khóa luận tốt nghiệp cao đẳng chuyên ngành dược. Giúp sinh viên có kiên thức cơ bản về phổ huỳnh quang, phương pháp phân tích bằng máy quang phổ huỳnh quang, ứng dụng quang phổ huỳnh quang vào phân tích. Tổng quan một số tài liệu đã nghiên cứu trong và ngoài nước về việc phân tích một số fluroquinolone trong dược phẩm và dịch sinh học và từ đó rút ra một số thành tựu nổi bật.
- - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TỔNG QUAN CƠ CHẾ PHÁT HUỲNH QUANG ỨNG DỤNG ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG KHÁNG SINH HỌ FLUOROQUINOLON TRONG DƯỢC PHẨM NGƯỜI THỰC HIỆN: KIM THỊ THU HÀ GV HƯƠNG DẪN: ThS NGUYỄN THỊ MINH DIỆP Việt Trì, ngày 30 tháng năm 2019 LỜI CẢM ƠN Xuất phát từ vai trò sinh viên ngành dược trường cao đẳng y-dược Phú Thọ với ham học hỏi, muốn tìm hiểu lĩnh vực phân tích dược phẩm phương pháp phổ huỳnh quang, em chọn đề tài “Tổng quan chế phát huỳnh quang - ứng dụng để định lượng kháng sinh họ fluoroquinolon dược phẩm” để làm khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Nguyễn Thị Minh Diệp mơn hóa-lý hết lòng hướng dẫn em suốt q trình tìm hiểu hồn thành khóa luận Đồng thời em xin cảm ơn thầy mơn Hóa lý bạn sinh viên khóa CD8 giúp đỡ em hồn thành khóa luận Với hiểu biết có hạn, khóa luận khó tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận góp ý kiến thầy cô, anh chị, bạn với người quan tâm để nội dung khóa luận hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Sinh viên Kim Thị Thu Hà MỤC LỤC I MỞ ĐẦU II TỔNG QUAN VỀ PHẢN ỨNG QUANG HÓA VÀ CƠ CHẾ PHÁT QUANG II.1 Các khái niệm II.2 Các trình xảy phân tử bị kích thích Giản đồ Jablonski .3 II.2.1 Các bước chuyển điện tử phân tử II.2.2 Giản đồ Jablonski II.3 Bản chất phản ứng quang hóa II.3.1 Điều kiện để xảy phản ứng quang hóa II.3.2 Các thông số phản ứng quang hóa II.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát quang .3 II.4 Phương pháp phổ huỳnh quang tĩnh huỳnh quang phân giải theo thời gian II.4.1 Mối quan hệ phổ huỳnh quang tĩnh huỳnh quang phân giải theo thời gian .3 II.4.2 Phương pháp huỳnh quang phân giải thời gian (time-resolved fluorescence) II.4.3 Phương pháp định lượng sở phản ứng hóa phát quang .3 III ỨNG DỤNG HIỆU ỨNG PHÁT HUỲNH QUANG TRONG PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG KHÁNG SINH HỌ FLUOROQUINOLONES .3 III.1 Tính chất quang số chất chất kháng sinh họ fluoroquinolones III.1.1 Tính chất quang số kháng sinh họ flouroquinolones hệ III.1.1.1-Công thức cấu tạo .3 III.1.1.2- Tính chất quang III.1.2 Một nghiên cứu khác tính chất quang kháng sinh họ flouroquinolone hệ III.2 Phân tích định lượng sở phản ứng quang hóa IV KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC H Hình 2- Các bước chuyển điện tử phân tử Hình 2- Giản đồ lượng Jablonski Hình 2- Hiện tượng huỳnh quang trễ Hình 2- Sự hấp thụ ánh sáng lớp mỏng Hình 2- So sánh phổ huỳnh quang tĩnh huỳnh quang phân giải theo thời gian3 Hình 2- Biểu diễn Stern-Volumer Hình 2- Các bước q trình định lượng phát quang hóa học Hình 2- Biêu diễn Stern-Volumer, phụ thuộc tỷ lệ cường độ phát quang (hoặc lifetime) nồng độ chất làm tắt huỳnh quang hai trường hợp tắt huỳnh quang động tắt huỳnh quang tĩnh YYHình 3- Cấu trúc chung quinolone fluoroquinolone……………………… Hình 3- Cơng thức cấu tạo (a) Norfloxacin; (b) Ciprofloxacin; (c) fleroxacin Hình 3- Phổ hấp thụ số FQs tiêu biểu, đệm phosphat nồng độ 5.10-3 M, pH 7.4, 20oC, .3 Hình 3- Phổ hấp thụ CIP nồng độ khác HCl 1-10M, C=5.10-5M Hình 3- Phổ huỳnh quang nhiệt độ phòng norfloxacin pH 1.2 (1); 3.4 (2); 7.4 (3) 10.8 (4) .3 Hình 3- Hiệu suất huỳnh quang Φ thời gian sống huỳnh quang τ Norfloxacin .3 Hình 3- Phổ phân giải theo thời gian CIP 10-5M, HCl 1M Hình 3- Phổ hấp thụ MOX (a) LEV (b) ─ACN, H2O, …PBS .3 Hình 3- Phổ huỳnh quang MOX (a), LEV (b) trongdung môi ─ACN, H2O, PBS Hình 3- 10 Phổ hấp thụ phân giải theo thời gian (a) MOX (b) LEV đệm PBS Hình 3- 11 Phổ huỳnh quang 4-FQ trước sau tạo phức với axit Cloranilic Hình 3- 12 Cơ chế dịch chuyển điện tử hình thành phức axit cloranilic với 4-FQs tương ứng (1)-LOM; (2)-FLE; (3)-CIP; (4)-NOR Hình 3- 13 Phổ kích thích phát xạ LEV (1µg/ml) (A) dung dịch chưa tạo mixen (B) dung dịch tạo mixen với SDS 8mM Hình 3- 14 Phổ phát xạ (a), phổ kích thích (b) Eu 3+–MOX–SDBS (1)Eu3+; (2)MOX; (3)Eu3+–MOX; (4)Eu3+–MOX–SDBS, pH 9.2 DANH MỤC BẢNG Bảng Đặc tính quang FQ dạng trung hòa dạng proton hóa, CFQ = 5.10-5M .3 Bảng Tính chất huỳnh quang MOX LEV dung môi Bảng 3 Điều kiện tối ưu kết định lượng FQs thuốc viên .3 Bảng Điều kiện tối ưu kết định lượng FQs thuốc viên .3 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT 10 11 Chữ viết tắt Tiếng anh FQs Fluoroquinolones UV-Vis Ultraviolet – visible Tia tử ngoại – khả kiến Nor Norfloxacin Norfloxacin CIP Ciprofloxacin Ciprofloxacin FLE Fleroxacin Fleroxacin LEV Levofloxacin Levofloxacin MOX Moxifloxacin Moxifloxacin PBS - Đệm muối phosphat ACN Acetonitril Acetonitril CL Cloranilic Cloranilic 7,7,8,8,TCNQ tetracyanoquino dimetan 12 13 14 15 SDS Sodium dodecyl sulfat Tiếng việt Kháng sinh họ fluoroquinolone 7,7,8,8,- tetracyanoquino dimetan Sodium (natri)dodecyl Sodium dodecyl benzen sulfat Sodium (natri) dodecyl sulfat benzen sulfat LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Lilit of quantitation Giới hạn định lượng SDBS 16 High Performance HPLC Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Q Quencher Chất làm tắt huỳnh quang IR Infra red Tia hồng ngoại F Fluorescence Huỳnh quang P Phosphorescence Lân quang VR Relaxation of vibration Sự phục hồi dao động A Adsorption Hấp thụ IC Internal conversion Chuyển hóa nội phân tử Internal and external Chuyển hóa nội ngoại conversion phân tử- dạng nhiệt ISC Intersystem crossing Kết hợp nội phân tử DF delay phosphorescence Huỳnh quang trễ S singlet Trạng thái đơn bội T Tripllet Trạng thái tam bội ADN Deoxyribonucleic acid Axit deoxy ribonucleic VN - Viên nén IEC 31 32 NT - Nước tiểu HT - Huyết I MỞ ĐẦU Fluoroquinolones (FQs) loại thuốc kháng sinh phổ rộng, có hiệu điều trị cao, thuốc dung nạp tốt tác dụng phụ tương đối hạn chế.FQs có nhóm hoạt động, chứa nguyên tử oxy ni tơ, chúng biết đến yếu tố cần thiết cho hoạt tính kháng khuẩn thuốc Tuy nhiên, có cải tiến mặt cấu trúc quinolone bổ sung nhóm có hoạt tính kháng khuẩn sinh khả dụng tốt hơn[1][2], dựa vào cấu trúc nhóm mà thời điểm FQs nghiên cứu phân loại đến hệ thứ với nhiều loại thuốc khác phù hợp cho đối tượng Đối với FQs dược phẩm,một số yêu cầu nghiêm ngặt cần phải cơng thức hàm lượng ghi nhãn nhà sản xuất, thuốc sử dụng điều trị cần phải biết q trình chuyển hóa, thải trừ, sinh khả dụng…, cần phải định lượng xác giai đoạn nghiên cứu điều chế thuốc Do việc nghiên cứu phương pháp định lượng FQs thuốc dịch sinh học (nước tiểu, huyết tương, huyết thanh…) nhà phân tích ngồi nước nghiên cứu từ lâu Có nhiều phương pháp định lượng FQs nghiên cứu thành cơng, có phương pháp phát quang, phương pháp định lượng chất phân tích dựa cường độ ánh sáng phát xạ Trong phương pháp phổ huỳnh quang, phản ứng hóa phát quang phản ứng quang hóa… Khơng nghiên cứu định lượng thơng thường mà nhà phân tích quan tâm tới tính chất quang, chế phản ứng, chế phát quang, để hiểu chất có cải tiến cho phương pháp để có kết xác, dễ thực giảm chi phí Trong chun đề chúng tơi tìm hiểu chế phát huỳnh quang nói chung phương pháp phân tích huỳnh quang Chủ yếu phản ứng quang hóavà ứng dụng chế vào định lượng FQs dược phẩm dịch sinh học, dựa nghiên cứu cơng nhận Về phát huỳnh quang phụ thuộc vào nguyên tử nito khác Ví dụ, phổ hấp thụ CIP dung dịch nước giá trị pH khác (HCl từ 1-10 M).Có thể thấy dải phổ tương ứng với chuyển tiếp π → π* n → π* nhạy với thay đổi pH Khi pH giảm dải có bước sóng ngắn tăng cường độ hấp thụ, ngược lại dải có bước sóng dài giảm cường độ Để giải thích khác biệt phổ phát quang phổ hấp thụ theo cấu trúc hình học cấu trúc electron, kết phân tích X-ray tinh thể FQ tổng hợp thực dung dịch acid mạnh [2] Hình 3- 4.Phổ hấp thụ CIP nồng độ khác HCl 1-10M, C=5.10-5M 2-Phổ huỳnh quang Phổ hấp thụ phụ thuộc lớn vào giá trị pH dung dịch, phản ánh phổ phát xạ huỳnh quang Sự phát huỳnh quang đáng kể mơi trường trung tính mơi trường acid vừa phải, phát xạ yếu môi trường ba zơ acid mạnh.Điều phù hợp với tồn phát huỳnh quang đáng kể dạng cation lưỡng tính, phát xạ dạng anion 20 Hình 3- 5.Phổ huỳnh quang nhiệt độ phòng norfloxacin pH 1.2 (1); 3.4 (2); 7.4 (3) 10.8 (4) [14] Ngồi pH gây thay đổi hiệu suất huỳnh quang thời gian sống huỳnh quang- lifetime Hình 3- 6.Hiệu suất huỳnh quang Φ thời gian sống huỳnh quang τ Norfloxacin.[14] 3-Phổ huỳnh quang phân giải theo thời gian [2]Ví dụ: quang phổ phân giải theo thời gian CIP dung dịch HCl 1M hình vẽ 3-7, kết cho thấy phổ phát quang cực đại λ=417nm dạng trung tính CIP, sau đến cực 21 đại thứ λ=445nm, dạng proton hóa CIPH.Bảng 3.1 thời gian sống CIP dạng trung tính, (pH 7.4) dạng proton hóa CIPH(pH 0) dạng diproton hóaCIPH Hình 3- 7.Phổ phân giải theo thời gian CIP 10-5M, HCl 1M Bảng 3.1 Đặc tính quang FQ dạng trung hòa dạng proton hóa, CFQ = 5.10-5M FQ CIP CIPH CIPH λabs, nm 273 277 277 λfl, nm 417 445 430 Φfl 0.12 0.18 0.09 τ,ns 5.0 1.5 0.7 kfl.10-7 5.8 5.5 13 Nói chung để nghiên cứu tính chất quang hóa kháng sinh họ FQ nhà nghiên cứu sử dụng phương pháp thực nghiệm hóa lượng tử Kết cho thấy tính chất quang phụ thuộc vào khả proton hóa chúng số nguyên tử nitơ vòng thơm, có số cặp e độc thân khác nhau, tương tác với liên kết π vòng thơm Kết tính tốn hóa học lượng tử chứng minh rằng, kích thích quang học FQs dẫn đến dịch chuyển mật độ điện tử phân tử.Định hướng 22 chúng phụ thuộc vào số proton vị trí trung tâm phản ứng FQs Mức độ proton hóa gây va chạm với vị trí có cặp e độc thân ni tơ, kết làm giảm tương tác spin-orbital n-electron với hệ liên hợp π vòng thơm A V Polishchukvà cộng tính tốn dạng anion lưỡng cực FQs đăc trưng π* →n (electron chuyển tiếp), dạng lại chuyển tiếp π*→π, điều chứng minh cho phụ thuộc phát quang vào giá trị pH dung dịch III.1.2 Một nghiên cứu khác tính chất quang kháng sinh họ flouroquinolone hệ 4.(levofloxacinvà moxifloxacin) Levofloxacin moxifloxacin làhai kháng sinh họ FQs nghiên cứu để đánh giá tính chất quang học để khám phá chế gây độc có ánh sáng Các thí nghiệm thực dung dịch nước phương pháp quang phổ trạng thái dừng phân giải theo thời gian ánh sáng đèn laser, để thu đường phân giải trạng kích thích thuốc trạng thái trung gian ngắn, chiếu xạ Kết thu cho thấy LEV có khả nhạy quang với phân rã hồng cầu cách độc lập với oxy Và MOX kháng sinh họ FQs thay nhóm –MeO vị trí thứ 8, độc hại so với FQs khác Thực nghiệm để làm sáng tỏ điều Giampietro Viola cộng thực [15] Với phạm vi chun đề, chúng tơi tìm hiểu phần tính chất quang hai hợp chất để làm sở cho mục đíchnghiên cứu định lượng 23 phương pháp quang hóa mà khơng đề cập đến khả gây độc tính hai chất bị chiếu xạ 1- Quang phổ hấp thụ Nghiên cứu phổ hấp thụ levofloxacin (LEV) moxifloxacin (MOX) acetonitril (ACN) dung dịch nước giá trị pH khác nhau, hình 3-8.Cả hai chất vùng UV-Vis có vị trí cực đại hấp thụ ảnh hưởng độ bền, độ phân cực dung mơi.Cụ thể là, nước, dải trung tâm quanh giá trị 290nm thứ hai 330-335nm Trong ACN, phổ chuyển sang màu đỏ, vai xuất cạnh đỏ phổ (khoảng 360nm), chứng tỏ dung mơi phân cực dung môi không protic (dung môi không chứa H +), trạng thái kích thích thấp singlet ổn định Các dải có độ hấp thụ phân tử ɛ = 1-3.104 M-1cm-1 cho phép e chuyển hoàn toàn từ π→π*, dải thứ hai ACN có ɛ = 0.5-0.7.104 M-1cm-1 trạng thái chuyển tiếp bị cấm phần chất Hình 3- Phổ hấp thụ MOX (a) LEV (b) ─ACN, H2O, …PBS 1- Phổ huỳnh quang huỳnh quang phân giải theo thời gian 24 Phổ huỳnh quang MOX LEV tương ứng cho cực đại khác phụ thuộc vào dung mơi, hình vẽ 3-9 Hình 3- 9.Phổ huỳnh quang MOX (a), LEV (b) trongdung môi ─ACN, H2O, PBS Tính chất huỳnh quang MOX LEV dung môi ACN, H 2Ovà PBS thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Tính chất huỳnh quang MOX LEV dung môi FQ LEV MOX Dung môi PBS H2O ACN PBS H2O ACN λmax (nm) 462 465 500 472 482 497 Φf 0.35 0.25 5.10-4 0.21 0.19 4.10-2 τf (%),(ns) 6.2 6.9 3.2 - Cả hai MOX LEV ACN có cực đại phát xạ 500nm trong dung dịch nước màu xanh dịch chuyển 20-30nm Trong bảng cho thấy đặc tính quang MOX LEV khác dung mơi khác Mất hoạt tính trạng thái kích thích thấp S bị ảnh hưởng lớn dung môi thể hiệu suất huỳnh quang Φ Ngồi phụ thuộc vào pH dung dịch, hiệu 25 suất huỳnh quang ACN thấp đặc biệt LEV, nói cách khác dung môi không protic phát huỳnh quang không đáng kể Thực nghiệm phân hủy quang học đèn laser tiến hành với hai hợp chất dung môi đệm PBS ETN, kết ghi lại hình vẽ 3-9, kết tương tự với LEV ETN Quang phổ ghi lại kết thúc xung laser, quan sát thấy có hai cực đại hấp thụ 390 720nm Phân tích động học tín hiệu dải sóng phân hủy hai FQs động học bậc tương ứng thời gian sống 0.08µs khơng ảnh hưởng có mặt phân tử oxy Hình 3- 10.Phổ hấp thụ phân giải theo thời gian (a) MOX (b) LEV đệm PBS Phổ hấp thụ phân giải theo thời gian MOX ghi lại tương ứng 0.08 (○), 0.13 (∆) 1.6 (◊) µs sau kết thúc xung xạ, động học phân hủy đo 390 nm LEV ghi lại tương ứng 0.2 (○), 0.6 (∆), 2.4 (), 8.0 (◊) µs, sau kết thúc xung xạ cực đại đo 308 nm 26 III.2 Phân tích định lượng sở phản ứng quang hóa Định lượng phương pháp huỳnh quang tĩnh, phương pháp đo cường độ phát xạ tương ứng λ ex/λem thích hợp, phân tử trở trạng thái Do cường độ huỳnh quang tỷ lệ với nồng độ chất phát huỳnh quang dung dịch, sở để định lượng Sau bảng tổng hợp số cơng trình nghiên cứu cơng bố,điển hình cho việc định lượng FQs phương pháp huỳnh quang tĩnh Điều cho thấy đóng góp phương pháp phổ huỳnh quanglà lớn, khơng phục vụ cho nghiên cứu đặc tính quang (mục III.1) FQs giúp lĩnh vực y sinh, y học mà định lượng chúng dược phẩm dịch sinh học nhiều lĩnh khác 1-Định lượng 4-FQs dược phẩm thuốc viên chế phản ứng dịch chuyển điện tử, thuốc thử tạo phức huỳnh quang với FQs axít cloranilic (CL), cường độ huỳnh quang tăng lên 4-14 lần so với FQs trước phản ứngcủa tác giả Li Ming Du cộng [16], sau kết công bố chứng nhận Bảng 3.3 Điều kiện tối ưu kết định lượng FQs thuốc viên Tên 4-FQ/kết LOM FLE CIP NOR Axít cloranilic, dung mơi axeton(đã khảo sát) Tác chất, dung môi Nhiệt độ phản ứng Thời gian phản ứng Thời gian ổn định λex/λem Khoảng tuyến tính (µg/ml) LOD (µg/ml) LOQ (µg/ml) điều kiện phản ứng tối ưu, phổ huỳnh quang trạng thái dừng, hình vẽ 3.11 35 30 35 30 30 30 20 30 60 80 60 70 335/438 334/436 332/427 334/431 0.14-8.2 0.16-11.4 0.10-7.2 0.08-5.6 0.08 0.14 0.09 0.16 0.06 0.10 0.02 0.08 27 TL TK [16] R2 Độ thu hồi (%), n = 0.9995 99.809± 0.9998 99.939± 0.9991 99.239± 0.9992 99.179± 1.22 0.92 1.36 0.81 Hình 3- 11.Phổ huỳnh quang 4-FQ trước sau tạo phức với axit Cloranilic (1’-9’) phổ kích thích, (1-9) phổ phát xạ Phổ kích thích phát xạ CL 4-FQ trước tạo phức:(1, 1’) CL (3.10-4 mol/l), (2,2’) CIP (1.06 µg/ml), (3, 3’) NOR (1.02µg/ml), (4, 4’) FLE(1.18 µg/ml), (5, 5’) LOM (1.12 µg/ml) Sau tạo phức cường độ huỳnh quang tăng lên khoảng từ 4-14 lần: (6, 6’) FLE(1.18 µg/ml) –CL, (7, 7’) LOM (1.12 µg/ml)-CL (8, 8’),CIP (1.06 µg/ml)-CL,(9, 9’) NOR (1.02 µg/ml)-CL Cơ chế phản ứng quang hóa: CL đóng vai trò chất nhận e LOM, FLE, CIP, NOR hợp chất chứa Ni tơ, phức chất CL tạo thành với thuốc 28 này, tỷ lệ mol phản ứng xác định 1:1, tỷ lệ có mặt nguyên tử flo hoạt động nhóm hút e phân tử 4-FQ Vòng benzen có mật độ thấp hơn, ngun tử nitơ piperarin có mật độ e cao bị cản trở khơng gian.Vì phức n-π tạo thành, hình vẽ 3-12 Hình 3- 12.Cơ chế dịch chuyển điện tử hình thành phức axit cloranilic với 4-FQs tương ứng (1)-LOM; (2)-FLE; (3)-CIP; (4)-NOR 2- Một nghiên cứu tương tự sau đề tài tác giả Li Ming Du vàcộng năm 2004 [17] Định lượng ofloxacin,levofloxacin, lomefloxacin, axit pipemidictrong thuốc viên nén, thuốc viên nang dịch sinh học (huyết tương, nước tiểu) với chế dịch chuyển điện tử phản ứng quang hóa tạo phức FQs với tác chất 7,7,8,8-tetracyanoquinodimetan (TCNQ) Cường độ huỳnh quang phức chất tạo thành tăng từ 15–90 lần so với cường độ thân FQs Đề tài có tính định lượng FQs dịch sinh học vàtrong điều kiện khảo sát với mẫu dược phẩm 29 3-Phương pháp tạo phức làm tăng ổn định cường độ huỳnh quang phương pháp đơn giản, hiệu Tuy nhiên, làm tăng huỳnh quang tạo mixen tăng huỳnh quang, cách thêm vào hỗn hợp gồm thuốc thử, FQs chất hoạt động bề mặt, có chức tạo mixen, làm cường độ huỳnh quang tăng lên nhiều lần, giúp cho việc định lượng FQs cách xác dễ dàng Hai nghiên cứu sau ví dụ điển hình, định lượng levofloxacin (LEV) Moxifloxacin (MOX) thuốc viên dịch sinh học (huyết nước tiêu) Bảng 3.4 Điều kiện tối ưu kết định lượng FQs thuốc viên Tác chất, điều kiện, kết Thuốc thử tạo phức Chất tạo mixen LEV Axit acetic 0,1M-đệm ntriacetat (pH 4) Sodium dodecyl sulfat (SDS) MOX Europium(III), 1,7.10-5 M Sodium dodecyl benzene pH 5, mM, pH 4.5–6.0 494/292 Hình vẽ 3-13 25.0 ± 0.1°C 30/100 sulfonate (SDBS), pH 9.2 373/614 Hinh vẽ 3-14 2.8.10-3/- tính(ng.ml ) Độ thu hồi (%), (n= 20–3000 1.8.10-2 – 7.3 101.4 (VN), 104.7 (NT), 105 100,7 (VN), 99.7 (NT), 5) (HT) RSD (%) 0,56 (VN), 0,8 (NT), 1,9 (HT) 99.2(HT) 1.35 (VN), 1.35 λex/λem (nm) Phổ huỳnh quang Nhiệt độ phản ứng LOD/LOQ (ng.ml-1) Khoảng tuyến -1 TLTK (NT),1.5(HT) [18] [19] VN: viên nén, NT: nước tiểu, HT: huyết 30 Hình 3- 13.Phổ kích thích phát xạ LEV (1µg/ml) (A) dung dịch chưa tạo mixen (B) dung dịch tạo mixen với SDS 8mM Hình 3- 14.Phổ phát xạ (a), phổ kích thích (b) Eu3+–MOX–SDBS (1)Eu3+; (2)MOX; (3)Eu3+–MOX; (4)Eu3+–MOX–SDBS, pH 9.2 Bên cạnh phương pháp đo huỳnh quang phản ứng quang hóa, phương pháp hóa phát quang có nhiều ứng dụng phân tích FQs dược phẩm dịch sinh học Một số nghiên cứu tiêu biểu: định lượng số FQs dược phẩm dịch sinh học sử dụng hệ thc thử [Ru(bipy)]–Ce(IV) với khoảng tuyến tính rộng, giới hạn phát thấp độ thu hồi cao [20], sử dụng thuốc thử tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II) cho phản ứng phát quang hóa học, để định lượng ofloxacin dược phẩm [21] Ngoài nhiều nghiên cứu khác, thành 31 cơng với phương pháp hóa phát quang để định lượng FQs đối tượng khác sữa, thức ăn chăn nuôi, thực phẩm, nước…vv IV KẾT LUẬN Phản ứng quang hóa FQs số thành tựu ứng dụng điển hình cho phản ứng quang hóa hữu cơ.Dựa vào chế phản ứng quang hóa, chế phát huỳnh quang trạng thái dừng phân giải theo thời gian hay chế tắt huỳnh quang phản ứng hóa phát quang sở cho định lượng FQs dược phẩm dịch sinh học Dựa tảng lý thuyết nghiên cứu công nhận có định hướng kế thừa cho việc triển khai phần thực nghiệm đề tài, phân tích đánh giá số chất kháng sinh thuộc họ FQs hệ 2, 3, 4, đối tượng dự kiến norfloxacin, ciprofloxacin, fleroxacin, levofloxacin moxifloxacin Dựa việc khảo sát hai phương pháp phát quang phản ứng quang hóa phản ứng hóa phát quang để đưa phương pháp phù hợp hiệu nhất, khảo sát thuốc thử,pH mơi trường, dung mơi…Nếu thành cơng thìhồn tồn áp dụng phương pháp vào thực tế phòng kiểm nghiệm thuốc Việt Nam thay phương pháp cũ phương pháp phức tạp, tốn TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] A Albini, S Monti, and V P Gobetti, “Photophysics and photochemistry of fluoroquinolones,” pp 238–250, 2003 [2] A V Polishchuk, E T Karaseva, T B Emelina, and V E Karasev, “Spectroscopic and photophysical properties of protonated forms of some fluoroquinolones in solutions,”J Fluoresc., vol 22, no 1, pp 373–379, 2012 [3] Peter Atkins & Julio de Paula, Physical Chemistry Oxford, 2006 [4] K K Rohatgi-Mukherjee, Fundamentals of Photochemistry 1978 [5] Phan Thị Như Quỳnh, “Phương pháp phân tích quang phổ huỳnh quang.” tr 45–60, 2002 32 [6] Trần Tứ Hiếu, Giới thiệu phương pháp phát quang (huỳnh quang) 2003 [7] Trần Văn Nhân, Hóa lý - Tập NXB Giáo dục [8] J R Lakowicz, “Introduction to fluorescence,” Princ Fluoresc Spectrosc., pp 1–27, 2006 [9] Joseph R Lakowicz, “Principle of Fluorescence Spectroscopy,” no Springer, 3rd Edition, 2006 [10] J A Oca, M Callejón, and F J Barragán, “Determination of trovafloxacin in human serum by time resolved terbium-sensitised luminescence,” Eur J Pharm Sci., vol 13, no 3, pp 297–301, 2001 [11] R C Rodríguez‐Díaz, M P Aguilar‐Caballos, and A Gómez‐Hens, “Sensitive Determination of Fluoroquinolone Antibiotics in Milk Samples Using Time‐Resolved Methodology,” Anal Lett., vol 37, no 6, pp 1163– 1175, 2004 [12] N Seedher and P Agarwal, “Complexation of fluoroquinolone antibiotics with human serum albumin: A fluorescence quenching study,” J Lumin., vol 130, no 10, pp 1841–1848, 2010 [13] T H Fereja, A Hymete, and T Gunasekaran, “A Recent Review on Chemiluminescence Reaction, Principle and Application on Pharmaceutical Analysis,” ISRN Spectrosc., vol 2013, pp 1–12, 2013 [14] A Albini, S Monti, and V P Gobetti, “Photophysics and photochemistry of fluoroquinolones.,” Chem Soc Rev., vol 32, no 4, pp 238–250, 2003 [15] G Viola et al., “Photophysical and phototoxic properties of the antibacterial fluoroquinolones levofloxacin and moxifloxacin,” Chem Biodivers., vol 1, no 5, pp 782–801, 2004 [16] D Liming, X Qingqin, and Y Jianmei, “Fluorescence spectroscopy determination of fluoroquinolones by charge-transfer reaction,” J Pharm Biomed Anal., vol 33, no 4, pp 693–698, 2003 33 [17] L M Du, Y Q Yang, and Q M Wang, “Spectrofluorometric determination of certain quinolone through charge transfer complex formation,” Anal Chim Acta, vol 516, no 1–2, pp 237–243, 2004 [18] J A O Gonzlez, M Callejn Mochn, and F J B De La Rosa, “Spectrofluorimetric determination of levofloxacin in tablets, human urine and serum,” Talanta, vol 52, no 6, pp 1149–1156, 2000 [19] M Kamruzzaman et al., “Spectrofluorimetric study of the interaction between europium(III) and moxifloxacin in micellar solution and its analytical application,” Spectrochim Acta - Part A Mol Biomol Spectrosc., vol 86, pp 375–380, 2012 [20] F A Aly, S A Al-Tamimi, and A A Alwarthan, “Chemiluminescence determination of some fluoroquinolone derivatives in pharmaceutical formulations and biological fluids using [Ru(bipy)3/2+] - Ce(IV) system,” Talanta, vol 53, no 4, pp 885–893, 2001 [21] P S Francis and J L Adcock, “Chemiluminescence methods for the determination of ofloxacin,” Anal Chim Acta, vol 541, no 1–2, pp 3–12 34 ... sinh viên khóa CD8 giúp đỡ em hồn thành khóa luận Với hiểu biết có hạn, khóa luận khó tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận góp ý kiến thầy cô, anh chị, bạn với người quan tâm để nội dung khóa luận hồn... fluoroquinolon dược phẩm” để làm khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Nguyễn Thị Minh Diệp mơn hóa-lý hết lòng hướng dẫn em suốt q trình tìm hiểu hồn thành khóa luận Đồng thời em xin cảm ơn... loại đến hệ thứ với nhiều loại thu c khác phù hợp cho đối tượng Đối với FQs dược phẩm,một số yêu cầu nghiêm ngặt cần phải cơng thức hàm lượng ghi nhãn nhà sản xuất, thu c sử dụng điều trị cần phải