Nghiên cứu chiết xuất cao chiết giàu hoạt chất từ lá nhàu (Morinda Citrifolia L.)

Trong nghiên cứu này, sử dụng phương pháp bề mặt đáp ứng (Response Surface Methodology) để tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao lá Nhàu gồm thể tích dung môi, nhiệt độ và thời gian chiết. Thí nghiệm được bố trí theo kiểu trực tâm quay (Rotatable Central Composite Design) và ma trận thí nghiệm được xây dựng bằng phần mềm Design–Expert 11.0. Tiêu chí đánh giá dựa trên hàm lượng flavonoid toàn phần, hoạt tính kháng khuẩn và kháng viêm. Xác đi ̣nh hàm lượng flavonoid toàn phần bằng phương pháp cân và UV-Vis theo chuẩn rutin; đánh giá khả năng kháng ba dòng vi khuẩn Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa và Staphylococus aureus bằng phương pháp khuếch tán qua giếng thạch; đánh giá hoạt tính kháng viêm in vitro. Kết quả cho thấy hiệu suất chiết cao đạt 21,218%. Hàm lượng flavonoid trong nguyên liệu đạt 0,715 mg /g và mẫu cao chiết đạt 2,227 mg /g bằng phương pháp UV-Vis. Cao chiết lá Nhàu có khả năng kháng đối với ba dòng vi khuẩn Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa và Staphylococus aureus ở các nồng độ khảo sát . Hoạt tính kháng viêm của cao chiết lá Nhàu là IC50 = 70,209 μg/mL .Như vậy, lá Nhàu có chứa hợp chất flavonoid và là nguồn dược liệu quý giá để tạo ra các sản phẩm thiên nhiên ứng dụng tốt trong đời sống sau này

Từ viết tắt CHCỈ3 Từ Tiếng Anh Từ Tiếng Việt Chloroform ĐẠI HỌCĐƯỢC QUỐC HỒN GIA TP.THÀNH Hồ CHÍCloroform MINH CƠNG TRÌNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRƯỜNG HỌC KHOA -ĐHQG -HCM 4.23.18 ĐỀ NGHỊ 2.3.3 Các Bảng Kết nồngĐẠI độ ức chếBÁCH vi khuẩn tối thiểu (MIC) cao chiết toàn phần72 ĐẠI HỌCDeoxyribonucleic QUỐC GIA TP.HCM CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM DNA acid Acid deoxyribonucleic LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC BẢNG BIỂU LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC phương pháp tiêu MỤC chuẩn hóa dược liệu cao toàn phần 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 LỤC HÌNH ẢNH MỤC LỤC Sơ ĐỒ 67 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TÓMABSTRACT TẮT LUẬN VĂN Độc lập - Tự - Hạnh phúc 2.3.4 Định tính ílavonoid TP.HCM, phương pháp hóa 79 học Trong nămquả học đánh tập vảgiárèn luyện Trường Báchcao Khoa vói PHỤ LỤC Bảng 3.19.2 Ket hoạt tínhMỤC kháng viêmĐH in vitro toàn phần 69 DANH VIẾT TẮT DMSOLỜI Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxid CẢM ƠN i Cán hướng khoa học: TS LÊthành VĂNdựa MINH Tôi xin cam đoan luậndẫn văn hoàn nghiên cứuKĩ của28 tơi giảng dạy nhiệt tình tận tâmhoạt củatính quý Thầy Cô, đặc biệt lả kết quý thầy cô khoa Thuật Bảng 2.1 Danh sách hóa chất, thuốc thửkháng sử dụng nghiên cứu .18 3.20 Ket đánh giá oxy hóa cao tồn phần 69 Hình 1.1 Hình thái tự nhiên Nhàu [A], trái Nhàu[B] Chụp tác giả vườn TÓM TẮT LUẬN VẢN 2.3.5 .Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lóp mỏng Sơ 2.1 Nội dung nghiên cứu 17 Morinda citrifolia L is long-standing plant used to treat some diseases iniifolk NHIỆM VỤ VĂN THẠC SĨ Cây Nhàu (Morỉnda citrifolia L.) lồi có từ lâu đời sử dụng chữa đồ chưa dùng cho bất cứakiến luận vănlàLUÂN cấp khác Hóa Học truyền thức q vói tâm huyết, nhiệtđểtình vảmột tận • • báu •• 2.2.đã Danh sáchđạt thiết bị, dụng cụ sửkháng dụng nghiên cứu 19 Bảng 3.21 Kết đánh giá hoạt tính oxy hóa acid ascorbic 70 EtOHbảo Ethanol Cồn etylic tồn gen giống thuốc tỉnh phía Nam Ngày 20/03/2018 29as a ABSTRACT iii Sơ đồ 2.2 Tóm tắt phân tích sơ thành phần hóa thực vật 22 medicine and parts of the tree, such as roots, stems, leaves and fruits, also used số bệnh dân gian cáckhông phận Nhàu rễ,mả thân, dùng tâm chúng emvà chỉTHÙY lảphần kiến thức cònlá,lảquả kinhcòn nghiệm vả lả NGUYỄN DIỄM THẢO Bảngdành 2.3 cho Tóm tắt phân tích sơ thành hóa thực vậtílavonoid 23 2.3.6 Định lượng phương pháp cân LỜI CAM ĐOAN iv Hình 1.2 Công thức cấu tạo Rutin Sơ đồ 2.3 Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lớp mỏng .31 functional food Many biological active ingredients, high biopharmaceuticals In this Cánphẩm bộviên: chấm nhận xét TS Hoàng Thị Kim Dung chức với1 :nhiều hoạt chất học, tính sinh1670202 họcdẫn, cao.dạy Trong hành trang cho tuông lai chúng sau nảy.flavonoid .27 Nếusinh không cóMSHV: lòidược hưởng bảo Họ thực tên Nguyễn Thùy Diễm Thảo Bảng 2.4.học Các phản ứng hóa họcem định tính 32 FeCb Hình Iron (III) chloride Sắt (III) clorua MỤC LỤC V 1.3 Các giai đoạn làm lành vết thưong 13 Sơ đồcác 2.4 Định lượng flavonoid phương pháp cânluận UV-Vis .34 study, Morinda citrifolia L thể leafbằng were with 70% ethanol Response Surface nghiên cứu này, sử dụng phưong pháp bềextracted mặttốt đáp ứng (Response Surface Methodology) thầy em khó có hồn thảnh văn nảy Luận văn thực Ngày, tháng, năm sinh: 12/07/1992 Nơi sinh: Long An 2.3.7 Định lượng flavonoid phương pháp UV-Vis Bảng 2.5 Mã hóa yếu tố giá trị thực yếu tố khảo sát 407 MỤC LỤC BẢNG BIÊU viii Hình 2.1 Hình thái tự nhiên Nhàu [A], bột Nhàu [B] .18 Methodology wasgian chosen to xuất optimize extraction condition Rotatable để tốikhoảng ưu ngành: hóathòi điều caokhó látheNhàu gồm thể tích dung mơi, nhiệt độ Central và32nhận thời chiết tháng nghiệm cóleaf thể tránh khỏi sai sót, em mong Chuyên Kỹkiện thuật hoá học Mã số: 60520301 2.6 Bố trí điều kiện thí theo phần mềm DesignExpert 11.0 .42 HC1 Bảng Chlohydric acid Acid Chlohydric MỤC3.1 LỤC HÌNH Hình Đồ thịchấm 3DẢNH .X ảnh hưởng 2:trí yếu tốmatrix đến hàm lượng flavonoid: (A)Design-Expert Thời gian nhiệt Composite Design and Experimental were constructed using 11.0 Cán nhận xétbố 2quý TS Hà cẩm Anh gian chiết Thí nghiệm theo kiểu trực tâm quay (Rotatable Central Composite ý kiến đóng góp báu Cơ để em hồn thiện đưọc kiến 2.3.8 Định tínhThầy kháng khuẩn phương pháp khuếch tán TP.HCM, ngày tháng .năm Bảng 3.1 Kết phân tích sơ thành phần hóa thực vật Nhàu 39 MỤC LỤC Sơ ĐỒ xi độ; (B) Thể tích the nhiệt độ; (C)được Thời giandựng thểbằng tích 49 software tovói select optimum high-extraction conditions from the leaf Determination thạch Design) ma trận thívăn nghiệm xây phầnđĩa mềm Design-Expert 11.0.36Tiêu bải luận I TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN cứu CHIẾT XUẤT GIÀU thực HOẠT IU thức International Unit Đon vị đoCAO lườngCHIẾT quốc tếNgưòi Bảng 3.2 Kết định lượng flavonoid phương pháp UV-Vis .45 DANH MỤC VIẾT TẮT xii Hình 3.2.flavonoid Đồ thị 3D ảnh hưởng khả yếu tố thời gian nhiệt độtính đếnbằng kháng khuẩn 2.3.9 Định lượng kháng khuẩn củahoạt mẫu thử phương pháp MIC 450 of total content by weight and UV-Vis Spectroscopy method based on rutin chí đánh giá dựa hàm lượng flavonoid toàn phần, kháng khuẩn kháng Em xin gửiKet lòi cảm on chân thảnh vả tribằng ân sâu sắc đến Thầy Lê Văn Minh, tạo NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT CAO CHIẾT GIÀU HOẠT CHẤT CÓđịnh TÁC LÀM LÀNH VẾT THƯONG TỪ NHÀU Bảng 3.3 tínhDỤNG kháng khuẩn phương pháp khuếch tán trênLÁ đĩathầy thạch LỜI MỞ ĐÀU xiii .37 Hình 3.3 Đồ thị 3D ảnh hưởng yếu tố thời gian nhiệt độ đến kháng viêm 450theo standard, evaluation of resistance to toàn three strains ofphưong Escherichia coli, viêm, xáccho địnhemhàm lượng flavonoid phần pháp cân vàPseudomonas UV-Vis kiện cóCITRIFOLIA mơi trường lảm việc tốt vói kinh nghiệm quý IC50 điều (MORINDA L.) Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM CHƯƠNG TÔNG QUAN .46 Nồng độ ức chế 50% gốc tự Half maximal inhibitory concentration 2.3.10 Ph Hình 3.4 Dự đánh đoán TỪ thay đổi hàm lượng flavonoid theo thay đổi yếuPseudomonas tố 51 aeruginosa Staphylococus aureus was by agar diffusion ^valuation of antiCHẤT LÁ NHÀU (MORINDA CITRIFOLIA L.) chuẩn rutin; giá khả kháng ba dòng vi tốt khuẩn Escherichia giá vả hỗand trọ thầy giúp em hoàn thảnh bải luận method văn coli, Trung tâm Sâm • NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG 1.1TÔNG QUAN VỀ CÂY NHÀU vả ngày 11 tháng 01 năm 2019 ương pháp đánh giá hoạt kháng viêmininvitro vitro 37 Bảng 3.4 Ket đánh giá hoạt tínhtính kháng viêm caochiết .46 Hình 3.5 Dựvà đoán thay đổi kháng thay đổi yếu tố 52 inflammation inStaphylococus vitro and antioxidant activity bysự DPPH method The results showed that aeruginosa aureuskhuẩn bằngtheo phưong pháp khuếch tán qua giếng thạch; Dược liệu TP.HCM 1.1.1 .Phân loại khoa học -3.5 Khảo sát điều chiết xuất dượcvăn liệuthạc dựa hàm lượng hoạt chất hoạt 2.3.11 Ph Thành phần Hội kiện đồng đánh giákháng luận sĩtrên gồm: Bảng Ket đánh giá hoạt tính viêm in vitro diclofenac sodium 46 MIC Hình Minimum Inhibitory Nồng ức chế tối thiểu 3.6 Dự đoán thaywas đổiconcentration kháng viêm thay đổi yếu tố 531was the extraction efficiency 21.218% Thetheo content of độ flavonoid inchiết the raw đạt material đánh giá hoạt tính kháng viêm in vitro Kết cho thấy hiệu suất cao 21,218% ương pháp DPPH xác định hoạt tính kháng oxy hóa Em xin gửi lòi cám on chân thảnh đến anh chị nhân viên phòng Sinh học phân tử Nguyễn Thùy Diễm tính sinh học (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ)38Thảo Bảng 3.6 Bố trí điều kiện thí nghiệm kết thực nghiệm theo phần mềm [1] Hình 3.7 So2.3.12 Tối sánh hàmChuyên lượng flavonoid từ2.227 thực nghiệm vàHỌC từ mơmẫu hình xâythực dựng 0.715 mg/g and the high extract was mg/g by UV-Vis Spectroscopy method 1.1.2 Đặc điểm vật ngành: KỸ THUẬT HÓA Hàm lượng flavonoid nguyên liệu đạt 0,715 mg /g cao chiết đạt 2,227 dành nhiều thòi gian giúp đõ, hướng dẫn vả củng cố thêm kiến thức cho em Chiết xuất cao chiết tiềm từ Nhàu với điều kiện tối ưu CT: PGS.TS Lê Thị Hồng Nhan DesignExpert 11.0 42 EC50 .57 and Extracts were resistant tokiện three strains of Escherichia coli, aeruginosa ưu hóa điều phàn ứng ảnh hưởng 50% đối maximal effective concentration mg /g Half phưong pháp UV-Vis Cao chiết láNồng Nhàuđộ có khảPseudomonas kháng ba38dòng trình luận văn tốt nghiệp - lảm Tiêu chuẩn hóa ngun liệu vàDung cao chiết tiềm từ Nhàu PB1: TS Hoàng Thị Kim Mã số: 60520301 Bảng 3.7 Kết giá trị tối ưu hóa theo yếu tố đáp ứng 49 1.1.3 .Phân bốproperties sinh thái[1] of 2.3.12.1 Giai đoạn Khảo dungconcentrations môiaeruginosa chiếtvà xuất liệu 39 Hình 3.8 So sánh kháng từsátthực nghiệm từdược mơ hình xây dựng 58 Staphylococus aureus at1:viêm investigated The anti-inflammatory tượng vi khuẩn Escherichia coli, Pseudomonas Staphylococus aureus nồng Cuối em xin kính chúc q Thầy Cơ cóchiết sức khỏe dồi dảo mem vả đạt nhiều - 2.3.12.2 Khảo sát hoạt tính sinh cao tiềm phần Nhàu PB2: TS Hà cẩm Anh Bảng 3.8 Kết suất chiết cao cồn 70% từ ládược Nhàu 55 Giaihiệu đoạn 2: Khảo sáthọc điều kiện chiết xuất liệu dựatừ Design Hình 3.9 extracts Ket Hoạt was định tính Nhàu ứng Flavonoid phản the khảo leaf IC 50 flavonoid = 70.209 pg/mL Thus, Morinda L leaf contains độ sát tính kháng viêm cao chiết láphản Nhàu hóa ICcitrifolia 50học = 70,209 pg/mL Như Expert 11.0 40 MeOHdanh Methanol Cồn methylic hiệu cao q cơng việc, kính chúc Cô, Anh, Chị Trung Tâm II NGÀY GIAO VỤ: UV: PGS.TS Trần Hiếu 1.1.4 Th Bảng 3.9 Kiểm tra độNHIỆM lặp lạiVăn mơ hình tối ưu hố 55Sâm ứng vói thuốc thử: (A) liệusource lávà Nhàu; (B) cao cồn 70% Hình flavonoid compounds and anguyên valuable pharmaceuticals to giá create good natural vậy, Nhàu có chứa họp chat flavonoid làof nguồn dược liệu chiết quý đế tạo ra61 sản CHƯƠNG 3:TK: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 44 Dược liệu TP.HCM sức khỏe dồi thành công việc III.3.10 NGÀY HỒN THÀNH NHIỆM VỤ: ành hóa họcphương có Nhàu uv,phần TS Lê Xuân Tiến Bảng Phân tích sai (ANOVA) ảnh hưởng củacông nhân tố chiết đến hàm 3.10 Sắc ký đồ định tính flavonoid dịch từ Nhàu HệNHÀU khai triển: (TEA)44 products forQUẢ later life phấm thiên nhiên ứng dụng tốtBỘ đời sống chiết sau 3.1 KẾT PHÂN TÍCH sơ THÀNH PHẦN HÓA THựC VẬT HPLC-DAD LUẬN VĂN THẠC SĨLÁ 1.1.5 .Công dụng phận dùng CÁN Bộ HƯỚNG DẪN: TS Lê Văn Minh Họchiệu viên Nguyễn Thùy Diễm Thảo Performance Liquid Sắc ký lỏng cao ghép mụcIV tiêu hàmHigh lượng flavonoid 51 Toluen Ethyl acetat Acid formic (8: 2: 1); (EMN) Ethyl acetat Methanol 3.2 TỐI ƯU HÓA ĐIỀU KỆN PHẢN ÚNG 45 Từkhoá: nhận Nhàu, phần mềm 11.0, flavonoid, khảng khuân, kháng viêm, Keywords' Morinda citrifolia Software Design-Expert 11.0, flavonoid, Xác Chủ tịchDesign-Expert HộiL., đồng đánh giá LVdò Trưởng quản lý chuyên Chromatography-Diode Array Detecto TP.HCM, ngày tháng .năm đầu chuỗi diotKhoa quang Bảng 3.11 Ket phân tích phương sai cho mơ hình đa thức bậc hai kháng viêm57 3.2.1 Tối -Nước (100: 17:nghiên 13) 62 1.1.6 Tình hình cứu nước giới kháng oxy hóa antibacterial, anti-inflammatory, antioxidan ngành sau khiđộluận văn đãnguyên sửa chữa (nếu có).cồn Bộ CÁN Bộ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM MÔN ĐÀO TẠO Bảng 3.12 Kết ẩm mẫu liệu cao chiết 70% từ Nhàu 59 ưu dung môi chiết cao Nhàu 45 1.1.6.1 cửu nước Hình 3.11 Sắc kýTình đồ hình địnhnghiên tính flavonoid dịch chiết từ Nhàu Hệ khai triển: 3.2.1.1 Đị Bảng 3.13 Kết độ tro toàn-phần mẫu nguyên liệu Toluen cao chiết cồn acetat 70% từ- Nhàu 1.1.6.2 Tình hình nghiên cứu thể 1: giới (BAN) n-butanol - Acid acetic Nước (7: 2); (TEMA) - Etyl CHỦ TỊCH HỘI ĐÒNG TRƯỞNG KHOA nh CHẾ lượngLÀNH flavonoid phương pháp UV- Vis 45 1.2Cơ VẾT THƯƠNG 10 54 Methanol - Acid formic (7: 5: 5: 1) 62 3.2.1.2 Đị 1.3TỔNG QUAN VỀ QUY TRÌNH TỒI Ưu HỎA BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁP ỨNG BỀ Bảng3.12 3.14.Đường Ket quảchuẩn độ trorutin không tan acid HC1 mẫu nguyên liệu Nhàu60 Hình 64 MẶT 14 nh tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán đìa thạch 45 TRƯỞNG KHOA Bảng 3.15 2: Nồng độ mật độ quang chất chuẩn CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu VÀRutin 58 THựC NGHIỆM .17 3.2.1.3 Đả Bảng 3.16 Ket định lượng flavonoid mẫu nguyên liệu cao chiết cồn 70% 2.1.nh MỤC TIÊU NGHIÊN cứu 17 TP CHÍ MINH,1tháng 01 năm 2019 giá hoạt tính kháng viêm inHỒ vitro 46 NỘIbằng DUNG NGHIÊN cứu từ lá2.2 Nhàu phương pháp cânCỒN UV-Vis 65 3.3 HỆU SUẤT CHẾT CAO 70% TỪ LÁ NHÀU 17 55 2.2.1 .Nguyên vật liệu X khuấn Bảng 3.17 3.4 TIÊU Ket CHUẨN đánhHĨA giá hoạt NGUN tính LIỆU khángVÀ CAO CHIET cao toàn CồN phần 66 70% TỪ LÁ NHÀU 59 viii IX VI vii V 11 iii XI Kiểm nghiệm - HC1 đậm đặc, H2SO4 đậm đặc Hoạt tính sinh học - DMSO (Trung quốc) 1.1.5 Công dụng phận dùng sinh học Polyesteramide coi cứu cho vêt thương nói chung vêt CHƯƠNG TỔNG QUAN Nhàu (từ 96,67%Trong 102,48%), đó, hỗn hợp thời tá dược gian MD/AE phân tích (25/75) mẫu ởvào tỷ HPLC lệ TD/CR phù 20% hợp làcầm phù (khoảng hợp 6,72 vết phương thương Cây pháp mọc làcứu hoang bề mặt trình đáp bao ứng gồm trồng nhiều nhiều quan ởtrọng đoạn tỉnh trùng phía lĩnh lắp Nam, vực nhau, nghiên theo cứu dùng để làm thay chế rau khác cần Hình trải -Nghiên -Cây Ở Q qua lơ thành trình chuột hoa mô bước liền uống quanh liên vết sau: paracetamol năm, thương kết: (1) Lựa tập trải trung chọn 500 qua nhiều mg/kg, trình 4tinh giai biến tăng hoạt đoạn độc sinh, độ lập khoảng AST bản: ảnh nguyên hưởng giai tháng ALT bào đoạn quan 11-2, tăng sợi trọng lên kết cho máu, so hợp tói với hệ giai với vào lơ 1.1.6 Tình hình nghiên vào năm cứu 2011 nước Deng vàgiai cộng giới cho thấy 23 flavonol glycoside, chủ 2.2.1 Nguyên vật liệu CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu VÀ THựC NGHIỆM LỜI MỞ ĐẦU mg/mL), Pseudomonas aeruginosa (MIC=6,25 mg/mL) Nồng nộ ức chế tối thiểu Giống có nhiều ứng dụng đời sống người cókinh thể coi thương khó lành nói riêng 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY NHÀU phút) khoảng nghiên đoạn collagen chứng viêm, cứu tháng Cao giai 3-5 thành đoạn Nhàu phạm lên tăng liều chất vi giới sinh tương hạn mô đương giai liên đoạn nghiên 6g kết, tái thúc 12g cứu tạo đẩy dược Tùy q theo vào liệu/kg trình mục mức hình làm tiêu độ thành nghiêm giảm cấu hoạt trọng nghiệm trúc độ mô hai phổ nhau, để biến phương chế ởhình nơng bột nhiều pháp cao thôn khác nghiên khô giúp cứu Nhàu nâng cho cao hiệu phương co lại pháp cho phun vùng trình sấy vết tối thương ưu hóa đóng thơng vai trò số quan yếu rutin, 1.1.6.1 Tình hình hợp nghiên chất cứu trong nước dịch chiết nuớc Nhàu qua phân tích HPLCLábào Nhàu thu hái từ vườn bảo tồn gen giống thuốc tỉnh phía Nam2.2.2 Hóa chất sau 48 đốichức vói Escherichia coli (MIC=6,25 Staphylococus aureus 2.1 MỤC TIÊU NGHIÊN cứusinh mg/mL), [13] thực phẩm vói nhiều hoạt chất học, tính sinh dược học cao cụcòn thể Tên khoa học: Morỉnda citrifolia L Nghiên cứu vào năm 2013 Võ Thị Mai Hương cộng Đại học Huế nghiên dụng cụ vết enzym thương người bị -Quả: tổn nghiên thuơng so Quả với hạch cứu; địa lô mô tạo ngưòi kép (2) hình Thiết độ vị bầu Tác thương bền kế nỗn dụng thí vững nghiệm mà cho giai cao vết phần đoạn thuơng tiến hai hành liều đài Bên nhanh thực cạnh hoa chậm collagen tương thí cụm nghiệm đương hoa có thúc dính với thể DAD Nghiên cứu vào năm 2005 Nguyễn Trọng Thông cộng sụ nghiên cứu ảnh trọng trình chữa lành vết thương liên quan đến di chuyển nguyên bào Trung tâm Sâmsang Dược liệu TP Hồ Chí Minh Lá Nhàu phơi sấy khô ởchất điềulá kiện 1.1.4 Nghiên Thành cứu tối phần ưu hóa hóa điều học kiện chiết xuất Nhàu cao chiết nhàu hoạt 1.1.6.2 Tình hình nghiên cứu giới Bước kỷ 21, với phát triển không ngừng xã hội kèm theo (MIC=25 mg/mL), đối vói Pseudomonas aeruginosa (MIC=12,5 mg/mL) Kháng viêm [1] [4] : lại [24 25] cứu số đặc trưng hóa sinh khả kháng khuẩn dịch chiết Nhàu theo để đẩy silymarin tạo sẹo trình thành ma trận hình da Quả thành vạch non chất trước màu xanh đó; mơ (3) liên nhạt, Xử kết dài lý trung 5-7 mặt cm, bì giúp thống rộng cho 3-4 kê cytokin toán cm học Quả già màu yếu liệu ngà tố huởng Nghiên cách cứu dùng vào năm thuốc 2013 đến tác Sabirin dụng kích cho thích biết việc miễn chữa dịch lành vết cao loét bị Nhàu ảnh huởng ’Kết sợi đến mô bị thương ’ nhàu Tên khác: Ngao, Nhàu núi, Giầu, M bracteata Roxb, M.đã litoralis Blanco,Dâu thích hợp (nhiệt độ 40°c 3lồi ngày) Bột dược liệu khơ (được xay thành bột qua Các nghiên cứu hóa học cho thấy gần 200mong hợp chất xác định vàchất Nghiên cứu vào năm 1990 Mairim Russo Serafini cộng Khoa Sinh lý Bị thương Bảng 2.1 Danh sách hóa chất, thuốc thử sử dụng nghiên cứu xuấthiện tai tạo nên vết thương không muốn ảnh hưởng đến thể qua số ICnạn 50 70,209 Ịig/mL [11] Hiệu việc chữa trị vết loét, ngừa phát ban Tiêu chuẩn hóa nguyên liệu cao chiết bán thành phẩm nhàu (Morinda citrifolia L.) cho thấy: vàng, thực tăng nghiệm truởng Paracetamol nhẵn Giai bóng, hoạt thu đoạn động mùi cầm CCL khai, thông máu làm qua tăng hàm tưcmg vết lượng thích tích MDA đĩa so hàm với mật đa lô thức; Quả chứng thịt, (4) Cao Đánh hình trứng giá Nhàu tính gồm hàm đạt đuợc luợng flavonoid cao Nhàu làm chiết tăng xuất trọng Nhàu luợng Tác lách dụng trọng chiết luợng xuất tuyến ức, Morỉnda đồng [13] Ấn Độ, Bengkudu, Mengkudu (Mã Lai) ray có kích mm) Cao chiết lưu trữ cốcSergipe, thủy tinh tách chiết từthước phần khác Nhàu Trong đó: vàtằm Hóa học, Đại học Liên bang Sergipe (UFS), SaCristovao, Brazil cho Hiện nay, nhà khoa học năm có lạnh nhiều nghiên cứu tạo vật liệu thấy sinh lượng sống người Những gần đây, nghiên cứu cho thấy nhiều thảo - Đánh giá hoạt tính sinh học cao chiết nhàu Dựa nghiên cứu giới tính cấp thiết vấn đề nghiên cứu, - Chữa tiêu chảy -làm Quả Nhàu chín chứa 5,27g/100g đường khử; 0,033g/100g protein; 8,750g/100g nhiều tương liềuHình Do tương thích tác thành hạch động dính mao mơ 6g vào hình; mạch: ngoại 12g nhau, (5) vật, vết dược Xác thuơng vết chín liệu/kg minh thương màu muốn làm tính vàng, chảy giảm khả lành máu chứa thi hàm nhanh com lượng tác tính cần mềm, động thiết MDA cóchuột ăn dinh lên yếu so collagen với duỡng đểbạch lô tiếnmô từ hành hĩnh máu vết thời citrifolia tăng L.đương số chữa luợng lành bạch vết cầu thuơng máu loét ngoại vi, tăng miệng bạch cầu lympho, Wistar cầu (Rattus diệt Lá có chứa glicosid tim, tannin, terpenoid, alkaloid, polysaccharid, quercetin 3,7rằng dịch chiết nước Nhàu (400 mg / xuất kg), tạo từ giảm đáng kể (P 6) P-DNghiên cứu vào năm 2008 Vijaykumar Pandurang Rasal vàquá cộng sựtính choZnCh thấy chiết [42] ưu chiết 2+ [43] [22] kiện tối caovết Nhàu với thể tích dung mơiROS 500 mL, trình chiết thực chuối , loại bỏ Cu nước , tối ưu hoá việc chế tạo cacbon hoạt từ việc làm lành thương Ở mức độ thấp, có lọi cho việc bảo vệ khỏi dụng đời sống vi khuẩn, làm chúng không sử dụng được, ức chế tổng hợp [10] Nhân dân miền Nam Việt Nam thường dùng nhàu làm thuốc điều kinh, hạ huyết áp, trị giúp điều hòa nhiệt độ thể, cảm giác thơng tin từ bên ngồi Các chấn thuơng cấp tính ấm, lượng hoạt chất làm tăng tỷ trọng, khả trơn chảy, hiệu suất vùng scopoletin Muốn xung cho quanh vết di thương chuyển Nhàu nhanh tới vết phương lành thương, pháp cần HPLC nguyên ýmơ chăm kết bào sóc sợi vết đạt thương tăng đáng sinh, l,0006g cách kết hợp có -hút Hoạt độhàm AST ALT tăng lên ởđược lô chuột tiêm CCL Cao Nhàu liều tuơng ứng Ở Việt Nam, mọc hoang trồng khắp nơi, thường dựa vào mép mở dọc, hướng trong, đính gốc Hạt phấn rời, hình hình cầu, màu vàng nhạt Lá nỗn, thuật tốn học thống kê dựa phù hợp hình thực nghiệm để liệu glucopyranose) Nó flavonoid cam quýt tìm thấy nhiều loại thực vật xuất nước Nhàu liều 200 mg/kg có tác dụng kháng oxy hóa làm lành vết thương 2+ [44] 2+ 95đểphút nhiệt độ truyền 60 °cbỏcho hàm lượng flavonoid mg/g Nồng nộthấp ức chế bã mía loại bỏ Cu ,loại ion Ni ho nước sử2,227 dụngperoxid nguyên tử cacbon xâm nhập vihư, khuẩn; dẫn tín hiệu nội bào; hydrogen mức acid nucleic băng huyết, khí bạch đới, viêm phế quản, hen, cảm mạo tính, vết thuơng mãn tính can thiệp phẫu thuật ảnh huởng đến chức da, phun sấy hiệu suất thu hoạt chất bột cao khô với nên hàm dùng lượng băng scopoletin proteoglycan, vết thương 0,0265%, dạng glycosamin xịt lại hình (RSD= để thành bảo 3,14% vệtrụ lên )và chất độ mơ thích liên kết trình tế 6g vàcollagen, 12g duợc liệu/kg làm giảm mức tăng hoạt độ hai enzym Tác dụng cao ởxanh hai nước Ở Việt Nam Nhàu có nhiều ởlặp Miền Nam, ngồi có ởkích tỉnh Miền vị trí trước sau, bầu dưới, 2hồi ơ, ơđộthiết 1Nacurgo nỗn, đính trung Vòi nhụy dạng sợi màu thực nghiệm thu liên quan đến kế thí nghiệm Theo hướng mục tiêu này, bao gồm trái họ cam quýt chuột thông qua đánh giá kích thước vết thương, hàm lượng collagen, [45] đối tối thiểu sau 24 với Escherichia colỉ (MIC=3,125 mg/mL), chế tạo từ rơm rạ , tối ưu hóa điều kiện q trình phản ứng xà phòng hóa từ dầu cần thiết cho hình mạchvào máu Tuy nhiên,ứcNO ROS mức giảm tác Flavonoid có thểthành tác dụng DNA khuôn, chếvà tổng hợpquá RNA củalàm vi khuẩn làm thuơng da, da khuyết tậtthế thẩm mỹ bào liền tổn vết hạt thương Thời kỳ diễn rađại nhanh thực bào Vì giảm băng số lượng vết thương chóng xịt Nacurgo thay với vào màng liều nhu tuơng đuơng với silymarin Trung Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên-Huế nơi thuộc đồng Bắcđó Bộ [17] nhạt, dài Quảng mm; 2hai đầu nhụy dạng phiến mỏng, dàimô 3nhanh mm, màu xanh Đĩa mật dày, hình hàm đa thức bậc hay bậc sử dụng để tảvài hệdạng nghiên cứu khảo sát hydroxyprolin, hàm lượng MDA 1461 Staphỵlococus aureus (MIC=12,5 dừa tỉnh Bencủa Tre cho dụng có lợi Điều có tính phản ứngthấy cao dẫn đến tốn thương mơ, cản trở nguyên bào sợi, thường diễn trongsựvòng 7-14 ngày saukĩkhi bị thương khoen, điềumàu kiệnvàng thực nghiệm để tìm ưu ứng dụng thuật tối ưu RSM Sơ đồ 2.1.tốiNội dung nghiên cửu trình làm lành vết thương [23] Mặc dù, lành 17 13 5116 xii 915 11 12 10 632 4714 18 XIV Bảng 2.2 Danh sách thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu - Ethanol 96%, Methanol - Sinh khối vi khuẩn: - Diethyl ether, Ethyl acetat - NaOH 10%, FeCb 5%, AlCb 2% Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa - CH3COOH,Pb(CH3COO)2lO% - KH2PO4, Na2C03 - Bột Magie kim loại - Chuẩn rutin (HPLC > 98%, Trung Quốc) Staphylococus aureus - Amoxicillin (Công ty cổ phần Duợc phẩm DOMESCO) - Bột agar 1,5%, pepton 1%, - Hệ dung môi khai triển sắc ký - Thuốc thử màu: FeCl3/EtOH yeast extract 0,5%,NaCl 1% - Diclofenac sodium, acid ascorbic (Himedia) Kiểm nghiệm Hoạt tính sinh học 19 Máy quay Buchi Switzeland, bếp đun - Tủ cấy vi sinh cách thủy Memmert hệ thống máy sinh - Đĩa petri, micropipet hàn Lò vi sóng 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu - vật Bình hút ẩm,2.3.1 chén Sơ sứ thành phần hóa thực - Nồi hấp tiệt trùng dạng đứng Bình chiết đun hồi lưu - Máy spin down Bảng 2.3 Tóm tắt phân tích sơtrênbộ phần hóa thực vật mờ giấythành lọc dược liệu bằng> Chất diethyl ether Hệ thống ống sinhChiết hàn dịch chiết ether: chiết 10 - 15 gvétbột béo Đèn uv hai bước sóng Soxhlet hay lắc bình nón trongCắn 0cố-mùi 0thơm phút Chiết ► Tinh dầu dịch chiết Tủ sấy SANYO -112 H2SO4 đậm đặc etherMOV sau bốc khơng để lại lớp cắn mờ mặt kính đồng hồ Gộp dịch ->■ Carotenoid Lò nung LENTON FURNACES, Made in Phản ứng Libermann-Burchard chiết, lọc cô đến cắn đến khoảng 50 mL dịch chiết ether England Cân kỹ thuật Mettler Toledo Chiết dịch AB204 chiết cồn: bã dược liệu chiết tiếp với cồn 96% bình nón với Bản silica gel F254 tráng sẵn 20 trên- 30 nềnphút nhôm sinh hàn hồi lưu bếp cách thủy, thực 2-3 lần Gộp dịch chiết, (Merck,Art 1,05554) lọc cô lại đến khoảng 50 mL dịch chiết cồn Phần lớn dịch chiết cồn Bể siêu âm Sonorex RK-1028H (Bandelin) dùng để định tính trực tiếp nhóm hợp chất Máy đo quang uv - Vis Beckman coulter DU 730 Life Science UV/Vis, cuvette thạchphân: phần dịch chiết cồn thủy phân để định Chiết dịch chiết cồn thủy anh Spectrophotometer, cuvette tính aglycon sauthạch thủy anh phân Lấy 15 mL dịch chiết cồn cho vào bình nón 100 mL, Máy chụp ảnh CANON 16.0 mega pixels thêm 10 mL acid hydrocloric 10% đun hồi lưu bếp cách thủy 30 phút, Bể điều nhiệt Memmert WNB14, Đức 50%, thêm 20 mL nước Đe nguội, cho hỗn hợp vào bình lắng gạn chiết diethyl ether (15mL X lần) Dịch ether dùng để định tính aglycon Chiết dịch chiết nước: bã dược liệu sau chiết cồn đem chiết nóng với nước cất bình nón bếp cách thủy sôi Gộp dịch chiết, đê nguội, lọc cô đế thu Sơ khoảng dịch chiết nước đồ 2.2 Tóm50 tắtmL phân tích sơ thành phần hóa thực vật Chiết dịchThuốc chiết nước thủythực phân: phần dịchứng chiết đượctính thủy phân đế định tính Phản dương thử Cách Chất béo aglycon sau thủyhiện phân Lấy 15 mL dịch chiết nước cho vào bình nón 100 mL, Nhỏ dung dịch lên giấy vết mờ thêm 10 mL acid hydrocloric 10% đun hồi lưu bếp cách thủy 30 phút Đe nguội, Carotenoid cho hỗn hợp vào Carr-Price bình lắng gạn chiếtXanh bang chuyển diethyl sang ether đỏ (15mL X lần) Dịch ether H2SO4 Xanh dương hay xanh lục ngả xanh dùng đế định tính aglycon dương Tinh dầu Bốc đến cắn Có mùi thơm đặc trưng Tri terpenoid tự Liebermann-Burchard Đỏ nâu tím, lớp có màu xanh lục Alkaloid TT chung Alkaloid Kết tủa Coumarin Phát quang kiềm Phát quang mạnh 20 Antraglycosid KOH 10% Dung dịch kiềm có màu hồng đến đỏ Dung dịch có màu hồng đến đỏ Flavonoid Mg/HCl đậm đặc Đỏ 21 Anthocyanosid HC1 KOH Xanh Proanthocyanidin HCl/t° Đỏ 22 Tannin DD FeCl3 DD gelatin-muối Xanh rêu hay xanh (Polyphenol) Tủa trắng (Tanin) đen Triterpenoid thủy phân Liebermann-Burchard Saponin TT Liebermann Đỏ-nâu tím, lớp có màu xanh lục Có vòng tím nâu Acid hữu Lắc mạnh dung dịch Có bọt bền nước Na2CŨ3 Sủi bọt Chất khử Hợp chất polyuronic TT Fehling Pha loãng với cồn 90% Có kết tủa đỏ gạch Tủa bơng trắng vàng nâu Phản ứng với Phản ứng vói thuốc Phản ứng vói Phản ứng với FeCl 5% thửđổi, Cyanidin NaOH 10% Pb(CH 3và 3của khối lượng cân 3chiết lần liên tiếp không thay độ chênh không mg Thực ĐặtH: chén nung vào lò nung tiếp tục nung nhiệt độ dung 1COO)2 giờ, để0,5 nguội Tiếp Sản tục phẩm sấy mẫu thu 105 sau °c,(%) áp suất trình thường chiết xuất là1Hàm giờ, đểlệch vào dịch bình hút ẩm chất đến hòa nguội tanvà Hiệu suất cao a: ẩm cao chiết 10% (%) Bảng 2.4 Các phản ứng hóa học định tính flavonoid bìnhlại ẩm và1cân, ghi nhận kết 3hút lần mẫu, lấy giá trung bình mẫu.đến cân lần liên tiếp khối cân khối lượng sau sấy Lặp lạigọi nhiều lần chiết cho dung môi, dung dịch nàytrị dịch m: Khối lượng cao chiết thu (g) A: Hàm ẩm nguyên liệu (%) lượng không đổi, độ lệch không mg Tiếpđiểm: tục tiến hành lặpchênh lại khối lượng cân lần liên tiếp không thay Ưu M: Khối lượng nguyên liệu (g) đổi, độhiện chênh lệch không quálấy0,5giámg Thực lần mẫu, trị trung bình mẫu - Tiết kiệm mơi Cơng thức tínhdung độ tro khơng tan acid phương pháp tiêutrịchuẩn cao toàn phần Thực lầnCác dễ mẫu, lấyhiện giá trung hóa bìnhdược từngliệu mẫu Cơng thứcbị3tính độ ẩm - 2.3.3 Thiết đon giản, thực - Hiệu xuất caophần Cơng thứcsuất tínhchiết độ tro tồn a—b Nguyên liệu cao chiết A kiểm địnhXđộ100 tinh khiết tiêu “mất khối = -(%) - Hạn chết ô nhiễm môi trường Trong đó: a btro khơng tan acid” dựa theo Dược — lượng làm khơ”, “độ tro tồn phần”,a “độ A = — X 100 (%) Nhược điểm: điển Việt Nam V Định tính flavonoid phản ứng hóa họcmẫu đặctrước trưngkhi sắc X: trolượng khơng tandotrong dược liệu (%), Trong đó, A: Khối làm acid khô (%) a: Khối lượng sấy ký (g)lớp b: v c (c X A) ' mỏng; lượng flavonoid toàn phần pháp UV-Vis dựanhau vào bước - định Sau xuất, tiến hành tách riêng chất với để thusóng a:chiết khối lượngphải chén có mẫu (g).phương b: khốiphần lượng Khối lượng mẫu sau sấy (g) hấp thuđó, cựcX:cần đại chất chiết xuất,phần trình phức tạp(g) chén (g) c:của khối lượng mẫu dùng Trong Độ trokhơng tồn mẫu dược liệu (%) Xác gian đinh đơẩm trocủa tồn phần - Tốns thời A: độtiêu mẫu (%) Các phương pháp chuẩn hóa dược liệu a: Khối lượng chén có tro (g) Nguyênkhuấy tắc trộn -• Khơng 2.3.4 Định tính ỉlavonoid phương pháp hóa học ■S Xác đinh khối lương làm khô - Dịch chiết luônchén nhiệt độ sôi nên không dễ b: Khối lượng không trodược (g) dung Nung khối lượng xác định mẫu liệu ởmôi nhiệt độcác 550chất °c cho đếnbền khivới khốinhiệt lượng Chuẩn • Nguyên tắcbị mẫu nguyên liệu: cân g mẫu dược liệu khơ Nhàu cho vào bình bị phân hủy khôngthêm đổi Cân lượng tro dịch đến khối lượng không cắn vơ erlen, 50 mL dung 70%, đunđổi 80Tro °cchính là2 phần Tập trung tồnlại c: Khối lượng dược liệuethanol dùng (g) Sấy khối lượng xác mẫu dược liệu nhiệt độ 105 °c khối lượng sau ta đốt cháy hoàn toàn mẫu dược liệu Xác định độ tro toàn phần theo Dược điển dịch chiết được, tiến hành thực phản ứng hóa học A: V Độ ẩmmẫu mẫu dược liệu (%) đối không đổi Cân sau khi204), sấy Từ độ lệchnguyên khối lượng mẫu trước sau Việt Nam (Phụ lụcthử 9.8 trang vớichênh phần lớn liệu, độ tro tồn phần • Tiến hành Chuẩn bị mẫu cao chiết: cân 0,2 g cao cho vào bình erlen, thêm 50 mL dung dịch sấy, xác định được4 lượng mộttrường phần toàn lượng nước kết tinh lượng thường khoảng -khôns 12%,nước, mộttrons vài s Xác đinh tro tan HCl hợp cao tới 15 - 18%, đối vói mẫu ethanol 70%, đun 80 °c Tập toàn dịch chiết ngâm được, tiến hành thực Cân 700 gđộ khối bột nguyên liệuXác khôđịnh látrung Nhàu Dược liệu chấtchiết dễ bay mẫu dược liệu khối lượng làm khơcùng được17,5 tiến lít cao tro lượng tồn phần khơng q 35% Xác phản định độ khơng acid tiến hành theo Dược điển Việt Nam V (Phụ ứngtrohóa học.tan dung 70% tròn thống ngưng Đun hành môi theo ethanol Dược điển Việt Nam V bình (Phụ cầu lục đáy 9.6 trang 203),nối đốivới vớihệ mẫu ngun liệutụ.khơ • 9.7 Tiếntrang hành203 - 204) Theo Dược điển Việt Nam V, mẫu ngun liệu khơ độ lục nóng bĩnh cầu dược liệu dung độ sôi bốcmất hơido khối lượng mấtchứa làm khơ khơng q mơi 13%,đến đốinhiệt vói mẫu cao60°c, chiếtdung khốimôi lượng tro không tan acid thường không 2,4% Nung chén khối lượng không ba lần cân liên tiếp.độ 60°c ngưng tụ khơng vàsứ quay trở lạikhi bình chiết Đun dượcđổi liệusau 95 phút nhiệt làm khô 20% Thêmmơi vàoxun tro tồn phần 25cấu mLtrúc dung HC1vật 2M.vàĐậy nung đuntựsôinhiên cáchrồi thủy dung thấm vào tế dịch bào thực hòachén tan hợpvàchất Cân xác khoảng g mẫu dược liệu khô cho vào chén sứ Trải mẫu đáy chén • Tiến hành 15 phút Lọc dungDịch dịchchiết qua xuất giấy tro, rửa cắn giấy cất tiến hành rút dịch chiết chiết đượclọc côkhông quay chân không áp lọc suấtbằng giảmnước thu cao 2.3.2 Phương sấy nhiệt độ 105 °cpháp 30 phút.đun hồi lưu nóng cho đếnở dịch lọc tính Chuyển giấy lọc cócao vàobếp chén nung lỗng thu hồi dung tụcđến cao lỗng đếnlượng dạng cách thủyởđổi ởtrên, 80 °c Sấy •chén sứ nhiệt độmơi, 105làtiếp °ctrung cho cân khối cắn lầnđặc liên tiếp không Nguyên tắc Dùng kẹp sắt dài đưa chén vào lò nung 550 °c (tránh đứng trực tiếp trước cửa lò sấy khơ, đốt nung ởlánhiệt độ 550 khối lượng không đổi Đe nguội hút ẩm 15 °c phút thu cao cồnbình 70% Nhàu nung) hồi nung đến pháp vơ cơsử hóa hồn tồnmơi (tro khơng màu Đe mơ nguội Đun lưucho phương dụng dung chất tanđen) khỏi thực Đe nguội bình hút ẩm khoảng 30 phút, cân để ghilấy nhận kết Cơng thức tính hiệu suất chiết cao Cân xác ẩm khoảng g mẫu dược liệuvàvào chén sứ,quả trải mẫu đáy chén sứ sấy bình khoảng phút Cân ghichất lại kết vật táchút dụng nhiệt,30dung môi dễ bay chuyển trở lại mơi Đặt chén vàốp lòsuất nungthường, tiếp tục nung nhiệt độ giờ, để nguội nhiệt độnung 105 °c, Đe nguội bình hút ẩm 15 phút, cân trường phản ứng thông qua hệ thống ngưng tụ m Xtục (1tiến — hành a) bình ấm khối cân, ghi nhận kết Tiếp lặp lại ghihút nhận lượng H(%) = X 100 M X (1 - A) 28 24 27 23 26 25 Chứng âm mL EtOH 70% mL EtOH 70% mL EtOH 70% mL EtOH 70% Chứng dương mL dịch chiết mL dịch chiết mL dịch chiết mL dịch chiết độ cao ICso ICso Phần trăm ức Phần trăm ức chiết (pg/uiL) chế (%) (pg/uiL) chế (%) (pg/m Ũ 20 22,226 ± 2,056 27,460 + 1,401 40 30,944 ± 2,823 38,835 + 0,673 60 43,894 ± 2,684 49,595 + 0,768 74,907 62,984 80 53,152 + 0,050 58,657 + 0,880 100 61,888 + 0,586 68,188 + 0,705 120 70,497 + 1,595 76,408 + 1,481 Nồng độ diclofenac 40 100 200 sodium (ug/mL) 43,786 + 51,939 + Phần trăm ức chế 25,874 + 1,923 2,456 0,132 (%) IC50 (ug/mL) 168,814 ICso Phần trăm ức (pg/m chế (%) L) 30,566 + 5,767 39,950 + 7,926 43,948 + 1,343 49,892 + 5,749 61,275 + 1,134 70,029 + 1,121 71,785 300 400 59,693 + 4,001 62,200 + 4,025 Bảng 3.5 Kết đánh giá hoạt tính kháng viêm in vitro diclofenac sodium Thí nghiệm 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Nhiệt Thời gian Thể tích Kháng Kháng Hàm lượng (mL) khuẩn viêm (phút) (°C) flavonoid (mg/g) (mm) (pg/mL) 60 205 500 0,614 + 0,013 77,752 75 150 400 2,094 + 0,091 15 73,874 Bảng 3.6 Bố trí điều kiện thí nghiệm kết thực nghiệm theo phần mềm 100 150 400 0,717 + 0.031 16 96,262 Design- Expert 11.0 Ghi ± với độ lệch chuẩn giá trị 90 chú: kết95 500 2,461+0,122 13,5 + 0,5 57,809 75 Kết quả60 400 0,054 89,922 bảng 3.4, 3.5 cho thấy1,679 giá trị+ IC 50 cao cồn 70% thấp hon cao cồn 75 150 235 1,572 + 0,136 14 85,231 45%, 96% diclofenac sodium 90 95 300 1,553 +0.042 14 96,368 Bàn 75 luận 240 400 1,461+0.017 15 98,595 60 Dung95môi chiết ảnh 300 hưởng3,583 + 0,115 20 nhiều đến thành phần chủng76,127 loại hợp chất có 75 150 400 2,252 + 0,068 21,5 +3,5 103,896 có tác dụng biến+ tính nhanh chóng, màng tế bào lá, tạo 75 cao chiết 150 Ethanol 400 2,720 0,016 21+3 phá hủy 97,379 điều xúc với 90 kiện thuận 205 lợi cho việc 300 xâm nhập, 1,509 tiếp + 0,017 20 hoạt + chất kháng 87,595oxy hóa khác 75 cho hiệu150 400hon Chúng 1,389 + 0,005 20,5dung + 0,5môi là86,970 nên chiết cao chọn loại cồn 45%, 70% 75 nồng 150 2,718 + 0,116 + 0,5 75,112 96% độ ethanol600 khác mức độ hòa 22,5 tan hợp chất khác [49] 75 150 400 2,112 + 0,123 18,5 + 1,5 87,962 Mức thuộc vào hằng21,5 số điện môi, giá trị liên kết hydro 60 độ phân95cực dung 500môi tùy 2,575 + 0,037 + 1,5 83,544 giá trị+ liên ethanol Do đó, 90 đó, nước 205có số 500điện mơi,2,901 0,3 kết hydro 11 cao hon 101,811 75 lẫn ethanol 150 nước400 3,044 0,117 có mức 89,774 trộn cho hỗn +hợp ethanol - nước độ phân cực khác 60 205 300 2,338 + 0,073 10,5 103,752 Kết bảng 3.2 cho thấy hàm lượng flavonoid cao cồn 70% cao hon cao cồn 50 150 400 1,680 + 0,038 10 93,095 45% 96% cách khác biệt có ý nghĩa thống kê Điều giải thích polyphenol Nhàu có chứa nhiều nhóm hydroxyl linh động nhung vĩ có cấu trúc phân tử lớn nên độ phân cực chúng gần xấp xỉ độ phân cực ethanol nồng độ ethanol 70% có độ phân cực tưong đưong với độ phân cực polyphenol nên chúng hòa tan tốt [16] Từ kết bảng 3.4 bảng 3.5 cho thấy khả kháng khuẩn kháng viêm cao cồn 70% tốt hàm lượng flavonoid cao nên có tác dụng kháng khuẩn tốt thể qua đường kính vòng kháng khuẩn cao giá trị IC50 thấp hoạt tính kháng viêm cao Tối ưu điều kiện chiết xuất dược liệu dựa phần mềm Design-Expert 11.0 47 46 tăng2trong sát.tnmadd Từ 3.625(X ta 1thấy khả kháng viêm xu hướng yếu tốvùng nhiệt độ(ãíicsíiai phản ứngkết vàquả thờihình gian3.3, chiết X2) ;cụ thể: Trong yếu tốcó khảo sát, Warning! RsaarrvjiKtiiwdei \va khảo rung tăngyếu khitốyếu tố thòi gianvà chiết giảm khảo sát Đốimục với tiêu yếu theo tố thểhàm tíchbậc X3 tăng nhiệt độ (Xi) thờiX2gian chiết ảnhvùng hưởng đến hàm ÍB s I với hệ số kháng âm ( 0,1688; 0,2327) tố thể tích dung (Xcác 3) 9ảnh hưởng đến hàm mục khả viêm xuYếu hướng tăng.Từ tamôi chọn điều kiện sau để tối * thể Hà m tiêutrình với hệ số dương ưu chiết cao: hàm bậc 0,1093 Hai yếu tố nhiệt độ phản ứng thời EỈƯ ị " ■Ợí ig gian tương tác với (X1X2) ảnh hưởng đến hàm mục tiêu theo hệ số dương fla •*■Ị Nhiệt độ: 60 °c vàlũthể tích dung mơi tương tác với (X1X3) >vo no (0,4502) Hai yếu tố nhiệt độ phản ứng •I id Thời gian: 95 phút ảnh hưởng đến hàm mục tiêu theo hệ số dương (0,6289); hai yếu tố thời gian s • Thể tích: 500 mL chiết thể tích dung mơi (X2X3) tương tác với có ảnh hưởng không đáng kể 3.3 với HIỆU SUẤT CHIẾT CAO CỒN 70% TỪ LÁ0NHÀU hệ số dương 0,0290 M *•= 7i 7'2 5-1 » — từ Nhàu Bảng 3.8 Kết hiệu suất chiết cao cồn 70% 205 Đối với khả kháng khuẩn theo phương trình (2) Ị cho thấy khả kháng A’ Nhạtdệ ứng B Thớigani khuẩn không chịu ảnh hưởngYếu bậc tố 1, đáp yếu tố nhiệt độ (Xi), thời gian chiết Kháng khuẩn (mm) Kháng viêm Hàm lượng flavonoid (X2), thể tích dung mơi (X3) tương tác chúng (pg/mL) (mg/g) B noi innvjd