TỔNG HỢP CÁC ALKYL CACBOXYLAT CỦA NAPHTHOL AS; ASOL; ASCA LÀM CƠ CHẤT NHUỘM ESTERASE ĐẶC HIỆU TẾ BÀO BẠCH CẦU DÒNG MONO

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - TRẦN THỊ THANH TÂM TỔNG HỢP CÁC ALKYL CACBOXYLAT CỦA NAPHTHOL AS; AS-OL; AS-CA LÀM CƠ CHẤT NHUỘM ESTERASE ĐẶC HIỆU TẾ BÀO BẠCH CẦU DÒNG MONO LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2019 MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 CHƢƠNG - TỔNG QUAN .3 1.1 Giới thiệu hợp chất Naphtol AS-thế cacboxylat 1.2 Tổng hợp este 3-[(N-phenyl thế)carbamoyl]naphtalen-2-yl cacboxylat 1.3 Tính chất alkyl cacboxylat 3-[(N-phenyl thế)carbamoyl]naphtalen-2yl cacboxylat 1.3.1 Tính chất vật lý 1.3.2 Tính chất phổ 1.3.3 Tính chất hóa học 1.4 Ứng dụng để nhuộm esteraza bạch cầu ngƣời 10 1.4.1 Bệnh bạch cầu cấp phân loại thể bệnh 10 1.4.2 Giới thiệu esteraza 11 1.4.3 Cơ chất dùng nhuộm esteraza không đặc hiệu bạch cầu ngƣời .16 CHƢƠNG - THỰC NGHIỆM .19 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu .19 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.3 Hóa chất thiết bị 19 2.3.1 Hóa chất 19 2.3.2 Các dụng cụ thiết bị 19 2.4 Các phần mềm sử dụng 21 2.5 Sơ đồ phản ứng chung quy trình thực nghiệm 21 2.6 Thực nghiệm 22 2.6.1 Tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS, AS-OL AS-CA 22 2.6.2 Quy trình thực nghiệm tối ƣu hóa phản ứng nhuộm enzym 25 3.1 Tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS; AS-OL AS-CA phƣơng pháp truyền thống [5, 7] 29 3.2 Nghiên cứu tối ƣu hóa phản ứng nhuộm esteraza 43 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng chất đến kết nhuộm 47 KẾT LUẬN .51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 55 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các hợp 3-( N-phenyl thế)naphtalen-2-yl cacboxylat đƣợc thƣơng mại hóa .4 Bảng 1.2 Bảng phân loại bệnh ung thƣ máu dòng mono theo FAB bổ sung Marker di truyền [8] 14 Bảng 2.1 Kết khảo sát ảnh hƣởng dung môi đến hiệu suất phản ứng .22 Bảng 2.2 Kết khảo sát ảnh hƣởng tỷ lệ chất tham gia phản ứng đến hiệu suất phản ứng 23 Bảng 2.3 Kết khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất phản ứng 23 Bảng 2.4 Kết khảo sát ảnh hƣởng thời gian phản ứng đến hiệu suất 24 Bảng 2.5 Các nhân tố mức đƣợc xét mơ hình thực nghiệm .26 Bảng 2.6 Bảng ma trận mơ hình mẫu nhân tố thực nghiệm 27 Bảng 3.1 Bảng kết tổng hợp alkyl cacboxylat Naphtol AS, AS-OL AS-CA .35 Bảng 3.2 Kết số liệu phổ IR ESI-MS naphtol AS-thế cacboxylat 37 Bảng 3.3 Kết liệu phổ 1H-NMR 3-(N-thế-cacbamoyl) naphtalen-2-yl cacboxylat 38 Bảng 3.4 Kết nhuộm theo phƣơng pháp nhân tố thực nghiệm 43 Bảng 3.5 Hiệu suất thu đƣợc vùng tối ƣu .45 Bảng 3.6 Độ nhạy độ đặc hiệu chất 3-[(N-phenyl thế) cacbamoyl]naphtalen-2-yl cacboxylat tổng hợp đƣợc 49 Bảng 3.7 Điểm nhuộm naphtol AS cacboxylat .49 DANH MỤC HÌNH Sơ đồ 1.1 Sơ đồ 1.2 Sơ đồ 1.3 Sơ đồ 1.4 Sơ đồ 1.5 Sơ đồ 1.6 Sơ đồ 1.7 Sơ đồ 1.8 Sơ đồ 1.9 Sơ đồ 1.10 Sơ đồ 1.11 10 Sơ đồ 1.12 16 Sơ đồ 1.13 17 Sơ đồ 1.14 17 Sơ đồ 2.1 21 Sơ đồ 3.1 29 Sơ đồ 3.2 30 Sơ đồ 3.3 30 Hình 3.1 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng chất dung môi đến hiệu suất phản ứng .31 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng tỷ lệ tác nhân tham gia phản ứng đến hiệu suất phản ứng 32 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng nhiệt độ đến hiệu suất phản ứng .33 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn ảnh hƣởng thời gian phản ứng đến hiệu suất sản phẩm 34 Hình 3.5 Ảnh chụp sắc ký mỏng Naphtol AS-OL butanoat tổng hợp theo phƣơng pháp truyền thống (ảnh trái) phƣơng pháp cải tiến (ảnh phải) 36 Hình 3.6 Phổ IR Naphtol AS-OL butanoat 40 Hình 3.7 Phổ 1H-NMR Naphtol AS-OL butanoat 41 Hình 3.8 Phổ ESI - MS Naphtol AS-OL butanoat 41 Sơ đồ 3.4 Sơ đồ phân mảnh hợp chất Naphtol AS-OL butanoat (3b3) .42 Hình 3.9 Đồ thị Pareto nhân tố ảnh hƣởng đến hiệu suất nhuộm esteraza dòng mono 44 Hình 3.10 Ảnh nhuộm naphtol AS propanoat 50 Hình 3.11 Ảnh nhuộm naphtol AS-CA axetat 50 Hình 3.12 Ảnh nhuộm naphtol AS axetat khơng có chất ức chế NaF .50 Hình 3.13 Ảnh nhuộm naphtol AS axetat có chất ức chế NaF 50 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT c.s Cộng Da Dalton THF Tetrahydrofuran DMF Dimethylformamide DMSO Dimethyl sulfoxide EC Uỷ ban Enzym (The enzyme commission ) NSE Nhuộm Esteraza không đặc hiệu (Esteraza) NSE+NaF Nhuộm Esteraza không đặc hiệu với chất ức chế NaF FAB Hội nhà Huyết học Anh-Pháp-Mỹ (French-American-British) IUB Hiệp hội Hóa sinh quốc tế (International Union of Biochemistry) L1 Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho biệt hóa (Acute lymphoblastic) L2 Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho chƣa biệt hóa (Acute lymphoblastic) L3 Bệnh bạch cầu cấp dòng lympho loại Burkitt (Acute lymphoblastic) M0 Bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ biệt hóa tối thiểu (Minimally differentiated acute myeloid) M1 Bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ khơng có tế bào trƣởng thành (Acute myeloblastic without maturation) M2 Bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ có tế bào trƣởng thành (Acute myeloblastic with maturation) M3 Bệnh bạch cầu cấp dòng tiền tuỷ (Acute promyelocytic) M4 Bệnh bạch cầu cấp dòng tuỷ-monoxit (Acute myelomonocytic) M5 Bệnh bạch cầu cấp dòng monoxit (Acute monocytic) M6 Bệnh bạch cầu cấp dòng hồng cầu (Erythroleukemia) M7 Bệnh bạch cầu cấp dòng tiểu cầu (Acute megakaryoblastic) NaOH Sodium hydroxide EGME ethylene glycol monomethyl ether NaOH Sodium hydroxid NaF Sodium fluorid NAS Naphtol AS (Naphthol AS) NASD Naphtol AS-D (Naphthol AS-D) NASDCl Nhuộm esteraza đặc hiệu (Naphthol AS-D chloroaxetat) Tnc Nhiệt độ nóng chảy Ts Nhiệt độ sơi WHO Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) Model Summary S R-sq R-sq(adj) R-sq(pred) * 100.00% * * Coded Coefficients SE Term Effect Constant Coef Coef T-Value P-Value 61.29 * * * VIF A 14.050 7.025 * * * 1.00 B -1.5375 -0.7688 * * * 1.00 C 4.225 2.112 * * * 1.00 D 4.625 2.312 * * * 1.00 E -0.2750 -0.1375 * * * 1.00 A*B 2.050 1.025 * * * 1.00 A*C 0.13750 0.06875 * * * 1.00 A*D -0.3625 -0.1813 * * * 1.00 A*E -0.4875 -0.2438 * * * 1.00 B*C -0.05000 -0.02500 * * * 1.00 B*D -0.7250 -0.3625 * * * 1.00 B*E -0.5000 -0.2500 * * * 1.00 C*D 0.3875 0.1938 * * * 1.00 C*E 2.112 1.056 * * * 1.00 D*E -1.8625 -0.9312 * * * 1.00 A*B*C -0.9625 -0.4813 * * * 1.00 A*B*D 0.6625 0.3312 * * * 1.00 A*B*E -0.2875 -0.1438 * * * 1.00 A*C*D 0.4000 0.2000 * * * 1.00 A*C*E -1.3000 -0.6500 * * * 1.00 A*D*E 3.425 1.712 * * * 1.00 B*C*D -1.4125 -0.7062 * * * 1.00 B*C*E 0.4375 0.2188 * * * 1.00 81 B*D*E 0.3375 0.1687 * * * 1.00 C*D*E -1.0500 -0.5250 * * * 1.00 A*B*C*D 0.6250 0.3125 * * * 1.00 A*B*C*E 0.5000 0.2500 * * * 1.00 A*B*D*E -0.6000 -0.3000 * * * 1.00 A*C*D*E -0.8125 -0.4063 * * * 1.00 B*C*D*E -0.10000 -0.05000 * * * 1.00 0.3625 0.1813 * * * 1.00 A*B*C*D*E Regression Equation in Uncoded Units Yield = % 61.29 + 7.025 A - 0.7688 B + 2.112 C + 2.312 D - 0.1375 E + 1.025 A*B + 0.06875 A*C - 0.1813 A*D - 0.2438 A*E - 0.02500 B*C - 0.3625 B*D - 0.2500 B*E + 0.1938 C*D + 1.056 C*E - 0.9312 D*E - 0.4813 A*B*C + 0.3312 A*B*D - 0.1438 A*B*E + 0.2000 A*C*D - 0.6500 A*C*E + 1.712 A*D*E - 0.7062 B*C*D + 0.2188 B*C*E + 0.1687 B*D*E - 0.5250 C*D*E + 0.3125 A*B*C*D + 0.2500 A*B*C*E - 0.3000 A*B*D*E 0.4063 A*C*D*E - 0.05000 B*C*D*E + 0.1813 A*B*C*D*E Alias Structure Factor Name A A B B C C D D E E 82 83 ... clorua 98%; Pentanoyl clorua 98%, loại P sản phẩm Sigma Aldrich;  Naphtol AS 99%; Naphtol AS-OL 95%; Naphtol AS-CA 99% sản phẩm Sigma Aldrich;  Dung môi etylenglycol monometyl ete; THF, DMF, DMSO,... ADVANCE Spectrometer (Bruker 500Mv), tần số 500MHz, Viện Hóa học -Viện KH&CN Việt Nam; dung môi DMSO-d6; chất chuẩn nội TMS; + BRUKER, tần số 500 MHz, khoa Hóa học, trƣờng Đại học KHTNĐHQGHN; dung. .. ứng hợp chất Enzym esteraza nguyên sinh chất bạch cầu xúc tác phản ứng thủy phân nhóm monoeste cacboxylat alkyl cacboxylat Sau phản ứng thủy phân, naphtol AS-thế sinh tác dụng với muối diazo tạo