Mục tiêu của nghiên cứu là phân lập, xác định đặc điểm của vi khuẩn Av. paragallinarum gây bệnh trên gà và khả năng mẫn cảm của vi khuẩn với kháng sinh. Trong tổng số 13 mẫu phân lập, 10 mẫu được xác định là Av. paragallinarum (76,92%) thông qua cách quan sát hình thái khuẩn lạc nghi ngờ, nhuộm Gram và xét nghiệm các phản ứng sinh hóa (phản ứng catalase, oxidase, urease, indole; khả năng lên men một số đường: maltose, lactose, mannitol, sorbitol, khả năng di động). Khả năng phát triển của các chủng phân lập được từ gà không phụ thuộc vào nicotinamide adenine dinucleotide (NAD). Thử nghiệm khả năng mẫn cảm của các chủng vi khuẩn phân lập được với kháng sinh bằng cách nuôi trên môi trường thạch Mueller Hilton và bổ sung các tấm giấy tẩm kháng sinh, ủ ở điều kiện 37C, 5% CO2 trong thời gian từ 24 đến 48 giờ cho thấy 100% các chủng được thử nghiệm mẫn cảm với kháng sinh amoxicillin, ampicillin; 60% vi khuẩn mẫn cảm với kháng sinh neomycin, penicillin; 40% vi khuẩn mẫn cảm với streptomycin; 100% vi khuẩn đề kháng với các loại kháng sinh erythromycin, gentamycin, tetracyclin, kanamycin và enrofloxacin.
Vietnam J Agri Sci 2019, Vol 17, No 8: 622-629 Tạp chí Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam 2019, 17(8): 622-629 www.vnua.edu.vn PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN GÂY BỆNH SỔ MŨI TRUYỀN NHIỄM TRÊN GÀ TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM Lê Văn Hùng*, Nguyễn Thị Giang, Trần Danh Sơn Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam * Tác giả liên hệ: hunglv@vnua.edu.vn Ngày chấp nhận đăng: 22.10.2019 Ngày nhận bài: 19.07.2019 TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu phân lập, xác định đặc điểm vi khuẩn Av paragallinarum gây bệnh gà khả mẫn cảm vi khuẩn với kháng sinh Trong tổng số 13 mẫu phân lập, 10 mẫu xác định Av paragallinarum (76,92%) thơng qua cách quan sát hình thái khuẩn lạc nghi ngờ, nhuộm Gram xét nghiệm phản ứng sinh hóa (phản ứng catalase, oxidase, urease, indole; khả lên men số đường: maltose, lactose, mannitol, sorbitol, khả di động) Khả phát triển chủng phân lập từ gà không phụ thuộc vào nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) Thử nghiệm khả mẫn cảm chủng vi khuẩn phân lập với kháng sinh cách nuôi môi trường thạch Mueller Hilton bổ sung giấy tẩm kháng sinh, ủ điều kiện 37C, 5% CO2 thời gian từ 24 đến 48 cho thấy 100% chủng thử nghiệm mẫn cảm với kháng sinh amoxicillin, ampicillin; 60% vi khuẩn mẫn cảm với kháng sinh neomycin, penicillin; 40% vi khuẩn mẫn cảm với streptomycin; 100% vi khuẩn đề kháng với loại kháng sinh erythromycin, gentamycin, tetracyclin, kanamycin enrofloxacin Từ khóa: Av paragallinarum, phân lập, kháng kháng sinh Isolation and Identification of Avibacterium paragallinarum from Chickens in North of Vietnam ABSTRACT Infectious coryza (IC) is an infectious upper respiratory disease affecting chickens and it is caused by Haemophilus paragallinarum (or Avibacterium paragallinarum) The symptoms of IC are facial swelling, malodorous nasal discharge and lacrimation This study aimed to isolate, identify the Av paragallinarum of snot in chickens and to determine the sensitivity and resistance to several antibiotics Ten isolates out of thirteen suspected isolates (76,92%) were Av paragallinarum by the observation of the morphology of the suspected colony, Gram staining, and biochemical tests (catalase test, oxidase test, urease test, indole test; carbohydrate fermentation such as maltose, lactose, mannitol and sorbitol; motility) The growth of isolates from chickens was not depended on the nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) Sensitivity test was done using the ten identified Av paragallinarum isolates that were cultured on Mueller-Hinton agar and added with antibiotic discs, then incubated in 5% CO2 at 37C for 24-48h; results showed that they were 100% sensitive to amoxicillin, ampicillin; 60% sensitive to neomycin, penicillin and 40% sensitive to streptomycin; 100% resistant toward erythromycin, gentamycin, tetracyclin, kanamycin and enrofloxacin Keywords: Av paragallinarum, isolation, antibiotic resistance ĐẶT VẤN ĐỀ Sổ müi truyền nhiễm gà (Infectious coryza - IC) bệnh truyn nhim ỵng hụ hỗp trờn cỷa g vi khuốn Haemophilus paragallinarum (H paragallinarum) gõy nờn hay cũn ỵc gi l Avibacterium paragallinarum 622 (Av paragallinarum) Bnh thỵng gõy cỏc dỗu hiu lồm sng nhỵ: giõm khõ nởng tởng trng, giõm sõn lỵng trng t 10% n 40% (Blackall & cs., 1997); tởng s lỵng g loọi thõi, giõm lỵng c th, t l t vong khoõng 210% (Blackall & cs., 2005) nờn õnh hỵng ln n kinh tế cûa số quốc gia (Blackall & Văn Hùng, Nguyễn Thị Giang, Trần Danh Sơn cs., 1997) Bnh rỗt quan trng ngnh chởn nuụi g cỏc nỵc phỏt trin v cỏc nỵc ang phỏt trin (Ariyanti & Supar., 2007) Bnh cú th ỵc tỡm thỗy trờn ton th gii, c bit cỏc nỵc nhit đĆi (Wahyuni & cs., 2018) Tuy nhiên, việc điều trị bnh gp nhiu khú khởn nhiu khỏng sinh ỵc sā dýng chỵ làm giâm mĀc độ nghiêm trọng mà khơng có khâ nëng điều trị khơi hồn tồn Nếu điều trị lðp lðp läi sơ dén đến tình träng kháng kháng sinh (Tabbu, 2000) Do vêy, việc xác định khâ nëng mén câm cûa vi khuèn vĆi kháng sinh quan trọng, làm cĄ sć khoa học để xây dăng phác đồ điều trị bệnh hiệu quâ Việt Nam quốc gia phát triển, chën nuôi chỵa tờp trung m chỷ yu theo quy mụ h gia đình hc chën ni nhơ ló, khí hêu nhiệt i giú nờn rỗt thuờn li cho bnh phỏt triển (Wahyuni & cs., 2018) Các nghiên cĀu bệnh chỵa nhiu, bnh thỵng ng nhim vi mt s bnh khỏc nhỵ Ornithobacterium rhinotracheale (ORT), H9N2, Mycoplasma gallisepticum gồy khú khởn cụng tỏc chốn oỏn lồm sng cỹng nhỵ phòng thí nghiệm HĄn nĂa, vi khn ngày kháng vĆi nhiều loäi kháng sinh, làm giâm hiệu quâ phác đồ điều trị Do vêy, nghiên cĀu phân lêp, xỏc nh c im cỷa vi khuốn gõy bnh sỵng phù đæu đàn gà xác định khâ nëng mén câm cûa vi khuèn vĆi số kháng sinh, cung cỗp c s khoa hc xõy dng phỏc điều trị bệnh hiệu q täi số tỵnh phía bíc Việt Nam cỉn thiết bối cânh PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cu Mộu ỵc s dýng nghiờn cu ny bao gồm: Dịch xoang hốc mít, dịch tiết khí quân hoðc tỳi khớ Mụi trỵng, húa chỗt s dýng nghiờn cĀu gồm có: Blood Agar Base (Merck); Brain Heart Broth (Merck); Mueller-Hilton Agar (MHA, Oxoid™); Catalase (Hydrogen peroxide 3%, Merck); Oxidase (Remel); Kovacs/Indol (Merck); Ure (BD; cỏc loọi ỵng: Maltose (Merck), Lactose (Merck), Mannitol (Merck), Sorbitol (Merck); Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD, Sigma); Kit nhuộm Gram (Merck); huyết thai bò (FBS - Fetal bovine serum, Gibco); Kit chiết tách DNA: QIAamp DNA Mini Kit cûa Hãng QIAGEN (QIAGEN Inc., USA); GoTaq PCR green (Promega) Các loäi kháng sinh: amoxicillin (Ax), ampicillin (Am), chloramphenicol (Cl), trimethoprime (Bt), erythromycin (Er), gentamycin (Ge), tetracycline (Te), kanamycin (Kn), enrofloxacin (En), neomycin (Ne), streptomycin (Sm), penicillin (Pn) cụng ty Nam Khoa cung cỗp Trang thiết bị cỉn thiết khác phòng thí nghiệm s dýng nghiờn cu gm cú: Tỷ ỗm 37C, 5% CO2; Cabinet vô trùng, máy PCR, máy Vortex, tû lọnh dỵng, tỷ lọnh õm 86C; dýng cý bõo h lao động… 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 PCR (Polymerase chain reaction) DNA ỵc chit tỏch t mộu bỡng cỏch sā dýng kít chiết tách DNA: QIAamp DNA Mini Kit cûa Hãng QIAGEN (QIAGEN Inc., USA) theo quy trình hỵng dộn cỷa nh sõn xuỗt DNA chuốn ỵc chit tách tÿ vacxin vơ hột phòng bệnh sổ müi truyền nhim (Bayovacđ Poulshotđ Coryza) cụng ty Bayer cung cỗp K thuờt PCR ỵc s dýng khuch ọi oọn gen 16S rDNA cûa vi khuèn Av paragallinarum, vĆi cðp mồi F: 5’-TGAGGGT AGTCTTGCACGCGAAT-3’; R: 5’-CAAGGTATC GATCGTCTCTCTACT-3’; sân phèm PCR có độ dài 500 bp (Chen & cs., 1996) Thành phỉn cûa phân Āng PCR gồm: 5,5 µL nuclease-free water, 12,5 µL GoTaq green, µL reverse primer, µL forward primer, µL khn méu DNA Chu trình nhiệt ỵc thc hin gm bỵc: tin bin tớnh nhiệt độ 95°C phút; chu kỳ lðp läi 35 lỉn: Biến tính ć nhiệt độ 94°C 30 giây, gín mồi ć 53°C 30 giây, tổng hợp kéo dài ć 72°C 60 giây; hoàn thành ć 72C phỳt Sõn phốm PCR ỵc in di gel 1,2% (TBE 1X) vĆi thang DNA chuèn 100 bp (marker) Sā dýng nguồn điện di ć hiệu điện th 100 V cỵng 100 mA, thi gian chọy điện di 35 phút 623 Phân lập, xác định đặc điểm vi khuẩn gây bệnh sổ mũi truyền nhiễm gà số tỉnh phía bắc Việt Nam 2.2.2 Nuôi cấy vi khuẩn 2.2.4 Xử lý số liu Mộu bnh phốm ỵc lỗy, x lý da theo TCVN 8400-18:2014 v nuụi cỗy trờn mụi trỵng thọch mỏu, sā dýng 5% máu thô hoðc 5% máu cÿu; kèm hoc khụng kủm ỵng cỗy Staphylococcus aureus (S aureus) (Blackall & cs., 2008); ć điều kiện hiếu khí 37C, 5% CO2, thąi gian 24-48 gią (Markey & cs., 2013) Cỏc khuốn lọc v tinh xung quanh ỵng cỗy S aureus hc nhĂng khn läc nhơ, tròn, trĄn, suốt ỵc nhum bỡng phỵng phỏp Gram, th cỏc phõn ng sinh hóa (Blackall, 1983); đánh giá khâ nëng phý thuộc vào yếu tố V (bổ sung 25 µg/mL Nicotinamide adenine dinucleotide NAD, 1% FBS) (Fernandes & cs., 2000) Các tỵ l ỵc tớnh toỏn phổn mm Excel, phổn mm Minitab 16 2.2.3 Khỏng sinh S dýng phỵng phỏp khuếch tán thäch để kiểm tra mĀc độ mén câm vĆi kháng sinh cûa chûng Av paragallinarum Các khoanh giỗy tốm khỏng sinh ỵc s dýng amoxicillin (10 µg), ampicillin (10 µg), chloramphenicol (30 µg), trimethoprime (1,25 µg), erythromycin (15 µg), gentamycin (10 µg), tetracycline (30 µg), kanamycin (30), enrofloxacin (50 µg), neomycin (30 µg), streptomycin (10 µg), penicillin (100/3 µg) Kết quâ đánh giá khâ nëng mén câm cûa vi khuèn vĆi kháng sinh dăa tiêu chuèn cûa CLSI (2012) dành cho vi khuèn khó mọc KẾT QU VÀ THÂO LUẬN 3.1 Thông tin kết quâ sàng lọc mẫu kỹ thuật PCR Kết quâ sàng lọc 46 méu gà nghi míc bệnh Coryza ć lĀa tuổi, quy mô chën nuôi ć cỏc a phỵng khỏc bỡng k thuờt PCR cho thỗy cú 13 mộu dỵng tớnh vi cp mi khuch đäi độn gen 16S rDNA (Hình 1) Gà ć lĀa tuổi khác có nguy cĄ míc bệnh Theo Yamamoto (1991), gà ć lĀa tuổi míc bnh, nhỵng bnh thỵng ớt nghiờm trng non Thi k ỷ bnh thỵng ngớn v quỏ trỡnh bnh kũo di hn trỵng thnh, c bit l gà mái trĀng Mðt khác, gà hoðc chỵa ỵc tiờm phũng u cú nguy c mớc bnh Theo Poernomo (2000), mc dự n g ó ỵc tiờm phòng vacxin phòng bệnh (chûng A C), nhiên q trình nghiên cĀu vén phát gà míc bệnh vi chỷng ó ỵc tiờm phũng Trong nghiờn cu ny, tác giâ cüng chỵ rìng tiêm vacxin phòng bệnh chûng A C khơng có khâ nëng bâo hộ chéo cho chûng B Bâng Thông tin kết quâ sàng lọc 13 mẫu dương tính sử dụng nghiên cứu Codes Năm Vùng Quy mô Tuổi (Tuần) Vacxin Kết PCR TB-03 2016 Thái Bình 6.000 Không HY-01 2016 Hưng Yên 2.000 24 Không 18 Có * 1 TNg-02 2017 Thái Nguyên 5.000 TNg-05 2017 Thái Nguyên 5.000 18 Có * VP-01 2018 Vĩnh Phúc 12.000 12 Có * Có * * VP-06 2018 Vĩnh Phúc 12.000 12 VP-10 2018 Vĩnh Phúc 12.000 12 Có BG-01 2019 Bắc Giang 6.000 35 Không BG-02 2019 Bắc Giang 6.000 35 Không BG-04 2019 Bắc Giang 6.000 35 Không 17 Có * 1 HN-02 2019 Hà Nội 10.000 HN-04 2019 Hà Nội 10.000 17 Có * HN-07 2019 Hà Nội 10.000 17 Có * Ghi chú: - Kết sàng lọc mẫu dương tính với cặp mồi (Chen & cs., 1996); Gà tiêm phòng vacxin vi khuẩn Av paragallinarum vô hoạt (chủng A C) * 624 Văn Hùng, Nguyễn Thị Giang, Trần Danh Sơn Ghi chú: M-DNA Marker; - Đối chứng dương; - Đối chứng âm; 2, 3, 4, 5, - Mẫu sàng lọc Hình Kết quâ sàng lọc mẫu kỹ thuật PCR 3.2 Nuôi cấy giám định đặc tính sinh hóa khuẩn lạc nghi ngờ 3.2.1 Kt qu nuụi cy Trờn mụi trỵng thọch mỏu, Av paragallinarum hình thành nhĂng khn läc tròn, suốt, nhùn búng nhỵ nhng họt sỵng (Hỡnh 2) Vi khuốn cú khõ nởng sinh trỵng v phỏt trin chờm trờn mụi trỵng nuụi cỗy, sau 48 gi nuụi cỗy mi cú th phỏt hin ỵc khuốn lọc Av paragallinarum l vi khn Gram âm bít màu Mðt khác, nghiờn cu ny ó chợ rỡng, s sinh trỵng phát triển cûa vi khuèn Av paragallinarum không phý thuộc vào yếu tố NAD, có hay khơng có bổ sung ỵng cỗy S aureus Theo mụ tõ cỷa Wahyuni (2018), khuốn lọc cỷa vi khuốn trờn mụi trỵng thọch máu có däng tròn, trĄn, nhïn bóng suốt Vi khuốn ny cú tc tởng trỵng tỵng i chờm v cú th ỵc phỏt hin sau ỵc nuụi cỗy 36-48 gi (Muhammad & dan Sreedevi, 2015) Kt quõ nghiờn cu cỷa Akhter (2014) cho thỗy vi khuèn Av paragallinarum vi khuèn Gram âm, bít màu đô kết quâ cûa nghiên cĀu cüng phù hợp vĆi nghiên cĀu cûa Priya (2012) Nghiên cĀu cûa Hall (1955) chỵ rìng vi khn khơng cỉn NAD quỏ trỡnh sinh trỵng v phỏt trin điều kiện phòng thí nghiệm chúng có khâ nëng phỏt trin tt trờn mt s mụi trỵng c bõn nhỵ thọch khoai tõy v mụi trỵng thọch mỏu (Mushin & cs., 1977) 3.2.2 Kết giám định Kết quâ kiểm tra đðc tính sinh hóa cûa vi khn cho thỗy tng s 13 chỷng cho khuốn lọc nghi ngą 10 chûng (TB-03, TNg02, TNg-05, VP-06, VP-10, BG-01, BG-02, BG04, HN-02 HN-04) mang đæy đû đðc tớnh sinh hc c trỵng cho chỷng, ging nhỵ: phõn Āng Indol, catalase, oxidase, urease âm tính; vi khn có khõ nởng lờn men ỵng lactose, mannitol, maltose, sorbitol v chúng khơng có khâ nëng di động Kết q tỵng ng vi kt quõ nghiờn cu cỷa Blackall v Soriano (2008) Cú tng s 10 chỷng ỵc xác định vi khuèn Av paragallinarum có khâ nëng lờn men ỵng lactose chờm (TB-03, TNg05 v HN-02) Bỏo cỏo cỷa Akhter (2013) cho thỗy cỏc chỷng khỏc thỡ khõ nởng lờn men ỵng lactose khỏc Ba chỷng (HY-01, VP-01 v HN-07) phõn lờp ỵc cho thỗy să khác biệt khâ nëng lên men carbohydrate so vĆi chûng läi Các xét nghiệm sinh hóa khác cüng khỵng định chúng khơng phâi chûng vi khuốn Av paragallinarum cổn nghiờn cu Nhỵ vờy, nghiên cĀu này, nhóm tác giâ phån lêp ỵc 10 chỷng vi khuốn gõy bnh sỵng phự ổu ć gà 3.3 Khâ mẫn câm vi khuẩn với số loại kháng sinh Trong nghiên cĀu này, nhóm tác giâ đánh giá khâ nëng mén câm cỷa cỏc chỷng vi khuốn phõn lờp ỵc vi 12 loäi kháng sinh khác (Bâng 3) 625 Phân lập, xác định đặc điểm vi khuẩn gây bệnh sổ mũi truyền nhiễm gà số tỉnh phía bắc Việt Nam Bâng Kết quâ giám định đặc tính sinh hóa khuẩn lạc nghi ngờ phân lập từ gà Chủng VK I K L M Ma Mt O S U Tiêu chuẩn − − + + + − − + − * − − + + + − − + − HY-01 − + + + + + + + + − − + + + − − + − − − + + + − − + − VP-01 + + + + + + − + − VP-06 − − + + + − − + − VP-10 − − + + + − − + − BG-01 − − + + + − − + − BG-02 − − + + + − − + − − − + + + − − + − − − + + + − − + − HN-04 − − + + + − − + − HN-07 − + + + + + − + − TB-03 TNg-02 TNg-05 * BG-04 HN-02 * Ghi chú: VK = Vi khuẩn, K = Catalase, I = Indole, Ma = Maltose, O = Oxidase, Mt = Motility, L = Lactose, U = Urease, M = Mannitol, S = Sorbitol, *Chủng có khả lên men đường Lactose chậm Bâng Kết quâ nghiên cứu khâ mẫn câm vi khuẩn với kháng sinh Đường kính vòng vô khuẩn (mm) Chủng VK Ax Am Cl Bt Er Gn Te Kn En Ne Sm Pn TB-03 24 (S) 27 (S) (R) (R) 10 (R) 10 (R) (R) 10 (R) 18 (I) 19 (S) 16 (S) 20 (I) TNg-02 19 (S) 26 (S) 10 (R) 26 (S) (R) (R) (R) (R) 22 (I) 22 (S) (R) 16 (R) TNg-05 20 (S) 25 (S) 16 (I) 10 (R) (R) 10 (R) 10 (R) (R) 17 (I) 23 (S) (R) 10 (R) VP-06 31 (S) 28 (S) (R) (R) 10 (R) 10 (R) (R) 16 (I) 11 (R) 10 (R) 20 (S) 24 (I) VP-10 30 (S) 28 (S) (R) 12 (R) 10 (R) (R) 10 (R) (R) 12 (R) 18 (S) 19 (S) 26 (S) BG-01 28 (S) 23 (S) 12 (R) (R) 10 (R) 11 (R) 10 (R) (R) 18 (I) (R) (R) 30 (S) BG-02 28 (S) 23 (S) 22 (S) (R) (R) 10 (R) (R) (R) 13 (R) 23 (S) (R) 30 (S) BG-04 27 (S) 25 (S) 10 (R) (R) (R) 10 (R) 10 (R) 10 (R) (R) 20 (S) (R) 32 (S) HN-02 32 (S) 30 (S) (R) (R) 10 (R) (R) (R) 14 (I) 19 (I) 11 (R) 20 (S) 28 (S) HN-04 31 (S) 30 (S) (R) (R) (R) 11 (R) (R) (R) 11 (R) 10 (R) (R) 30 (S) Ghi chú: S = Sensitive, I = Intermediate, R = Resistant Các chûng vi khuèn Av paragallinarum nghiên cĀu mén câm cao vĆi kháng sinh amoxicillin ampicillin (100%) (Hình 3) Theo kết quâ nghiên cĀu cûa Wahyuni (2018), 5/5 chûng thā nghiệm mén câm vĆi loäi kháng sinh ny Rajurkar (2010) cho rỡng tỗt cõ cỏc chỷng phõn lờp ỵc mộn cõm vi 626 chloramphenicol, enrofloxacin, ampicillin v kanamycin Trong nghiên cĀu khác, tác giâ Poernomo (2000) cho bit 13 s 14 chỷng ỵc th nghim mén câm vĆi kháng sinh ampicillin Trong nghiên cĀu cüng chỵ số chûng vi khn phân lêp ỵc mộn cõm vi Vn Hựng, Nguyn Th Giang, Trn Danh Sơn kháng sinh neomycin, penicillin (60%) số chûng mén câm vĆi streptomycin (40%) Theo Fernandez (2000), thā nghiệm khâ nëng kháng kháng sinh cûa vi khuèn cho thỗy tỗt cõ cỏc chỷng u mộn cõm vi penicillin, ampicillin erythromycin Trong đó, Poernomo (2000) läi chỵ rìng có 10/14 chûng kháng vĆi neomycin, 11/14 chûng kháng vĆi streptomycin Rajurkar (2010) cho biết 100% cỏc chỷng phõn lờp ỵc khỏng vi streptomycin v tetracycline Kết quâ cûa nghiên cĀu cüng cho biết 100% chỷng vi khuốn phõn lờp ỵc khỏng vi khỏng sinh erythromycin, gentamycin, tetracyclin, kanamycin enrofloxacin Kết quâ nghiên cĀu phù hợp vĆi Wahyuni (2018) cho rìng tỷ lệ (%) vi khuèn kháng vĆi amikacin, erythromycin, gentamycin tetracyclin 100%; đối vĆi kháng sinh kanamycin, 4/5 chûng vi khuèn đề kháng vĆi thuốc, 1/5 chûng mén câm trung bình vĆi thuốc MĀc độ vi khuèn kháng thuc i vi erythromycin tỵng ỵng trờn 75% so vi cỏc nghiờn cu trỵc ú (Chukiatsiri & cs., 2012; Hsu & cs., 2007); đó, mĀc độ vi khuèn khỏng thuc cao i vi tetracyclin cỹng ỵc bỏo cỏo bi Thenmozi & Malmarungan (2013) mc trờn 70% Nhỵ vêy, chûng vi khuèn khác mĀc độ kháng thuốc khác vi khuèn có xu hỵng ngy cng khỏng vi nhiu loọi khỏng sinh iu ny cú th bnh thỵng ng nhim vi mt s vi khuốn gõy bnh ỵng hụ hỗp khỏc nhỵ ORT (Morales-Erasto & cs., 2015), Mycoplasma gallisepticum (Sarika & cs., 2019), H9N2 (Kishida & cs., 2004) Mðt khác, vi khuèn Av paragallinarum khó phân lêp, thąi gian phân lêp kòo di nờn ngỵi chởn nuụi thỵng iu tr da vo kinh nghim hoc quỏ trỡnh tỵ vỗn cỷa cỏc cụng ty thuốc mà khơng gāi méu đến phòng thí nghiệm để xét nghiệm, làm cĄ sć khoa học xây dăng phác đồ điều trị Bên cänh đó, lợi nhuên mang läi cao trình kinh doanh thuốc thú y nên số tổ chĀc, cá nhån tă mua nguyên liệu để pha chế bán thị trỵng, lm cho cỏc c quan quõn lý Nh nỵc khú kim soỏt cõ v s lỵng v chỗt lỵng Ngoi ra, mt b phờn ngỵi chởn nuụi khụng ỷ sĀc kiên trì theo dõi, thăc đúng, đû liệu trỡnh khỏng sinh nờn tụ núng vi, thỵng xuyờn thay đổi kháng sinh thąi gian ngín dén đến tình träng vi khn ngày kháng vĆi nhiều lội kháng sinh phäm vi ngày lan rộng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Vi khuèn Av paragallinarum phát trin tt trờn mụi trỵng thọch mỏu, cú hoc khụng cú b sung ỵng cỗy S aureus, khụng phý thuc vào yếu tố NAD Vi khuèn mang đðc điểm c trỵng cho loi, chỷng, ging nhỵ: l vi khuốn Gram âm; phân Āng indol, catalase, ure, oxidase âm tính; cú khõ nởng lờn men ỵng carbohydrate, khụng cú khõ nëng di động Hình Hình thái khuẩn lạc Av paragallinarum mơi trường thạch máu Hình Tính mẫn câm vi khuẩn Av paragallinarum với kháng sinh 627 Phân lập, xác định đặc điểm vi khuẩn gây bệnh sổ mũi truyền nhiễm gà số tỉnh phía bắc Việt Nam Vi khuèn mén câm cao vĆi hai lội kháng sinh amoxicillin ampicillin (100%), sā dýng loäi kháng sinh trình xây dăng phác đồ điều trị Vi khuèn đề kháng cao vĆi loäi kháng sinh gồm: erythromycin, gentamycin, tetracyclin, kanamycin enrofloxacin TÀI LIỆU THAM KHÂO Tiêu chuẩn Quốc gia, TCVN 8400-18 (2014) Bệnh động vật - Quy trình chẩn đốn - Phần 18: Bệnh phù đầu gà (Coryza) Akhter S., Ali M., Das P.M & Hossain M.M (2013) Isolation and identification of Avibacterium paragallinarum, the causal agent of infectious coryza (IC) from layer chickens in Bangladesh J Bangladesh Agric Univ 11: 87-96 Akhter S., Saha S., Khan K.A., Amin M.M & Haque M.E (2014) Isolation and identification of Avibacterium paragallinarum from layer chickens in Gazipur, Bangladesh Microbes Health 3: 9-11 Ariyanti T & Supar (2007) Pengendalian coryza infeksius pada ayam Wartazoa 17: 185-191 Blackall P.J (1983) An evaluation of methods for the detection of carbohydrate fermentation patterns in avian Haemophilus species Journal of Microbiological Methods 1: 275–281 Blackall P.J., Christensen H., Beckenham T., Blackall L.L & Bisgaard M (2005) Reclassification of Pasteurella gallinarum, Haemophilus paragallinaarum, Pasteurella avium and Pasteurella volantium as Avibacterium gallinarum gen nov., Avibacterium paragallinarum comb nov., Avibacterium avium comb nov and Avibacterium volantium comb nov Int J Syst Evol Microbiol 55: 353-362 Blackall P.J & Soriano, E.V (2008) Infectious coryza and related bacterial In: Disease of Poultry 12th ed Blackwell Publishing, Oxford pp 789-803 Chen X., Miflin J.K., Zhang P & Blackall P.J (1996) Development and application of DNA probes and PCR tests for Haemophilus paragallinarum Avian diseases 40(2): 398-407 Chukiatsiri K., Sasipreeyajan J., Blackall P.J., Yuwatanichsampan S & Chansiripornchai N (2012) Serovar identification, antimicrobial sensitivity and virulence of Avibacterium paragallinarum isolated from chickens in Thailand Avian Dis 56: 359-364 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) (2012) Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria 628 Isolated from Animals; Approved Standard, 3rd Ed M31-A3 CLSI, Wayne, PA Fernandez R.P., Garcia-Delgado G.A., Ochoa P & Soriano V.E (2000) Characterization of Haemophilus paragallinarum isolates from Mexico Avian Pathology 29(5): 473-476 Hall W.J., Heddleston K.L., Legenhausen D.H & Hughes R.W (1955) Studies on pasteurellosis I A new species of Pasteurella encountered in chronic fowl cholera Am J Vet Res 16: 598-604 Hsu Y.M., Shieh H.K., Chen W.H., Sun T.Y & Shiang J.H (2007) Antimicrobial susceptibility, plasmid profiles and haemocin activities of Avibacterium paragallinarum strains J Vet Microbiol 124: 209-218 Kishida N., Sakoda Y., Eto M., Sunaga Y & Kida H (2004) Co-infection of Staphylococcus aureus or Haemophilus paragallinarum exacerbates H9N2 influenza A virus infection in chickens Archives of virology 149(11): 2095-2104 Markey B.K., Leonard F.C & Archambault M (2013) Clinical Veterinary Microbiology Mosby Elseiver, Edinburgh pp 307-314 Morales-Erasto V., Falconi-Agapito F., Luna-Galaz G.A., Saravia L.E., Montalvan-Avalos A., SorianoVargas E.E & Fernandez-Diaz M (2015) Coinfection of Avibacterium paragallinarum and Ornithobacterium rhinotracheale in chickens from Peru Avian diseases 60(1): 75-78 Muhammad T.N & Sreedevi B (2015) Detection of Avibacterium paragallinarum by polymerase chain reaction from outbreaks of infectious coryza of poultry in Andhra Pradesh Veterinary world 8(1): 103 MushinR., Bock R & Abrams M (1977) Studies on Pasteurella gallinarum Avian Pathol 6: 415-423 Poernomo S., Sutarma M.R & Blackall P.J (2000) Characterization of isolates of Haemophilus paragallinarum from Indonesia Aust Vet J 78: 759-762 Priya P.M., Krishna S.V., Dineskhumar V & Mini M (2012) Isolation and characterization of Avibacterium paragallinarum from ornamental birds in Thrissur, Kerala Int J Life Sci 1: 87-88 Rajurkar G., Roy A & Yadav M.M (2010) Antimicrobial sensitivity pattern of Haemophilus paragallinarum isolated from suspected cases of infectious coryza in poultry Vet World 3(4): 177-181 Sarika N., Devigasri C., Surya Sankar & Mini M (2019) A report of natural concurrent infection with Avibacterium paragallinarum and Mycoplasma gallisepticum in chicken The Pharma Innovation Journal 8(1): 16-18 Văn Hùng, Nguyễn Thị Giang, Trần Danh Sơn Tabbu C.R (2000) Penyakit Ayam dan Penanggulangannya Kanisius, Yogyakarta 1: 14-20 Thenmozi V & Malmarungan S (2013) Isolation and Identification and Antibiogram Pattern of Avibacterium paragallinarum from Japanese Quails Tamil Nadu J Vet Anim Sci 9: 253-258 Wahyuni A.E., Tabbu T.H., Artanto C.R., Setiawan S.D.C.B & Rajaguguk S.I (2018) Isolation, identification, and serotyping of Avibacterium paragallinarum from quails in Indonesia with typical infectious coryza disease symptoms Veterinary world 11(4): 519 Yamamoto R (1991) Infectious coryza In: B.W Calnek H.J., Barnes C.W., Beard W.M., Reid & H.W Yoder Diseases of Poultry, 9th Ed Iowa State University Press, Ames, Iowa pp 186-195 629 ... gian chọy điện di 35 phút 623 Phân lập, xác định đặc điểm vi khuẩn gây bệnh sổ mũi truyền nhiễm gà số tỉnh phía bắc Vi t Nam 2.2.2 Nuôi cấy vi khuẩn 2.2.4 Xử lý số liu Mộu bnh phốm ỵc lỗy, x... khuẩn lạc Av paragallinarum mơi trường thạch máu Hình Tính mẫn câm vi khuẩn Av paragallinarum với kháng sinh 627 Phân lập, xác định đặc điểm vi khuẩn gây bệnh sổ mũi truyền nhiễm gà số tỉnh phía. .. lập, xác định đặc điểm vi khuẩn gây bệnh sổ mũi truyền nhiễm gà số tỉnh phía bắc Vi t Nam Bâng Kết quâ giám định đặc tính sinh hóa khuẩn lạc nghi ngờ phân lập từ gà Chủng VK I K L M Ma Mt O S U