Nghiên cứu môi trường nuôi cấy in vitro từ đoạn thân cây sacha inchi (Plukenetia volubilis L.)

Từ nguyên liệu ban đầu là hạt, nghiên cứu đã xác định được môi trường nuôi cấy in vitro phù hợp cho việc tái sinh cây sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) từ đoạn thân. Hạt sacha inchi được khử trùng bằng NaOCl 5% trong 30 phút cho tỉ lệ mẫu sạch nảy mầm cao nhất đạt 78,29%.

ISSN: 1859-2171 e-ISSN: 2615-9562 TNU Journal of Science and Technology 207(14): 121 - 128 NGHIÊN CỨU MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY IN VITRO TỪ ĐOẠN THÂN CÂY SACHA INCHI (Plukenetia volubilis L.) Lê Thị Thủy*, Nguyễn Thị Nhung Trường Đại học Sư phạm Hà Nội TÓM TẮT Từ nguyên liệu ban đầu hạt, nghiên cứu xác định môi trường nuôi cấy in vitro phù hợp cho việc tái sinh sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) từ đoạn thân Hạt sacha inchi khử trùng NaOCl 5% 30 phút cho tỉ lệ mẫu nảy mầm cao đạt 78,29% Hạt có tốc độ nảy mầm nhanh gieo môi trường MS bổ sung 20 g/l sucrose +7 g/l agar với chiều cao trung bình đạt 14,52 cm Sử dụng đoạn thân thật thật in vitro nảy mầm từ hạt cho khả tái sinh cao với tỉ lệ mẫu tạo chồi 72,22% Đoạn thân sau tuần nuôi cấy môi trường MS bổ sung 0,1 mg/l BAP 0,1 mg/l IBA tái sinh tạo trung bình 4,67 chồi/mẫu Các chồi có chất lượng tốt đạt chiều cao 1,75 cm, số trung bình 2,50 Chồi sau chuyển sang mơi trường rễ có bổ sung IBA 0,5 mg/l, tỉ lệ chồi rễ đạt 90%, số lượng rễ trung bình đạt 5,85 rễ/chồi Từ khóa: sinh lý thực vật; đoạn thân; in vitro; Plukenetia volubilis L.; tái sinh Ngày nhận bài: 03/9/2019; Ngày hoàn thiện: 26/9/2019; Ngày đăng: 04/10/2019 STUDY ON THE SUITABLE MEDIUMS FOR IN VITRO CULTURE THE STEM SEGMENT OF SACHA INCHI (Plukenetia volubilis L.) PLANT Le Thi Thuy*, Nguyen Thi Nhung Hanoi National University of Education ABSTRACT From the initial material is seeds, the study identified a suitable in vitro medium for regenerating sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) from the stem segment The seeds of sacha inchi sterilized with 5% NaOCl for 30 minutes give the highest rate of clean germination samples reaching 78.29% Seeds have the fastest germination rate when sown on MS medium supplemented with 20 g/l sucrose + g/l agar with average tree height of 14.52 cm Using stem segments between true leaves and real leaves of seedlings in vitro collected from seeds for maximum reproductive regeneration capacity of 72.22% The stem segment after weeks of growing on MS medium supplemented with 0.1 mg/l BAP and 0.1 mg/l IBA was regenerated 4.67 shoots/sample These average height of the shoots reached 1.75cm, the number of leaves was 2.50 leaves/shoot The shoots were then transferred to the rooting medium supplemented with an IBA of 0.5 mg / l, the rooting rate reached 90%, the average number of roots reached 5.85 roots/shoot Keywords: plant physiology; stem segment; in vitro; Plukenetia volubilis L.; regeneration Received: 03/9/2019; Revised: 26/9/2019; Published: 04/10/2019 * Corresponding author Email: hienthuy20@gmail.com http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn 121 Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN Giới thiệu Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) leo bán thân gỗ có nguồn gốc từ nước Trung Nam Mĩ, đưa trồng Việt Nam từ năm 2012 Cây cho thu lứa đầu sau 7-8 tháng trồng chưa xuất bệnh hại, nay, sacha inchi đánh giá trồng sinh trưởng phát triển tốt điều kiện khí hậu nước ta Ngồi protein (chiếm 27%), hạt sacha inchi đặc trưng hàm lượng cao omega (4553% tổng hàm lượng chất béo) omega (34-39% tổng hàm lượng chất béo), ghi nhận có tác dụng tốt với sức khỏe người, đặc biệt việc ngăn ngừa bệnh viêm khớp, bệnh mạch vành, tiểu đường, tăng huyết áp, tăng động giảm ý bệnh viêm da [1, 2] Khác với nhiều loại thực vật cung cấp dầu, hạt sacha inchi có hàm lượng chất chống oxy hóa tự nhiên cao, hàm lượng axit béo bão hòa thấp (5,4%), bên cạnh cân tỉ lệ omega 3, omega omega khiến sacha inchi đánh giá loại dầu thực vật lành mạnh sức khỏe người [3, 4, 5] Tạo giống từ hạt xem phương pháp nhân giống sacha inchi, tiếp đến phương thức giâm cành với việc sử dụng thêm chất kích thích rễ IBA 0,2% [6] Tuy nhiên, với hàm lượng dầu cao, hạt sacha inchi thường nhanh chóng khả nảy mầm sau thời gian bảo quản Do vậy, việc ứng dụng phương pháp nhân giống in vitro xem giải pháp hỗ trợ thay phù hợp cho phương pháp nhân giống truyền thống Kĩ thuật cho phép lựa chọn nguồn vật liệu di truyền, xử lý khối lượng lớn không gian nhỏ tạo nguồn giống bệnh Các nghiên cứu đỉnh sinh trưởng, mô phân sinh đỉnh thu từ hạt nảy mầm ống nghiệm hay mầm sacha inchi phát sinh chồi trực tiếp môi trường Murashige & Skoog (MS) có bổ sung BAP IBA [7, 8, 9] Theo nghiên cứu Viegas 122 207(14): 121 - 128 cộng (2014) [10], thực nghiệm đồng ruộng cho thấy, khơng tìm thấy biến đổi di truyền in vitro, giống sinh trưởng tốt, cho suất cao ổn định so với giống trồng từ hạt Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu Trong nghiên cứu này, hạt sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) thu từ 1,5 năm tuổi trồng Vườn thực nghiệm Khoa Sinh học, Trường đại học Sư phạm Hà Nội sử dụng làm vật liệu tạo phục vụ nhân giống in vitro sacha inchi 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu thực Bộ môn Sinh lý học thực vật Ứng dụng, Bộ mơn Di truyền-Hóa sinh, Khoa Sinh học, Trường đại học Sư phạm Hà Nội từ tháng năm 2018 đến tháng năm 2019 2.2.1 Phương pháp khử trùng hạt Hạt sacha inchi rửa xà phòng pha lỗng, lắc 2-3 phút, sau vô trùng sơ cồn 70% Tiếp theo, hạt khử trùng dung dịch NaOCl (javel) nồng độ khác (0,5%; 1,5%; 2,5%; 5% 7,5%) 30 phút Sau thời gian khử trùng, javel hạt loại bỏ nước vô trùng (5 lần) Hạt sau ngâm nước cất vơ trùng Sau khử trùng hạt tách vỏ đưa vào môi trường nuôi cấy 2.2.2 Phương pháp tạo vật liệu nhân giống in vitro Sau khử trùng, tách bỏ lớp vỏ hạt gieo môi trường MS có bổ sung sucrose agar với hàm lượng khác Hạt sau nảy mầm, sử dụng vật liệu cho nghiên cứu tạo đa chồi từ đoạn thân 2.2.3 Phương pháp tạo đa chồi từ đoạn thân Đoạn thân (kích thước 1-1,5 cm) vị trí khác nuôi cấy đánh giá chất lượng thông qua tỉ lệ mẫu tạo chồi Đoạn thân phù hợp cắt ni mơi trường tạo đa chồi (MS có bổ sung BAP IBA với nồng độ khác nhau) http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN 2.2.4 Phương pháp tạo hồn chỉnh Sau 4-6 tuần ni cấy, chồi tạo từ đoạn thân đạt chiều cao quy định chuyển sang mơi trường rễ có bổ sung IBA (0; 0,5 mg/l) Mức độ phù hợp môi trường đánh giá thông qua thời gian chồi rễ, số lượng chồi tạo rễ, số rễ/chồi, chiều dài rễ chiều cao Tất môi trường nuôi cấy sử dụng MS bản, có bổ sung sucrose, agar, chất điều hòa sinh trưởng (BAP, IBA) với nồng độ khác tùy giai đoạn nuôi cấy Môi trường nuôi cấy điều chỉnh pH=5,8, khử trùng 1210C, áp suất 1atm 20 phút Điều kiện nuôi cấy: thời gian chiếu sáng 16h/ngày; nhiệt độ 25± 20C 2.2.5 Phương pháp xử lí số liệu Số liệu xử lí theo phương pháp thống kê sinh học phần mềm SPSS phiên 16.0 Sự sai khác giá trị trung bình phân tích One way – ANOVA theo kiểm định Turkey’s – b mức ý nghĩa α = 0,05 Trong bảng số liệu, chữ a, b, a, d, e khác cột thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α =0,05 Kết bàn luận 3.1 Ảnh hưởng nồng độ javel đến khả tạo mẫu từ hạt sacha inchi Trong nghiên cứu này, javel với nồng độ khác sử dụng để khử trùng hạt sacha inchi nguyên vỏ thời gian khử trùng 30 phút Kết thí nghiệm sau tuần theo dõi trình bày bảng Kết cho thấy, tỉ lệ mẫu nhiễm giảm dần tăng nồng độ javel từ 0,5% đến 7,5% Cụ thể, nồng độ javel 0,5% (KT1) tỉ lệ mẫu 207(14): 121 - 128 nhiễm lên tới 83,33%, tỉ lệ giảm 6,94% 29,16% tăng nồng độ javel lên 1,5% 2,5% Tỉ lệ hạt nhiễm thấp (9,22%) sử dụng javel 7,5% để khử trùng Cùng với giảm tỉ lệ mẫu nhiễm, tỉ lệ mẫu tăng lên Các hạt sachi inchi (không nhiễm) sau khử trùng nảy mầm khơng sau tuần theo dõi Kết Bảng cho thấy, tăng nồng độ javel từ 0,5% lên 5%, tỉ lệ mẫu bật mầm tăng dần cao công thức KT4 đạt 78,29% thấp công thức KT1 11,11% Khi tiếp tục tăng nồng độ javel lên 7,5% tỉ lệ mẫu bật mầm lại giảm, đồng thời tỉ lệ mẫu không nảy mầm tăng lên Cụ thể, tỉ lệ mẫu không nảy mầm đạt giá trị cao (41,67%) công thức KT5, tăng gấp gần 10 lần so với công thức KT4 Như thấy, với đặc tính oxi hóa mạnh, việc tăng nồng độ javel khử trùng làm tăng khả diệt nấm, vi khuẩn bề mặt hạt sacha inchi đồng thời ảnh hưởng đến khả nảy mầm hạt giống Với kết này, javel nồng độ 5% sử dụng để khử trùng hạt sacha inchi 3.2 Ảnh hưởng hàm lượng sucrose agar đến việc tạo nguyên liệu từ hạt sacha inchi Đường sucrose xem nguồn cung cấp cacbon tốt cho hoạt động nuôi cấy mô, tế bào thực vật Trong agar đóng vai trò giá thể, giúp đặc chất dinh dưỡng, có tác động trực tiếp đến đặc tính mơi trường ni cấy Sự ảnh hưởng hàm lượng sucrose agar có mơi trường ni cấy tới nảy mầm hạt sacha inchi thể bảng Bảng Ảnh hưởng nồng độ javel đến tỉ lệ tạo mẫu hạt sacha inchi Công thức Nồng độ javel (%) Tỉ lệ mẫu nhiễm (%) Tỉ lệ mẫu nảy mầm (%) KT1 KT2 KT3 KT4 KT5 0,5 1,5 2,5 5,0 7,5 83,33e ± 2,04 76,39d ± 3,19 54,17c ± 2,32 17,56b ± 2,09 9,22a ± 3,42 11,11a ± 1,05 18,06a ± 1,16 40,25b ± 2,02 78,29c ± 2,85 49,11b ± 2,27 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Tỉ lệ mẫu không nảy mầm (%) 5,56a ± 0,82 5,56a ± 1,02 5,58a ± 0,91 4,15a ± 0,73 41,67b ± 1,54 123 Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 207(14): 121 - 128 Bảng Ảnh hưởng hàm lượng sucrose agar đến việc tạo in vitro hạt sacha inchi Công thức Sucrose (g/l) Agar (g/l) CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 10 20 30 10 20 30 4 7 Thời gian TB xuất rễ mầm (ngày) 2,61ab ± 0,45 2,15a ± 0,26 3,07b ± 0,21 2,45ab ± 0,50 2,11a ± 0,26 3,01b ± 0,19 Thời gian TB xuất mầm (ngày) 15,90b ± 0,72 11,00a ± 0,63 32,03d ± 1,34 15,93b ± 0,60 11,23a ± 0,80 26,33c ± 0,93 Chiều cao TB (cm) 8,92b ± 0,25 13,32c ± 0,69 6,69a ± 0,86 8,89b ± 0,40 14,52c ± 1,14 9,86a ± 1,18 Bảng Ảnh hưởng vị trí đoạn thân tới tỉ lệ mẫu bật chồi Kí hiệu ĐT1 ĐT2 ĐT3 ĐT4 Vị trí đoạn thân Đoạn thân già cách gốc 5cm Đoạn thân mầm Đoạn thân mầm thật Đoạn thân thật thật Từ kết bảng nhận thấy hàm lượng sucrose hàm lượng agar ảnh hưởng đến thời gian trung bình xuất rễ mầm, thời gian trung bình xuất mầm chiều cao trung bình Hạt nảy mầm nhanh nhất, tương ứng với thời gian xuất rễ mầm (2,11-2,15 ngày) mầm (11-11,23 ngày) sớm gieo môi trường chứa 20g/l sucrose Thời gian kéo dài hàm lượng đường giảm xuống 10g/l hay tăng lên 30g/l Cụ thể, thời gian xuất mầm tăng thêm ngày môi trường chứa 10g/l sucrose tăng lên 15-21 ngày môi trường chứa 30g/l sucrose Kết nghiên cứu hàm lượng sucrose ảnh hưởng đến chiều cao trung bình sau tuần theo dõi Cụ thể, với hàm lượng đường 10g/l công thức CT1 CT4 chiều cao dao động từ 8,89 cm đến 8,92 cm Khi lượng đường tăng lên 20g/l chiều cao trung bình tăng lên từ 4,43 cm đến 5,6 cm Tiếp tục tăng lượng đường lên 30g/l chiều cao trung bình lại giảm xuống công thức CT3 CT6, với giá trị đo dao động từ 6,69 cm đến 9,86 cm Như thấy, việc tăng hàm lượng sucrose khiến thời gian trung bình xuất rễ mầm mầm 124 Tỉ lệ mẫu bật chồi (%) 1,31a ± 0,20 3,05a ± 0,30 51,67b ± 3,05 72,22c ± 3,68 dài ra, đồng thời chiều cao giảm xuống Kết việc tăng hàm lượng sucrose dẫn tới tăng khả giữ nước mơi trường, gây khó khăn cho việc hấp thụ nước hạt trình nảy mầm Về ảnh hưởng hàm lượng agar kết bảng cho thấy, với hàm lượng đường khác hàm lượng agar cặp công thức CT1 – CT3, CT2 – CT5, CT3 – CT6 khơng nhận thấy sai khác rõ ràng mặt thống kê tiêu Song việc bổ sung hàm lượng agar 7g/l vào môi trường ni cấy có xu hướng tạo có chiều cao tốt Kết liên quan đến phát triển hệ rễ mơi trường có hàm lượng agar khác Từ kết nghiên cứu thu được, lựa chọn công thức CT5 (MS chứa 20 g/l sucrose g/l agar) môi trường để gieo hạt 3.3 Ảnh hưởng vị trí đoạn thân tới tỉ lệ mẫu tái sinh tạo chồi Tuổi mô khác ảnh hưởng đến khả tái sinh tạo chồi, thơng thường, mơ non có khả tái sinh phân chia tế bào cao so với mô già Kết nghiên cứu ảnh hưởng vị trí đoạn thân sacha inchi đến khả tạo chồi thể bảng http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ ĐHTN 207(14): 121 - 128 ĐT1 ĐT2 ĐT4 ĐT3 Hình Đoạn thân vị trí khác tái sinh mơi trường tạo chồi Bảng Ảnh hưởng tỉ lệ IBA/BAP đến hiệu tạo chồi chất lượng chồi từ đoạn thân in vitro sacha inchi Nồng Nồng Chỉ tiêu theo dõi Công độ BAP độ IBA Tỉ lệ mẫu nảy Số chồi TB Chiều cao chồi Số thức (mg/l) (mg/l) chồi (%) đoạn thân TB (cm) TB/chồi T1 0,1 63,33cd ± 1,54 3,33c ± 0,23 1,72d ± 0,25 2,80c ± 0,15 d d d T2 0,1 0,1 76,67 ± 1,85 4,67 ± 0,61 1,75 ± 0,26 2,50c ± 0,17 cd c d T3 0,1 0,3 64,03 ± 1,12 3,29 ± 0,31 1,69 ± 0,36 2,59c ± 0,24 b b a T4 0,3 46,67 ± 1,06 1,93 ± 0,33 1,15 ± 0,21 1,50ab ± 0,17 c bc b T5 0,3 0,1 50,00 ± 1,10 2,53 ± 0,21 1,35 ± 0,04 1.49ab ± 0,12 b b a T6 0,3 0,3 47,05 ± 1,18 2,05 ± 0,40 1,16 ± 0,04 1,50ab ± 0,17 a a a T7 0,5 23,33 ± 2,01 1,20 ± 0,30 1,13 ± 0,07 1,81b ± 0,17 a a a T8 0,5 0,1 24,57 ± 1,96 1,26 ± 0,23 1,20 ± 0,09 1,48ab ± 0,16 a a a T9 0,5 0,3 24,02 ± 1,85 1,19 ± 0,28 1,14 ± 0,09 1,49ab ± 0,10 Kết nghiên cứu cho thấy, độ già đoạn thân tỉ lệ nghịch với số mẫu bật chồi Trong điều kiện môi trường nuôi cấy, đoạn thân già cách gốc cm đoạn thân mầm cho kết tỉ lệ mẫu bật chồi thấp, dao động từ 1,31% đến 3,05% Trong khi, đoạn thân mầm thật cho tỉ lệ mẫu bật chồi 51,67%, cao 48,62% so với đoạn thân mầm Tỉ lệ mẫu bật chồi tiếp tục tăng, đạt giá trị cao (72,22%) sử dụng đoạn thân thật thật 2, cao gấp 55 lần so với đoạn ĐT1, cao gấp 23 lần so với đoạn ĐT2 cao gấp 1,4 lần so với đoạn ĐT3 Kết giải thích sau: Với vị trí đoạn ĐT1 ĐT2 đoạn thân mà có chứa mơ già, mạch dẫn bắt đầu hóa gỗ, khả phản phân hóa để tái sinh phân chia nên cho tỉ lệ bật chồi thấp Trong khi, đoạn thân mầm thật http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn đoạn thân thật thật hình thành sau, chứa mô mềm phần mô sinh dễ dàng phân chia tái sinh, tạo chồi mới, đặc biệt đoạn thân ĐT4 (Hình 1) Với kết này, đoạn thân thật thật sử dụng làm vật liệu cho các bước tái sinh chồi in vitro sacha inchi 3.4 Ảnh hưởng tỉ lệ IBA/BAP đến hiệu tạo chồi chất lượng chồi từ đoạn thân sacha inchi Auxin cytokinin nhóm hoocmon kích thích sinh trưởng thực vật, chúng sử dụng rộng rãi nuôi cấy mô tế bào nhằm thúc đẩy sinh trưởng mẫu hoạt hóa phân chia giãn tế bào Trong nhân giống in vitro tỉ lệ auxin/cytokinin có ảnh hưởng lớn đến phân hóa, hình thành chồi từ mô nuôi cấy 125 Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 207(14): 121 - 128 T9 T5 T2 Hình Hình ảnh mẫu cấy sau tuần nuôi môi trường tái sinh tạo đa chồi T1 Kết thu trình bày bảng 4, hình cho thấy, hàm lượng BAP nồng độ thấp có ảnh hưởng tích cực đến hình thành chồi đoạn thân sacha inchi Cụ thể, mơi trường có bổ sung BAP với nồng độ 0,1 mg/l (T1, T2 T3) tỉ lệ mẫu tạo chồi thu dao động từ 63,33% đến 76,67% Tuy nhiên, nồng độ BAP tăng lên, khả tạo chồi chất lượng chồi tạo lại giảm xuống, nói cách khác, BAP nồng độ cao ức chế hình thành chồi đoạn thân sacha inchi Ở nồng độ 0,5 mg/l BAP, đoạn thân có xu hướng bị mơ sẹo hóa, mẫu hóa nâu khả tái sinh Kết là, mẫu tạo chồi đạt từ 23,33%-24,57% Mặt khác, đoạn thân tái sinh cho số lượng chồi thấp (1,19-1,26 chồi/mẫu), chiều cao số trung bình mẫu nhỏ Kết tương tự với kết công bố nghiên cứu Reynaldo cộng (2018) [9] tiến hành nhân giống in vitro sacha inchi từ mô phân sinh đỉnh Nghiên cứu cho thấy, việc bổ sung thêm IBA vào mơi trường ni cấy có tác dụng hỗ trợ tích cực cho khả tái sinh đoạn thân Song, với nồng độ IBA nghiên cứu 0; 0,1 0,3 mg/l nồng độ 0,1 mg/l cho kết tích cực tiêu theo dõi Cụ thể, mơi trường có 0,1 mg/l IBA, số lượng mẫu tạo chồi số chồi trung bình mẫu có xu hướng tăng lên so với mơi trường có BAP khơng có IBA, chiều cao chồi số lá/chồi khơng có khác biệt nhiều cơng thức mơi 126 trường có bổ sung IBA nồng độ BAP Ví dụ so sánh tiêu nghiên cứu thu công thức T1với T2 hay công thức T4 với T5 Nhận thấy, công thức môi trường T2 với 0,1 mg/lBAP 0,1 mg/l IBA công thức phù hợp cho giai đoạn tái sinh tạo đa chồi từ đoạn thân sacha inchi Cụ thể, môi trường T2, tỉ lệ mẫu tạo chồi 76,67% cao gấp 3,12 lần mơi trường T8 (có bổ sung 0,5 mg/l BAP 0,1 mg/l IBA); số lượng chồi/mẫu cao nhất, đạt 4,67 chồi; chiều cao chồi số chồi tương đương với công thức môi trường T1 T2 với giá trị thu 1,75 cm 2,50 lá/chồi Trong nghiên cứu khác, tiến hành nhân giống sacha inchi in vitro từ mầm, Dong cộng (2016) [8] sử dụng mơi trường MS có bổ sung BAP với nồng độ lên tới mg/l kết hợp với 0,2 mg/l IBA cho việc tái sinh tạo chồi mẫu cấy Hình Ảnh hưởng IBA đến tỉ lệ mẫu tạo rễ chồi sacha inchi sau tuần ni cấy 3.5 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng IBA đến hiệu tạo rễ chất lượng rễ sacha inchi http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN 207(14): 121 - 128 Bảng Ảnh hưởng IBA đấn hiệu tạo rễ chồi sacha inchi sau tuần Công thức R1 R2 R3 Nồng độ IBA (mg/l) 0,5 1,0 Thời gian trung bình bắt đầu rễ (ngày) 0a b 15,07 ± 0,15 15,73b ± 0,32 Số lượng rễ TB/ chồi Chiều dài rễ (cm) Tăng chiều cao chồi (cm) 0a 5,85 ± 0,05 3,97b ± 0,21 0a 3,19 ± 0,04 2,58b ± 0,86 0,15a ± 0,06 2,36c ± 0,72 1,90b ± 0,15 IBA thường sử dụng làm chất điều hòa sinh trưởng để kích thích phát sinh rễ hình thức nhân giống sinh dưỡng [6] nhân giống in vitro [8, 9] Trong thí nghiệm này, chúng tơi tiến hành bổ sung IBA với nồng độ 0; 0,5 mg/l môi trường MS Sau tuần theo dõi, kết mơ tả hình Cụ thể, công thức R1 không bổ sung IBA mẫu cấy khơng tạo rễ (0%) Khi tăng nồng độ IBA lên 0,5 mg/l cơng thức R2 tỉ lệ mẫu tạo rễ tăng lên 90% Sau đó, tiếp tục tăng nồng độ IBA lên 1mg/l tỉ lệ mẫu tạo rễ giảm xuống 63,33% Như vậy, thấy nồng độ thích hợp, IBA kích thích khả tạo rễ chồi Để xác định nồng độ IBA cho hiệu tạo rễ chất lượng rễ cao nhất, tỉ lệ mẫu tạo rễ, số tiêu khác theo dõi kết bảng Trong mơi trường khơng có IBA (R1), chồi sacha inchi không phát sinh rễ sau tuần nuôi cấy Khi bổ sung IBA với nồng độ 0,5 mg/l vào môi trường nhận thấy, rễ xuất sau 15,07 ngày, số rễ trung bình/chồi thu 5,85 rễ với chiều dài rễ 3,19 cm sau 60 ngày nuôi môi trường, chồi cao thêm 2,36 cm Trong thời gian để chồi sacha inchi cảm ứng tạo rễ gần không đổi (15,73 ngày) tăng nồng độ IBA lên mg/l chất lượng tạo lại có xu hướng giảm xuống Cụ thể, môi trường R3, số rễ/chồi đạt trung bình 3,97 rễ, thấp 1,88 rễ so với chồi ni mơi trường R2 Bên cạnh đó, chiều dài rễ giảm, đạt 2,58 cm/rễ sau 60 ngày nuôi cấy, chồi cao thêm 1,90 cm Việc tăng nồng độ IBA (từ 0,2% đến 0,8%) làm giảm tỉ lệ mẫu tạo http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn c c rễ, chiều dài rễ cành giâm sacha inchi kết nghiên cứu Cachique cộng (2011) [6] Kết luận Hạt sacha inchi khử trùng NaOCl 5% 30 phút cho tỉ lệ mẫu nảy mầm cao đạt 78,29% Môi trường MS bổ sung 20 g/l sucrose +7 g/l agar cho thời gian trung bình xuất rễ mầm mầm ngắn chiều cao trung bình đạt 14,52 cm Đoạn thân thật thật nảy mầm từ hạt sacha inchi cho khả tái sinh tạo đa chồi cao vị trí nghiên cứu, với tỉ lệ mẫu tái sinh 72,22% Sau tuần nuôi cấy, mơi trường MS có bổ sung 0,1 mg/l BAP kết hợp với 0,1 mg/l IBA công thức tái sinh chồi phù hợp cho đoạn thân, với tỉ lệ mẫu tạo chồi 76,67%, số lượng chồi/mẫu cao nhất, đạt 4,67 chồi; chiều cao chồi số chồi 1,75 cm 2,50 lá/chồi Với mơi trường tạo rễ, cơng thức MS có bổ sung 0,5 mg/l IBA môi trường tối ưu với tỉ lệ chồi rễ đạt 90%, số lượng rễ trung bình đạt 5,85 rễ/chồi TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Gogus U., Smith C., “3 Omega fatty acids: a review of current knowledge”, Int J Food Sci Technol., vol 45, no 3, pp 417-436, 2010 [2] Hanssen H., Schmitz-Hübsch M., “Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) nut oil and its therapeutic and nutritional uses”, Academic Press, San Diego, pp 991-994, 2011 [3] Cabral F A., Follegatti-Romero L A., Piantino C R., Grimaldi R., “Supercritical CO2 extraction of omega-3 rich oil from Sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) seeds”, J Supercrit Fluid, vol 49, no 3, pp 323–329, 2009 [4] Gonzales G F., Gonzales C., “A randomized, double-blind placebo-controlled study on acceptability, safety and efficacy of oral 127 Lê Thị Thủy Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ĐHTN administration of sacha inchi oil (Plukenetia volubilis L.) in adult human subjects”, Food Chem Toxicol., vol 65, pp 168-76, 2014 [5] Edwin D B H., Luz A U M., Luis F R B., “Effect of adding sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) seeds to a prototype of convenience food draft, on the nutritional composition and sensory acceptance”, Academic journals, vol 10, no 29, pp 435-441, 2016 [6] Cachique D., Rodriguez A., Ruiz-solsol H., Vallejos G., Solis R., “Vegetative propagation of sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) by rooting of juvenile cuttings in sub-irrigated chamber in the Peruvian Amazon”, Folia Amazónica, vol 20, pp 95-100, 2011 [7] Bordignon S R., Ambrosano G B M., Viegas rodrigues P H., “In vitro propagation of Sacha 128 207(14): 121 - 128 inchi”, Ciência Rural, vol 42, pp 1168-1172, 2012 [8] Dong Y., Chen M., Wang X., Niu L., Fu Q., Xu Z., “Establishment of In Vitro Regeneration System of Woody oil Crop Plukenetia volubilis”, Molecular Plant Breeding, vol 14, no 2, pp 462470, 2016 [9] Reynaldo S., Danter C., Juan C., Guerrero A., María E R S., Lourdes T F., “In vitro propagation of sacha inchi through organogenesis”., Pesq agropec bras., vol 53, no 11, pp.1285-1288, 2018 [10] Viegas P H R., Bordignon S R, Ambrosano G M B., “Horticultural performance of in vitro propagated plants of Sacha inchi”, Ciência Rural, Santa Maria, vol 44 no 6, pp 1050-1053, 2014 http://jst.tnu.edu.vn; Email: jst@tnu.edu.vn ... giống trồng từ hạt Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu Trong nghiên cứu này, hạt sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) thu từ 1,5 năm tuổi trồng Vườn thực nghiệm Khoa Sinh học, Trường đại... nhân giống in vitro sacha inchi 2.2 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu thực Bộ môn Sinh lý học thực vật Ứng dụng, Bộ mơn Di truyền-Hóa sinh, Khoa Sinh học, Trường đại học Sư phạm Hà Nội từ tháng... cho nghiên cứu tạo đa chồi từ đoạn thân 2.2.3 Phương pháp tạo đa chồi từ đoạn thân Đoạn thân (kích thước 1-1,5 cm) vị trí khác nuôi cấy đánh giá chất lượng thông qua tỉ lệ mẫu tạo chồi Đoạn thân