpltNPV SeNPV quản lý sâu ăn tạp sâu xanh da láng gây hại trồng vùng ĐBSCL Chương 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thời gian: từ tháng 06/2013 đến tháng 06/2016 Địa điểm: Các thí nghiệm phòng, nhà lưới phân tích thực Bộ mơn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ; Phòng Sinh học Phân tử − Viện Công nghệ Sinh học − Trường Đại học Cần Thơ; Phòng Kính hiển vi điện tử − Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Hà Nội Trung tâm Dịch vụ Phân tích Thí nghiệm TP.HCM Các ruộng thí nghiệm ngồi đồng tỉnh Vỉnh Long, Sóc Trăng Hậu Giang 3.2 Phương pháp 3.2.1 Thu thập định danh virus NPV (Nucleopolyhedrosis virus) gây bênh ̣ sâu ăn tạp (S litura) và sâu xanh da láng (S exigua) 3.2.1.1 Địa điểm phương pháp thu mẫu Thu mẫu: Tổng cộng có 16 địa điểm tương ứng với 16 xã 14 huyện tỉnh ĐBSCL tiến hành thu mẫu, ruộng chọn thu mẫu phải có diện tích từ 500 m2 trở lên, ruộng thu mẫu ngẫu nhiên điểm theo đường zig zag, điểm cách tối thiểu m Các ruộng trồng hành lá, xà lách xoong, đậu phộng đậu xanh tiến hành thu điểm theo đường chéo góc (1 khung/điểm) tương đương với khung, khung có diện tích 40 x 50 cm2 Đối với ruộng trồng loại lại cải bắp, cà chua, cải làm dưa, đậu cove… tiến hành thu mẫu 10 cây/điểm, thu mẫu điểm/ruộng Phương pháp thu mẫu thu tất có diện SAT SXDL cho vào túi nylon Ghi dán nhãn địa điểm, loại ký chủ lên túi nylon mang PTN môn BVTV để phân loại 3.2.1.2 Định danh virus Nucleopolyhedrovirus a Xác định triệu chứng sâu bị nhiễm virus Nucleopolyhedrovirus Những mẫu sâu thu đồng mang phòng thí nghiệm tiến hành phân loại theo độ tuổi sâu, mẫu nuôi hộp có kích cỡ 30 mL thức ăn nhân tạo (Trịnh Thị Xuân ctv., 2016) Các tiêu theo dõi hành vi, kić h thước thể, màu sắ c sâu bị chết (nếu có) định danh theo phương pháp phân loại Evans and Shapiro (1997) b Xác định hình dạng thể vùi virus Nucleopolyhedrovirus Trong điều kiện PTN, mẫu ấu trùng SAT SXDL nghi ngờ bị nhiễm virus NPV thu nhận trữ vào ống eppendorf 1,5 mL sử dụng tăm nhọn tiệt trùng phết mẫu lên lame có bổ sung giọt dịch nước cất Tiến hành quan sát mẫu kính hiển vi huỳnh quang độ phóng đại 40 − 100 lần để phát thể vùi virus NPV có hình dạng góc cạnh Bên cạnh tiến hành cắt thể mỡ sâu bị nhiễm virus NPV, nhuộm màu quan sát mẫu dưới kiń h hiể n vi điện tử độ phóng đại 40.000 đến 150.000 lần và chu ̣p hiǹ h xác đinh ̣ cấ u trúc của virus NPV (Hunter-Fujita et al., 1998) Ghi nhận tiêu: Quan sát hình dạng đo kích thước thể vùi virus NPV c Định danh virus Nucleopolyhedrovirus kỹ thuật PCR Để dò tìm khuếch đại trình tự gene polh virus NPV từ DNA tổng số, kỹ thuật PCR sử dụng với primer chuyên biệt PER001 PSF002 Clarke et al (1996) sử dụng để dò tìm gene polh Đây phương pháp đại thuận tiện cho xác định diện trình tự mẫu với độ xác cao ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực (Trần Nhân Dũng ctv., 2012) Căn vào tài liệu tham khảo, chủ yếu dựa vào kết mà Clarke et al (1996); Takatsuka et al (2001) đạt được, cặp mồi PER001 PSF002 sử dụng để khuếch đại gene polh virus NPV Sau ly trích DNA mẫu tiến hành thực phản ứng khuếch đại PCR với chu trình nhiệt sau: bước 1: 940C phút; bước 2: 940C 30 giây; bước 3: 500C 30 giây; bước 4: 720C 30 giây; bước 5: lặp lại 32 chu kỳ từ bước đến bước 4, giữ nhiệt độ 40C Sau tiến hành điện di chụp hình gel, so sánh với thang chuẩn để xác nhận vị trí băng xác định mẫu cho kết dương tính (có băng mong muốn) Gửi sản phẩm PCR để giải trình tự cơng ty Macrogen, Hàn Quốc (www.macogen.com) 3.2.2 Nghiên cứu tính độc của virus SpltNPV SeNPV điề u kiêṇ phòng thí nghiệm 3.2.2.1 Đánh giá hiêụ quả của chủng virus SpltNPV SeNPV điều kiêṇ phòng thí nghiêm ̣ Thí nghiệm được bớ trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên, gồ m các nghiệm thức là tấ t các chủng virus thu thâ ̣p pha ở nồ ng đô ̣ thể vùi x 107 OBs/mL và nghiê ̣m thức đố i chứng (sử dụng nước cất trùng), tất nghiệm thức bổ sung 5% nước đường + 10% phẩm màu đỏ (Kyoritu Food Co Ltd., Tokyo), nghiệm thức với bốn lần lặp lại, lần lặp lại gồm 24 ấu trùng sâu tuổi để bố trí (trước bố trí thí nghiệm cần bỏ đói sâu 24 giờ) Sử dụng phương pháp droplet − feeding (Hughes and Wood, 1981; Hughes et al.,1986; Kunimi and Nakai, 2001) Ghi nhận tiêu: Đánh giá kết thí nghiệm cách ghi nhận số sâu sống, chết tất nghiệm thức sau ngày lây nhiễm hiệu đính cơng thức Abbott (1925) 3.2.2.2 Xác đinh ̣ giá tri LC ̣ 50, LT50 của virus SpltNPV virus SeNPV giai đoạn tuổi sâu * Thí nghiê ̣m xác đinh ̣ giá tri ̣ LC50 (Lethal Concentration – nồ ng ̣ gây chế t trung bình 50% cá thể): thí nghiệm thực giai đoạn phát triển SAT SXDL từ tuổi đến tuổi Ở giai đoạn tuổi sâu sử dụng 120 ấu trùng/nồng độ Trước lây nhiễm, cân trọng lượng giai đoạn tuổi sâu để xác định độ đồng thực thí nghiệm, sử du ̣ng phương pháp droplet − feeding 3.2.2.3 Năng suất thu hồi thể vùi chủng virus SpltNPV, SeNPV đố i với sâu ăn tạp và sâu xanh da láng *Thí nghiệm thực phương pháp lây nhiễm bề mặt thức ăn (Shorey and Hale, 1965) Sử dụng 1,0 mL dung dịch huyền phù virus nồng độ tương ứng trộn với thức ăn nhân tạo Sử dụng 100 ấu trùng/tuổi/chủng virus cho tiếp xúc với thức ăn bị nhiễm virus Hàng ngày có bổ sung thức ăn theo dõi sâu có triệu chứng chết virus (đổi màu, không di chuyển) tiến hành ngừng cho ăn, thu sâu cho vào ống Falcon 50 mL trữ lạnh -200C Cách tính suất thể vùi virus sau, nghiền tất xác sâu với 10 mL (sâu tuổi 2), 100 mL (sâu tuổi 3, 5) nước cất trùng, lọc thu dịch virus ly tâm theo quy trình Kunimi and Nakai (2001) 3.2.2.4 Khảo sát khả lưu tồ n của các chủng virus SpltNPV, SeNPV đố i với sâu ăn tạp và sâu xanh da láng Thí nghiệm thực với nghiệm thức tương ứng chủng virus chọn lựa từ mục 3.2.2.1 Sử dụng nồng độ thể vùi virus x 107 OBs/mL nghiệm thức đối chứng (chỉ phun nước cất), chậu thí nghiệm tiến hành phun với liều lượng 15 mL/chậu sau 1, 3, 20 ngày sau phun (NSP) cắt cải (hành) vào phòng thí nghiệm tiến hành cho sâu tuổi ăn phương pháp vị độc (tác động qua miệng) Mỗi lần lặp lại tương ứng với 24 ấu trùng sâu tuổi 2, để chuẩn bị lượng sâu lớn dùng cho thí nghiệm ổ trứng nở đồng loạt tiến hành làm chậm thời gian nở trứng cách đưa ổ trứng vào ngăn tủ lạnh mát 40C 3.3.2.5 Khảo sát tác động chéo của virus SpltNPV SeNPV Đặc tính virus chun tính thí nghiệm thực nhằm khẳng định lại giả thuyết virus NPV phân lập SAT ký hiệu SpltNPV có tác động (gây chết) SXDL hay khơng ngược lại Thí nghiệm thực điều kiện phòng thí nghiện, sử dụng phương pháp droplet – feeding (Hughes and Wood, 1981; Hughes et al., 1986; Kunimi and Nakai, 2001) để thực 3.2.3 Xác định chất phụ gia phối trộn với virus NPV Thí nghiệm thực theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với nghiệm thức lần lặp lại Mỗi lặp lại sử dụng 24 ấu trùng sâu tuổi 2, virus SpltNPV và SeNPV được bổ sung với chấ t phu ̣ gia Tinopal UNPA − GX với tỷ lê ̣ khác nhau, sử dụng phương pháp lây nhiễm qua thức ăn (Shorey and Hale, 1965), 10 µL virus được trơ ̣n với thức ăn nhân ta ̣o được chuẩ n bị sẵn cho vào khuôn chủng, chuyển cá thể sâu vào khuôn chủng Sau ngày chuyển sâu từ khuôn chủng hộp nhỏ 30 mL để tránh lây bệnh sai số 3.2.4 Xác định thời gian tồn trữ chế phẩm virus SpltNPV và SeNPV Thí nghiệm thực cách phối trộn công thức khác để sản xuất virus dạng lỏng dạng bột theo quy trình chi tiết Hình 3.1: Thức ăn nhân tạo Trứng Lây nhiễm sâu thức ăn nhân tạo Sâu tuổi Vòng đời Sâu tuổi Lây nhiễm virus sâu Thu virus Ngài Nhộng Ly tâm virus Dạng lỏng Nhân nuôi sâu bệnh Phối trộn phụ gia Dạng khơ Đóng gói, bảo quản Hình 3.1 Sơ đồ sản xuất chế phẩm virus NPV điều kiện phòng thí nghiệm, Bộ mơn BVTV, ĐHCT Sau sản xuất chế phẩm bảo quản điều kiện 40C nhiệt độ phòng tiến hành đánh giá hiệu sâu tuổi 3.2.5 Đánh giá hiệu quả chế phẩm virus NPV sâu hại điều kiện nhà lưới Thí nghiệm bố trí theo thể thức hồn tồn ngẫu nhiên nhân tố gồm nghiệm thức, có: nghiệm thức dùng chế phẩm virus NPV (chế phẩm lỏng: 500mL/ha 1.000mL/ha; chế phẩm khô: 500g/ha 1.000g/ha), nghiệm thức dùng thuốc trừ sâu sinh học (đối chứng dương) nghiệm thức phun nước (đối chứng âm) Mỗi nghiệm thức với lần lặp lại tương ứng với chậu trồng cải bắp (hành lá), 10 Chín chủng virus SpltNPV khảo sát để xác định nồng độ LC50 thơng qua tính tốn số liệu sâu chết độ tuổi sâu Kết xác định chủng virus SpltNPV-VL2 có giá trị LC50 từ tuổi đến tuổi đạt 1,2 x 103; 2,8 x 104; 3,6 x 107; 4,1 x 107 5,6 x 108 OBs/mL Chủng SpltNPV-TG1 cho kết giá trị LC50 2,9 x 103; 1,1 x 105; 1,9 x 106; 6,6 x 107 4,6 x 108 OBs/mL Chủng SpltNPV-TV1 cho kết giá trị LC50 6,5 x 103; 7,4 x 104; 1,1 x 106; 4,7 x 106 3,4 x 108 OBs/mL Đối với chủng SpltNPV-AG1 cho kết LC50 1,5 x 102; 7,6 x 103; 3,0 x 106; 4,5 x 107 5,3 x 107 OBs/mL Chủng SpltNPV-CT4 cho kết LC50 2,3 x 103; 3,6 x 104; 2,4 x 106; 3,3 x 106 1,4 x 108 OBs/mL Chủng SpltNPV-ĐT8 cho kết LC50 8,2 x 103; 4,3 x 104; 2,8 x 106; 3,1 x 106 2,8 x 107 OBs/mL Chủng SpltNPV-HG7 cho kết LC50 2,0 x 102; 3,3 x 104; 4,1 x 106; 5,4 x 106 2,7 x 107 OBs/mL Chủng SpltNPV-LA2 cho kết LC50 4,3 x 102; 5,4 x 104; 2,2 x 106; 3,5 x 107 4,3 x 108 OBs/mL Chủng SpltNPV-ST1 cho kết LC50 1,7 x 103; 1,3 x 105; 4,4 x 106; 2,7 x 108 5,9 x 108 OBs/mL Kết quả LT50 chủng virus SpltNPV giai đoạn tuổi sâu ăn tạp điều kiện phòng thí nghiệm Kết khảo sát thời gian gây chết trung bình SAT chín chủng virus SpltNPV giai đoạn tuổi khác tính theo sau lây nhiễm ngày sau lây nhiễm cho thấy, giai đoạn sâu tuổi giá trị LT50 tất chủng virus có khác biệt qua phân tích thống kê dao động từ 73,25 đến 94,25 sau lây nhiễm tương ứng với 3,05 đến 3,93 ngày Đến giai đoạn sâu tuổi thời gian gây chết chủng virus tăng lên, chủng virus SpltNPV-CT4 thể thời gian gây chết sâu chậm 115,75 tương ứng với 4,82 ngày sau lây nhiễm Ở giai đoạn sâu tuổi với nồng độ thể vùi ban đầu 1,5 x 104 OBs/ấu trùng chủng SpltNPV-HG7 cho thời gian gây chết sâu nhanh 78,74 tương đương qua phân tích thống kê so với chủng SpltNPV-VL2 (89,26 giờ) khác biệt với chủng lại, chủng virus SpltNPV-CT4 thể thời gian chậm 143,50 tương ứng với 5,98 ngày sau chủng Sang đến giai đoạn sâu tuổi hầu hết chủng virus có thời gian gây chết đạt tương đương qua phân tích thống kê, với lượng thể vùi 1,5 x 105 OBs/ấu trùng thời gian trung bình 159,24 đến 175,25 sau lây nhiễm gây chết 50% cá thể SAT Sâu tuổi cho giá trị LT50 trung bình tất chủng virus khác biệt qua phân tích thống kê, chủng SpltNPV-TG1 SpltNPV-ĐT8 cho thời gian gây chết nhanh đạt 198,74 199,75 sau lây nhiễm nồng độ 1,5 x 106 OBs/ấu trùng Như vậy, qua kết đánh giá giá trị LT50 chủng virus SpltNPV thu thập ĐBSCL cho thấy, tuổi sâu cao thời gian gây chết sâu kéo dài * Năng suất thể vùi virus thu ấu trùng sâu ăn tạp 17 Bảng 4.2: Năng suất thể vùi virus SpltNPV đạt 100 ấu trùng SAT giai đoạn tuổi khác điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T= 28,30C ± 2; H= 63,8%± 3,7 Chủng virus Năng suất thể vùi (OBs/100 ấu trùng) Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi SpltNPV-VL2 7,5 x 108 5,6 x 109 8,5 x 1010 2,8 x 1012 7,8 x 1012 9 10 12 SpltNPV-TG1 1,2 x 10 9,7 x 10 6,1 x 10 1,8 x 10 6,2 x 1012 SpltNPV-TV1 8,8 x 108 7,9 x 109 4,3 x 1010 0,9 x 1012 7,4 x 1012 9 10 12 SpltNPV-AG1 1,7 x 10 8,7 x 10 1,8 x 10 1,5 x 10 5,9 x 1012 SpltNPV-CT4 1,5 x 109 6,5 x 109 3,8 x 1010 9,8 x 1011 5,1 x 1012 9 10 12 SpltNPV-ĐT8 2,1 x 10 8,7 x 10 7,1 x 10 1,1 x 10 6,7 x 1012 SpltNPV-HG7 6,9 x 108 4,9 x 109 5,6 x 1010 1,6 x 1012 8,8 x 1012 SpltNPV-LA2 4,9 x 109 6,9 x 109 2,4 x 1010 8,9 x 1011 3,9 x 1012 9 10 12 SpltNPV-ST1 3,4 x 10 8,4 x 10 3,4 x 10 1,4 x 10 4,2 x 1012 Kết phân tích suất virus đạt 100 ấu trùng SAT thể Bảng 4.2 cho thấy, giai đoạn sâu tuổi tất chủng virus SpltNPV, suất virus thu dao động từ 6,9 x 108 đến 4,9 x 109 OBs/100 ấu trùng, chủng SpltNPV-LA2 đạt suất cao Đến giai đoạn sâu tuổi với nồng độ lây nhiễm ban đầu x 105 OBs/2,5 g thức ăn lượng virus thu lại tính 100 ấu trùng 4,9 x 109 đến 9,7 x 109 OBs Ở sâu tuổi lớn tuổi 3, lượng virus thu lớn giai đoạn sâu cần thời gian để virus nhân mật số thể, song song lượng virus đưa vào thể sâu tương đối thấp nên thời gian sâu chết chậm thu lượng virus nhiều Ở giai đoạn sâu tuổi lượng virus thu chín chủng SpltNPV lớn 3,9 x 1012 OBs/100 ấu trùng Bảng 4.3: Năng suất thể vùi virus SpltNPV đạt ấu trùng SAT giai đoạn tuổi khác điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T= 28,30C ± 2; H= 63,8%± 3,7 Chủng virus Năng suất thể vùi (OBs/ấu trùng) Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi SpltNPV-VL2 1,8 x 105 c 3,4 x 106 1,6 x 107 e 2,0 x 108 d 2,0 x 109 cd SpltNPV-TG1 7,8 x 105 a 1,2 x 106 1,5 x 107 e 1,1 x 108 e 2,4 x 109 cd SpltNPV-TV1 2,8 x 105 bc 4,6 x 106 6,2 x 107 bc 4,6 x 109 b 1,6 x 109 b SpltNPV-AG1 4,8 x 105 ab 1,7 x 106 1,9 x 107 e 2,2 x 108 d 2,8 x 109 bc SpltNPV-CT4 1,4 x 105 c 4,0 x 106 7,6 x 107 b 3,4 x 108 c 3,7 x 109 ab SpltNPV-ĐT8 2,0 x 105 c 1,5 x 106 3,7 x 108 a 6,3 x 109 a 4,2 x 109 a 5c 7d ab SpltNPV-HG7 1,5 x 10 1,8 x 10 3,2 x 10 5,0 x 10 2,8 x 109 bc SpltNPV-LA2 2,1 x 105 bc 1,9 x 106 7,1 x 107 bc 5,8 x 109 ab 5,2 x 109 a SpltNPV-ST1 1,8 x 105 c 4,3 x 106 5,2 x 107 c 6,8 x 109 a 4,4 x 109 a Mức ý nghĩa ** ns ** ** ** CV (%) 5,39 6,4 3,45 4,40 4,04 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN **:Khác biệt có ý nghĩa mức 1%, ns: khơng khác biệt 18 Qua Bảng 4.3 thể mật số thể vùi thu ấu trùng SAT chủng virus SpltNPV giai đoạn tuổi khác cho thấy, sâu tuổi suất thể vùi thu dao động từ 1,4 x 105 đến 7,8 x 105 OBs/ ấu trùng có khác biệt qua phân tích thống kê chủng virus thu thập ĐBSCL Đến giai đoạn sâu tuổi suất virus thu tăng cao khơng có khác biệt qua phân tích thống kê đạt (1,2 - 4,6) x 106 OBs/ ấu trùng Đối với sâu tuổi mật số thể vùi thể sâu chủng SpltNPV-ĐT8 (3,7 x 108 OBs/ấu trùng) cao khác biệt hoàn toàn so với chủng lại qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 1% Ở sâu tuổi 4, mật số thể vùi chủng virus thể sâu nhiễm tăng dần có khác biệt ý nghĩa thống kê 1%, mật số thể vùi cao chủng virus SpltNPV- ST1 (6,8 x 109 OBs/ấu trùng) SpltNPV-ĐT8 (6,3 x 109 OBs/ấu trùng) tương đương qua phân tích thống kê với chủng SpltNPV-HG7 (5,0 x 109 OBs/ ấu trùng) SpltNPV-LA2 (5,8 x 109 OBs/ấu trùng) Đối với giai đoạn sâu tuổi mật số thể vùi chủng virus đạt sau chủng SpltNPV- ST1 (4,4 x 109 OBs/ấu trùng), SpltNPV-ĐT8 (4,2 x 109 OBs/ấu trùng), SpltNPV-LA2 (5,2 x 109 OBs/ấu trùng), tương đương với chủng SpltNPV-CT4 (3,7 x 109 OBs/ấu trùng) khác biệt hồn tồn so với chủng lại qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 1% 4.2.2 Hiệu quả khả gây bệnh SeNPV sâu xanh da láng Bảng 4.4 Hiệu lực chủng virus SeNPV thu thập tỉnh Vĩnh Long SXDL Spodoptera exigua tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T = 25,30C ±2,0; H = 65,8% ± 3,0 Nghiệm thức Độ hữu hiệu (%) qua NSLNa SeNPV-VL1 92,0ab 100a 100 SeNPV-VL2 88,7ab 97,1a 100 SeNPV-VL3 59,7c 81,1b 97,4 SeNPV-VL4 87,3ab 94,6a 100 SeNPV-VL5 97,4a 100a 100 SeNPV-VL6 93,4ab 95,9a 100 SeNPV-VL7 76,7bc 91,4a 100 SeNPV-JP1 88,1ab 100a 100 Mức ý nghĩa * * ns CV (%) 17,6 10,1 3,6 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5%, ns: không khác biệt a: Ngày sau lây nhiễm, SeNPV – JP1: Virus SeNPV cung cấp từ Nhật Bản làm đối chứng dương Độ hữu hiệu chủng virus NPV thu thập tỉnh Vĩnh Long SXDL tuổi trình bày Bảng 4.4 cho thấy cho thấy chủng virus hiệu lực gây chết SXDL thời điểm NSLN chủng virus SeNPV-VL5 cao tương đương với chủng virus SeNPV-VL2, SeNPV-VL4, SeNPV-VL6 SeNPV-VL1 Tại thời 19 điểm NSLN chủng virus SeNPV-VL5, SeNPV-VL4 đạt hiệu lực tối đa 100% Tuy nhiên, chủng virus SeNPV-VL5 cho hiệu cao NSLN đạt 97,4% nên chọn để nghiên cứu Bảng 4.5: Hiệu lực chủng virus SeNPV thu thập Tp Cần Thơ ấu trùng SXDL Spodoptera exigua tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T = 25,30C ±2,0; H = 65,8% ± 3,0 Nghiệm thức Độ hữu hiệu (%) qua NSLNa SeNPV-CT1 58,3c 79,5b 94,2b SeNPV-CT2 80,8abc 87,3b 97,2b SeNPV-CT3 94,3a 100a 100a bc b SeNPV-CT4 69,5 87,2 100a SeNPV-CT5 75,5abc 85,6b 98,4a ab a SeNPV-JP1 88,2 100 100a Mức ý nghĩa * * * CV (%) 19,4 7,0 6,7 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5% a: Ngày sau lây nhiễm, SeNPV – JP1: Virus SeNPV cung cấp từ Nhật Bản làm đối chứng dương Kết Bảng 4.5 so sánh hiệu lực gây chết SXDL tuổi chủng virus thu thập Tp Cần Thơ cho thấy, thời điểm NSLN độ hữu hiệu chủng virus SeNPV-CT3 cao tương đương với chủng SeNPV-CT2, SeNPV-CT5 SeNPV-JP1, nhiên thời điểm NSLN chủng virus SeNPV-CT3 đạt hiệu lực 100% với hiệu lực chủng SeNPV-JP1 Bảng 4.6 Hiệu lực chủng virus SeNPV thu thập tỉnh Đồng Tháp SXDL Spodoptera exigua tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T = 25,30C ±2,0; H = 65,8% ± 3,0 Nghiệm thức Độ hữu hiệu (%) qua NSLNa SeNPV-ĐT1 73,3b 86,1b 98,6a SeNPV-ĐT2 92,9a 100a 100a a ab SeNPV-ĐT3 94,3 95,6 100a SeNPV-ĐT4 49,7c 64,8c 92,7b SeNPV-ĐT5 88,0ab 95,8ab 100a SeNPV-JP1 89,2ab 100a 100a Mức ý nghĩa * * * CV (%) 15,7 10,0 2,6 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5% a: Ngày sau lây nhiễm, SeNPV – JP1: Virus SeNPV cung cấp từ Nhật Bản làm đối chứng dương Kết Bảng 4.6 cho thấy, xét hiệu lực gây chết sâu NSLN chủng virus SeNPV-ĐT2 (92,9%) SeNPV-ĐT3 (94,3%) cao chủng virus lại Tại thời điểm NSLN chủng virus SeNPV-ĐT2 có hiệu lực gây chết sâu tối đa 100% 20 Bảng 4.7 Hiệu lực dòng virus thu thập tỉnh An Giang ấu trùng SXDL Spodoptera exigua tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T = 25,30C ±2,0; H = 65,8% ± 3,0 Nghiệm thức Độ hữu hiệu (%) qua NSLNa SeNPV-AG1 98,8a 100a 100 SeNPV-AG2 80,6bc 98,7a 100 SeNPV-AG3 61,9c 75,0b 96,9 SeNPV-JP1 90,0ab 100a 100 Mức ý nghĩa * * ns CV (%) 16,0 7,4 5,7 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5%, ns: khơng khác biệt, a: Ngày sau lây nhiễm, SeNPV – JP1: Virus SeNPV cung cấp từ Nhật Bản làm đối chứng dương Kết thí nghiệm Bảng 4.7 cho thấy, hiệu lực chủng virus ấu trùng SXDL tuổi tăng NSLN, với hiệu lực dao động từ 75,0 – 100% Trong đó, chủng SeNPV-AG1, SeNPV-JP1 cho hiệu lực gây chết sâu tối đa (100%) không khác biệt mức ý nghĩa 5% với chủng virus SeNPV-AG2 (98,7%) có khác biệt với chủng virus lại Đến NSLN hiệu chủng tương đương không khác biệt qua phân tích thống kê, nhiên thời điểm NSLN virus SeNPV-AG1 có hiệu lực gây chết sâu cao chủng virus lại * Giá trị LC50 chủng virus SeNPV giai đoạn tuổi ấu trùng sâu xanh da láng điều kiện phòng thí nghiệm Bốn chủng virus SeNPV chọn từ tỉnh để khảo sát để xác định nồng độ LC50 thơng qua tính tốn số liệu sâu chết độ tuổi sâu Kết xác định chủng virus SeNPV-VL5 có giá trị LC50 từ tuổi đến tuổi đạt 2,0 x 101, 2,2 x 101; 1,6 x 103; 3,3 x 105 1,7 x 107 OBs/mL Chủng SeNPV-CT1 cho kết giá trị LC50 5,1 x 101; 2,3 x 103; 3,1 x 104; 8,8 x 104 3,4 x 107 OBs/mL Chủng SeNPV-ĐT2 cho kết giá trị LC50 8,6 x 101; 1,3 x 102; 5,0 x 102; 7,8 x 105 3,2 x 108 OBs/mL Đối với chủng SpltNPV-AG1 cho kết LC50 2,2 x 101; 3,3 x 101; 1,7 x 102, 1,4 x 105 1,5 x 107 OBs/mL Ngoài ra, đề tài xác định độ tuổi sâu tương ứng với nồng độ (độc lực) cao nhất, sâu tuổi thể chủng virus SeNPV-VL5 có độc lực cao (LC50 = 2,0 x 101 OBs/mL) Đối với giai đoạn sâu tuổi chủng virus SeNPV- VL5 cho độc lực cao (LC50 = 2,2 x 101 OBs/mL) chủng SeNPV-CT3 (LC50 = 2,0 x 103 OBs/mL) có độ độc thấp Tương tự giai đoạn sâu tuổi 3, kết cho thấy chủng SeNPV-AG1 cho độc lực cao (LC50 = 1,7 x 102 OBs/mL) chủng SeNPV-CT4 cho độc lực thấp (LC50 = 3,1 x 104 OBs/mL) Đến giai đoạn sâu tuổi chọn chủng SeNPV-AG1 thể độc lực cao (LC50 = 1,8 x 104 OBs/mL), chủng SeNPV-ĐT2 thể độc lực thấp (LC50 = 7,8 x 105 OBs/mL) Ở giai đoạn sâu tuổi chủng SeNPV-AG1 thể độc lực cao 21 (LC50 = 1,5 x 107 OBs/mL) chủng SeNPV-ĐT2 thể độc lực thấp (LC50 = 3,2 x 108 OBs/mL) * Giá trị LT50 chủng virus SeNPV giai đoạn tuổi sâu xanh da láng điều kiện phòng thí nghiệm Kết thí nghiệm xác định thời gian trung bình gây chết bốn chủng virus SeNPV giai đoạn tuổi khác SXDL tính theo ngày sau lây nhiễm đạt sau: Ở giai đoạn tuổi cho thấy, bốn chủng virus SeNPV có thời gian gây chết tương đương qua phân tích thống kê từ 62,26 đến 69 (tương đương với 2,594 đến 2,875 ngày sau lây nhiễm) Đối với giai đoạn ấu trùng tuổi có gia tăng thời gian gây chết, chủng SeNPV-VL5 có thời gian gây chết nhanh (102,00 giờ) khác biệt với ba chủng lại qua phân tích thống kê Thời gian gây chết trung bình chủng virus tiếp tục gia tăng giai đoạn sâu tuổi 3, Chủng SeNPV-VL5 có thời gian gây chết sâu đạt 123,24; 139,51 171,24 giờ, chủng SeNPV - CT3 đạt 123,50; 149,50 163,54 giờ, chủng SeNPV - ĐT2 đạt 124,75; 144,00 177,24 giờ, chủng SeNPV - AG1 đạt 127,99; 152,50 180,50 * Năng suất thể vùi virus thu ấu trùng sâu xanh da láng, S exigua Số liệu từ Bảng 4.8 cho thấy, có khác biệt suất thể vùi thu giai đoạn tuổi chủng virus Đối với giai đoạn ấu trùng SXDL tuổi tuổi nồng độ lây nhiễm ban đầu x 103 OBs/2,5 g trộn vào thức ăn nhân tạo cho kết thể suất vùi thu từ 8,9 x 107 đến 5,7 x 109 OBs/100 ấu trùng Tuổi sâu lớn suất thể vùi virus thu cao, giai đoạn tuổi lượng virus thu chủng đạt từ 4,6 x 1011 đến 7,5 x 1012 OBs/100 ấu trùng Bảng 4.8 Năng suất thể vùi virus SeNPV đạt 100 ấu trùng SXDL điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT Chủng virus Năng suất thể vùi (OBs/100 ấu trùng) Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi SeNPV-VL5 8,9 x 107 8,6 x 108 7,1 x 1011 9,2 x 1011 9,7 x 1011 SeNPV-CT3 4,6 x 108 5,7 x 109 3,2 x 1010 4,6 x 1011 9,5 x 1011 SeNPV-ĐT2 2,7 x 108 2,6 x 109 3,9 x 1010 6,3 x 1012 4,1 x 1012 10 12 SeNPV-AG1 5,6 x 10 4,7 x 10 3,2 x 10 7,5 x 10 6,9 x 1012 Kết suất thể vùi virus SeNPV tính cá thể ấu trùng SXDL Bảng 4.9 cho thấy, tất chủng virus khơng có khác biệt qua phân tích thống kê lượng virus thu bốn chủng virus giai đoạn ấu trùng SXDL tuổi 1, Đối với giai đoạn sâu tuổi mật số dao động từ (4,0 - 4,8) x 105 OBs/ấu trùng, giai đoạn ấu trùng tuổi mật số thể vùi thu 1,3 x 107 OBs/ấu trùng Sự khác biệt mật số thể vùi giai đoạn sâu tuổi cho kết chủng SeNPV- 22 AG1 SeNPV-CT3 đạt suất thể vùi đạt cao tương đương 3,2 x 108 2,8 x 108 OBs/ấu trùng SXDL Bảng 4.9 Năng suất thể vùi virus SeNPV đạt ấu trùng SXDL giai đoạn tuổi khác điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T = 25,30C ±2,0; H = 65,8% ± 3,0 Tuổi sâu Năng suất thể vùi (OBs/ấu trùng) Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi Tuổi SeNPV-VL5 4,0 x 105 1,9 x 106 c 3,2 x107 6,3 x 107 1,4 x 108 c SeNPV-CT3 4,3 x 105 7,7 x 106 a 1,8 x107 6,2 x 108 2,8 x 108 ab SeNPV-ĐT2 4,8 x 105 5,3 x 106 ab 1,3 x 107 6,2 x 107 2,0 x 108 b SeNPV-AG1 4,6 x 105 4,1 x 106 b 1,4 x 107 6,9 x 107 3,2 x 108 a Mức ý nghĩa ns ** ns ns * CV(%) 1,93 3,27 3,69 2,34 3,58 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5%; **: Khác biệt có ý nghĩa mức 5%; ns: không khác biệt 4.3 Đánh giá hiệu lực chéo virus SpltNPV sâu xanh da láng điều kiện phòng thí nghiệm Kết thí nghiệm cho thấy virus SpltNPV không gây chết SXDL ngược lại SeNPV không gây chết SAT, đặc điểm chung họ Baculoviridae kí sinh chuyên tính lồi, nên kết luận virus SpltNPV khơng ảnh hưởng đến phát triển SXDL 4.4 Xác định chất phụ gia lên hiệu lực virus SpltNPV SeNPV * Chất phụ gia Tinopal UNPA-GX Kết bảng 4.10 cho thấy, việc phối trộn chất phụ gia Tinopal; UNPA-GX nồng độ 1% với virus SpltNPV mang lại hiệu phòng trị SAT đạt 88% sau ngày sau lây nhiễm Bảng 4.10 Hiệu hỗn hợp SpltNPV + Tinopal UNPA-GX lên SAT tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T=30 ± 50C, RH= 65 ± 5% Độ hữu hiệu (%)qua NSLNa Nghiệm thức 10 SpltNPV (107OBs/mL) 0,0 d 27,4 c 71,2 c 93,7 b SpltNPV + 0,125% Ti 14,5 c 36,1 c 71,9 c 96,3 ab SpltNPV + 0,25% Ti 32,9 b 59,8 b 87,5 b 98,2 ab b b ab SpltNPV + 0,5% Ti 36,6 70,5 93,0 100 a SpltNPV + 1% Ti 45,3 a 88,2 a 98,2 a 100 a 0,125% Ti 0,0 d 0,0 d 0,0 d 0,0 + Mức ý nghĩa ** ** ** ** CV (%) 12,9 15,7 11,8 9,5 Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê **: khác biệt mức ý nghĩa 1% Ti: Tiopal UNPA-GX a: Ngày sau lây nhiễm 23 Qua kết Bảng 4.11 cho thấy, virus SeNPV nghiệm thức sử dụng Tinopal UNPA-GX với nồng độ 1% cho hiệu cao đạt từ 79,2% đến 88,3% sau 10 ngày lây nhiễm Bảng 4.11: Hiệu hỗn hợp SeNPV + Tinopal UNPA-GX lên SXDL tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T= 27,30C ± 2,0; H= 63,8%± 4,0 Nghiệm thức SeNPV + 0,125% Ti SeNPV + 0,25% Ti SeNPV + 0,5% Ti SeNPV + 1% Ti SeNPV (106OBs/mL) 0,125% Ti Mức ý nghĩa CV (%) 18,1a 19,4a 27,8a 22,2a 29,2a 0,0b * 16,71 Độ hữu hiệu (%)qua NSLNa 27,0d 30,9b 39,9cd 47,3b 48,1bc 47,6b 65,5a 79,2a 61,7ab 80,6a 0,0e 0,0c ** ** 11,71 12,65 10 42,9b 53,7b 60,0b 88,3a 94,2a 0,0c ** 17,4 Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê; *: khác biệt mức ý nghĩa 5% **: khác biệt mức ý nghĩa 1%, Ti: Tinopal a: Ngày sau lây nhiễm * Chất phụ gia acid boric Trong Bảng 4.12 cho thấy, nghiệm thức NPV có bổ sung nồng độ acid boric 0,25%; 0,5% 1% cho hiệu lực diệt sâu tối đa (100%) nghiệm thức SpltNPV(107OBs/mL) đạt 85,2% Bảng 4.12 Hiệu hỗn hợp SpltNPV + acid boric lên SAT tuổi trong điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T=30 ± 50C, RH= 65 ± 5% Độ hữu hiệu (%) qua NSLNa Nghiệm thức SpltNPV(107OBs/mL) 1,7 c 56,0 c 85,2 b SplyNPV + 0,125% a.b 8,1 bc 76,2 ab 93,0 b bc b SpltNPV + 0,25% a.b 8,3 72,5 100 a SpltNPV + 0,5% a.b 25,9 ab 79,4 ab 100 a a a SpltNPV + 1% a.b 48,4 88,0 100 a 0,125% a.b 0,0 c 0,0 d 0,0 c Mức ý nghĩa ** ** ** CV (%) 78,9 10,0 9,6 Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê; **: khác biệt mức ý nghĩa 1%; a.b: acid boric a: Ngày sau lây nhiễm Kết Bảng 4.13 cho thấy, ngày sau lây nhiễm độ hữu hiệu nghiệm thức có khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 1%, nghiệm thức sử dụng hỗn hợp SeNPV + 1% a.b có hiệu lực vượt trội đạt 92,3%, nghiệm thức sử dụng hỗn hợp SeNPV với acid boric nồng độ lại có hiệu lực thấp dao động từ 42,7 đến 49,9% thấp nghiệm thức sử dụng SeNPV (106OBs/mL) đạt 84,2% 24 Bảng 4.13 Hiệu hỗn hợp SeNPV + acid boric lên SXDL tuổi điều kiện PTN, Bộ môn BVTV – ĐHCT T= 27,30C ± 2,0; H= 63,8%± 4,0 Độ hữu hiệu (%)qua NSLNa Nghiệm thức 10 SeNPV + 0,125% a.b 26,4a 34,1b 42,7c 45,8b SeNPV + 0,25% a.b 16,7ab 39,9b 49,9c 52,8b SeNPV + 0,5% a.b 18,1ab 41,3b 44,3c 48,5b b a a SeNPV + 1% a.b 11,1 62,8 92,3 100a SeNPV (106OBs/mL) 11,1b 47,2b 84,2b 100a c c d 0,125 % a.b 0,0 0,0 0,0 0,0c Mức ý nghĩa * * ** ** CV (%) 20,15 10,97 6,92 7,2 Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê;*: khác biệt mức ý nghĩa 5%, **: khác biệt mức ý nghĩa 1%, a.b: acid boric a: Ngày sau lây nhiễm Như vậy, kết nghiên cứu hai chất phụ gia Tinopal UNPA-GX acid boric sâu SAT SXDL cho thấy sử dụng acid boric với nồng độ 1% phối trộn với virus NPV làm tăng hiệu SAT SXDL 100 92,3% sau ngày lây nhiễm Đánh giá hiệu quả chế phẩm virus SpltNPV và SeNPV điều kiện tồn trữ tháng tháng tháng tháng 12 tháng 120 100 100 91,9 89,7 88,9 90,2 92,5 77,5 70,1 Độ hữu hiệu (%) 80 64,8 60 40 20 89,9 89 74,6 66,8 53,3 34,4 37,6 29,2 22,8 23,9 16,5 Lỏng 250C Lỏng (250C) 49,8 Lỏng 40C Lỏng (40C) Khô 250C Khô (250C) Khô 40C Khô (40C) Viru Virus s Hình 4.6: Hiệu chế phẩm virus SpltNPV sau 12 tháng sản xuất 25 tháng tháng tháng tháng 12 tháng 120,0 100,0 100,0 97,8 96,7 94,1 89,7 80,1 80,0 Độ hữu hiệu (%) 93,5 90,2 86,4 77,1 67,6 61,5 55,8 60,0 40,0 56,9 51,9 41,9 28,3 26,4 26,7 29,2 16,1 20,0 0,0 Lỏng 25 C Lỏng (250C) Lỏng 40C Lỏng (40C) Khô 250C Khô (250C) Khô 40C Virus Khô (40C) Virus Hình 4.8: Hiệu chế phẩm virus SeNPV sau 12 tháng sản xuất Kết hình 4.7 4.8 cho thấy hai chế phẩm virus SpltNPV SeNPV sản xuất Bộ môn BVTV, trường ĐHCT mang lại hiệu quản lý SAT SXDL thời gian từ đến tháng sau sản xuất, để lâu hiệu bị giảm dần theo thời gian 4.5 Hiệu quả chế phẩm SpltNPV sâu ăn tạp điều kiện nhà lưới Bảng 4.14 cho thấy nghiệm thức sử dụng chế phẩm SpltNPV dạng lỏng liều lượng 1.000 mL/ha chế phẩm SpltNPV dạng khô liều lượng 1.000 g/ha cho hiệu phòng trị SAT cao khác biệt có ý nghĩa so với hai nghiệm thức liều lượng lại đạt 77,0% 82,2% Bảng 4.14: Đô ̣ hữu hiê ̣u của chế phẩ m virus SpltNPV dạng bột lỏng đố i với SAT tuổi điề u kiê ̣n nhà lưới Bộ môn BVTV, ĐHCT T= 35,30C ± 5; H= 53,8%±5,0 Nghiệm thức Liều lượng Độ hữu hiệu (%) ngày sau phun 12 SpltNPV lỏng 500 mL/ha 17,2b 32,9b 45,2c 56,7c SpltNPV lỏng 1.000 mL/ha 8,5b 54,0b 74,9b 77,0b SpltNPV khô 500 g/ha 25,0b 30,8b 37,3c 55,5c ab b b SpltNPV khô 1.000 g/ha 34,1 60,6 78,5 82,2b Nazomi 5WG 100 g/ha 65,4a 89,1a 97,2a 97,2a Mức ý nghĩa * * * * CV (%) 34,9 21,5 15,1 11,5 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống khơng khác biệt qua phép thử DUNCAN ns: khơng khác biệt,* : Khác biệt có ý nghĩa mức 5% 26 4.6 Hiệu quả chế phẩm SeNPV sâu xanh da láng điều kiện nhà lưới Bảng 4.15 cho thấy nghiệm thức sử dụng chế phẩm SeNPV dạng lỏng liều lượng 1.000 mL/ha chế phẩm SeNPV dạng khô liều lượng 1.000 g/ha cho hiệu phòng trị SXDL cao tương đương qua phân tích thống kê với thuốc trừ sâu Radiant 60% đạt 80,6% 88,5% Bảng 4.15 Hiệu lực chế phẩm SeNPV dạng lỏng dạng bột SXDL điề u kiê ̣n nhà lưới Bộ môn BVTV, ĐHCT T= 35,30C ± 5; H= 53,8%±5,0 Nghiệm thức Liều lượng Độ hữu hiệu (%) ngày sau phun SeNPV lỏng 500 mL/ha 12,6b 39,4c 63,8 c 67,7b SeNPV lỏng 1.000 mL/ha 23,4ab 56,4bc 76,6abc 80,6ab SeNPV khô 500 g/ha 16,9b 49,5bc 65,2bc 67,1b SeNPV khô 1.000 g/ha 31,1a 74,6a 82,7a 88,5a a b ab Radiant 60SC 300 mL/ha 32,4 58,9 78,8 79,3ab Mức ý nghĩa * * * * CV (%) 17,94 13,84 8,72 9,23 Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống không khác biệt qua phép thử DUNCAN ns: không khác biệt, *: Khác biệt có ý nghĩa mức 5% 4.7 Khả quản lý sâu ăn tạp sâu xanh da láng chế phẩm virus NPV đồng Thí nghiệm 1: Hiệu quả chế phẩm virus SpltNPV sâu ăn tạp Spodoptera litura gây hại cải làm dưa xã Đông Phước A, H Châu Thành, tỉnh Hậu Giang, 2014 Kết Bảng 4.16 lần phun thứ nhất, cho thấy nghiệm thức dạng khô lỏng liều lượng chế phẩm virus SpltNPV phun có hiệu SAT Sau ngày xử lý, hai nghiệm thức xử lý chế phẩm SpltNPV dạng lỏng (1.000 mL/ha) dạng bột khô (1.000g/ha) cho hiệu cao tương đương qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 1% (lần lượt đạt 59,0 73,6%) Riêng nghiê ̣m thức phun thuố c hóa ho ̣c có hoa ̣t chấ t Emamectin benzoate (Nazomi 5WG) đa ̣t hiê ̣u quả 97,4% quản lý SAT và không khác biê ̣t qua phân tích thố ng kê với nghiê ̣m thức phun chế phẩ m virus SpltNPV liề u lượng 1.000 mL/ha 27 Bảng 4.16 Hiệu (%) chế phẩ m virus SpltNPV SAT gây ̣i cải làm dưa ta ̣i xã Đông Phước A, huyê ̣n Châu Thành, tỉnh Hâ ̣u Giang, 2014 Độ hữu hiệu (%) ngày sau phun Nghiệm thức Liều lượng Phun lần Phun lần NSP NSP NSP NSP NSP SpltNPV lỏng 1.000 mL/ha 46,9b 73,6ab 98,3a 35,8b 83,8a b b ab b SpltNPV khô 1.000 g/ha 49,9 59,0 68,7 34,4 70,9ab Nazomi 5WG 100 g/ha 86,3a 97,4a 98,2a 93,5a 99,5a Mức ý nghĩa ** ** ** ** ** CV (%) 38,87 29,83 32,58 22,68 28,50 Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê; ns: khơng khác biệt qua phân tích thống kê; **: khác biệt mức ý nghĩa 1%; NSP: Ngày sau phun Sau phun lần thứ hai cho thấ y, sau ngày xử lý nghiệm thức sử dụng chế phẩm SpltNPV cho hiệu phòng trị SAT khơng khác biệt qua phân tích thống kê mức ý nghĩa 1%, dao động từ 70,9 – 83,8% tương đương với nghiệm thức sử dụng thuốc Nazomi 5WG (99,5%) Thí nghiệm 2: Hiệu quả chế phẩm virus SpltNPV quản lý sâu ăn tạp hại cải bắp H Phụng Hiệp, T Hậu Giang, 2015 Bảng 4.17 Độ hữu hiệu (%) chế phẩm virus NPV SAT xã Phương Phú, huyện Phụng Hiệp, tỉnh Hậu Giang, 2015 Nghiệm thức Liều lượng Ngày sau phun Phun lần Phun lần Phun lần 12 12 SpltNPV lỏng 1.000 mL/ha 31,6 48,9 43,3 36,0b 34,9b 54,2b 71,7 71,0b SpltNPV khô 1.000 g/ha 35,8 41,5 62,5 38,6b 47,5b 65,2ab 89,8 94,7ab Nazomi 5WG 100 g/ha 59,0 86,3 70,4 74,0a 71,8a 96,7a 97,9 100a Mức ý nghĩa ns ns ns * * * ns * CV (%) 64,4 79,4 27,6 13,3 31,8 17,2 69,1 29,7 Các số cột có chữ theo sau giống khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê; ns: khơng khác biệt qua phân tích thống kê; *: khác biệt mức ý nghĩa 5% Kết bảng 4.17 sau ba lần phun cho thấy chế phẩm SpltNPV liều lượng cho hiệu phòng trị SAT cao đạt 71%, chế phẩm dạng khơ cho hiệu tương đương với thuốc trừ sâu Nazomi 5WG Thí nghiệm 3: Hiêụ quả của virus SeNPV quản lý sâu xanh da láng gây hại hành tím thị xã Vĩnh Châu, tỉnh Sóc Trăng, 2014 Kết diễn biến mật số sâu Hình 4.9, cho thấy thời điểm 20 NST (trước phun lần 1) mật số sâu trung bình nghiệm thức dao động từ 3,7 đến 11 con/m2, giai đoạn sâu tuổi chiếm đa số, mật số sâu tiếp tục có xu hướng tăng cao 23 26 NST Đến 34 NST (phun lần 2), mật số SXDL nghiệm thức từ 11,3 đến 46,3 con/m2 tuổi chiếm đa số, giai đoạn sâu mẫn cảm cao với virus 28 SeNPV thuốc hóa học Tại 37 NST, mật số tất nghiệm thức giảm, nghiệm thức xử lý SeNPV khô giảm mạnh từ 25 con/ m2 giảm 8,0 con/ m2, SeNPV lỏng thuốc hóa học Ohayo 100SC Kết cho thấy xử lý chế phẩm virus SeNPV lần phun thứ hai phân bố giai đoạn sâu tuổi nhỏ (tuổi tuổi 2) phát huy hiệu giai đoạn sâu tuổi lớn Mặt khác, mật số sâu có xu hướng tăng cao giai đoạn sâu tuổi 4, xuất nhiều nên tiến hành phun đợt (45 NSKT) để mang lại hiệu cao, triệt để Kết diễn biến mật số sâu xanh da sáng sau phun lần ba Hình 4.9 cho thấy nghiệm thức xử lý chế phẩm virus SeNPV có mật số từ đến 22,3 con/m2 hiệu virus kéo dài nên thời điểm 54 NST ngày ghi nhận mật số sâu từ 1-7,3 con/m2 Mật số (con/m2) NPV1.000ml/ha lỏng 1,000 mL/ha NPV1.000ml/ha khô 1,000 g/haOhayo Ohayo 100SC Đối Đốichứng chứng NPV lỏng NPV khô 100SC 80,0 80,0 70,0 70,0 60,0 60,0 50,0 50,0 40,0 30,0 40,0 30,0 20,0 10,0 20,0 0,0 20 NST 10,0 23 NST 26 NST 34 NST 37 NST 40 NST 45 NST 48 NST 51 NST 54 NST 51 NST 54 NST 0,0 20 NST 23 NST 26 NST 34 NST 37 NST 40 NST 45 NST 48 NST Ngày sau trồng Hình 4.9: Diễn biến mật số SXDL ruộng hành tím thị xã Vĩnh Châu, tỉnh Sóc Trăng Thí nghiệm 4: Hiệu lực chế phẩm SeNPV SXDL gây hại hành huyện Bình Tân – tỉnh Vĩnh Long, 2015 Kết diễn biến mật số SXDL phân bố giai đoạn tuổi sâu thể Hình 4.10 cho thấy sử dụng chế phẩm virus SeNPV với lần phun (7, 17, 27, 43 53 ngày sau trồng) phun giai đoạn sâu tuổi 1, khống chế mật số SXDL ruộng hành xuống 0,27 - con/m2 Các nghiệm thức xử lý NPV phát huy tác dụng làm giảm mật số sâu thời điểm ngày sau xử lý kéo dài theo thời gian virus tích lũy ruộng 29 NPV lỏng 1,000 mL/ha NPV khô 1,000g/ha ĐC Radiant 60SC 45,00 40,00 Mật số (con/m2) 35,00 30,00 25,00 20,00 15,00 10,00 5,00 T 60 S K T T 56 S K T K S 53 49 S K T T K 46 S K T S 43 40 S K T T K S 36 33 S K T T 30 S K T K S 26 23 S K T T K 20 S K T 16 S K K S S 13 10 S KT T 0,00 Ngày sau trồng Hình 4.10: Diễn biến mật số SXDL gây hại ruộng hành H Bình Tân, Vĩnh Long, 2015 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Kết thu thập 43 chủng SpltNPV (Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus) sâu ăn tạp (Spodoptera litura) tỉnh Long An, Tiền Giang, Vĩnh Long, Trà Vinh, Sóc Trăng, Hậu Giang, An Giang, Tp Cần Thơ Đồng Tháp Thu thập 20 chủng virus SeNPV (Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus) gây bệnh sâu xanh da láng (Spodoptera exigua) Vĩnh Long, Tp Cần Thơ, An Giang, Đồng Tháp Kết nghiên cứu độc tính chủng virus SpltNPV SeNPV: chọn lựa 09 chủng virus SpltNPV 04 chủng SeNPV cho hiệu cao sâu gây hại điều kiện phòng thí nghiệm Kết nghiên cứu chất phụ gia thời gian bảo quản chế phẩm virus SpltNPV SeNPV: chọn chất phụ gia acid boric với nồng độ 1% phối trộn với virus mang lại hiệu 90% điều kiện phòng thí nghiệm Thời gian tồn trữ chế phẩm virus NPV giảm dần theo thời gian, chế phẩm virus NPV dạng khơ sau 1, 3, 5, 12 tháng sản xuất cho hiệu giảm 89,9; 89,0; 74,6; 66,8 49,8% (sâu ăn tạp) 93,5, 90,2; 77,1; 56,9 51,9% (sâu xanh da láng) 30 Trong điều kiện nhà lưới hiệu lực chế phẩm virus SpltNPV, SeNPVở dạng khô liều lượng 1.000 g/ha cho hiệu lực trừ sâu ăn tạp 82,2% sau 12 ngày xử lý sâu xanh da láng đạt 88,5% sau ngày xử lý Thí nghiệm ngồi đồng Cải làm dưa: thí nghiệm ngoài đồ ng xã Đông Phước A, huyê ̣n Châu Thành, tin̉ h Hâ ̣u Giang, sử du ̣ng chế phẩ m virus SpltNPV dạng khô với liều lượng 1.000 g/ha để phòng tri ̣ sâu ăn ta ̣p cho hiê ̣u quả 83,8% suấ t đa ̣t 5,61 tấ n/ha so với phun thuốc trừ sâu sinh học Nazomi 5WG 5,89 tấn/ha đố i chứng (phun nước) 3,15 tấ n/ha Cải bắp: xã Phương Phú, huyện Phụng Hiệp, tỉnh Hậu Giang cho thấy sau phun lần chế phẩm virus (dạng lỏng khơ) mang lại hiệu phòng trừ sâu ăn tạp đạt từ 71% - 94,7% Sử du ̣ng chế phẩ m virus SpltNPV để phòng tri ̣sâu ăn ta ̣p cho suấ t cải bắp đa ̣t 23,1 - 25,1 tấ n/ha so với đố i chứng (phun nước) đa ̣t 21,6 tấ n/ha Hành tím: Sử dụng chế phẩm virus SeNPV sâu xanh da láng gây hại hành tím sau lần phun làm giảm tỷ lệ thiệt hại từ 2,56 xuống 0,43%, hiệu lực đạt 90% Năng suất đạt từ 11,726 đến 15,642 tấn/ha tương đương cao thuốc hóa học Ohayo 100SC 13,525 tấn/ha Hành lá: Thí nghiệm ngồi đồng xã Tân Bình, huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long cho thấy phun chế phẩm virus SeNPV lần/vụ giảm tỷ lệ bị sâu xanh da láng gây hại 3,61% xuống 0,88% nghiệm thức phun SeNPV lỏng, nghiệm thức phun SeNPV khô có tỷ lệ bị hại giảm từ 4,27% xuống 1,49% Ngồi ra, sử dụng chế phẩm virus SeNPV để phòng trị sâu xanh da láng cho suất hành đạt từ 16,03- 16,8 tấn/ha tương đương với sử dụng thuốc hóa học Radiant 60SC 17,28 tấn/ha cao nghiệm thức đối chứng 8,24 tấn/ha 5.2 Đề nghị Tiếp tục thử nghiệm hiệu lực chế phẩm SpltNPV SeNPV nghiên cứu địa phương có trồng rau màu khác để quản lý sâu xanh da láng sâu ăn tạp gây hại trồng Nghiên cứu thêm yếu tố có ảnh hưởng đến hiệu lực chế phẩm virus sau phóng thích ngồi đồng Tiếp tục nghiên cứu, ứng dụng chế phẩm virus NPV loại trồng khác để đưa quy trình ứng dụng cụ thể loại trồng 31 ... Nghiên cứu đặc tính hiệu phòng trừ Nucleopolyhedrosis virus (NPV) sâu ăn tạp (Spodoptera litura Fabr.) sâu xanh da láng (Spodoptera exigua Hubn.) Đồng Sông Cửu Long” thực nhằm phát nguồn virus. .. số nước tiên tiến giới sử dụng virus NPV phòng trừ loại sâu hại trồng phổ biến sâu ăn tạp (Spodoptera litura) , sâu đo (Trichoplusia ni), sâu xanh da láng (Spodoptera exigua), sâu xanh (Heliothis... phẩm virus NPV acid boric nồng độ 1% làm tăng hiệu chế phẩm virus NPV Đã ứng dụng virus SpltNPV SeNPV quản lý sâu ăn tạp sâu xanh da láng gây hại trồng vùng ĐBSCL Chương 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU